Mecanismo do Ponto de Acupuntura Cérebro-Rim de Shu-Mu no Tratamento da Oligoastenospermia em Ratos através do Eixo Hipotálamo-Hipófise-Testicular

Este estudo tem como objetivo verificar o efeito terapêutico do ponto de acupuntura Cérebro-Rim de Shu-Mu na oligoastenospermia em ratos e explorar seu mecanismo subjacente através do eixo hipotálamo-hipófise-testicular (HPT).

A oligoastenospermia é uma causa comum de infertilidade masculina. O eixo hipotálamo-hipófise-testicular (HPT) regula a diferenciação e maturação gonadal por meio da síntese e liberação de hormônios reprodutivos, desempenhando um papel vital na fertilidade masculina. A interrupção da estabilidade do eixo HPT prejudica a produção de espermatozoides, reduzindo a qualidade do sêmen. Investigar o efeito da eletroacupuntura na regulação do eixo HPT pode fornecer informações sobre o tratamento da oligoastenospermia. Cinquenta ratos SD machos de 8 semanas de idade foram divididos aleatoriamente em grupos branco, modelo, Shu-Mu Cérebro-Rim, sem acupuntura e L-carnitina (n = 10 por grupo). Com exceção do grupo em branco, os ratos receberam adenina por via intragástrica por 28 dias para estabelecer o modelo. Após a modelagem, o grupo Shu-Mu Cérebro-Rim foi submetido a eletroacupuntura em pontos de acupuntura designados, enquanto o grupo sem acupuntura recebeu tratamento simulado por 30 minutos diários. O grupo L-carnitina recebeu L-carnitina (10 mL/kg) por via intragástrica uma vez ao dia. Os tratamentos continuaram por 28 dias. Foram avaliadas as condições gerais, os coeficientes dos órgãos e a qualidade do sêmen. A coloração HE analisou a morfologia do tecido e o ELISA detectou alterações hormonais séricas. Em comparação com o grupo modelo, os grupos Shu-Mu, Cérebro-Rim e L-carnitina exibiram melhorias significativas no espírito, dieta e movimentos intestinais, com aumento do peso corporal, enquanto o grupo sem acupuntura não mostrou mudanças significativas. Os coeficientes dos órgãos renais diminuíram significativamente nos grupos Shu-Mu, Cérebro-Rim e L-carnitina, mas permaneceram inalterados no grupo sem acuponto. Os coeficientes dos órgãos testiculares não mostraram diferenças significativas entre os grupos de tratamento. As taxas de contagem de espermatozóides, densidade, sobrevivência e motilidade melhoraram significativamente nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina, mas não no grupo sem acuponto. A coloração H & E mostrou melhora nos danos nos rins e no tecido testicular nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina. O ELISA revelou aumento de T, GnRH e INHB e diminuição dos níveis de LH, FSH, E2 e PRL nesses grupos (p < 0,001), sem alterações significativas no grupo sem acuponto. Esses achados indicam que a terapia de acupuntura Shu-Mu Cérebro-Rim melhora a qualidade do esperma regulando o eixo HPT, oferecendo um tratamento potencial para oligoastenospermia.

A oligoastenospermia, dividida em "oligospermia" e "astenospermia", é um dos tipos comuns de infertilidade masculina, com uma taxa de incidência responsável por cerca de 75% dos casos de infertilidade masculina¹. A oligoastenospermia é caracterizada principalmente pela diminuição da densidade e motilidade espermática nos testículos e se manifesta principalmente clinicamente como distúrbio da espermatogênese, contagem reduzida de espermatozóides e baixa motilidade espermática ^2,3. Nos últimos anos, a incidência de oligoastenospermia aumentou ano a ano⁴. Sem tratamento eficaz, terá efeitos adversos a longo prazo na saúde física e mental dos pacientes e até mesmo na harmonia familiar⁵. Estudos mostraram que problemas genéticos⁶, distúrbios endócrinos reprodutivos⁷, infecções do trato urogenital⁸ e drogas químicas⁹ podem afetar a produção e maturação do esperma, levando a um declínio na qualidade do sêmen. Atualmente, melhorar a qualidade do esperma danificado tornou-se um problema desafiador na área médica.

O eixo hipotálamo-hipófise-testicular (HPT) é a principal via de regulação reprodutiva do organismo, que pode regular a diferenciação e maturação das gônadas, estimulando a síntese e liberação de hormônios reprodutivos relacionados ao hipotálamo, hipófise e testículos, e desempenha um papel importante na manutenção da função reprodutiva masculina normal¹⁰. Se a estabilidade da função do eixo HPT for interrompida, isso fará com que a secreção testicular seja insuficiente para atingir a concentração fisiológica de testosterona, resultando em uma diminuição no número e na qualidade dos espermatozoides no testículo¹¹. Portanto, o tratamento da oligoastenospermia visa principalmente regular a função do eixo HPT e atingir o objetivo de manter o equilíbrio dos hormônios endócrinos relacionados, aumentando assim o número de espermatozoides no sêmen, aumentando a atividade espermática e melhorando a qualidade do sêmen.

