Method Article
* Diese Autoren haben gleichermaßen beigetragen
Dieses Protokoll bietet eine einfache Methode zur Herstellung von statischen Trainingsgeräten für Mäuse. Das Gerät hält die isometrische Muskelkontraktion der Gliedmaßen von Mäusen aufrecht, um den Interventionseffekt traditioneller Bewegung bei Typ-2-Diabetes (T2DM) zu verifizieren, und bietet eine neue Bewegungstherapie für die klinische Behandlung von T2DM.
Die Behandlung von Typ-2-Diabetes mellitus (T2DM) ist eine große Schwierigkeit bei der Verbesserung der Gesundheit der Patienten. Bewegung ist eine der wichtigsten Interventionen bei T2DM. Statisches Krafttraining ist eine der Schlüsselformen der traditionellen Sportarten in China. Die Forschung zeigt, dass statisches Krafttraining eine wirksame klinische Methode für die T2DM-Intervention ist, aber es gibt kein experimentelles Gerät, das für das statische Training bei Mäusen geeignet ist. Eine der Schwierigkeiten beim Übergang von der klinischen zur Grundlagenforschung besteht darin, geeignete experimentelle Geräte zu entwickeln. Um den Mechanismus der statischen Trainingsintervention bei T2DM weiter zu untersuchen, wird in dieser Arbeit eine einfache Methode zur Herstellung eines statischen Trainingsgeräts für Mäuse vorgestellt. Dieses Gerät hat die Vorteile einer einfachen Bedienung, eines billigen Materials und einer hohen Machbarkeit. Frühere Studien, die unter diesem Protokoll durchgeführt wurden, haben gezeigt, dass statisches Training den Blutzuckerspiegel effektiv senken und die mitochondriale Funktion der Skelettmuskelzellen bei T2DM-Mäusen verbessern kann. Der Zweck der Einführung dieses Geräts besteht darin, die Forschung über den Mechanismus des traditionellen Trainings bei der Intervention von T2DM zu fördern und eine Grundlage für die quantitative Intervention des Trainings zu schaffen.
Typ-2-Diabetes mellitus (T2DM) ist eine chronische Krankheit, die durch Insulinresistenz und β-Zell-Dysfunktion gekennzeichnet ist und eine erhebliche Bedrohung für die globale Gesundheit darstellt1. Bewegung ist eine entscheidende Intervention bei der Behandlung von Typ-2-Diabetes. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass traditionelle chinesische Übungsmethoden wie Tai Chi und Ba Duan Jin den Blutzuckerspiegel und die Lebensqualität von Menschen mit T2DMsignifikant verbessern 2,3,4,5. Um diese Bewegungen auszuführen, muss der Trainer für eine gewisse Zeit eine stabile Körper- und Gelenkposition einnehmen. Die statische Position wird durch statische Muskelkontraktionen aufrechterhalten, die allgemein als statische Kraft bezeichnet werden6.
