آلية Shu-Mu الدماغ والكلى المضغوطة في علاج قلة الوحدة في الفئران عبر محور ما تحت المهاد والغدة النخامية والخصية

تهدف هذه الدراسة إلى التحقق من التأثير العلاجي لنقطة الوخز بالإبر في الدماغ والكلى Shu-Mu على قلة وحدة النطاف في الفئران واستكشاف آليتها الأساسية من خلال محور ما تحت المهاد والغدة النخامية والخصية (HPT).

قلة وهن النطاف هو سبب شائع للعقم عند الذكور. ينظم محور الغدة النخامية والخصية (HPT) تمايز الغدد التناسلية ونضجها من خلال تخليق الهرمونات التناسلية وإطلاقها ، مما يلعب دورا حيويا في خصوبة الذكور. يؤدي تعطيل استقرار محور HPT إلى إضعاف إنتاج الحيوانات المنوية ، مما يقلل من جودة السائل المنوي. قد يوفر التحقيق في تأثير الوخز بالإبر الكهربائية على تنظيم محور HPT رؤى حول علاج قلة وهن النطاف. تم تقسيم خمسين من ذكور الفئران SD البالغة من العمر 8 أسابيع بشكل عشوائي إلى مجموعات فارغة ، ونموذجية ، و Shu-Mu Brain-Kidney ، وغير نقطة البر ، و L-carnitine (ن = 10 لكل مجموعة). باستثناء المجموعة الفارغة ، تلقت الفئران الأدينين داخل المعدة لمدة 28 يوما لإنشاء النموذج. بعد النمذجة ، خضعت مجموعة Shu-Mu Brain-Kidney للوخز بالإبر الكهربائية في نقاط الوخز بالإبر المحددة ، بينما تلقت المجموعة غير الوخز بالإبر علاجا زائفا لمدة 30 دقيقة يوميا. تلقت مجموعة L-carnitine L-carnitine (10 مل / كغ) داخل المعدة مرة واحدة يوميا. استمرت العلاجات لمدة 28 يوما. تم تقييم الظروف العامة ومعاملات الأعضاء وجودة السائل المنوي. قام تلطيخ HE بتحليل مورفولوجيا الأنسجة ، واكتشفت ELISA تغيرات هرمون المصل. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، أظهرت مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine تحسنا كبيرا في حركات الروح والنظام الغذائي والأمعاء ، مع زيادة وزن الجسم ، بينما لم تظهر المجموعة غير الوخز بالإبر أي تغيير كبير. انخفضت معاملات الأعضاء الكلوية بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ولكنها ظلت دون تغيير في المجموعة غير السر. لم تظهر معاملات أعضاء الخصية فروق ذات دلالة إحصائية بين مجموعات العلاج. تحسن عدد المنوية وكثافتها وبقائها ومعدلات الحركة بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ، ولكن ليس في المجموعة غير الوخز بالإبر. أظهر تلطيخ H & E تلفا محفنا في الكلى وأنسجة الخصية في مجموعات Shu-Mu Brain Kidney و L-carnitine. كشفت ELISA عن زيادة T و GnRH و INHB وانخفاض مستويات LH و FSH و E2 و PRL في هذه المجموعات (ص < 0.001) ، مع عدم وجود تغييرات ذات دلالة إحصائية في المجموعة غير الوخز بالإبر. تشير هذه النتائج إلى أن العلاج بنقطة الوخز بالدماغ والكلى Shu-Mu يحسن جودة المنوية من خلال تنظيم محور HPT ، مما يوفر علاجا محتملا لقلة وهن النطاف.

قلة الوهن الوحد، مقسمة إلى "قلة النطاف" و "وهن النطاف" ، هي واحدة من الأنواع الشائعة للعقم عند الذكور ، حيث يمثل معدل الإصابة حوالي 75٪ من حالات العقم عند الذكور¹. تتميز قلة الوهن النطاف بشكل أساسي بانخفاض كثافة المنوية وحركتها في الخصيتين وتتجلى في الغالب سريريا في اضطراب تكوين المنوية ، وانخفاض عدد المنوية ، وانخفاض حركة المنوية^2،3. في السنوات الأخيرة ، زاد معدل الإصابة بقليل الوهن السماف عاما بعد عام⁴. بدون علاج فعال ، سيكون له آثار ضارة طويلة المدى على الصحة الجسدية والعقلية للمرضى وحتى الانسجام الأسري⁵. أظهرت الدراسات أن المشاكل الوراثية⁶ ، واضطرابات الغدد الصماء التناسلية⁷ ، والتهابات الجهاز البولي التناسلي⁸ ، والأدوية الكيميائية⁹ يمكن أن تؤثر على إنتاج الحيوانات المنوية ونضجها ، مما يؤدي إلى انخفاض جودة السائل المنوي. في الوقت الحالي ، أصبح تحسين جودة المنوية التالفة مشكلة صعبة في المجال الطبي.

محور الغدة النخامية والخصية (HPT) هو المسار الرئيسي للتنظيم الإنجابي في الجسم ، والذي يمكن أن ينظم تمايز ونضج الغدد التناسلية عن طريق تحفيز تخليق وإفراز الهرمونات التناسلية المتعلقة بمنطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية والخصيتين ، ويلعب دورا مهما في الحفاظ على الوظيفة الإنجابية الطبيعية للذكور¹⁰. إذا تعطل استقرار وظيفة محور HPT ، فسوف يتسبب ذلك في عدم كفاية إفراز الخصية للوصول إلى التركيز الفسيولوجي لهرمون التستوستيرون ، مما يؤدي إلى انخفاض عدد وجودة المنوية في الخصية¹¹. لذلك ، يهدف علاج قلة وهن النطاف بشكل أساسي إلى تنظيم وظيفة محور HPT وتحقيق الغرض من الحفاظ على توازن هرمونات الغدد الصماء ذات الصلة ، وبالتالي زيادة عدد الحيوانات المنوية في السائل المنوي ، وتعزيز نشاط الحيوانات المنوية ، وتحسين جودة السائل المنوي.

