배양 가능한 방법론을 통한 조류 나열
Overview
출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 - 애리조나 대학교
시연 저자: 브래들리 슈미츠
조류는 하나의 일반적인 특성, 즉 광합성 안료의 소유를 갖는 미생물의 매우 이질적인 그룹입니다. 환경에서 조류는 물 속에서 성장하여 수영장 소유자에게 문제를 일으킬 수 있습니다. 조류는 또한 독소를 방출하는 조류 꽃으로 인해 호수와 저수지와 같은 지표수에 문제를 일으킬 수 있습니다. 최근에는 조류 바이오 연료를 통해 새로운 에너지원으로 평가되고 있습니다. 블루-그린 조류는 실제로 시아노 박테리아로 분류 하는 박테리아. 시아노박테리아뿐만 아니라 photoynthesize, 뿐만 아니라 대기에서 질소 가스를 해결할 수있는 능력을 가지고있다. 다른 조류는 해초와 같은 복잡한 다세포 유기체에 단세포 유기체에서 구역 수색하는 진핵증입니다. 여기에는 녹조류, 유글레노이드, 디노플라겔레이트, 황금갈색 조류, 규음, 갈색 조류 및 붉은 조류가 포함됩니다. 토양에서, 조류 인구는 자주 106 그램 당. 이 숫자는 박테리아, actinomycetes 및 곰팡이에 대한 해당 숫자보다 낮으며, 광합성에 필요한 햇빛이 토양 표면 아래에 멀리 침투 할 수 없기 때문입니다.
조류는 광영양이기 때문에 광합성과 이산화탄소로부터 에너지를 얻고 이산화탄소로부터 바이오매스를 위한 에너지를 얻기 때문에, 전적으로 무기 영양소와 유기 탄소 기질 없이 구성된 성장 매체에서 성장할 수 있다. 유기 기판의 부족은 이종성 균 박테리아의 성장을 배제. 무기 성장 배지를 사용하여, 원래 토양 또는 물에 존재하는 조류는 가장 가능한 수(MPN) 방법에 의해 양수될 수 있다. MPN 방법은 조류 자체가 멸종으로 희석되는 것을 연속적으로 희석하는 것에 의존합니다. 어떤 희석에 조류의 존재는 매체에 있는 성장의 긍정적인 표시에 의해 결정됩니다, 이는 전형적으로 광합성에서 유래하는 조류의 녹색 점액이다. 각 희석에서 복제 튜브를 사용하고 주어진 희석에서 성장을 위해 양성 튜브의 수의 통계적 평가를 통해 원래 샘플에 존재하는 조류의 수를 계산할 수 있습니다. MPN 테이블은 각 희석에 사용되는 복제 수를 포함하여 특정 MPN 디자인에 따라 개발 및 게시되었습니다.
Procedure
- 10g의 토양 샘플을 계량하여 현장에서 습한 채 수집되었거나 물을 첨가하여 2-3일 동안 촉촉하게 유지되도록 합니다. 토양은 촉촉하지만 포화되지 않아야합니다.
- 수정된 브리스톨용액의 95mL에 10g의 토양을 추가하여 10배 희석 계열을 준비한다(그림1). 수정 된 브리스톨의 용액을 만들려면, 물 1,000 mL에서 다음을 용해 : 0.25 g NaNO3,0.025 g CaCl2,0.075 g MgSO-4 · 7H2O, 0.075 g K2HPO4,0.018 g KH2PO4,0.025 g NaCl, 0.5 mg FeCl3.
- 브리스톨 솔루션의 서스펜션 A~ 9mL의 1mL와 추가 순차 희석을 추가하여 희석 계열을 계속합니다.
- 접종 5 복제 튜브 각각 9 mL의 수정 된 브리스톨용액1mL을 포함 10-2 ~ 10-6 (표 1).
- 햇빛에 노출된 지역에서 캡된 튜브를 최대 4주 동안 배양합니다.
- 7일에 한 번씩 조류 성장을 위한 튜브를 관찰하십시오. 조류 가 성장을 가진 튜브는 녹색으로 나타납니다.
그림 1. 10배 희석 시리즈를 만드는 방법.
| 관 | 희석 |
| B | 10-2 |
| C | 10-3 |
| D | 10-4 |
| E | 10-5 |
| F | 10-6 |
표 1. 튜브와 희석.