No tratamento clínico da oligoastenospermia, a medicina moderna adota principalmente métodos como cirurgia e drogas antioxidantes e aumenta a motilidade dos espermatozoides^12,13, enquanto a terapia de eletroacupuntura combina a acupuntura tradicional chinesa e a bioeletricidade médica moderna. Tem as vantagens de ser rápido e preciso, ter um efeito curativo óbvio, ter poucas reações adversas, uma ampla gama de doenças adequadas e baixo custo de tratamento, e ter um bom efeito de tratamento na oligoastenospermia^14,15. "As costas são yang e o abdômen é yin." A combinação de pontos de acupuntura Shu-Mu combina os pontos Shu com os pontos Mu, um na frente e outro atrás, um yin e um yang, trabalhando juntos, também conhecido como método de combinação de pontos de acupuntura frente-trás. A medicina tradicional chinesa (MTC) acredita que o rim é a raiz da essência pré-natal e a doença está localizada no rim. O ponto Front-mu do rim, Jingmen (GB25), e o ponto Back-shu, Shenshu (BL23), são selecionados, o que tem o efeito de aquecer o rim, auxiliar yang e buscar yang dentro de yin^16,17; o rim armazena a essência e governa a produção de medula, o cérebro é o mar de medula e o ponto de encontro de todos os yang, e Taixi (KI3) é o ponto de origem do meridiano do rim Shaoyin do pé, que pode regular e tonificar o fígado e o rim, nutrir o yin e gerar medula¹⁸. Combinado com Epangsanxian (MS4), ele conecta o rim e o cérebro, refletindo a ideia de "combinação de acupontos Shu-Mu Cérebro-Rim" na MTC¹⁹, e o efeito terapêutico é mais óbvio do que o da acupuntura comum.

Os estudos atuais de tratamento sobre a qualidade do sêmen se concentram principalmente na melhoria da estrutura e função testicular, enquanto pesquisas limitadas foram conduzidas sobre a regulação dos níveis séricos de hormônios em diferentes tecidos do eixo hipotálamo-hipófise-testicular (HPT)²⁰. Em pesquisas preliminares, o sequenciamento de RNA (RNA-Seq) foi usado para identificar genes candidatos e vias regulatórias envolvidas na regulação da qualidade do sêmen nos tecidos hipotalâmico, hipofisário e testicular de ratos saudáveis e ratos modelo de oligozoospermia induzida por adenina²¹. Além disso, testes de qualidade do sêmen e análise histológica dos tecidos testiculares foram realizados em ambos os grupos. Essas descobertas forneceram informações sobre os mecanismos moleculares subjacentes à qualidade do sêmen em ratos oligoastenospermia induzida por adenina. A terapia de eletroacupuntura com acupuntura proximal distante pode melhorar a qualidade do esperma em ratos oligoastenospermia, regulando o eixo HPT, e o efeito está relacionado ao processo de estresse oxidativo²². No entanto, não se sabe se o ponto de acupuntura Cérebro-Rim de Shu-Mu pode melhorar a qualidade do sêmen de ratos, regulando o eixo HPT. Para explorar ainda mais o mecanismo regulatório de melhoria da qualidade do sêmen em ratos oligoastenospermia e métodos de tratamento eficazes, este estudo usou um modelo de oligoastenospermia induzido por adenina em ratos e selecionou quatro pontos de acupuntura, Epangsanxian, Shenshu, Jingmen e Taixi, para explorar o mecanismo relacionado do efeito terapêutico do ponto de acupuntura Cérebro-Rim Shu-Mu na oligoastenospermia em ratos do aspecto do eixo HPT, fornecendo uma base mais científica para o tratamento clínico.

Todos os experimentos com animais foram revisados e aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade Médica de Ningxia (número de aprovação: IACUC-NYLAC-2021-130). O estudo foi realizado em estrita conformidade com as Diretrizes ARRIVE 2.0 para experimentos com animais e aderiu aos princípios de bem-estar animal descritos no Guia do NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Este estudo randomizado controlado em animais empregou análise de variância unidirecional e foi conduzido no Centro de Experimentos Animais da Universidade Médica de Ningxia de março a maio de 2023. Ratos SD machos de grau FPS com oito semanas de idade, pesando 180-220 g, foram usados para este estudo. Os detalhes dos reagentes e equipamentos usados estão listados na Tabela de Materiais.

