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Der erwachsene Drosophila Gehirn ist ein wertvolles System zur Untersuchung der neuronalen Schaltkreise, höhere Hirnfunktionen und komplexe Erkrankungen. Eine effiziente Methode ganze Hirngewebe von der kleinen Fliegenkopf zu sezieren werden Gehirn basierte Studien erleichtern. Hier beschreiben wir eine einfache, one-step-Dissektion Protokoll von erwachsenen Gehirn mit gut erhaltenen Morphologie.
Es gibt ein zunehmendes Interesse Drosophila im Umgang mit menschlichen Gehirn degenerative Krankheiten zu modellieren, neuronale Schaltkreise in erwachsenen Gehirn abbilden und untersuchen die molekularen und zellulären Grundlagen der höheren Hirnfunktionen. Eine ganze Montage Vorbereitung von erwachsenen Gehirn mit gut erhaltenen Morphologie ist von entscheidender Bedeutung für eine solche ganze Gehirn-basierte Studien, kann aber technisch anspruchsvoll und zeitaufwendig sein. Dieses Protokoll beschreibt eine einfach zu erlernende, Ein-Schritt-Dissektion Ansatz eines erwachsenen Fliege Kopf in weniger als 10 s, während das intakte Gehirn zum Rest des Körpers angebracht halten nachfolgende Bearbeitungsschritte zu erleichtern. Das Verfahren hilft die meisten der Augen- und tracheale Gewebe entfernen, die normalerweise mit dem Gehirn verbunden, die mit dem späteren Abbildungsschritt stören kann, und stellt auch weniger Anforderungen an die Qualität der Pinzette. Zusätzlich beschreiben wir eine einfache Methode, die auf einem Deckglas praktisch Umklappen der montierten Gehirnproben ermöglicht, die zum Abbilden auf beiden Seiten der b wichtig istRegen mit ähnlichen Signalstärke und Qualität. Als ein Beispiel des Protokolls, wir eine Analyse der dopaminerge (DA) Neuronen in Gehirnen von erwachsenen WT präsentieren (w 1118) fliegt. Die hohe Wirksamkeit der Dissektion Methode macht es besonders nützlich für große erwachsenen Gehirn-basierte Studien in Drosophila.
Der Modellorganismus Drosophila, die gemeinhin als die Fruchtfliege bekannt ist , hat für seine eleganten genetischen Werkzeuge, kurze Fortpflanzungszeiten, geschätzt und hoch konservierten molekularen und zellulären Wege lang sind. Die Fruchtfliege wurde erfolgreich eingesetzt grundlegende Signalwege zu sezieren, die Strukturierungsmechanismen von mehrzelligen Organismen, sowie die Mechanismen der neuronalen Entwicklung, Funktionen zugrunde liegen, und Krankheiten 1,2. Mit den jüngsten Fortschritten in Zellmarkierung und Imaging - Technologien, hat die Fruchtfliege Gehirn besonders mächtig geworden in Feinkartierung der neuronalen Schaltkreise und in der molekularen und zellulären Grundlagen der höheren Hirnfunktionen zu sezieren, wie Lernen und Gedächtnis, und zirkadianen Rhythmus 1,3, 4,5,6,7,8.
Ein besonderer Vorteil des Drosophila - Systems ist seine relativ kleine Größe, so dass ganze Montage Vorbereitung und Untersuchung des Gehirns eine regelmäßige Verbindung oder konfokalen Mikroskop. This-Funktion ermöglicht eine detaillierte anatomische und funktionelle Analysen der neuronalen Schaltkreise, oder auch nur ein einziges Neuron, auf zellulärer und subzellulärer Ebene im Rahmen einer ganzen Hirngewebe, so dass sowohl eine ganzheitliche Sicht des untersuchten Subjekts und seiner exakten Geometrie innerhalb der gesamten Bereitstellung Gehirn. Doch die eher geringen Größe des Gehirns gegeben, es stellt auch eine technische Herausforderung bei der effizienten ein intaktes Hirngewebe aus dem Schutz Exoskelett Kopf Fall bei einem erwachsenen Fliege sezieren. Verschiedene wirksame und relativ einfache Dissektion Methoden wurden im Detail beschrieben , die in der Regel vorsichtig beinhalten und stufenweise Entfernung des Kopfgehäuses und die damit verbundenen Gewebe , einschließlich der Augen, der Trachea und Fett aus dem Gehirn richtigen 9, 10. Diese mikrochirurgische Dissektion Methoden oft legen eher hohe Anforderungen an die Qualität der Präparation einer Pinzette, mit feinen gut ausgerichteten Spitzen auf einer Pinzette verlassen, die leicht beschädigt werden können. Außerdem ist, wie die Gehirne seziert sind oft separatwegen ihrer geringen Größe und ihrer Transparenz im Verarbeitungspuffer ed von dem Rest des Körpers, kann die Gehirne leicht während der nachfolgenden Färbung und Waschverfahren verloren. Hier beschreiben wir eine relativ einfache und leicht zu erlernende, Ein-Schritt-Dissektion Protokoll für die erwachsenen Gehirn, die die seziert Gehirne an dem Rumpf hält. Die Dissektion Prozess löscht oft leicht die meisten der Gehirn-assoziierten Gewebe wie das Auge und die Luftröhre entfernt und verringert die Nachfrage nach guter Qualität Dissektion Pinzette.
