JoVE Logo

로그인

사상균

Overview

출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 - 애리조나 대학교
시연 저자: 브래들리 슈미츠

곰팡이는 이종성 진핵 생물이며 효모를 제외하고는 호기성입니다. 그들은 표면 토양에 풍부하고 영양 순환과 유기 물질과 유기 오염 물질의 분해에 자신의 역할에 중요하다. 백색부패균류(phanerochaete chryosporium)예를 들어,(도 1)방향족을 저하시키는 것으로 알려져 있다.

Figure 1
그림 1. 자작 나무에 흰색 부패.

Principles

토양은 일반적으로 그램 당 곰팡이의 수백만을 포함, 그래서 토양은 일반적으로 희석 계열을 사용하여 희석된다. 희석 계열은 탈화 된 물과 같은 분산 용액에서 주어진 양의 토양을 일시 중단하여 만들어집니다. 현탁액의 알리쿼트는 개별 이산 곰팡이 식민지가 천판에서 자랄 수 있도록 충분히 희석될 때까지 신선한 용액으로 옮겨진다. (그림2)

여러 복제 한천 판에 접종 후, 플레이트는 25 °C에서 배양된다. 거시적 곰팡이 식민지가 형성된 후 그림 3에도시된 대로 계산됩니다. 가정은 하나의 곰팡이 식민지가 하나의 유기체에서 파생되어 있기 때문에, 용어 콜로니 형성 단위 (CfU)는 최종 분석에 사용되며, 결과는 오븐 건조 토양의 그램 당 CFU의 관점에서 표현된다.

비옥한 토양에서 정상적인 컬처 균골 수는 건조 토양의 그램 당 106-106 곰팡이 "프로파굴레스"(포자, 최면 또는 최면 조각)의 범위에 있습니다. 컬처 플레이트 수는 19세기부터 유기체를 열거하는 데 사용되어 왔습니다. 그들은 오늘 계속 사용, 그들은 수행 하는 저렴 한, 작은 노동을 필요로, 빠른, 그리고 상당히 재현. 그러나 결과를 평가할 때 고려해야 하는 여러 오류로 인해 어려움을 겪습니다. 이러한 오류의 가장 중요한 것은 많은 유기체가 미디어 플레이트에서 문화하지 않을 것이라는 사실입니다.

Figure 2
그림 2. 희석 및 도금 기술. 여기서, 희석된 토양 현탁액은 확산 도금의 경우와 같이 표면이 가해지는 것이 아니라 한천 매체에 직접 통합된다. 환경 및 오염 과학에서, 2nd 에드., 학술 언론, 샌디에고, 캘리포니아

Figure 3
그림 3. 로즈 벵골 아가르가 들어 있는 페트리 접시에서 자란 표면 토양에서 분리된 토양 곰팡이. 사진 제공: K.L. 조셉슨 환경 및 오염 과학에서, 2nd 에드., 학술 언론, 샌디에고, 캘리포니아.

Procedure

1. 토양 샘플 준비

  1. 먼저, 공지된 양의 축축한 토양을 밤새 건조하고 건조된 토양의 재량에 의해 토양의 초기 수분 함량을 결정한다. 토양의 초기 수분 함량을 결정하는 방정식은 다음과 입니다.
    Equation 1
    (방정식 1)
    어디:
    MC = 수분 함량
    W = 순 중량
    D = 건성 중량
  2. 토양 수분 함량을 건조 중량 기준으로 10%로 늘리기 위해 토양 25g에 첨가해야 하는 물의 양을 계산합니다.
  3. 다음으로, 토양의 25 g에 그 양의 물을 추가합니다.
  4. 플라스틱 랩으로 용기를 덮고 배양 중에 식기를 허용하기 위해 프로브로 필름을 여러 번 펑크합니다. 고무 밴드로 필름을 고정합니다.
  5. 토양을 계량하고 랩을 한 다음 실온에서 샘플을 1 주일 동안 배양합니다.