في العلاج السريري لقلة وهن النطاف ، يعتمد الطب الحديث بشكل أساسي طرقا مثل الجراحة والأدوية المضادة للأكسدة وتعزيز حركة المنوية^12،13 ، بينما يجمع العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية بين الوخز بالإبر الصينية التقليدية والكهرباء الحيوية الطبية الحديثة. تتميز بمزايا كونها سريعة ودقيقة ، ولها تأثير علاجي واضح ، ولها عدد قليل من ردود الفعل السلبية ، ومجموعة واسعة من الأمراض المناسبة ، وتكلفة العلاج المنخفضة ، ولها تأثير علاجي جيد على قلة وهن النطاف^14،15. "الظهر يانغ ، والبطن ين." تجمع تركيبة نقطة الوخز بالإبر Shu-Mu بين نقاط Shu ونقاط Mu ، واحدة في الأمام وواحدة في الخلف ، وواحدة يين وواحدة يانغ ، تعمل معا ، والمعروفة أيضا باسم طريقة الجمع بين نقطة الوخز بالإبر الأمامية والخلفية. يعتقد الطب الصيني التقليدي (TCM) أن الكلى هي جذر جوهر ما قبل الولادة ، ويقع المرض في الكلى. يتم اختيار نقطة Front-mu للكلي, Jingmen (GB25), ونقطة Back-shu, Shenshu (BL23), التي لها تأثير في تدفئة الكلى, مساعدة يانغ, والبحث عن يانغ داخل يين^16,17; تخزن الكلى الجوهر وتتحكم في إنتاج النخاع ، والدماغ هو بحر النخاع ومكان التقاء كل يانغ ، و Taixi (KI3) هي نقطة مصدر خط الزوال الكلوي Shaoyin للقدم ، والذي يمكنه تنظيم وتنشيط الكبد والكلى ، وتغذية الين ، وتوليد النخاع¹⁸. إلى جانب Epangsanxian (MS4) ، فإنه يربط الكلى والدماغ ، مما يعكس فكرة "تركيبة الوخز بالإبر بين الدماغ والكلى" في الطب الصيني^{التقليدي 19} ، والتأثير العلاجي أكثر وضوحا من تأثير الوخز بالإبر العادي.

تركز دراسات العلاج الحالية على جودة السائل المنوي في المقام الأول على تحسين بنية الخصية ووظيفتها ، بينما أجريت أبحاث محدودة حول تنظيم مستويات هرمون المصل عبر الأنسجة المختلفة لمحور الغدة النخامية والخصية (HPT)²⁰. في البحث الأولي ، تم استخدام تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA-Seq) لتحديد الجينات المرشحة والمسارات التنظيمية المشاركة في تنظيم جودة السائل المنوي داخل أنسجة ما تحت المهاد والغدة النخامية والخصية للفئران السليمة والفئران النموذجية قليلة النطاف التي يسببها^{الأدينين 21}. بالإضافة إلى ذلك ، تم إجراء اختبار جودة السائل المنوي والتحليل النسيجي لأنسجة الخصية في كلتا المجموعتين. قدمت هذه النتائج نظرة ثاقبة حول الآليات الجزيئية الكامنة وراء جودة السائل المنوي في فئران قلة الوهن النطاف الناجم عن الأدينين. يمكن أن يؤدي العلاج بالوخز بالإبر الكهربائية باستخدام نقطة الوخز بالإبر البعيدة التقريبية إلى تحسين جودة المنوية في الفئران قليلة الوهن النطاف عن طريق تنظيم محور HPT ، ويرتبط التأثير بعملية الإجهاد التأكسدي²². ومع ذلك ، من غير المعروف ما إذا كانت نقطة الوخز بالإبر الدماغية والكلى Shu-Mu يمكن أن تحسن جودة السائل المنوي للفئران من خلال تنظيم محور HPT. لمزيد من استكشاف الآلية التنظيمية لتحسين جودة السائل المنوي في فئران قلة وهن النطاف وطرق العلاج الفعالة ، استخدمت هذه الدراسة نموذجا للفئران الناجم عن الأدينين من قلة وهن النطاف واختارت أربع نقاط وخز بالإبر ، Epangsanxian و Shenshu و Jingmen و Taixi ، لاستكشاف الآلية ذات الصلة للتأثير العلاجي لنقطة الوخز بالإبر الدماغية والكلى Shu-Mu على قلة وهن النطاف في الفئران من جانب محور HPT ، توفير أساس علمي أكثر للعلاج السريري.

تمت مراجعة جميع التجارب على والموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة نينغشيا الطبية (رقم الموافقة: IACUC-NYLAC-2021-130). أجريت الدراسة بما يتفق بدقة مع إرشادات ARRIVE 2.0 للتجارب على والتزمت بمبادئ رعاية الموضحة في دليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر. استخدمت هذه الدراسة العشوائية ذات الشواهد على تحليلا أحادي الاتجاه للتباين وتم إجراؤها في مركز التجارب على بجامعة نينغشيا الطبية في الفترة من مارس إلى مايو 2023. تم استخدام ذكور الفئران SD البالغة من العمر ثمانية أسابيع من درجة SPF والتي تزن 180-220 جم في هذه الدراسة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. إنشاء النموذج الحيواني وإجراءات العلاج