1. Procedimentos de estabelecimento e tratamento de modelos animais

1. Animais e grupos experimentais
   1. Obtenha cinquenta ratos SD machos de 8 semanas de idade, com FPS, pesando 180-220 g.
   2. Alojar todos os ratos em condições padrão, mantendo uma temperatura ambiente de 22-25 °C, umidade de 50% a 60% e fornecendo livre acesso à ração e água padrão para roedores.
   3. Após uma semana de adaptação, divida aleatoriamente os ratos em um grupo em branco (B) (n = 10) e um grupo de modelagem (n = 40) usando um método de tabela de números aleatórios. Administre solução salina normal ao grupo em branco e adenina ao grupo de modelagem por gavagem oral.
   4. Após 28 dias, divida aleatoriamente o grupo de modelagem em um grupo modelo (M), grupo Shu-Mu Cérebro-Rim (S), grupo sem acuponto (N) e grupo L-carnitina (L) (n = 10 por grupo). Deixe o grupo de modelos sem tratamento.
      1. Aplique a intervenção de eletroacupuntura usando o método de correspondência de pontos de acupuntura Shu-Mu Cérebro-Rim ao grupo Shu-Mu Cérebro-Rim. Administre tratamento sem acuponto ao grupo sem acuponto e L-carnitina líquido oral por gavagem ao grupo L-carnitina. Trate todos os grupos continuamente por 28 dias.
2. Construção do modelo
   NOTA: Estudos mostraram que altas doses de adenina podem afetar a função testicular em ratos, levando à secreção anormal de hormônios sexuais, interrupção da estabilidade funcional do eixo HPT e declínio na qualidade do esperma²³. Portanto, a adenina é comumente usada para estabelecer modelos de infertilidade animal masculina.
   1. Administre solução salina normal (1 mL / 100 g de peso corporal) ao grupo em branco e adenina (20 mg / 100 g de peso corporal) ao grupo modelo por gavagem oral ( Figura 1A ).
   2. Garanta agitação contínua durante a gavagem para evitar a precipitação de adenina e o bloqueio da agulha de gavagem. Administre o tratamento uma vez ao dia por 28 dias.
3. 1.3 Procedimento de tratamento
   1. Grupo Cérebro-Rim Shu-Mu
      1. Comece a intervenção no primeiro dia após a modelagem. Realize acupuntura com agulhas de acupuntura estéreis descartáveis em pontos bilaterais. Depois de fixar o rato, exponha e desinfete o local da acupuntura.
      2. Fixe a pele do local da acupuntura com a mão esquerda e perfure rapidamente o ponto de acupuntura com a agulha de acupuntura estéril descartável na mão direita. Conecte um estimulador elétrico. Aplique ondas dilatacionais com uma frequência de eletroacupuntura de 2 Hz, uma intensidade de estimulação de 1,5 mA e um leve tremor do músculo local.
      3. Realize o tratamento de eletroacupuntura por 30 minutos de cada vez, uma vez ao dia, por 28 dias consecutivos (Figura 1B).
         NOTA: Selecione pontos de acupuntura em ratos com referência à Ciência Experimental de Acupuntura e Moxabustão de Yong Tang, Apêndice II, "Pontos de Acupuntura Comumente Usados em Animais Experimentais", combinado com um método comparativo de seleção de pontos anatômicos¹⁹. Os seguintes pontos foram selecionados: (1) Epangsanxian (MS4): Localizado 3 mm abaixo e 4 mm fora do ponto Touwei. Operação: Picada 1-2 mm em linha reta; (2) Shenshu (BL23): Localizado na área da coluna, em ambos os lados do processo espinhoso inferior da segunda vértebra lombar, 6 mm ao lado da linha dorsal mediana. Operação: Picada 6 mm reta; (3) Jingmen (GB25): Localizado na cintura lateral, na extremidade livre da 13ª costela na parte inferior. Operação: Picada 1-2 mm em linha reta; (4) Taixi (KI3): Localizado na parte interna do pé, na depressão entre o ponto alto do tornozelo medial e a borda posterior do tendão de Aquiles. Operação: Picada 3 mm reta.
   2. Grupo sem pontos de acupuntura
      1. Selecione e opere os pontos de não acupuntura 1, 2 e 3 da mesma maneira que o grupo Cérebro-Rim Shu-Mu (Figura 1B).
         NOTA: Como os pontos de não acupuntura não seguem o princípio da seleção de pontos ao longo dos meridianos, e de acordo com a teoria da Medicina Tradicional Chinesa (MTC) e observação clínica de longo prazo, esses três pontos de acupuntura têm pouco efeito terapêutico em pacientes com oligoastenozoospermia²⁴. (1) Não acuponto 1: Localizado no ponto médio da linha entre a ponta do cotovelo e a axila na parte interna do cotovelo. Operação: Picada 1-2 mm em linha reta; (2) Não acuponto 2: Localizado no ponto médio entre o epicôndilo medial do úmero e o punho da ulna, na margem ulnar. Operação: Picada 1-2 mm em linha reta; (3) Não acuponto 3: Localizado na interseção do músculo deltóide anterior e do músculo bíceps na parte interna do braço. Operação: Pique 1-2 mm em linha reta.
   3. Grupo L-carnitina
      1. Administrar levocarnitina líquida oral por sonda oral na dose de 10 mL/kg de peso corporal, uma vez ao dia, por 28 dias consecutivos (Figura 1A).
4. Eutanásia
   1. Após o tratamento, permitir que todos os ratos jejuem por 24 horas, anestesiar-os por injeção intraperitoneal de pentobarbital sódico a 2% (40 mg/kg de peso corporal, seguindo protocolos aprovados institucionalmente) e coletar sangue do ápice do coração usando uma agulha descartável de coleta de sangue intravenoso^21,24.
   2. Após a morte por decapitação, remova um lado do epidídimo para medir a qualidade do sêmen. Colha os tecidos renais e testiculares, pese-os e registre-os e fixe-os em fixador de paraformaldeído à temperatura ambiente por 48 h antes de incorporá-los em parafina²⁴.