2. 곰팡이 접종 과 배양

  1. 인큐베이션이 완료되면 토양 샘플을 랩과 고무 밴드로 계량합니다. 수분 손실로 인한 체중 감소를 계산합니다.
  2. 새로운 토양 수분 함량을 계산합니다.
  3. 다음으로 도 2에도시된 토양의 1/10 희석 시리즈를 준비한다. 이로 인해 mL 서스펜션당10-1(병 A),10-2(튜브 B),10-3(튜브 C),10-4(튜브 D),10-5(튜브 E) g 토양의 희석이 발생합니다.
  4. 멸균 로즈 벵골 -연쇄 상미신 한천 접시를 준비합니다. 로즈 벵골과 연쇄상 구균 모두 세균 성장을 억제합니다. 토양 미생물 인구가 높은 매우 비옥한 토양의 경우, 선택한 희석제는 플레이트 당10-3,10-4및 10-5,g 토양과 같은더 높아야합니다.
  5. 각각10-3 플레이트에 희석 튜브10-2에서0.1 mL을 추가하고 에탄올 화염 살균 유리 스프레더를 사용하여 한천 표면에 확산시다. 0.1mL의 수량이 도금되어 있기 때문에, 이것은 효과적인 희석 10-3을만든다. 모든 희석에 대해 다음 단계를 반복합니다.
  6. 1 주일 동안 실온에서 접시를 배양하십시오.

3. 현미경 검사에 의한 식민지 계산 및 검사

  1. 식민지는 각 토양의 하나만 희석으로 계산합니다. 계산된 플레이트에는 신중하게 계산할 수 있는 식민지가 있어야 합니다. 자란 플레이트는 계산해서는 안 됩니다. 마찬가지로, 10개 미만의 식민지가 있는 판을 계산해서는 안 됩니다. 세 가지 식민지의 문화적 특성을 참고하고 설명합니다.
  2. 다음 절차를 사용하여 상세한 현미경 연구를 위해 슬라이드에 압력 테이프(투명 테이프) 마운트를 준비합니다.
    1. 깨끗한 유리 슬라이드의 중앙에 락토페놀 장착 유체 한 방울을 보관하십시오.
    2. 스톡 롤에서 약 3cm 길이의 투명한 셀로판 테이프 스트립을 잘라냅니다. 접착제 표면을 오염하지 않으려면 테이프를 처리할 때 집게를 사용하십시오. 해부 바늘은 집게에서 테이프를 확보하는 데 도움이됩니다.
    3. 테이프의 접착제 면은 포자 곰팡이 식민지의 표면에 적용됩니다. 테이프에 과도한 압력을 피하기 위해주의하거나 너무 조밀 한 덩어리의 최면과 포자가 수집됩니다.
    4. 곰팡이 식민지와의 접촉에서 테이프를 제거하고 유리 슬라이드에 장착 유체의 드롭에 아래로 접착제 측면을 적용합니다. 부드럽고 평평한 악기로 테이프를 부드럽게 문질러 기포를 표현합니다.
    5. 오일침침 목표 아래 테이프 마운트를 현미경으로 검사합니다.
    6. 공급된 곰팡이 식별키(도 4)를사용하여 두 가지 상이한 곰팡이 제네라를 식별합니다.

Figure 4
그림 4. 곰팡이 식별 키.

Results

콜로니 카운트

토양의 그램 당 곰팡이 식민지의 수는 도금 희석의 상호곱을 곱플레이트에 계산된 식민지의 수와 동일합니다. 예를 들어, 46개의 식민지가10-5의희석으로 계산되는 경우, 토양 의 그램당 CFU는 46 x 105 또는 4.6 x 106입니다.

세 가지 다른 곰팡이 제네라의 식별

곰팡이는 과일 몸과 포자의 검사에 의해 현미경으로 식별 될 수있다. 곰팡이 식별 키는이 과정을 도울 수 있습니다. (그림4) 관찰된 일반적인 곰팡이 모형은 페니실륨과 아스퍼길러스를 포함합니다.