Der Mechanismus der Intervention beim statischen Krafttraining bei T2DM ist jedoch nicht geklärt. Um diese Frage zu beantworten, sind Tierversuche unerlässlich. Bei isometrischen Übungen werden die Muskeln aktiviert, behalten eine konstante Länge bei und erreichen sicher die maximale Spannung7. In Versuchen mit statischem Krafttraining ist das Versuchstier gefordert, isometrische Muskelkontraktionen durchzuführen und diesen Zustand der Muskelkontraktion aufrechtzuerhalten. Die Umsetzung von statischem Krafttraining bei Mäusen, Ratten und anderen Labortieren ist zu einem großen Problem in der Forschung geworden. Erstens haben Tiere Schwierigkeiten, Befehlen zu gehorchen und ihre Muskeln bei Bedarf anzuspannen. Zweitens ist es für das Tier schwierig, unter Widerstand eine stabile Position aufrechtzuerhalten, und der Zweck der isometrischen Muskelkontraktion kann nicht erreicht werden. Während die Tiere nach Bedarf trainiert werden, ist es wichtig, Bedenken im Zusammenhang mit dem Tierschutz zu berücksichtigen, wie z. B. die Linderung von Stress und Angstzuständen, die Minimierung von Schmerzen und die Verbesserung der allgemeinen Bedingungen. Dieses Protokoll bezieht sich auf ein statisches Trainingsmodell für Ratten 8,9, und hier stellen wir ein einfaches Gerät für das statische Training von Mäusen vor. Wenn die Hinterbeine von Mäusen angehoben werden, ziehen sich ihre Bauchmuskeln aufgrund des Aufrichtreflexes zusammen, die Vorderpfoten greifen die Querstange vorne und dann ziehen sich die vorderen und hinteren Gliedmaßen gegen die Schwerkraft zusammen. Die Mäuse können sich nach dem Greifen der kurzen Stange nicht mehr bewegen, was dazu führt, dass sich ihre Muskeln in einem Zustand isometrischer Kontraktion befinden.
Alle Tierversuche wurden vom Animal Care and Use Committee der Nanjing University of Chinese Medicine genehmigt (Erlaubnis Nr. 202209A033). Es wurden gesunde männliche C57BL/6J-Mäuse mit Lichtschutzfaktor, einem Alter von 8 Wochen und einem Körpergewicht von 20 ± 4 g ausgewählt. Die Mäuse wurden in einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus bei einer Temperatur von 20-22 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 45%-50% gehalten. Die Tiere fressen und trinken frei.
1. Etablierung eines Mausmodells von T2DM
2. Gruppierung und Behandlung bei Mäusen
3. Herstellung des statischen Krafttrainingsgeräts
Abbildung 1: Montieren Sie die Stäbchen und befestigen Sie sie auf der transparenten Platte. (A) Kleben Sie den 1 cm langen Stab an beide Enden des 4 cm langen Stabes. (B) Verwenden Sie Schmelzkleber, um den 1 cm langen Stab und die transparente Platte zu verbinden, und die Spaltlänge beträgt 2 cm. (C) Zwei 4 cm lange Stäbe im Abstand von 6 cm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
4. Statisches Krafttraining bei Mäusen
Abbildung 2: Fixierungsmethode bei der Maus. (A) Binden Sie die Oberseite des Knöchels mit einem Schlupfknoten zusammen. (B) Das Ende des Seils wird durch den Spalt geführt, festgezogen und dann mit Klebeband gesichert. (C) Statisches Krafttraining bei Mäusen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Gemäß dem obigen Protokoll werden die Hintergliedmaßen der Maus fixiert, und die Vordergliedmaßen greifen autonom nach der vorderen Stange. Durch den engen Bewegungsspielraum bleibt die Maus in einer relativ festen Position. Die Kontraktion der Muskeln von Mäusen kann durch Berühren der Muskeln ihres Bauches und ihrer Beine bestätigt werden. Dies entspricht der Notwendigkeit des Zustands der isometrischen Muskelkontraktion beim statischen Krafttraining. Das Training von Mäusen gemäß dem Protokoll und die Verlängerung der Trainingszeiten helfen den Mäusen, sich an das Training anzupassen und gleichzeitig ihre Lust am Kampf zu reduzieren. Ein Kampf um die Flucht kann vermieden werden.