2. Índices de observação

1. Observação geral: Observe o estado mental, a dieta e os movimentos intestinais dos ratos e monitore seu peso corporal diariamente.
2. Coeficientes de órgãos: Após a morte, remova cuidadosamente a gordura superficial e o tecido conjuntivo dos tecidos renal e testicular, enxágue com solução salina normal, seque com papel de filtro, pese em uma balança e registre as medições para o cálculo dos coeficientes de órgãos. Coeficiente de órgão (%) = (peso do órgão [g] / peso corporal [g]) x 100%.
3. Qualidade do sêmen
   1. Depois de remover o excesso de gordura, remova e coloque um lado do epidídimo de cada rato em banho-maria de temperatura constante a 37 ° C por 5 min. Em seguida, corte, filtre, sopre suavemente e misture bem a amostra.
   2. Pegue uma alíquota de 10 μL da suspensão de esperma diluída e solte-a na borda da lamínula de uma placa de contagem pré-aquecida, permitindo que a suspensão de esperma penetre automaticamente na câmara de contagem.
   3. Meça a contagem de espermatozoides, densidade, taxa de sobrevivência e taxa de motilidade usando um sistema CASA (análise de sêmen assistida por computador)²¹.
4. Coloração de hematoxilina e eosina (H&E)
   NOTA: Para detalhes sobre o procedimento, consulte Yang, N. et ^al.21.
   1. Enxágue os tecidos fixados com água corrente, desidrate e incorpore-os.
   2. Corte seções de parafina (5 μm de espessura) usando um micrótomo e leve ao forno a 65 ° C por 4 h.
   3. Desparafine as seções e reidrate-as com água.
   4. Pinte as seções com solução de coloração de hematoxilina por 3 min e depois enxágue com água corrente.
   5. Desidrate as seções com etanol a 95% por 1 min e, em seguida, comente com solução de eosina por 2 min.
   6. Depois de selar as lâminas, execute a digitalização usando um scanner de lâminas e colete e analise as imagens.
5. Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)
   NOTA: Para detalhes sobre o procedimento, consulte Yang, N. et ^al.21.
   1. Para preparar o soro, adicionar substâncias-padrão e soro das concentrações correspondentes aos alvéolos da substância-padrão e aos alvéolos de amostra a medir, seguidos da adição do reagente marcado com enzima.
   2. Realize as etapas de incubação, lavagem, desenvolvimento de cor e terminação.
   3. Determine a absorbância em um comprimento de onda de 450 nm usando um instrumento marcado com enzima e calcule os níveis de expressão de testosterona (T), hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH), inibina B (INHB), hormônio luteinizante (LH), hormônio folículo-estimulante (FSH), estradiol (E2) e prolactina (PRL).

3. Análise estatística

1. Analisar os dados experimentais utilizando software estatístico, e apresentar os resultados de cada grupo como média ± desvio padrão (média ± DP).
2. Use ANOVA unidirecional para comparar as médias da amostra entre vários grupos que atendem às suposições de normalidade e homogeneidade de variância.
3. Use o teste t para comparações entre dois grupos e testes não paramétricos para dados que não atendem às suposições acima.
4. Considera-se diferenças estatisticamente significativas quando p < 0,05.