1. التجارب والمجموعات
   1. احصل على خمسين فأرا من الذكور SD بعمر 8 أسابيع من فئة SPF تزن 180-220 جم.
   2. قم بإيواء جميع الفئران في ظل ظروف قياسية ، مع الحفاظ على درجة حرارة الغرفة من 22 إلى 25 درجة مئوية ، ورطوبة 50٪ -60٪ ، وتوفير الوصول المجاني إلى علف القوارض القياسي والمياه.
   3. بعد أسبوع واحد من التكيف ، قسم الفئران بشكل عشوائي إلى مجموعة فارغة (ب) (ن = 10) ومجموعة نمذجة (ن = 40) باستخدام طريقة جدول الأرقام العشوائية. يتم تطبيق محلول ملحي عادي للمجموعة الفارغة والأدينين لمجموعة النمذجة عن طريق التزقيم الفموي.
   4. بعد 28 يوما ، قسم مجموعة النمذجة بشكل عشوائي إلى مجموعة نموذجية (M) ، ومجموعة Shu-Mu Brain - Kidney (S) ، ومجموعة غير نقطة الوخز (N) ، ومجموعة L-carnitine (L) (ن = 10 لكل مجموعة). اترك مجموعة النماذج دون علاج.
      1. تطبيق تدخل الوخز بالإبر الكهربائية باستخدام طريقة مطابقة الوخز بالإبر بين الدماغ والكلى Shu-Mu على مجموعة Shu-Mu Brain-Clay. يتم تطبيق العلاج غير الوخز بالإبر للمجموعة غير الوخز بالإبر والسائل الفموي ل carnitine عن طريق التزقيم لمجموعة L-carnitine. علاج جميع المجموعات بشكل مستمر لمدة 28 يوما.
2. بناء النموذج
   ملاحظة: أظهرت الدراسات أن الجرعات العالية من الأدينين يمكن أن تؤثر على وظيفة الخصية في الفئران ، مما يؤدي إلى إفراز غير طبيعي للهرمونات الجنسية ، وتعطيل الاستقرار الوظيفي لمحور HPT ، وانخفاض جودة المنوية²³. لذلك ، يستخدم الأدينين بشكل شائع لإنشاء نماذج العقم الحيواني عند الذكور.
   1. يتم تطبيق محلول ملحي عادي (1 مل/100 جم من وزن الجسم) للمجموعة الفارغة والأدينين (20 ملغ/100 جم من وزن الجسم) للمجموعة النموذجية عن طريق التزقيم الفموي (الشكل 1 أ).
   2. تأكد من التحريض المستمر أثناء التزقيم لمنع ترسيب الأدينين وانسداد إبرة التزقيم. قم بإدارة العلاج مرة واحدة يوميا لمدة 28 يوما.
3. 1.3 إجراء العلاج
   1. مجموعة Shu-Mu للدماغ والكلى
      1. ابدأ التدخل في اليوم الأول بعد النمذجة. قم بإجراء الوخز بالإبر باستخدام إبر الوخز بالإبر المعقمة التي تستخدم لمرة واحدة على النقاط الثنائية. بعد إصلاح الجرذ ، قم بتعريض وتعقيم موقع الوخز بالإبر.
      2. قم بإصلاح جلد موقع الوخز بالإبر باليد اليسرى واثقب نقطة الوخز بالإبر بسرعة بإبرة الوخز بالإبر المعقمة التي يمكن التخلص منها في اليد اليمنى. قم بتوصيل محفز كهربائي. تطبيق الموجات التوسعية بتردد الوخز بالإبر الكهربائية 2 هرتز ، وشدة تحفيز 1.5 مللي أمبير ، ورعشة طفيفة في العضلات المحلية.
      3. قم بإجراء علاج الوخز بالإبر الكهربائية لمدة 30 دقيقة في كل مرة ، مرة واحدة يوميا ، لمدة 28 يوما متتاليا (الشكل 1 ب).
         ملاحظة: حدد نقاط الوخز بالإبر في الفئران بالإشارة إلى علم الوخز بالإبر والكي التجريبي ل Yong Tang ، الملحق الثاني ، "نقاط الوخز بالإبر شائعة الاستخدام في التجارب" ، جنبا إلى جنب مع طريقة اختيار النقاط التشريحية المقارنة¹⁹. تم اختيار النقاط التالية: (1) Epangsanxian (MS4): تقع على بعد 3 مم أقل و 4 مم خارج نقطة Touwei. العملية: وخز 1-2 مم مستقيم ؛ (2) شنشو (BL23): تقع في منطقة العمود الفقري ، على جانبي العملية الشائكة السفلية للفقرة القطنية الثانية ، 6 مم بجانب الخط الظهري المتوسط. العملية: وخز 6 مم مستقيم ؛ (3) Jingmen (GB25): يقع على الخصر الجانبي ، في الطرف الحر من الضلع 13 على الجانب السفلي. العملية: وخز 1-2 مم مستقيم ؛ (4) Taixi (KI3): يقع على الجانب الداخلي من القدم ، في الاكتئاب بين النقطة العالية للكاحل الإنسي والحافة الخلفية لوتر العرقوب. العملية: وخز 3 مم مستقيم.
   2. مجموعة غير الوخز بالإبر
      1. حدد وقم بتشغيل نقاط الوخز غير 1 و 2 و 3 بنفس طريقة مجموعة Shu-Mu Brain-Kidney (الشكل 1 ب).
         ملاحظة: نظرا لأن نقاط الوخز غير الحابرة لا تتبع مبدأ اختيار النقاط على طول خطوط الطول ، ووفقا لنظرية الطب الصيني التقليدي (TCM) والملاحظة السريرية طويلة المدى ، فإن نقاط الوخز بالوخز بهذه الوخز بالإبر لها تأثير علاجي ضئيل على المرضى الذين يعانون من قلة الوهن الحيواني²⁴. (1) غير نقطة الوخز بالإبر 1: تقع في منتصف الخط الفاصل بين طرف الكوع والإبط على الجانب الداخلي من الكوع. العملية: وخز 1-2 مم مستقيم ؛ (2) غير نقطة الوخز 2: تقع في منتصف نقطة المنتصف بين اللقيمة الإنسية لعظم العضد ومعصم الزند ، على الهامش الزندي. العملية: وخز 1-2 مم مستقيم ؛ (3) غير نقطة الوخز 3: تقع عند تقاطع العضلة الدالية الأمامية وعضلة العضلة ذات الرأسين في الذراع الداخلية. عملية: وخز 1-2 مم مستقيم.
   3. مجموعة L-carnitine
      1. يتم تطبيق سائل ليفوكارنيتين الفموي عن طريق التزقيم الفموي بجرعة 10 مل/كغ من وزن الجسم، مرة واحدة يوميا، لمدة 28 يوما متتاليا (الشكل 1 أ).
4. القتل الرحيم
   1. بعد العلاج ، اسمح لجميع الفئران بالصيام لمدة 24 ساعة ، وتخديرها عن طريق الحقن داخل الصفاق من 2٪ بنتوباربيتال الصوديوم (40 مجم / كجم من وزن الجسم ، باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا) ، وجمع الدم من قمة القلب باستخدام إبرة جمع الدم الوريدي التي يمكن التخلص منها^21،24.
   2. بعد الوفاة بقطع الرأس ، قم بإزالة جانب واحد من البربخ لقياس جودة السائل المنوي. احصد أنسجة الكلى والخصية ، ووزنها وسجلها ، وثبتها في مثبت بارافورمالدهايد في درجة حرارة الغرفة لمدة 48 ساعة قبل دمجها في البارافين²⁴.