Zusätzlich wird, wenn das Gehirn unter dem Fluoreszenzmikroskop Verbindung oder konfokalen Mikroskop Bildgebung, die Seite des Gehirns, die von der fluoreszierenden Lichtquelle weg erzeugt oft ein schwächeres Signal und weniger klare Bilder aufgrund der Dicke des gesamten Montage Gehirn. Hier haben wir auch eine einfache Montage-Methode beschreiben, die leicht Umklappen der Gehirnproben ermöglicht, so dass bequem Bildgebung von beiden Seiten des Gehirns mit ähnlichen Signal intensiviertenty und Qualität.
Als proof-of-concept für die Anwendung dieses Verfahrens das adulte Gehirn zu untersuchen, untersuchten wir ferner die Anwesenheit von DA - Neuronen im Gehirn von w 1118 Fliegen; ein Genotyp , die oft als die Elternlinie verwendet wird transgenen Fliegen und die Wildtyp - Kontrolle in vielen Drosophila Studien zu erzeugen.
1. Verwendete Lösungen für Gehirnsezierung und Immunfluoreszenzanfärbung
2. Mikro Dissektion der erwachsenen Fliege Heads
Anmerkung: Die Dissektion Verfahren in Abbildung 1 dargestellt ist.
3. Immunfluoreszenzanfärbung der Gehirne
Abbildung 1 zeigt die Hauptverfahren für adulte Gehirn Dissektion, wie oben beschrieben , die Figuren 2 und 3 sind repräsentative Bilder von 3 Tage alten WT. (Genotyp: w 1118) erwachsenen Gehirnen Fliegen, die mit einem Antikörper gegen Tyrosinhydroxylase (TH costained wurden in rot, in Figur farbigen 2 und weiß in 3), einem Marker allgemein zu bezeichnen DA - Neuronen 11, zusätzlich zu dem DNA - Farbstoff DAPI zu etikettieren alle Zellkerne und einen Antikörper gegen Elav Protein, einem Marker für differenzierte Neuronen verwendet in der Fliege (in grün gefärbt), die zusammen die Gesamtstruktur des Gehirns offenbart.
Für den primären Antikörper in den 2 und 3 verwendeten wir Kaninchen - Anti-TH - Antikörper bei einer 1: 200 Verdünnung und Ratten - Anti-Elav Antikörper bei einer 1: 100 Verdünnung, WHIch wurden in 1x PBT mit 5% normalem Ziegenserum nicht-spezifische Bindung zu blockieren. Für sekundäre Antikörper, verwendeten wir Alexa Fluor 488-konjugiertem Ziege-anti-Ratte-Antikörper und AlexaFluor596-konjugiertem Ziege-anti-Kaninchen-Antikörper bei einer 1: 500-Verdünnung in 1x PBT.
Um das Bild zu den Gehirnen verwendeten wir eine aufrechte Verbindung Fluoreszenzmikroskop mit einer Apotome Funktion ausgestattet Z-Stapel-Bilder von Hirnschnitten, die die ganze Tiefe der Region von Interesse im Gehirn zu erwerben decken. Um zum Beispiel eine klare Visualisierung der allgemeinen Verteilung von DA - Neuronen im gesamten Gehirn zu erhalten, verwendeten wir eine 20fach Objektiv separat Bild der vorderen und hinteren Seiten des gleichen Gehirns (Abbildung 2). Die Tiefe jeder Seite des Gehirns abgebildet, dass können alle DA Neuronen decken ist etwa 20 bis 25 & mgr; m insgesamt. Um zuverlässig zu visualisieren und DA Neuronen im PAM Clusterregion zu quantifizieren, die kleinere Zellgrößen und schwächer TH si habengnale (siehe unten), haben wir eine 40-fach Objektivlinse. Zusätzlich ist in der Z-Serie Erfassungsfunktion von der kommerziellen Software, wählten wir eine Schnittdicke von 0,5 bis 1 & mgr; m zwischen jeder abgebildeten Schicht, die eine optimale Bildqualität in einer 3D - Rekonstruktion des PAM Clusterregion (3c) gewährleistet. Die Dicke der PAM-Cluster im Gehirn, die alle DA Neuronen umfasst ca. 8 - 10 & mgr; m insgesamt. Nach unserer Erfahrung kann die Apotome Funktion signifikant das Rauschsignal bei der Abbildung dicken Proben mit hohem Hintergrund, wie ein ganzes Gehirn oder der PAM-Cluster-Region zu reduzieren.