Avaliação do modelo

Após a modelagem, observe os ratos quanto à letargia, postura agachada, membros frios, relutância em comer, perda de peso, aumento do volume de urina, fezes moles e outros sintomas, que geralmente se alinham com a síndrome da deficiência de yang renal.

Após a dissecção, observe que os rins estão duros, brancos e mais pesados. A coloração H & E revela que os tecidos renais e testiculares dos ratos modelo estão seriamente danificados, com formas glomerulares irregulares, inflamação intersticial do túbulo renal e um grande número de células epiteliais sofrendo degeneração e até fibrose. Mais túbulos seminíferos nos testículos estão atrofiados e deformados, com células espermatogênicas desordenadas ou mesmo ausentes (Figura 2), indicando o estabelecimento bem-sucedido do modelo.

Condição geral dos ratos

No grupo em branco, os ratos exibiram bom humor, reações sensíveis, cabelos brilhantes e alimentação e defecação normais. Após a dissecção, seus rins pareciam marrom-avermelhados e macios. No grupo modelo, os ratos apresentaram letargia, costas agachadas, corpos frios, perda de apetite, perda de peso (p < 0,001), aumento da micção e fezes moles. Após a dissecção, seus rins estavam duros e uma aparência de "grande rim branco" foi observada (Figura 2A). Em comparação com o grupo modelo, os sintomas acima melhoraram significativamente no grupo Cérebro-Rim Shu-Mu, não melhoraram significativamente no grupo sem acuponto e também melhoraram significativamente no grupo L-carnitina. A comparação da massa corporal entre os grupos é mostrada na Figura 3.

Coeficientes de órgãos renais e testiculares

Conforme mostrado na Figura 4, em comparação com o grupo em branco, os coeficientes de órgãos renais dos ratos do grupo modelo aumentaram significativamente (p < 0,01), enquanto nenhuma diferença significativa foi encontrada nos coeficientes bilaterais dos órgãos testiculares (p > 0,05), indicando que a qualidade de ambos os testículos diminuiu após a modelagem. Em comparação com o grupo modelo, os coeficientes dos órgãos renais nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina diminuíram significativamente (p < 0,05), mas nenhuma diferença significativa foi encontrada no grupo sem acuponto (p > 0,05). Nenhuma diferença significativa foi encontrada nos coeficientes bilaterais de órgãos testiculares entre os grupos Shu-Mu Cérebro-Rim, L-carnitina e não acupuntura em comparação com o grupo modelo (p > 0,05), indicando que a massa testicular bilateral aumentou nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina, enquanto nenhuma mudança significativa foi observada no grupo sem acuponto.

Análise da qualidade do sêmen

Conforme mostrado na Figura 5, em comparação com o grupo em branco, a contagem de espermatozóides, a densidade, a taxa de sobrevivência e a taxa de motilidade diminuíram significativamente no grupo modelo (p < 0,001). Em comparação com o grupo modelo, a contagem de espermatozóides, a densidade de espermatozóides, a taxa de sobrevivência e a taxa de motilidade aumentaram significativamente nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina (p < 0,001), mas nenhuma diferença significativa foi encontrada no grupo sem acuponto.

Alterações morfológicas no rim

Conforme mostrado na Figura 6, o tecido renal dos ratos do grupo branco tinha uma estrutura completa e forma normal. Os glomérulos eram redondos e cheios, fortemente ligados às cápsulas renais, e os túbulos renais eram regulares e bem organizados. Em comparação com o grupo em branco, o grupo modelo exibiu lesão grave do tecido renal, morfologia glomerular irregular, atrofia, redução, inflamação intersticial grave do túbulo renal, degeneração de numerosas células epiteliais e fibrose grave. Em comparação com o grupo modelo, o grau de dano ao tecido renal melhorou significativamente nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina, com formas glomerulares mais regulares, ligeira separação das cápsulas renais, desnaturação de algumas células epiteliais tubulares e leve infiltração e fibrose de células intersticiais do túbulo renal. Em comparação com o grupo modelo, o grau de lesão do tecido renal foi menos aparente no grupo sem acupuntura, com formas glomerulares mais regulares, separação das cápsulas renais, mais desnaturação e distúrbio das células epiteliais tubulares renais, infiltração moderada de células inflamatórias ao redor dos glomérulos e no interstício do túbulo renal e mais fibrose.