2. مؤشرات المراقبة

1. ملاحظة عامة: راقب الحالة العقلية والنظام الغذائي وحركات الأمعاء للفئران ، وراقب وزن أجسامها يوميا.
2. معاملات الأعضاء: بعد الوفاة ، قم بإزالة الدهون السطحية والأنسجة الضامة بعناية من أنسجة الكلى والخصية ، واشطفها بمحلول ملحي عادي ، وجففها بورق الترشيح ، ووزنها على ميزان ، وسجل القياسات لحساب معاملات الأعضاء. معامل العضو (٪) = (وزن العضو [جم] / وزن الجسم [جم]) × 100٪.
3. جودة السائل المنوي
   1. بعد إزالة الدهون الزائدة ، قم بإزالة ووضع جانب واحد من البربخ من كل فأر في حمام مائي بدرجة حرارة ثابتة عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. ثم قم بقص العينة وتصفيتها ونفخها برفق واخلطها جيدا.
   2. خذ كمية 10 ميكرولتر من معلق المنوية المخفف وقم بإسقاطه على حافة زجاج الغطاء للوحة العد المسخنة مسبقا ، مما يسمح لتعليق المنوية بالتغلغل تلقائيا في غرفة العد.
   3. قياس عدد الحيوانات المنوية وكثافتها ومعدل البقاء على قيد الحياة ومعدل الحركة باستخدام نظام CASA (تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر^{) 21}.
4. تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E)
   ملاحظة: للحصول على تفاصيل حول الإجراء ، راجع Yang, N. et ^al.21.
   1. اشطف المناديل الثابتة بالماء الجاري وجففها وقم بتضمينها.
   2. قطع أقسام البارافين (بسمك 5 ميكرومتر) باستخدام ميكروتوم واخبزها على حرارة 65 درجة مئوية لمدة 4 ساعات.
   3. قم بإزالة الشمع من الأقسام وترطيبها بالماء.
   4. تلطخ الأقسام بمحلول تلطيخ الهيماتوكسيلين لمدة 3 دقائق ، ثم اشطفها بالماء الجاري.
   5. جفف الأقسام بنسبة 95٪ من الإيثانول لمدة 1 دقيقة ، ثم قم بتلطيخ محلول اليوزين لمدة دقيقتين.
   6. بعد إغلاق الشرائح ، قم بإجراء المسح الضوئي باستخدام ماسح ضوئي للشرائح ، وجمع الصور وتحليلها.
5. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
   ملاحظة: للحصول على تفاصيل حول الإجراء ، راجع Yang, N. et ^al.21.
   1. لتحضير المصل ، أضف المواد القياسية والمصل من التركيزات المقابلة إلى آبار المواد القياسية وعينات الآبار المراد قياسها ، متبوعا بإضافة الكاشف المسمى بالإنزيم.
   2. قم بتنفيذ خطوات الحضانة والغسيل وتطوير اللون والإنهاء.
   3. حدد الامتصاص بطول موجي يبلغ 450 نانومتر باستخدام أداة تحمل علامة الإنزيم ، واحسب مستويات التعبير عن هرمون التستوستيرون (T) ، والهرمون المطلق لموجهة الغدد التناسلية (GnRH) ، والإنيهيبين ب (INHB) ، والهرمون اللوتيني (LH) ، والهرمون المنبه للجريب (FSH) ، والاستراديول (E2) ، والبرولاكتين (PRL).

3. التحليل الإحصائي

1. تحليل البيانات التجريبية باستخدام البرمجيات الإحصائية، وتقديم نتائج كل مجموعة كمتوسط ± انحراف معياري (المتوسط ± SD).
2. استخدم ANOVA أحادي الاتجاه لمقارنة وسائل العينة بين مجموعات متعددة تلبي افتراضات الحالة الطبيعية وتجانس التباين.
3. استخدم اختبار t للمقارنات بين مجموعتين ، والاختبارات غير المعلمية للبيانات التي لا تفي بالافتراضات المذكورة أعلاه.
4. ضع في اعتبارك الاختلافات ذات دلالة إحصائية عندما < p 0.05.