Die 2A-E zeigen die vordere Ansicht eines Gehirns, während 2F-J die hintere Ansicht des gleichen Gehirns zeigen , nachdem die Deckgläser Spiegeln, die die Gehirnproben halten, die zwischen zwei Seiten des Gehirns ein ähnliches Niveau der Signalintensität anzuzeigen alle drei Kanäle abgebildet. Die DA neurons wurden 11 nach dem frühen Bezeichnung in verschiedene Cluster gruppiert, obwohl hier verwenden wir den Hinteren Medial (PPM) Gepaart Namen der PPM1, PPM2 und PPM3 Cluster an der vorderen Seite des Gehirns und den Namen posterior Lateral (PPL Gepaart enthalten ) die pPL1 und PPL2 Cluster von der hinteren Seite des Gehirns zu bedecken, wie in den Figuren 2E und 2J. 2E und 2J in weiß zeigen vordere und hintere Ansichten des gleichen Gehirns in hoher Vergrößerung dargestellt, um die verschiedenen Gruppen von dA enthüllt Neuronen auf beiden Seiten des Gehirns. Der weiße gestrichelte Linien die herausragende PAM und Paired Anterior Lateral (PAL) Cluster in der vorderen Seite des Gehirns (2E) sowie die PPL und die PPM - Clustern in der hinteren Seite des Gehirns (2J) hervorzuheben.
3A und 3B ein re Zusammenfassungen der Quantifizierungsergebnisse für einige der DA - Cluster in w 1118 Fliegen. Wir zählten DA Neuronen Scheibe für Scheibe und auch von rekonstruierten 3D-Bildern, die ungenau Zählen minimieren sollte. Wir gehen davon aus, dass die 3-Tage-alten w 1118 fliegt durchschnittlich 27 DA - Neuronen haben insgesamt im PPM - Cluster pro Gehirn, 16 DA Neuronen in der PPL - Cluster pro Hemisphäre, 5 DA Neuronen in PAL - Cluster pro Hemisphäre (3A), und 97 DA Neuronen in jeder der PAM - Cluster (3B). 3C ist eine repräsentative 3D - Rekonstruktion von DA - Neuronen in den PAL und PAM - Cluster, projiziert von Scheiben mit hoher Vergrößerung Bilder , die alle DA - Neuronen in dieser Region. Es ist offensichtlich, dass im Vergleich zu anderen Clustern wie die PAL, DA-Neuronen in den PAM-Cluster relativ kleinere Zellgrößen und schwächer TH Anfärbung Signale aufweisen.
