⁶⁸加标记精氨酸甘氨酸 (rgd)-肽的血管生成

该方法有助于回答在制备标有RGD-肽的Gallium 68中的关键问题，以及其模拟的生物评价方法。该技术的主要优点是，它是开发一种新的放射性金属标记肽的简单系统协议。演示这个程序的将是Ki-HyeJung，一个来自我们研究所的博士后。

首先使用0.5摩尔盐酸从放射性标记三氯化铀从放射性标记三氯酸。在80摄氏度下用氮气在5毫升反应小瓶中清除化合物。其次是在一个摩尔醋酸钠中加入100微克的醋酸精氨酸或RGD肽。

将反应混合物在80摄氏度下加热5分钟，然后让混合物冷却至室温。要使用高性能液相色谱来净化粗制氧产品，请将溶液添加到 C18 柱中，然后通过 C18 反相带墨盒传递溶液。用两毫升盐水清洗墨盒，用0.7毫升95%乙醇洗除放射性标记肽，随后在氮气下80摄氏度下去除溶剂20分钟。

重组PBS中纯化肽，并通过无菌0.22微米无菌滤株过滤放射性标记产品。在一毫升无菌盐水溶液中配制肽，将一微升肽溶液点到即时薄层色谱板上。然后，在含有水 0.1 摩尔柠檬酸的腔室中开发板，直到距离该点 9 厘米，以确定放射性化学产量。

为了评估肽体内细胞吸收情况，在六孔板中每口10至6个人类胶质母细胞瘤细胞，每井111千克奎雷，每孔37摄氏度，三升30、60、90或120分钟。在孵育结束时，每次洗涤用两毫升 PBS 洗井两次，并在 37 摄氏度的 PBS 中用 0.25% Trypsin 和 0.02% EDTA 收获细胞，在 37 摄氏度内洗涤 3 到 5 分钟。然后，将每个井中的细胞转移到15毫升锥形管中，以测量伽马计数器上的放射性标记肽吸收。

为了评估放射性标记的RGD-肽的血清稳定性，添加500微升新鲜制备的小鼠血清、500微升的人类血清和500微升PBS到每个样品的50微升，并在37摄氏度下孵育混合物长达两个小时。然后，在30、60、90和120分钟的孵育后，将每个样品的1至2微升发现到一个即时薄层色谱板上，并如所示，开发这些板。要确定肽的嗜脂性，在八进制PBS系统中加入10微升放射性标记RGD肽，并在室温下慷慨地混合小瓶5分钟。

然后通过离心收集肽，从每层收集100微升样品，用伽马计数器进行测量。为了生成放射性标记的肿瘤模型，将 PBS 100 微升中第 5 个人类胶质母细胞瘤细胞加载到半英寸胰岛素注射器中，每只 BALB/c 裸体小鼠配备 28 量针进行注射，然后将肿瘤细胞皮下送到每个接受者的左侧。对于通过正电子发射断层扫描（PET）对肽进行体内定量，将头部的肿瘤携带、麻醉小鼠放入PET龙门，并在列表模式下通过尾静脉将200微升PBS的放射性标记RGD肽溶液静脉注射到每个异种移植小鼠模型中，通过尾静脉进行一分钟。

在活体外生物分布分析中，在200微升PBS中注射0.37兆基放射性标记RGD肽，注射到异种移植的肿瘤动物的尾静脉中，并在注射后30分钟、60分钟、90分钟和120分钟收获感兴趣的组织。然后称量组织，用伽马计数器测量其放射性。溷合后，反应杂质可以通过高性能液相色谱成功去除，如所证明的。

放射性标记的RGD肽的放射性化学纯度大于99%，在合成结束时，每纳米90至130兆贝奎尔之间的特定活性可以达到。PET 分析表明，主要器官（包括肝脏、肾脏、心脏、肌肉）以及肿瘤内的初始吸收率很高。在分析的后期阶段，肿瘤区域可以清晰可视化，肿瘤与肌肉的比例保持不变，表明肽的动力学稳定性。

前体内生物分布分析显示，肿瘤中累积的放射性随时间而减少，如预期中体内PET的发现。在尝试这一程序时，重要的是要记住，虽然我们的方法不能取代微妙的生物评估过程，但它可以大大地用于使用传统药物开发做法的时间和成本。不要忘记，使用放射性物质可能非常危险，并应采取预防措施，例如在执行这些程序时，应始终使用适当的防护设备，如个人剂量计和热致发光剂量计。