تقييم النموذج

بعد النمذجة ، راقب الفئران للخمول ، والوضعية الرابضة ، والأطراف الباردة ، والإحجام عن تناول الطعام ، وفقدان الوزن ، وزيادة حجم البول ، والبراز الرخو ، وغيرها من الأعراض ، والتي تتوافق بشكل عام مع متلازمة نقص الكلى يانغ.

بعد التشريح ، لاحظ أن الكلى صلبة وبيضاء وأثقل. يكشف تلطيخ H & E أن أنسجة الكلى والخصية للفئران النموذجية تتعرض لأضرار جسيمة ، مع أشكال كبيبية غير منتظمة ، والتهاب خلالي للنبيبات الكلوية ، وعدد كبير من الخلايا الظهارية التي تخضع للتنكس وحتى التليف. المزيد من الأنابيب المنوية في الخصيتين ضمرة ومشوهة ، مع خلايا منوية مضطربة أو حتى غائبة (الشكل 2) ، مما يشير إلى إنشاء نموذج ناجح.

الحالة العامة للفئران

في المجموعة الفارغة ، أظهرت الفئران معنويات جيدة ، وردود فعل حساسة ، وشعر لامع ، وأكل طبيعي وتغوط. بعد التشريح ، بدت كليتيهم بنية ضاربة إلى الحمرة وناعمة. في المجموعة النموذجية ، أظهرت الفئران الخمول ، والظهر الرابض ، والأجسام الباردة ، وفقدان الشهية ، وفقدان الوزن (ص < 0.001) ، وزيادة التبول ، والبراز الرخو. بعد التشريح ، كانت كليتيهم قاسية ، ولوحظ ظهور "كلية بيضاء كبيرة" (الشكل 2 أ). بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تحسنت الأعراض المذكورة أعلاه بشكل ملحوظ في مجموعة Shu-Mu Brain-Kidney ، ولم تتحسن بشكل ملحوظ في المجموعة غير الوخز بالإبر ، كما تحسنت بشكل ملحوظ في مجموعة L-carnitine. تظهر مقارنة كتلة الجسم بين المجموعات في الشكل 3.

معاملات أعضاء الكلى والخصية

كما هو موضح في الشكل 4 ، مقارنة بالمجموعة الفارغة ، زادت معاملات الأعضاء الكلوية للفئران في المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ (ص < 0.01) ، بينما لم يتم العثور على فرق كبير في معاملات أعضاء الخصية الثنائية (ص > 0.05) ، مما يشير إلى أن جودة كلتا الخصيتين انخفضت بعد النمذجة. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، انخفضت معاملات الأعضاء الكلوية في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine بشكل ملحوظ (p < 0.05) ، ولكن لم يتم العثور على فرق كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر (ص > 0.05). لم يتم العثور على فرق كبير في معاملات أعضاء الخصية الثنائية بين مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine و non-Acupoint مقارنة بالمجموعة النموذجية (ص > 0.05) ، مما يشير إلى أن كتلة الخصية الثنائية زادت في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ، بينما لم يلاحظ أي تغيير كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر.

تحليل جودة السائل المنوي

كما هو موضح في الشكل 5 ، مقارنة بالمجموعة الفارغة ، انخفض عدد المنوية ، والكثافة ، ومعدل البقاء على قيد الحياة ، ومعدل الحركة بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية (ص < 0.001). بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، زاد عدد المنوية وكثافة المنوية ومعدل البقاء على قيد الحياة ومعدل الحركة بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine (ص < 0.001) ، ولكن لم يتم العثور على فرق كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر.

التغيرات المورفولوجية في الكلى

كما هو موضح في الشكل 6 ، كان لأنسجة الكلى للفئران في المجموعة الفارغة بنية كاملة وشكل طبيعي. كانت الكبيبات مستديرة وممتلئة ، مرتبطة بإحكام بالكبسولات الكلوية ، وكانت الأنابيب الكلوية منتظمة ومرتبة بدقة. بالمقارنة مع المجموعة الفارغة ، أظهرت المجموعة النموذجية إصابة خطيرة في الأنسجة الكلوية ، ومورفولوجيا كبيبية غير منتظمة ، وضمور ، وانخفاض ، والتهاب خلالي شديد للنبيبات الكلوية ، وتنكس العديد من الخلايا الظهارية ، والتليف الشديد. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تحسنت درجة تلف أنسجة الكلى بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ، مع أشكال كبيبية أكثر انتظاما ، وانفصال طفيف عن الكبسولات الكلوية ، وتمسخ عدد قليل من الخلايا الظهارية الأنبوبية ، وتسلل الخلايا الخلالية للنبيبات الكلوية الخفيفة والتليف. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، كانت درجة إصابة الأنسجة الكلوية أقل وضوحا في المجموعة غير الوخز بالإبر ، مع أشكال كبيبية أكثر انتظاما ، وانفصال عن الكبسولات الكلوية ، والمزيد من التمسخ واضطراب الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية ، وتسلل الخلايا الالتهابية المعتدلة حول الكبيبات وفي الخلال الخلالي للنبيبات الكلوية ، والمزيد من التليف.