Alterações morfológicas dos testículos

Conforme mostrado na Figura 7, os testículos dos ratos no grupo branco tinham uma estrutura de tecido completa, morfologia normal, túbulos seminíferos limpos e células espermatogênicas regulares. Em comparação com o grupo em branco, o dano ao tecido testicular foi grave no grupo modelo, com mais atrofia e deformação dos túbulos seminíferos e células espermatogênicas desordenadas ou mesmo ausentes. Em comparação com o grupo modelo, o grau de dano ao tecido testicular melhorou significativamente nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina, com a maioria dos túbulos seminíferos dispostos ordenadamente e células espermatogênicas dispostas regularmente. Em comparação com o grupo modelo, o grau de dano ao tecido testicular não diminuiu significativamente no grupo sem acupuntura, com alguns túbulos seminíferos exibindo atrofia e deformação, necrose celular, vacúolos e células espermatogênicas desordenadas e ausentes.

Comparação dos níveis séricos de hormônios

Conforme mostrado na Figura 8, em comparação com o grupo em branco, os níveis de testosterona (T), hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) e inibina B (INHB) no soro diminuíram no grupo modelo (p < 0,001), enquanto o hormônio luteinizante (LH), hormônio folículo-estimulante (FSH), estradiol (E2) e prolactina (PRL) aumentaram (p < 0,001). Em comparação com o grupo modelo, T, GnRH e INHB aumentaram nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina (p < 0,001), enquanto os níveis de LH, FSH, E2 e PRL diminuíram (p < 0,001), mas nenhuma diferença significativa foi encontrada no grupo sem acuponto.

Figura 1: Métodos experimentais. (A) Procedimento de gavagem oral. (B) Método de tratamento envolvendo eletroacupuntura. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 2: Verificação do modelo. (A) Aparência do rim antes e depois da modelagem. (B) Tecido renal normal. (C) Tecido renal após modelagem (coloração HE, 200x, barra de escala: 100 μm). (D) Tecido testicular normal. (E) Tecido testicular após modelagem (coloração HE, 100x, barra de escala: 200 μm). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 3: Comparação da massa corporal entre os grupos. B: grupo em branco, M: grupo modelo, S: grupo cérebro-rim Shu-Mu, N: grupo sem acupuntura, L: grupo L-carnitina. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 3). ^ap < 0,05, ^bp < 0,01, ^cp < 0,001, ^nsp > 0,05. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4: Comparação dos coeficientes dos órgãos renais e testiculares entre os grupos. (A) Coeficientes dos órgãos renais esquerdos. (B) Coeficientes de órgãos renais direitos. (C) Coeficientes de órgãos testiculares esquerdos. (D) Coeficientes de órgãos testiculares direitos. B: grupo em branco, M: grupo modelo, S: grupo cérebro-rim Shu-Mu, N: grupo sem acupuntura, L: grupo L-carnitina. Coeficiente de órgão (%) = peso do órgão (g) / peso corporal (g) × 100%. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 3). ^Ap < 0,05, ^bp < 0,01, ^cp < 0,001, ^NSp > 0,05. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 5: Comparação da qualidade do esperma entre os grupos. (A) Contagem de espermatozoides. (B) Densidade de espermatozóides. (C) Taxa de sobrevivência do esperma. (D) Razão de atividade espermática. B: grupo em branco, M: grupo modelo, S: grupo cérebro-rim Shu-Mu, N: grupo sem acupuntura, L: grupo L-carnitina. Taxa de sobrevivência de espermatozóides (%) = contagem de espermatozóides móveis / contagem total de espermatozóides × 100%. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 3). ^Ap < 0,05, ^bp < 0,01, ^cp < 0,001, ^NSp > 0,05. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 6: Alterações morfológicas no rim em cada grupo. (coloração HE, 200×, barra de escala: 100 μm). As setas pretas indicam glomérulos, as setas verdes indicam túbulos renais, as setas amarelas indicam células inflamatórias e as setas azuis indicam fibrose. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 7: Alterações morfológicas nos testículos em cada grupo. (coloração HE, 100×, barra de escala: 200 μm). As setas pretas indicam túbulos seminíferos normais, as setas verdes indicam necrose e as setas azuis indicam vacúolos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 8: Comparação dos níveis séricos de hormônios entre os grupos. (A) Níveis séricos de testosterona (T). (B) Níveis séricos de GnRH. (C) Níveis séricos de LH. (D) Níveis séricos de FSH. (E) Níveis séricos de E2. (F) Níveis séricos de INHB. (G) Níveis séricos de PRL. B: grupo em branco, M: grupo modelo, S: grupo cérebro-rim Shu-Mu, N: grupo sem acupuntura, L: grupo L-carnitina. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (n = 3). ^ap < 0,05, ^bp < 0,01, ^cp < 0,001, ^nsp > 0,05. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Na MTC, o "rim" consiste no "rim interno", referindo-se às funções do sistema urinário na medicina moderna, e o "rim externo", referindo-se ao eixo hipotálamo-hipófise-gonadal e aos órgãos reprodutivos externos anatômicos²⁵. As vesículas seminais masculinas pertencem ao "rim externo" e seus componentes incluem testículos, epidídimos, vesículas seminais, etc.²⁶. A MTC considera a essência a base material do corpo humano, e a "essência renal" inclui a "essência pré-natal" herdada dos pais e a "essência pós-natal" produzida pela transformação do baço e do estômago em água e essência de grãos, que é usada para nutrir as cinco vísceras e seis intestinos. Entre eles, a essência pré-natal é a substância original que constitui o embrião e é a base da vida; A essência pós-natal enriquece a essência das cinco vísceras e seis intestinos, e a parte restante é armazenada no rim. Os dois são interdependentes e intimamente combinados no rim para formar a "essência renal". Se a essência renal for insuficiente, ou seja, se as vesículas seminais não puderem ficar cheias, isso levará à "oligospermia"; Se a essência reprodutiva pode ser normalmente descarregada, isto é, se as vesículas seminais podem exercer suas funções de produzir, armazenar e descarregar espermatozoides, é o resultado da coordenação mútua da natureza adstringente do yin do rim e da natureza excitatória do yang do rim. Se o yang do rim for deficiente e fraco, a função adstringente é excessiva, enquanto a função excitatória é insuficiente, resultando em essência fria e "astenospermia". Portanto, as manifestações da oligoastenospermia correspondem aos tipos de síndrome da MTC de "deficiência de essência renal e deficiência de yang renal". Neste experimento, todos os ratos modelados basicamente atenderam às manifestações de oligoastenospermia do tipo deficiência de yang renal, e o tratamento deve se concentrar em "tonificar o rim, auxiliar o yang, preencher a essência e nutrir a medula". A combinação de Epangsanxian, Shenshu, Jingmen e Taixi para o ponto de acupuntura Cérebro-Rim de Shu-Mu pode coordenar yin e yang e conectar o rim e o cérebro, alcançando o objetivo de "equilíbrio yin-yang".