Results
도 2는 대표적인 결과의 예입니다.
p1은 양성 튜브수가 가장 많은 가장 높은 희석(토양에 집중된 최소)의 복제 튜브 수로 선택된다. 여기서 튜브 B의 복제는 튜브 C의 복제가 더 높은 희석에서 이기 때문에 계산되지 않습니다. 대조적으로, 성장의 긍정적인 표시를 보여주는 Tube D에서 튜브의 수는 튜브 C에서 그 보다는 적습니다. 그래서, p1 = 5.
p2 및 p3은 성장의 긍정적 인 징후를 보여주는 다음 두 개의 높은 희석에서 튜브의 수로 선택된다. 따라서 p2 = 3 및 p3 = 1.
p1의 값은 표 2의첫 번째 열을 내려다보면 찾을 수 있습니다. p2 열에서도 마찬가지입니다. 그런 다음 p3(위쪽)의 값은 p1 및 p2값에의해 정의된 두 값을 교차합니다. 이 예에서 값은 mL당 1.1 유기체입니다.
이 값을 p2를할당한 희석의 토양 농도로 나눈다. 이 예제에서는 튜브 D입니다.
따라서, 이 예에서는 토양의 g당 1.1 x 104 조류 세포가 있었다. 이 값은 토양에서 발견되는 조류 의 수의 상당히 전형적이다.
그림 2. 조류 열거 실험의 가설 결과. 그늘진 튜브는 조류의 존재를 나타냅니다. 그늘이 없는 튜브는 조류의 부재를 나타냅니다.
| p3의 표시된 값에 대한 가장 가능성이 높은 수 | |||||||
| p1 | p2 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 0 0 0 0 0 |
0 1 2 3 4 5 |
-- 0.018 0.037 0.056 0.075 0.094 |
0.018 0.036 0.055 0.074 0.094 0.11 |
0.036 0.055 0.074 0.093 0.11 0.13 |
0.054 0.073 0.092 0.11 0.13 0.15 |
0.072 0.091 0.11 0.13 0.15 0.17 |
0.090 0.11 0.13 0.15 0.17 0.19 |
| 1 1 1 1 1 1 |
0 1 2 3 4 5 |
0.020 0.040 0.061 0.083 0.11 0.13 |
0.040 0.061 0.082 0.1 0.13 0.16 |
0.060 0.081 0.10 0.13 0.15 0.17 |
0.080 0.10 0.12 0.15 0.17 0.19 |
0.10 0.12 0.15 0.17 0.19 0.22 |
0.12 0.14 0.17 0.19 0.22 0.24 |
| 2 2 2 2 2 2 |
0 1 2 3 4 5 |
0.045 0.068 0.093 0.12 0.15 0.17 |
0.068 0.092 0.12 0.14 0.17 0.20 |
0.091 0.12 0.14 0.17 0.20 0.23 |
0.12 0.14 0.17 0.20 0.23 0.26 |
0.14 0.17 0.19 0.22 0.25 0.29 |
0.16 0.19 0.22 0.25 0.28 0.32 |
| 3 3 3 3 3 3 |
0 1 2 3 4 5 |
0.078 0.11 0.14 0.17 0.21 0.25 |
0.11 0.14 0.17 0.21 0.24 0.29 |
0.13 0.17 0.20 0.24 0.28 0.32 |
0.16 0.20 0.24 0.28 0.32 0.37 |
0.20 0.23 0.27 0.31 0.36 0.41 |
0.23 0.27 0.31 0.35 0.40 0.45 |
| 4 4 4 4 4 4 |
0 1 2 3 4 5 |
0.13 0.17 0.22 0.34 0.41 |
0.17 0.21 0.26 0.33 0.40 0.48 |
0.21 0.26 0.32 0.39 0.47 0.56 |
0.25 0.31 0.38 0.45 0.54 0.64 |
0.30 0.36 0.44 0.52 0.62 0.72 |
0.36 0.42 0.5 0.59 0.69 0.81 |
| 5 5 5 5 5 5 |
0 1 2 3 4 5 |
0.23 0.33 0.49 0.79 1.3 2.4 |
0.31 0.46 0.7 1.1 1.7 3.5 |
0.43 0.64 0.95 1.4 2.2 5.4 |
0.58 0.84 1.2 1.8 2.8 9.2 |
0.76 1.1 1.5 2.1 3.5 16 |
0.95 1.3 1.8 2.5 4.3 -- |
표 2. 이 연습에서 실험 설계와 함께 사용하기에 가장 가능성이 있는 숫자입니다.
Application and Summary
MPN 방법론은 프로세스 관련 기여에 따라 기능 인구의 추정을 허용하기 때문에 유용합니다. 예에서, 기능공정은 유기탄소의 부재 속에서 성장을 허용한 조류에 의해 광합성을 수행하였다. 이것은 토양에 있는 총 조류 인구가 확대될 수 있었습니다.
MPN은 또한 살모넬라와같은 물에서 특정 유형의 미생물 병원체의 수를 추정하기 위해 사용되며, 모모넬라의 저항을 활용하여 말라카이트 그린에 사용된다.
추가 적용은 식물 호스트에 토양 희석을 접종하고 곰팡이에 의한 뿌리 식민지화를 찾는 균류균의 추정이다.
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