التغيرات المورفولوجية للخصيتين

كما هو موضح في الشكل 7 ، كان لخصيتين الفئران في المجموعة الفارغة بنية نسيجية كاملة ، وتشكل طبيعي ، وأنابيب منوية أنيقة ، وخلايا حيوانية منوية منتظمة. بالمقارنة مع المجموعة الفارغة ، كان تلف أنسجة الخصية شديدا في المجموعة النموذجية ، مع مزيد من الضمور والتشوه في الأنابيب المنوية ، وخلايا المنوية المضطربة أو حتى الغائبة. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تحسنت درجة تلف أنسجة الخصية بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ، مع ترتيب معظم الأنابيب المنوية بدقة وترتيب الخلايا المنوية بانتظام. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، لم تنخفض درجة تلف أنسجة الخصية بشكل كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر ، حيث تظهر بعض الأنابيب المنوية ضمورا وتشوه ونخر خلوي وفجوات وخلايا منوية مضطربة وغائبة.

مقارنة بين مستويات هرمون المصل

كما هو موضح في الشكل 8 ، مقارنة بالمجموعة الفارغة ، انخفضت مستويات هرمون التستوستيرون (T) والهرمون المطلق لموجهة الغدد التناسلية (GnRH) والإنهيبين B (INHB) في المصل في المجموعة النموذجية (ص < 0.001) ، بينما زادت هرمون اللوتين (LH) والهرمون المنبه للجريب (FSH) والاستراديول (E2) والبرولاكتين (PRL ) (ص < 0.001). بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، زادت T و GnRH و INHB في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine (ص < 0.001) ، بينما انخفضت مستويات LH و FSH و E2 و PRL (ص < 0.001) ، ولكن لم يتم العثور على فرق كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر.

الشكل 1: الطرق التجريبية. (أ) إجراء التزقيم عن طريق الفم. (ب) طريقة العلاج التي تنطوي على الوخز بالإبر الكهربائية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: التحقق من النموذج. (أ) ظهور الكلى قبل وبعد النمذجة. (ب) أنسجة الكلى الطبيعية. (ج) أنسجة الكلى بعد النمذجة (تلطيخ HE ، 200x ، شريط المقياس: 100 ميكرومتر). (د) أنسجة الخصية الطبيعية. (ه) أنسجة الخصية بعد النمذجة (تلطيخ HE ، 100x ، شريط المقياس: 200 ميكرومتر). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: مقارنة كتلة الجسم بين المجموعات. ب: مجموعة فارغة ، م: مجموعة نموذجية ، S: مجموعة Shu-Mu للدماغ والكلى ، N: مجموعة غير نقاط الوخز بالإبر ، L: مجموعة L-carnitine. يتم تقديم البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (ن = 3). ^أ< p 0.05 ، ^بص < 0.01 ، ^جص < 0.001 ، ^nsp > 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: مقارنة معاملات أعضاء الكلى والخصية بين المجموعات. (أ) معاملات الأعضاء الكلوية اليسرى. (ب) معاملات الأعضاء الكلوية اليمنى. (ج) معاملات أعضاء الخصية اليسرى. (د) معاملات أعضاء الخصية اليمنى. ب: مجموعة فارغة ، م: مجموعة نموذجية ، S: مجموعة Shu-Mu للدماغ والكلى ، N: مجموعة غير نقاط الوخز بالإبر ، L: مجموعة L-carnitine. معامل العضو (٪) = وزن العضو (جم) / وزن الجسم (جم) × 100٪. يتم تقديم البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (ن = 3). ^أ< p 0.05 ، ^بص < 0.01 ، ^جص < 0.001 ، ^nsp > 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5: مقارنة جودة المنوية بين المجموعات. (أ) عدد المنوية. (ب) كثافة المنوية. (ج) معدل بقاء المنوية. (د) نسبة نشاط المنوية. ب: مجموعة فارغة ، م: مجموعة نموذجية ، S: مجموعة Shu-Mu للدماغ والكلى ، N: مجموعة غير نقاط الوخز بالإبر ، L: مجموعة L-carnitine. معدل بقاء المنوية (٪) = عدد المنوية المتحركة / إجمالي عدد المنوية × 100٪. يتم تقديم البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (ن = 3). ^أ< p 0.05 ، ^بص < 0.01 ، ^جص < 0.001 ، ^nsp > 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 6: التغيرات المورفولوجية في الكلى في كل مجموعة. (تلطيخ HE ، 200× ، شريط المقياس: 100 ميكرومتر). تشير الأسهم السوداء إلى الكبيبات ، وتشير الأسهم الخضراء إلى الأنابيب الكلوية ، وتشير الأسهم الصفراء إلى الخلايا الالتهابية ، وتشير الأسهم الزرقاء إلى التليف. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 7: التغيرات المورفولوجية في الخصيتين في كل مجموعة. (تلطيخ HE ، 100× ، شريط المقياس: 200 ميكرومتر). تشير الأسهم السوداء إلى الأنابيب المنوية الطبيعية ، وتشير الأسهم الخضراء إلى النخر ، وتشير الأسهم الزرقاء إلى الفجوات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 8: مقارنة مستويات هرمون المصل بين المجموعات. (أ) مستويات هرمون التستوستيرون في الدم (T). (ب) مستويات GnRH في الدم. (ج) مستويات الهرمون اللوتيني في الدم. (د) مستويات هرمون FSH في المصل. (ه) مستويات المصل E2. (و) مستويات INHB في المصل. (ز) مستويات PRL في الدم. ب: مجموعة فارغة ، م: مجموعة نموذجية ، S: مجموعة Shu-Mu للدماغ والكلى ، N: مجموعة غير نقاط الوخز بالإبر ، L: مجموعة L-carnitine. يتم تقديم البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (ن = 3). ^أ< p 0.05 ، ^بص < 0.01 ، ^جص < 0.001 ، ^nsp > 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