A espermatogênese é regulada pela atividade endócrina do eixo HPT, e a regulação do eixo HPT depende principalmente de hormônios relacionados e genes receptores expressos no hipotálamo, hipófise e testículos²⁷, que é dominado principalmente pela liberação pulsátil de GnRH do hipotálamo. Isso estimula a hipófise anterior a secretar LH, FSH e PRL¹¹. Entre eles, o GnRH é o regulador mais crítico do eixo HPT, e seu nível pode refletir indiretamente o status do eixo HPT e a capacidade dos testículos de produzir espermatozoides²⁸. O LH medeia a liberação de T das células estromais testiculares, e a ocorrência de espermatozoides depende da estimulação de T. Se a secreção de T for insuficiente, o número e a qualidade dos espermatozoides diminuirão²⁹. O FSH liga-se a receptores na superfície das células de Sertoli e atua em conjunto com o T para promover a proliferação de espermatogônias e produzir INHB para manter a espermatogênese³⁰. A INHB, uma glicoproteína sintetizada em células testiculares de Sertoli e células germinativas, é um importante regulador da gônada masculina, que pode, por sua vez, ativar a glândula pituitária para produzir FSH e interagir com a FSH para regular conjuntamente o eixo HPT 31,32,33. No entanto, a PRL é um fator importante que afeta a motilidade espermática³⁴. A PRL excessiva pode inibir a secreção do eixo gonadal, inibindo assim a espermatogênese³⁵. E2 é secretado pelas gônadas e pelo cérebro e tem um efeito de feedback negativo sobre LH e FSH³⁶. Níveis elevados de E2 danificam as células de Sertoli e as células intersticiais testiculares, causam esteatose do tecido conjuntivo circundante e diminuem o diâmetro dos túbulos seminíferos masculinos, resultando em fertilidade prejudicada dos pacientes³⁷. Verificou-se que os níveis séricos de FSH e LH em ratos oligastenospermia induzidos por Tripterygium wilfordii foram significativamente aumentados após a modelagem. Após 60 dias de tratamento com Qilin Pill, os níveis desses dois hormônios diminuíram significativamente em comparação com o grupo modelo³⁸, o que foi consistente com os resultados deste estudo. Outros estudos mostraram que a disfunção do eixo HPT ocorre em ratos com síndrome de deficiência rim-yang causada pela adenina, e os níveis de secreção de hormônios sexuais relacionados também mudam³⁹.

