⁶⁸가 표시 된 아르기닌 글리신 Aspartate (RGD) 준비-신생에 대 한 펩 티 드

이 방법은 갈륨 68 라벨 RGD-펩타이드의 제조와 그 유사체의 생물학적 평가를 위한 방법에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있다. 이 기술의 주요 장점은 새로운 방사성 금속 표지 펩타이드의 개발을위한 간단한 전신 프로토콜이라는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 우리 연구소의 사후 의사 인 정기혜가 될 것입니다.

먼저 0.5 개의 어금니 염산을 사용하여 방사성 라벨이 부착된 갈륨 게르마늄 발생기에서 방사성 라벨이 부착된 갈륨 트리클로라이드를 엘루트합니다. 80°C에서 질소 가스로 5밀리리터 반응 바이알로 화합물을 제거합니다. 건조 된 화합물에 하나의 어금니 나트륨 아세테이트에 아르기닌 글리신 아세테이트 또는 RGD 펩티드의 100 마이크로 그램의 첨가에 의해 다음.

혼합물을 실온으로 식히기 전에 5분간 반응 혼합물을 섭씨 80도에서 가열합니다. 고성능 액체 크로마토그래피로 원유 제품을 정화하려면 C18 컬럼에 용액을 추가하고 C18 역단계 카트리지를 통해 솔루션을 전달합니다. 식염수 2밀리리터로 카트리지를 세척하고 방사성 표지 펩타이드를 95%에탄올의 0.7 밀리리터로, 질소 가스 하에서 섭씨 80도에서 20분 동안 용매를 제거합니다.

PBS에서 정제 된 펩티드를 재구성하고 멸균 0.22 미크론 멸균 여과기를 통해 방사성 표지 된 제품을 필터링합니다. 펩티드를 멸균 식염수 용액 1밀리리터로 제조하고 펩타이드 용액 1마이크로리터를 즉시 얇은 층 크로마토그래피 플레이트에 뿌린다. 이어서, 수성 0.1 의 어금반 구연산을 함유하는 챔버내의 플레이트를 개발하여 그 자리에서 9센티미터 떨어진 곳에서 전파 화학수량을 결정한다.

펩티드의 생체 내 세포 섭취를 평가하기 위해, 삼중에서 30, 60, 90 또는 120 분 동안 잘 37 섭씨당 111 킬로베크렐의 방사성 라벨 RGD-펩타이드와 함께 6 개의 우물 판당 6 번째 인간 교모 세포 세포를 잘 치료하십시오. 인큐베이션이 끝나면 세척당 PBS 2밀리리터로 우물을 2회 세척하고 PBS에서 0.25%의 트립신과 0.02%EDTA로 3~5분간 37°C.로 수확한다. 그런 다음 각 웰에서 15 밀리리터 원내 튜브로 세포를 이송하여 감마 카운터에서 방사성 표지 펩타이드 섭취량을 측정합니다.

방사성 라벨이 부착된 RGD-펩타이드의 혈청 안정성을 평가하기 위해 새로 준비된 마우스 혈청 500마이크로리터, 인간 혈청 500마이크로리터, PBS 500마이크로리터를 각 시료의 50마이크로리터에 추가하고 혼합물을 최대 2시간 동안 섭씨 37도에서 배양한다. 그런 다음 각 샘플의 1~2개의 마이크로리터를 30분, 60, 90 및 120분 의 배양 후 인스턴트 얇은 층 크로마토그래피 플레이트에 발견하고 입증된 바와 같이 플레이트를 개발한다. 펩티드의 지동성을 결정하기 위해, 방사성 라벨이 부착된 RGD-펩타이드 10마이크로리터를 옥탄 PBS 시스템에 추가하고 실온에서 5분 동안 육병을 아낌없이 섞는다.

그런 다음 원심분리에 의해 펩티드를 수집하고 감마 카운터로 측정하기 위해 각 층에서 100 마이크로리터의 시료를 수확한다. 방사선 표지 종양 모델을 생성하기 위해, PBS의 100 마이크로리터에서 6번째 인간 교모세포종 세포에 5회 10회 적재하여 BALB/c 누드 마우스당 28게이지 바늘을 장착한 반인치 인슐린 주사기로 하여, 각 수신자의 왼쪽 측면에 종양 세포를 피하로 전달한다. 양전자 방출 단층 촬영, 또는 PET에 의한 펩티드의 생체 내 정량화를 위해, 머리에 종양 베어링, 마취 마우스를 PET 갠트리에 넣고 200 마이크로리터의 방사성 RGD-펩타이드 용액을 각 xenograft 마우스 모델에 투여하여 각 제노이식 마우스 모델에 1분 이상의 페틴 을 수행한다.

전 생체 분포 분석을 위해, XEnografted, 종양 베어링 동물의 꼬리 정맥에 PBS의 200 마이크로 리터에 방사성 라벨 RGD 펩타이드의 0.37 메가 베크렐을 주입하고, 30, 60, 90 및 120 분 후 주입에서 관심있는 조직을 수확한다. 그런 다음 조직을 계량하고 감마 카운터로 방사능을 측정합니다. 킬레이션 후, 반응 불순물을 성공적으로 입증된 바와 같이 고성능 액체 크로마토그래피로 제거할 수 있다.

방사성 라벨이 부착된 RGD 펩타이드의 99% 이상의 방사성 화학순도는 나노미터당 90~130메가베크렐사이의 합성끝에 특정 활성으로 달성될 수 있다. PET 분석은 종양 내뿐만 아니라 간, 신장, 심장, 근육을 포함한 주요 장기에서 초기 높은 섭취를 보여줍니다. 분석의 후반 단계에서, 종양 영역은 펩티드의 운동 안정성을 나타내는, 변경되지 않은 남아 근육 비에 종양으로 명확하게 시각화 될 수있다.

전 생체 내 생체 분포 분석은 종양의 축적된 방사능이 생체 내 PET 연구 결과에서 예상대로 시간이 지남에 따라 감소한다는 것을 보여줍니다. 이 절차를 시도하는 동안, 우리의 방법론은 섬세한 생물학적 평가 과정을 대체 할 수 없지만, 상당히 기존의 약물 개발 관행의 시간과 비용을 사용하는 데 사용할 수 있음을 기억하는 것이 중요합니다. 방사성 물질과 함께 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 개인 도지계 및 온도 발광 측정기와 같은 적절한 보호 장비를 사용하는 것과 같은 예방 조치는 이러한 절차를 수행하는 동안 항상 취해야합니다.