في الطب الصيني التقليدي ، تتكون "الكلى" من "الكلية الداخلية" ، في إشارة إلى وظائف الجهاز البولي في الطب الحديث ، و "الكلية الخارجية" ، في إشارة إلى محور ما تحت المهاد والغدة النخامية والغدد التناسلية والأعضاء التناسلية الخارجية^{التشريحية 25}. تنتمي الحويصلات المنوية الذكرية إلى "الكلى الخارجية" ، وتشمل مكوناتها الخصيتين ، البربخ ، الحويصلات المنوية ، إلخ²⁶. يعتبر الطب الصيني التقليدي الجوهر هو الأساس المادي لجسم الإنسان ، ويشمل "جوهر الكلى" "جوهر ما قبل الولادة" الموروث من الوالدين و "جوهر ما بعد الولادة" الناتج عن تحول الطحال والمعدة للماء وجوهر الحبوب ، والذي يستخدم لتغذية الأحشاء الخمسة والأمعاء الستة. من بينها ، جوهر ما قبل الولادة هو المادة الأصلية التي تشكل الجنين وهي أساس الحياة. يثري جوهر ما بعد الولادة جوهر الأحشاء الخمسة والأمعاء الستة ، ويتم تخزين الجزء المتبقي في الكلى. الاثنان مترابطان ومدمجان بشكل وثيق في الكلى لتشكيل "جوهر الكلى". إذا كان جوهر الكلى غير كاف ، أي إذا لم تكن الحويصلات المنوية ممتلئة ، فسيؤدي ذلك إلى "قلة النطاف" ؛ إذا كان من الممكن تفريغ الجوهر التناسلي بشكل طبيعي ، أي إذا كان بإمكان الحويصلات المنوية ممارسة وظائفها في إنتاج المنوية وتخزينها وتفريغها ، فهذا نتيجة للتنسيق المتبادل لطبيعة الين القابضة للكلى وطبيعة يانغ الكلى المثيرة. إذا كانت يانغ الكلى ناقصة وضعيفة ، فإن الوظيفة القابضة تكون مفرطة ، في حين أن الوظيفة المثيرة غير كافية ، مما يؤدي إلى جوهر البرد و "وهن النطاف". لذلك ، فإن مظاهر قلة الوهن السماف تتوافق مع أنواع متلازمة الطب الصيني التقليدي من "نقص جوهر الكلى ونقص يانغ الكلى". في هذه التجربة ، استوفت جميع الفئران النموذجية بشكل أساسي مظاهر قلة وهن النطاف من نوع نقص الكلى يانغ ، ويجب أن يركز العلاج على "تنغيم الكلى ، ومساعدة اليانغ ، وملء الجوهر ، وتغذية النخاع". يمكن أن يؤدي الجمع بين Epangsanxian و Shenshu و Jingmen و Taixi لنقطة الوخز بالإبر الدماغية والكلى Shu-Mu إلى تنسيق الين واليانغ وربط الكلى والدماغ ، مما يحقق في النهاية الغرض من "توازن yin-yang".

يتم تنظيم تكوين المنوية من خلال نشاط الغدد الصماء لمحور HPT ، ويعتمد تنظيم محور HPT بشكل أساسي على الهرمونات ذات الصلة وجينات المستقبلات المعبر عنها في منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية والخصيتين²⁷ ، والتي يهيمن عليها بشكل أساسي الإطلاق النابض ل GnRH من منطقة ما تحت المهاد. هذا يحفز الغدة النخامية الأمامية على إفراز LH و FSH و PRL¹¹. من بينها ، GnRH هو المنظم الأكثر أهمية لمحور HPT ، ويمكن أن يعكس مستواه بشكل غير مباشر حالة محور HPT وقدرة الخصيتين على إنتاج المنوية²⁸. يتوسط LH في إطلاق T من الخلايا اللحمية في الخصية ، ويعتمد حدوث المنوية على تحفيز T. إذا كان إفراز T غير كاف ، فسوف ينخفض عدد وجودة المنوية²⁹. يرتبط FSH بالمستقبلات الموجودة على سطح خلايا سيرتولي ويعمل جنبا إلى جنب مع T لتعزيز تكاثر المنوية وإنتاج INHB للحفاظ على تكوين المنوية³⁰. INHB ، وهو بروتين سكري يتم تصنيعه في خلايا سيرتولي الخصية والخلايا الجرثومية ، هو منظم مهم للغدد التناسلية الذكرية ، والتي بدورها يمكنها تنشيط الغدة النخامية لإنتاج FSH ، والتفاعل مع FSH لتنظيم محور HPT^{بشكل مشترك 31،32،33}. ومع ذلك ، فإن PRL هو عامل مهم يؤثر على حركة المنوية³⁴. يمكن أن يمنع PRL المفرط إفراز محور الغدد التناسلية ، وبالتالي تثبيط تكوين المنوية³⁵. يتم إفراز E2 بواسطة الغدد التناسلية والدماغ وله تأثير سلبي على LH و^{FSH 36}. ستؤدي مستويات E2 العالية إلى إتلاف خلايا سيرتولي والخلايا الخلالية في الخصية ، وتسبب التنكس الدهني للنسيج الضام المحيط ، وتقليص قطر الأنابيب المنوية الذكرية ، مما يؤدي إلى ضعف الخصوبة للمرضى³⁷. لقد وجد أن مستويات مصل FSH و LH في فئران oligasthenospermia التي يسببها Tripterygium wilfordii قد زادت بشكل كبير بعد النمذجة. بعد 60 يوما من العلاج بحبوب كيلين ، انخفضت مستويات هذين الهرمونين بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة النموذجية³⁸ ، والتي كانت متسقة مع نتائج هذه الدراسة. أظهرت دراسات أخرى أن الخلل الوظيفي في محور HPT يحدث في الفئران المصابة بمتلازمة نقص الكلى يانغ الناجمة عن الأدينين ، كما تتغير مستويات إفراز الهرمونات الجنسية^{ذات الصلة 39}.