Neste estudo, em comparação com o grupo em branco, os ratos do grupo modelo estavam geralmente em más condições e a qualidade do sêmen diminuiu significativamente (p < 0,001). A coloração H & E mostrou sérios danos ao rim e ao tecido testicular, indicando que os ratos modulados pela adenina preenchiam os critérios para oligonastenospermia. Em comparação com o grupo modelo, as condições acima melhoraram significativamente nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina (p < 0,05), enquanto a melhora não foi significativa no grupo sem acuponto, indicando que a qualidade do esperma e a morfologia e estrutura dos órgãos melhoraram nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina. Em comparação com o grupo em branco, T, GnRH e INHB diminuíram (p < 0,001) no grupo modelo, indicando que a capacidade de secretar T, GnRH e INHB diminuiu em ratos oligoastenospermia após modelagem bem-sucedida. LH, FSH, E2 e PRL aumentaram (p < 0,001), indicando que a secreção de LH, FSH, E2 e PRL aumentou após a modelagem bem-sucedida, levando ao enfraquecimento da função espermatogênica testicular. Em comparação com o grupo modelo, T, GnRH e INHB aumentaram (p < 0,001), enquanto os níveis de secreção de LH, FSH, E2 e PRL diminuíram (p < 0,001) nos grupos Shu-Mu Cérebro-Rim e L-carnitina, mas nenhuma diferença significativa foi encontrada no grupo sem acuponto. Isso ilustra que tanto a eletroacupuntura quanto a L-carnitina podem regular os níveis hormonais do eixo HPT em ratos e ter um bom efeito na melhoria da oligonastenospermia em ratos.

A L-carnitina é um antioxidante natural em mamíferos que pode participar do metabolismo energético celular e reduzir o dano antioxidante do esperma⁴⁰. Numerosos estudos provaram que a L-carnitina pode melhorar significativamente a motilidade, morfologia e concentração dos espermatozoides, aumentando o nível de hormônios relacionados ao eixo HPT⁴¹. Neste experimento, a L-carnitina foi usada como um grupo de controle positivo de drogas para comparar com o grupo Cérebro-Rim Shu-Mu. Os dados experimentais não mostraram diferença significativa na comparação de vários índices entre os dois grupos, verificando-se que a eletroacupuntura em "Epangsanxian, Shenshu, Jingmen e Taixi" teve um bom efeito em ratos oligoastenospermia. Além disso, a acupuntura pode coordenar o yin e o yang das vísceras e aumentar o qi saudável do corpo para resistir ao qi patogênico, tornando-o seguro, eficaz e menos tóxico com menos efeitos colaterais. A eletroacupuntura pode aumentar o efeito curativo mais do que a acupuntura comum e fornecer um tratamento seguro e eficaz para o tratamento clínico da oligoastenospermia. Como os ratos do grupo sem acupuntura não seguiram o princípio da seleção de pontos ao longo dos meridianos, vários dados experimentais foram significativamente diferentes daqueles do grupo Cérebro-Rim de Shu-Mu, verificando a significância da compatibilidade dos quatro pontos, "Epangsanxian, Shenshu, Jingmen e Taixi".

Em resumo, a eletroacupuntura nos quatro pontos, "Epangsanxian, Shenshu, Jingmen e Taixi", pode melhorar a função do eixo HPT em ratos, regulando o nível de hormônios relacionados, melhorando assim a qualidade do esperma em ratos e, finalmente, alcançando o objetivo de tratar a oligoastenospermia. Ele fornece outro tratamento seguro e eficaz para o manejo clínico da oligonastenospermia.

No entanto, devido à falta de tecnologia e recursos, este estudo limitou-se ao estudo dos níveis séricos de hormônios no eixo HPT, e os métodos de detecção foram limitados. Em experimentos futuros, consideraremos o uso de vários meios, como cromatografia, para verificar ainda mais as mudanças nos níveis hormonais e usar transcriptômica ou metabolômica para realizar estudos adicionais sobre a regulação do eixo HPT por eletroacupuntura no nível do gene e além.

Os autores não têm nada a divulgar.

Esta pesquisa foi apoiada pelo Projeto Chave de Pesquisa e Desenvolvimento da Região Autônoma de Ningxia Hui (2021BEG02041), avaliação baseada em evidências e estudo clínico sobre a compatibilidade do ponto de acupuntura da terapia de acupuntura regulando o "eixo hipotálamo-hipófise-testicular" no tratamento da disfunção reprodutiva masculina, Líder do projeto: Huisheng Ma; Projeto de Construção de Disciplina de Primeira Classe 2024 (ZY0019110305), líder do projeto: Huisheng Ma; Academia Chinesa de Ciências Médicas Chinesas (YZ-202128), Líder do projeto: Huisheng Ma.