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Abb . 1: Grafische Darstellung des Dissection - Protokoll für Erwachsene Drosophila Gehirn (A) Flies mit der Bauchseite nach oben positioniert und durch den Brustkorb gehalten , um die nicht-dominanten Hand. Force sanft aufgetragen (rote Pfeile) an der Zange nach hinten Kippen des Fliegenkopf und leichte Außen Verlängerung des Rüssels zu induzieren, unter den weißen transparenten Bereich ausgesetzt wird. (B) Pinzetten aus der dominanten Hand sind in den transparenten Bereich unter den Rüssel eingeführt, einen flachen Einschnitt zu schaffen (roter Pfeil). Beachten Sie, dass die Zange wir nicht sehr feinen spitzen Enden verwenden müssen. (C) Forceps dürfen außer durch seine eigene Kraft zu kommen, wie durch die roten Pfeile angedeutet. Die Dynamik , die durch die Zange öffnen entfernt die Augen und Exoskelett, eine relativ saubere Drosophila Gehirn ausgesetzt wird . Die meisten der Trachea werden in dem Prozess entfernt. ( D) Excess Zubehör Gewebe um das Gehirn sind richtige für volle Belichtung des Gehirns sorgfältig getrimmt weg. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 2:. DA Neurone Revealed mit Anti-Tyrosin - Hydroxylase (TH) Antikörper in Adult Male Drosophila B regen (mit einem 20x - Objektiv erworben) Darin enthalten sind repräsentative Bilder von seziert erwachsenen Gehirn, rekonstruiert mit Z-stacked Bilder des Gehirns Region Interesse mit der Verbindung Fluoreszenzmikroskop erhalten. (AE) Anterior und (FJ) posterior Ansichten des gleichen erwachsenen Gehirn; (A & F) Zellkerne wurden durch DAPI - Färbung (weiß) abgebildet und (C & H) Neuronen were von pan-neuronalen Marker anti-Elav Antikörper (grün) markiert; (B & G) DA Neuronen werden durch Anti-TH - Antikörper (rot) ergab. (D & I) Überlagerung von Bildern für DAPI, TH und Elav Behandlung. (E & J) vergrößerte Ansicht der Hirnregionen mit DA - Neuronen in weiß dargestellt. Gestrichelte Linien verdeutlichen die PAL und PAM-Cluster in der anterioren des Gehirns und PPL und PPM-Clustern in dem hinteren Teil des Gehirns. Der Maßstab entspricht 50 & mgr; m in alle Panels. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 3. Die Quantifizierung von DA Neurone in Gehirnen von männlichen Erwachsenen mit 1118 Fliegen (mit einem 40x - Objektiv erworben). (A & B) Quantifizierung der DA neurons von Tag 3 männlich w 1118 Fliegen, durch Anti-TH - Färbung ergab. Die Daten werden durch Whisker Box-Plots zeigen Minimal- und Maximalwerte wie die Ausreißer dargestellt; sowie der ersten (Q1), zweiten (Q2) und dritten (Q3) Quartile. Der zweite Quartil wird als Mittelwert dargestellt. (A) PPM {(n = 28) Min: 21, Q1: 24, Durchschnitt: 27, Q2: 30, Max: 32}, PPL {(n = 26) Min: 10, Q1: 12, Durchschnitt: 16, Q2: 18, Max: 25} und {PAL (n = 24), Min: 2, Q1: 4, Durchschnitt: 5, Q2: 5, Max: 10} Cluster; (B) PAM - Cluster {(n = 20) min: 86, Q1: 94, Durchschnitt: 97, Q2: 97, Max: 99}. (C) Eine repräsentative Projektionsbild zeigt DA Neuronen in den PAM und PAL - Cluster von männlichen w 1118 fliegt bei 3 d. Maßstabsbalken entspricht 20 & mgr; m. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Mit zunehmendem Interesse an der Verwendung erwachsenen Drosophila Gehirn menschliche Gehirn Krankheiten zu studieren, neuronale Schaltkreise und höheren Hirnfunktionen, ist es notwendig , eine einfache und schnelle Methoden zu entwickeln , intakte Fliegen Gehirne für ganze-mount zu erhalten Analysen, die für groß besonders wichtig ist , skalieren Gehirn-basierte Bildschirme. Unser Verfahren bietet eine einfache und leicht zu erlernende Ansatz eine Fliege Kopf zu sezieren aus (oft in weniger als 10 s mit Erfahrung) mit gut erhaltenen Morphologie, die weitgehend von assoziierten Gewebe gelöscht wird. Da die sezierte Gehirne noch den Rest der Flugkörper angebracht sind, sinken sie in der Regel auf den Boden des Probenröhrchens schnell und leicht während des Wasch- und Färbeschritte zu erkennen und zu sammeln. Dies minimiert deutlich Probenverlust, die eine herausragende Problem bei der Verarbeitung der Gehirnproben von winzigen physikalischen Größen sein kann. Dieses Problem kann besonders wichtig für groß angelegte Studien. Das Gehirn kann leicht von dem Körper gelöst werdennach Beendigung des Färbeprozesses, vor der Montage.
Während der Präparation ist es wichtig, die Fliege richtig halten, die richtigen Winkel zu positionieren, wenn das Exoskelett vom Fliegenkopf zu entfernen und sanft die richtige Kraft ausüben, in jeden Schritt durchführen. Es wird empfohlen , dass die Zange senkrecht zueinander angeordnet sind , um decapitation der Fliege (1B) zu verhindern. Wie in den repräsentativen Bildern in Abbildung 2 gezeigt, vorbereitet das Gehirn unter Verwendung dieses Protokolls zufriedenstellende Ergebnisse. In diesem Beispiel konzentrieren wir uns auf die DA-Neuronen in den PAM-Cluster von erwachsenen Gehirnen. A Drosophila Gehirn in Durchschnitt hat insgesamt etwa 280 DA - Neuronen pro Protocerebrum, die in unterschiedliche Cluster in verschiedenen Regionen des Gehirns mit markanten Projektionsmuster und Funktionsausgang 11, 12 verteilt sind. Zurück Charakterisierung von DA - Neuronen im erwachsenen Gehirn Drosophila, including Modelle menschlicher Krankheitsgene fliegen wie in Parkin - Mutanten, weitgehend auf dem PAL konzentriert, PPL und PPM - Cluster , die relativ große Zellgrößen und prominente Expression von TH haben, die Standard - Hersteller zur Kennzeichnung von DA - Neuronen verwendet 13-18.