في هذه الدراسة ، مقارنة بالمجموعة الفارغة ، كانت الفئران في المجموعة النموذجية في حالة سيئة بشكل عام ، وانخفضت جودة السائل المنوي بشكل ملحوظ (ص < 0.001). أظهر تلطيخ H & E أضرارا جسيمة في أنسجة الكلى والخصية ، مما يشير إلى أن الفئران المعدلة بالأدينين استوفت معايير قلة وهن النطاف. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، تحسنت الظروف المذكورة أعلاه بشكل ملحوظ في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine (ص < 0.05) ، في حين أن التحسن لم يكن كبيرا في المجموعة غير الوخز بالإبر ، مما يشير إلى أن جودة المنوية ومورفولوجيا الأعضاء وهيكلها تحسنت في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine. بالمقارنة مع المجموعة الفارغة ، انخفضت T و GnRH و INHB (ص < 0.001) في المجموعة النموذجية ، مما يشير إلى أن القدرة على إفراز T و GnRH و INHB انخفضت في فئران قلة وحدة النطاف بعد النمذجة الناجحة. زادت كل من LH و FSH و E2 و PRL (ص < 0.001) ، مما يشير إلى أن إفراز LH و FSH و E2 و PRL زاد بعد النمذجة الناجحة ، مما أدى إلى إضعاف وظيفة المنوية في الخصية. بالمقارنة مع المجموعة النموذجية ، زادت T و GnRH و INHB (ص < 0.001) ، بينما انخفضت مستويات إفراز LH و FSH و E2 و PRL (ص < 0.001) في مجموعات Shu-Mu Brain-Kidney و L-carnitine ، ولكن لم يتم العثور على فرق كبير في المجموعة غير الوخز بالإبر. يوضح هذا أن كلا من الوخز بالإبر الكهربائية و L-carnitine يمكن أن ينظما مستويات الهرمونات في محور HPT في الفئران ولهما تأثير جيد على تحسين قلة الوحد النطاف في الفئران.

L-carnitine هو أحد مضادات الأكسدة الطبيعية في الثدييات التي يمكن أن تشارك في استقلاب طاقة الخلية وتقليل الضرر المضاد للأكسدة للحيوانات المنوية⁴⁰. أثبتت العديد من الدراسات أن L-carnitine يمكن أن يحسن بشكل كبير حركة المنوية ومورفولوجيتها وتركيزها مع زيادة مستوى الهرمونات المرتبطة بمحور^{HPT 41}. في هذه التجربة, تم استخدام ل carnitine كمجموعة مراقبة المخدرات إيجابية للمقارنة مع شو مو الدماغ والكلى مجموعة. أظهرت البيانات التجريبية عدم وجود فرق كبير في مقارنة الفهارس المختلفة بين المجموعتين ، مما يتحقق من أن الوخز بالإبر الكهربائية في "Epangsanxian و Shenshu و Jingmen و Taixi" كان له تأثير جيد على فئران قليلة الوحد. علاوة على ذلك ، يمكن للوخز بالإبر أن ينسق الين واليانغ في الأحشاء ويعزز تشي الصحي للجسم لمقاومة تشي المسببة للأمراض ، مما يجعله آمنا وفعالا وأقل سمية مع آثار جانبية أقل. يمكن أن يعزز الوخز بالإبر الكهربائية التأثير العلاجي أكثر من الوخز بالإبر العادي ويوفر علاجا آمنا وفعالا للإدارة السريرية لقلة وحدة النطاف. نظرا لأن الفئران في المجموعة غير الوخز بالإبر لم تتبع مبدأ اختيار النقاط على طول خطوط الطول ، فقد كانت البيانات التجريبية المختلفة مختلفة اختلافا كبيرا عن تلك الموجودة في مجموعة Shu-Mu Brain-Kidney ، مما يتحقق من أهمية توافق النقاط الأربع ، "Epangsanxian و Shenshu و Jingmen و Taixi".

باختصار ، يمكن للوخز بالإبر الكهربائية في النقاط الأربع ، "Epangsanxian و Shenshu و Jingmen و Taixi" ، تحسين وظيفة محور HPT في الفئران من خلال تنظيم مستوى الهرمونات ذات الصلة ، وبالتالي تحسين جودة المنوية في الفئران وتحقيق الغرض في نهاية المطاف من علاج قلة وهن السماط. يوفر علاجا آمنا وفعالا آخر للإدارة السريرية لقلة وهن النطاف.

ومع ذلك ، نظرا لنقص التكنولوجيا والأموال ، اقتصرت هذه الدراسة على دراسة مستويات هرمون المصل على محور HPT ، وكانت طرق الكشف محدودة. في التجارب المستقبلية ، سننظر في استخدام وسائل مختلفة ، مثل الكروماتوغرافيا ، لمزيد من التحقق من التغيرات في مستويات الهرمونات واستخدام النسخ أو التمثيل الغذائي لإجراء مزيد من الدراسات حول تنظيم محور HPT عن طريق الوخز بالإبر الكهربائية على مستوى الجينات وما بعده.

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

تم دعم هذا البحث من قبل مشروع البحث والتطوير الرئيسي لمنطقة نينغشيا هوي ذاتية الحكم (2021BEG02041) ، والتقييم القائم على الأدلة والدراسة السريرية حول توافق نقاط الوخز بالإبر للعلاج بالوخز بالإبر الذي ينظم "محور ما تحت المهاد - الغدة النخامية - الخصية" في علاج الضعف التناسلي للذكور ، قائد المشروع: Huisheng Ma ؛ 2024 مشروع بناء الانضباط من الدرجة الأولى (ZY0019110305) ، قائد المشروع: Huisheng Ma ؛ الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية الصينية (YZ-202128) ، قائد المشروع: Huisheng Ma.