Auswirkungen auf den Blutzucker- und Insulinspiegel bei T2DM-Mäusen
Insgesamt wurden 24 C57BL/6J-Mäuse nach dem Zufallsprinzip in die Kontrollgruppe (n=6) und die T2DM-Modellgruppe (n=18) eingeteilt. Die T2DM-Mäuse wurden dann nach dem Zufallsprinzip in die Modellgruppe, die Trainingsgruppe und die Metformin-Gruppe eingeteilt. In der Kontrollgruppe wurde keine Modellierung oder Intervention durchgeführt, und bei den Mäusen in der Modellgruppe wurde keine Intervention durchgeführt. Die Mäuse in der Trainingsgruppe erhielten 3 Wochen lang einmal täglich 30 Minuten statisches Krafttraining an 5 Tagen in der Woche. Mäuse in der Metformin-Gruppe erhielten 3 Wochen lang einmal täglich Metformin 200 mg/kg. Die Ergebnisse des Nüchternblutzuckerspiegels (FBG) nach 3-wöchiger Intervention sind in Abbildung 3A dargestellt. Wie aus der Abbildung ersichtlich ist, waren die FBG-Spiegel der T2DM-Modellmäuse signifikant höher als die der Kontrollmäuse. Mäuse, die mit statischem Training trainiert wurden, zeigten im Vergleich zur Modellgruppe signifikant niedrigere FBG-Werte, was darauf hindeutet, dass statisches Training bei T2DM-Mäusen wirksam bei der Reduzierung von FBG ist. Die Nüchternseruminsulinspiegel (FINS) waren in der Modellgruppe signifikant niedriger als in der Kontrollgruppe, wie in Abbildung 3B gezeigt. In der Trainings- und der Metformin-Gruppe stiegen die FINS-Spiegel im Vergleich zur Modellgruppe an. In Abbildung 3C hatten Mäuse in der Modellgruppe einen signifikant höheren Insulinresistenzindex (HOMA-IR) als die in der Kontrollgruppe, während der HOMA-IR der statischen Trainings- und der Metformin-Gruppe signifikant niedriger war als der der Modellgruppe, was ihre Wirksamkeit bei der Linderung des Insulinresistenzzustands von T2DM-Mäusen zeigt. Diese Ergebnisse zeigen, dass die statische Krafttrainingsstrategie, die durch dieses Regime bereitgestellt wird, ähnliche Auswirkungen wie Metformin bei der Regulierung des Blutzuckerspiegels von T2DM-Mäusen hat.
Abbildung 3: Blutzucker- und Insulinspiegel. (A) Vergleich der Nüchternblutzuckerspiegel bei T2DM-Mäusen nach 3-wöchiger Intervention. * p <0,05 vs. Kontrollgruppe, # p <0,05 vs. Modellgruppe. (B) Vergleich der Nüchtern-Seruminsulinspiegel bei T2DM-Mäusen nach 3-wöchiger Intervention. * p <0,05 vs. Kontrollgruppe, # p <0,05 vs. Modellgruppe. (C) Vergleich des Insulinresistenzindex bei T2DM-Mäusen nach 3-wöchiger Intervention. * p <0,05 vs. Kontrollgruppe, # p <0,05 vs. Modellgruppe. Für die statistische Analyse wurde eine unidirektionale Varianzanalyse (ANOVA) durchgeführt. Die quantitativen Daten werden als Mittelwert ± SEM (n=6) ausgedrückt. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Auswirkungen auf die Skelettmuskulatur bei T2DM-Mäusen
Der Gastrocnemius von Mäusen wurde mittels Transmissionselektronenmikroskopie beobachtet. Im Vergleich zu Kontrollmäusen waren die Skelettmuskelmyozyten von T2DM-Mäusen degeneriert, die Struktur der Myofibrillen war locker und die Sarkomeranordnung war unregelmäßig (Abbildung 4A, B). Nach dem im Protokoll beschriebenen statischen Training zeigt Abbildung 4C die straffe Struktur der myogenen Fasern in der Muskelstruktur und die symmetrische Anordnung der lokalen Muskelsegmente. Dies deutet darauf hin, dass statisches Krafttraining die Morphologie der Skelettmuskulatur bei T2DM-Mäusen regulieren kann. Auf der anderen Seite waren im Gastrocnemius von Kontrollmäusen die Mitochondrien lokal verteilt, mit intakten Membranen, und lokal geteilte oder fusionierte Mitochondrien (gekennzeichnet durch rote Pfeile). In ähnlicher Weise ist im Skelettmuskel von Mäusen nach statischem Krafttraining die Anzahl der Mitochondrien normal; Einige von ihnen sind offensichtlich verschmolzen oder geteilt (roter Pfeil). Im T2DM-Modell bei Mäusen ist die Anzahl der Mitochondrien dagegen geringer und die Aktivität ist gering. (Siehe Abbildung 4) Dies deutet darauf hin, dass statisches Krafttraining die mitochondriale Funktion und Aktivität in Skelettmuskelzellen beeinträchtigen kann.