Application and Summary

토양 균류의 희석 및 도금은 토양의 건강을 나타내는 지표로 사용될 수 있습니다. 일반적으로 "건강한"비옥한 토양은 토양 그램당 105 ~ 106 곰팡이가 있습니다. 또한 특정 곰팡이의 순수한 배양을 분리하여 유기 화합물을 저하시키는 능력과 같은 특정 특성에 대해 평가할 수 있습니다. 이들은 백색 부패 균류의 경우와 같이 해로울 수 있습니다, 또는 독성 유기물생분해를 통해 저하 될 때 도움이. 곰팡이의 순수한 문화의 다른 용도는 항생제에 대한 곰팡이의 격리를 포함한다. 예를 들어, 최초의 항생제는 토양 매개 곰팡이 페니실린에의해 생성된 페니실린이었다. 이것은 1929년에 알렉산더 플레밍 경에 의해 처음 발견되었습니다.

References

  1. Pepper, I.L., Gerba, C.P., Brusseau, M. Environmental & Pollution Science, 2nd Ed. Academic Press, San Diego, CA. (2006).
  2. Pepper, I.L., Gerba, C.P. Environmental Microbiology, A Laboratory Manual, 2nd Ed. Academic Press, Boston, MA. (2005).

Tags

Filamentous FungiMulticellular OrganismsEukaryoticSoilEcosystemIsolationQuantificationLaboratory ExaminationNutrient CyclingDecompositionOrganic MatterContaminantsHeterotrophicAerobicOxygen RequirementCulture FungiSoil SamplesDilutionSterile WaterAgar PlatesIncubationFungal ColoniesCountingIdentificationVideo DemonstrationSoil AnalysisSerial DilutionsDispersing SolutionBuffer SolutionDiscrete Fungal ColoniesAgar MediaVisible Fungal ColoniesCounting CFUs Colony Forming UnitsHyphae Growth

건너뛰기...

0:00

Overview

1:04

Principles of Isolating and Identifying Filamentous Fungi

4:02

Soil Sample Preparation

4:43

Fungus Inoculation and Incubation

5:51

Colony Counting and Examination by Microscopy

7:21

Applications

8:33

Summary

이 컬렉션의 비디오:

article

Now Playing

사상균

Environmental Microbiology

57.3K Views

article

토양의 수분 함량 측정

Environmental Microbiology

359.3K Views

article

환경 과학의 무균 기술

Environmental Microbiology

126.4K Views

article

환경 자원의 박테리아의 그람 염색

Environmental Microbiology

100.2K Views

article

접촉 슬라이드 분석 및 현미경을 통한 토양 미생물 시각화

Environmental Microbiology

42.2K Views

article

박테리아 콜로니에서 군집 DNA 추출

Environmental Microbiology

28.8K Views

article

중합 효소 연쇄 반응 및 겔 전기 영동을 통한 환경 미생물 검출

Environmental Microbiology

44.6K Views

article

RT-PCR을 사용한 환경 검체의 RNA 분석

Environmental Microbiology

40.4K Views

article

qPCR을 사용하여 환경 미생물 및 바이러스 정량화

Environmental Microbiology

47.8K Views

article

지표 유기체를 통한 수질 분석

Environmental Microbiology

29.5K Views

article

물 샘플에서 분변 박테리아 여과 분리

Environmental Microbiology

39.3K Views

article

환경 검체에서 박테리오파지 검출

Environmental Microbiology

40.7K Views

article

토양 샘플에서 박테리아 배양 및 나열

Environmental Microbiology

184.3K Views

article

박테리아 성장 곡선 분석 및 환경 응용

Environmental Microbiology

295.9K Views

article

배양 가능한 방법론을 통한 조류 나열

Environmental Microbiology

13.8K Views

JoVE Logo

개인 정보 보호

이용 약관

정책

연구

교육

JoVE 소개

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. 판권 소유