يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في إعداد الغاليوم 68 المسمى RGD-الببتيد وطريقة التقييم البيولوجي لنظيراته. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها بروتوكول نظامي بسيط لتطوير الببتيد الجديد المسمى بالمعادن الراديوية. إثبات الإجراء سيكون كي هاي جونغ، بعد الطبيب من معهدنا.
تبدأ باستخدام 0.5 حمض الهيدروكلوريك المولر إلى ثلاثي كلوريد الغاليوم elute radiolabeled من مولد الجرمانيوم الغاليوم المشع. تطهير المجمع في قارورة تفاعل المليلتر مع غاز النيتروجين في 80 درجة مئوية. تليها إضافة 100 ميكروغرام من خلات ارجينين الجليسين أو ببتيد RGD في خلات الصوديوم الضرس واحد إلى المجمع المجفف.
سخني خليط التفاعل عند درجة حرارة 80 درجة مئوية لمدة خمس دقائق قبل السماح للخليط بأن يبرد إلى درجة حرارة الغرفة. لتنقية المنتج الخام مع الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، إضافة الحل إلى عمود C18 وتمرير الحل من خلال خرطوشة C18 عكسي. غسل خرطوشة مع مليلتر اثنين من المالحة و elute الببتيد radiolabeled مع 0.7 ملليلتر من 95٪ الإيثانول تليها إزالة المذيبات في 80 درجة مئوية تحت غاز النيتروجين لمدة 20 دقيقة.
إعادة الببتيد المنقى في برنامج تلفزيوني وتصفية المنتج radiolabeled من خلال مصفاة معقم 0.22 ميكرون معقم. صياغة الببتيد في ملليلتر واحد من محلول ملحي عقيمة وبقعة واحدة ميكرولتر من الحل الببتيد على طبقة رقيقة فورية لوحة الكروماتوغرافيا. ثم، تطوير لوحة في الغرفة التي تحتوي على 0.1 حمض الستريك المولية 0.1 0.1 حتى تسعة سنتيمترات بعيدا عن بقعة لتحديد الغلة الكيميائية الراديو.
لتقييم الامتصاص الخلوي في الجسم الحي للببتيد، علاج مرة واحدة 10 إلى الخلايا الأرومية الدبقية الإنسان السادسة في بئر في ستة لوحات بئر مع 111 كيلوبيكريل من RGD-الببتيد المشع في بئر 37 درجة مئوية لمدة 30، 60، 90 أو 120 دقيقة في ثلاث مرات. في نهاية الحضانة، وغسل الآبار مرتين مع مليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني في غسل، وحصاد الخلايا مع 0.25٪ تريبسين و 0.02٪ EDTA في برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. ثم، نقل الخلايا من كل بئر إلى أنابيب مخروطية 15 ملليلتر لقياس امتصاص الببتيد المشع على عداد غاما.
لتقييم استقرار المصل من RGD-الببتيد المشع، إضافة 500 ميكرولترات من مصل الماوس الطازجة، 500 ميكرولترات من مصل الإنسان، و 500 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني إلى 50 ميكرولترات من كل عينة واحتضان الخلائط في 37 درجة مئوية لمدة تصل إلى ساعتين. ثم بقعة واحد إلى اثنين microliters من كل عينة على لوحة كروماتوغرافيا طبقة رقيقة لحظة بعد 30 و 60 و 90 و 120 دقيقة من الحضانة وتطوير لوحات كما هو موضح. لتحديد lipophilicity من الببتيد، إضافة 10 ميكرولترات من RGD-الببتيد المشع إلى نظام PBS octanal وخلط قوارير بسخاء لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
ثم جمع الببتيد عن طريق الطرد المركزي وحصاد 100 ميكرولترات من العينة من كل طبقة لقياس مع عداد غاما. لتوليد نماذج ورم ذات علامات إشعاعية، قم بتحميل خمس مرات 10 إلى الخلايا الأرومية البشرية السادسة في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في حقنة إنسولين نصف بوصة واحدة مجهزة بإبرة قياس 28 لكل فأر عاري BALB/c ليتم حقنه، وتسليم الخلايا السرطانية تحت الجلد في الجناح الأيسر لكل مستلم. لفي الكم vivo من الببتيد عن طريق التصوير المقطعي الانبعاثات البوزيترون، أو PET، وضع رئيس تحمل الورم، الماوس تخدير في جسر PET وإدارة الوريد 7.4 megabecquerels من حل RGD-الببتيد radiolabeled في 200 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في كل نموذج الماوس xenograft عبر الوريد الذيل أكثر من دقيقة واحدة أثناء إجراء مسح PET في وضع القائمة.
لتحليل التفشّي البيولوجي السابق، حقن 0.37 megabecquerels من RGD-الببتيد المشع في 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في الوريد الذيل من xenografted، وتحمل الورم، وحصاد الأنسجة ذات الاهتمام في 30 و 60 و 90 و 120 دقيقة بعد الحقن. ثم وزن الأنسجة وقياس النشاط الإشعاعي مع عداد غاما. بعد التسخين، يمكن إزالة الشوائب رد الفعل بنجاح عن طريق اللوني السائل عالية الأداء كما هو موضح.
ويمكن تحقيق نقاء كيميائي إشعاعي أكبر من 99٪ من ببتيد RGD الإشعاعي مع نشاط محدد في نهاية التوليف بين 90 و 130 megabecquerels لكل نانومتر. يوضح تحليل PET امتصاصًا أوليًا عاليًا في الأعضاء الرئيسية ، بما في ذلك الكبد والكلى والقلب والعضلات ، وكذلك داخل الورم. خلال المراحل اللاحقة من التحليل ، يمكن تصور منطقة الورم بوضوح مع نسبة الورم إلى العضلات التي تبقى دون تغيير ، مما يشير إلى الاستقرار الحركي للببتيد.
تحليل الكشف عن المعلومات الحية السابق يكشف أن النشاط الإشعاعي المتراكم في الورم يقلل مع مرور الوقت كما هو متوقع من النتائج في الحيوانات الأليفة في الجسم الحي. في أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أنه على الرغم من أن منهجيتنا لا يمكن أن تحل محل عملية التقييم البيولوجية الحساسة ، إلا أنه يمكن استخدامها لاستخدام وقت وتكلفة ممارسات تطوير الأدوية التقليدية. لا تنس أن العمل مع المواد المشعة يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات، مثل استخدام معدات الحماية المناسبة مثل مقياس الجرعات الشخصي ومقياس الجرعات الحرارية الحرارية ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذه الإجراءات.