Abbildung 4: Wirkung des statischen Trainings auf die Skelettmuskulatur von T2DM-Mäusen. (A) Kontrollgruppe; (B) Modellgruppe T2DM; (C) Statische Trainingsgruppe. Die M stehen für Mitochondrien. Weiße Maßstabsleisten stehen für 50 μm und rote Maßstabsleisten für 10 μm. Das untere Bild ist eine teilweise Vergrößerung des oberen Bildes. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Statisches Krafttraining kann die Fettansammlung reduzieren, die Gewichtsabnahme unterstützen und den Stoffwechselankurbeln 8. Darüber hinaus verbessert es die Expression von PGC-1α und die mitochondriale Biogenese in Skelettmuskelzellen, was zu einem verbesserten Glukosestoffwechsel bei Mäusen mit Typ-2-Diabetes mellitus und einer daraus resultierenden Senkung des Blutzuckerspiegels führt11. Um die Auswirkungen und den Mechanismus des statischen Trainings auf T2DM zu bestätigen, müssen geeignete Geräte für die Durchführung des statischen Trainings an Versuchstieren entwickelt werden.
Mit diesem Protokoll wird ein Gerät für das statische Training bei Mäusen eingeführt. Die erforderliche Ausrüstung wie Acrylplatten, Stäbchen, Wollgarn und Heißklebepistolen sind leicht verfügbar, und die Produktionsmethode ist einfach und unkompliziert. Dadurch können die Kosten des Experiments effektiv gesenkt und die Durchführbarkeit und Wiederholbarkeit erhöht werden. Eine feste Position für die Mäuse während des Trainings beizubehalten, kann bei der Entwicklung eines statischen Trainingsgeräts eine Herausforderung sein. Bei diesem Protokoll können die Füße der Maus an der Vorderseite des kleinen Stäbchens befestigt werden, indem die weiche Wolle festgezogen wird. Der Aufrichtreflex bewirkt, dass die Maus ihren Oberkörper nach oben beugt und so mit den Vorderpfoten die vordere Stange greifen kann. Die Stange ist kurz, was den Bewegungsumfang der Vorderpfoten einschränkt. Nach zwei bis drei Sitzungen adaptiven Trainings waren die Mäuse in der Lage, eine stabile Haltung einzunehmen. Durch die eingeschränkte Kraft der Vorderpfoten verlieren die Mäuse häufig den Halt an der Querstange. Es ist notwendig, dass die Experimentatoren die Mäuse die ganze Zeit überwachen, um ihnen zu helfen, die Querstange mit ihren Vordergliedmaßen zu greifen und die Mäuse vor versehentlichen Verletzungen zu schützen. Durch das Training können die Mäuse eine feste Position für jeweils 1-2 Minuten beibehalten, die mehrmals wiederholt wird, für etwa 30 Minuten nach Erschöpfung. Wenn die Mäuse erschöpft waren, rollten sie nicht mehr ihren Bauch und hoben ihre Vorderbeine nicht mehr. Wenn die Maus mit dem Stock zum Greifen mit den Vorderpfoten geführt wurde, konnte die Maus zwar greifen, aber ihr Oberkörper konnte sich nicht nach oben drehen. Löse den Knoten so schnell wie möglich, nachdem du Mäuse eingeschläfert hast, was Knödeme und Verschleiß effektiv vermeiden kann.
Vorläufige Experimente deuten darauf hin, dass der Blutzuckerspiegel von T2DM-Mäusen nach einer Phase statischen Trainings im Vergleich zur Kontrollgruppe von Modellmäusen signifikant abnahm. Die Skelettmuskulatur ist eine wichtige Komponente im peripheren Glukosestoffwechsel und für die Aufrechterhaltung der Blutzuckerhomöostase unerlässlich12. Elektronenmikroskopische Analysen zeigten, dass in Gastrocnemius-Zellen von T2DM-Mäusen eine schwere Degeneration auftrat, während statisches Training die Degeneration des Muskelgewebes abschwächte. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass statisches Training an der Regulation der Skelettmuskelfunktion beteiligt sein könnte. Die Forschung hat gezeigt, dass die Aufrechterhaltung der Skelettmuskelfunktion erheblich von der mitochondrialen Dynamik beeinflusst wird13. Wir beobachteten eine deutliche Verringerung der Anzahl der Mitochondrien und einen Mangel an mitochondrialer Aktivität in den Gastrocnemius-Muskelzellen der T2DM-Mausmodellgruppe im Vergleich zu wilden Mäusen und statischen Trainingsmäusen. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass statisches Training die Skelettmuskelfunktion fördern kann, indem es die mitochondriale Funktion in den Skelettmuskelzellen verbessert. Basierend auf den vorangegangenen experimentellen Ergebnissen kann festgestellt werden, dass statisches Training den Blutzucker- und Insulinstoffwechsel bei T2DM-Mäusen erheblich verbessern kann. Der Interventionsmechanismus kann mit der Regulation der mitochondrialen Funktion der Skelettmuskulatur durch statisches Training in Verbindung gebracht werden.
Dieses Protokoll hat einige Einschränkungen. Anfangs war es schwierig, die Hinterbeine von Mäusen einzeln von einer Person zu binden, da eine Person die Hinterbeine greifen musste, während eine andere Person die Bindung durchführte. Mit ein paar Anpassungen und zunehmender Geschicklichkeit seitens des Experimentators wurden die Mäuse zugänglicher. Dies ermöglichte ein selbstständiges Anbinden der Hinterbeine. Darüber hinaus kann die weiche Wolle die Blutergüsse in den Knöcheln der Mäuse verringern.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll eine einfache Methode zur Herstellung von statischen Trainingsgeräten für Mäuse bietet. In ähnlicher Weise können einfache statische Trainingsgeräte für Ratten hergestellt werden, indem die Größe von Brettern und Stöcken erhöht wird. Das Gerät kann die muskelisometrische Kontraktion der Gliedmaßen von Mäusen aufrechterhalten, um den Interventionseffekt traditioneller chinesischer Übungen auf T2DM zu verifizieren und eine neue Perspektive für die klinische Behandlung von T2DM zu bieten.
Die Autoren erklären, dass sie nichts offenzulegen haben.
Diese Arbeit wurde durch die zweite Gruppe spezieller wissenschaftlicher Forschungsprojekte der Nationalen Klinischen Forschungsbasis für Traditionelle Chinesische Medizin (JDZX2015127, die am Provinzkrankenhaus für Chinesische Medizin Anhui angesiedelt ist) unterstützt.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acrylic boards | Transparent acrylic boards with 5mm thickness. The size should be larger than 20cm×20cm | ||
Boxes | Two boxes of the same height (15~20cm) | ||
ELISA KIT | H203-1-2 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | |
Hot melt glue gun | Avoid touching the gun head to cause burns | ||
Knives | No special requirement | ||
Metformin tablets | 1396309 | Sigma | |
scissors | No special requirement | ||
Sticks | Several wooden sticks with a diameter of 3mm | ||
Streptozotocin | S0130 | Sigma | |
Tape | No special requirement | ||
Transmission Electron Microscope (TEM) | HT7700 | HITACHI |
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