Jedoch sind die meisten DA-Neuronen im Gehirn fly in den PAM-Cluster, die mit etwa 100 DA-Neuronen pro Cluster. Im Vergleich zu Zellen in anderen DA-Clustern, DA Neuronen im PAM-Cluster zeigen in der Regel einen geringeren Grad an Tyrosin-Hydroxylase Expression und kleinere Zellgrößen. Verwendung einer Verbindung Fluoreszenzmikroskop, ohne konfokale Abbildung In Proben aus unserer Dissektion und Färbungsprotokoll vorbereitet, können die DA Neuronen im PAM-Cluster eindeutig in hochwertigen visualisiert und abgebildet werden. Aufgrund ihrer großen Anzahl, Quantifizierung von DA-Neuronen im PAM Cluster von verschiedenen genetischen Hintergründen könnte zuverlässigere und reproduzierbare Ergebnisse liefern. Wir schlagen vor, dass DA Neuronen in den PAM cluster ein weiteres nützliches System darstellen DA biology für Studium und DA-Dysfunktionen Modellierung, wie Parkinson-Krankheit.
Nach unserer Erfahrung die Apotome Funktion aus dem Mikroskop verwendeten wir können das Hintergrundsignal deutlich zu reduzieren, vor allem in Proben mit einem signifikanten Dicke, wie der gesamten erwachsenen Fliegenhirn zu untersuchen. Obwohl konfokalen Mikroskop Bilder mit mehr Details, höhere Vergrößerung und eine bessere Qualität erzeugen kann, ist es oft zeitaufwendig und teuer. Dies gilt insbesondere für eine große Anzahl von dicken Proben wie erwachsenen Gehirn für die Bildgebung, die für klare 3D-Rekonstruktion und Dekonvolutionsanalyse Reihe von Z-Stack Abschnitt erfordern. In dieser Hinsicht stellt die Apotome Funktion eine schnelle und kostengünstige Alternative Bilder von ausreichender Qualität zu produzieren (zB Bilder in den Abbildungen 2 und 3).
Im Gehirn Studien, ist es oft notwendig, um Bildzellen auf beiden sides des gleichen Gehirns. Sind beispielsweise DA-Neuronen, die in Clustern von den beiden vorderen und hinteren Seiten des Gehirns. Doch aufgrund seiner Dicke, nachdem ein Gehirn auf dem Schlitten montiert ist, entfernt die Seite , von der Lichtquelle (dh die Seite der Montageplanschieber) gibt in der Regel Anlass zu schwächeren Signalen und weniger scharfe Bilder , wenn regelmäßige Verbindung und konfokale abgebildet mit Mikroskope. Durch die Montage der Proben zwischen den beiden Deck gleitet, ermöglicht es bequem Umklappen der Proben auf dem montierten Schieber und nachfolgende Abbildung von beiden Seiten desselben Gehirns mit ähnlichen Signalintensitäten. 2 ist ein Beispiel von Abbildungs DA - Neuronen von beiden Seiten des fliegen Gehirn mit dieser Methode, die relativ vergleichbare Signalintensität und Bildqualität zeigte.
Mehrere easy-to-follow - Ansätze für die erwachsenen Gehirn gewesen fliegen Sezieren beschrieben schön 9, 10. Unser Ansatz stellt eine alternative Methode , die Fell kannther vereinfachen die Präparation und Färbung Prozesse der erwachsenen Gehirn fliegen. Mit groß angelegten Studien das gesamte Gehirn neuronale Schaltkreise sowie deren molekulare und zelluläre Bestandteile zu kartieren durchgeführt wird, ist es absehbar , dass automatisierte Präparation und Bildgebung Ansätze für erwachsene Drosophila Gehirn entwickelt werden können , mit hohem Durchsatz genetischen und Drogen - Bildschirme zu erkennen , in vivo in diesem klassischen genetischen Modell.
The authors have nothing to disclose.
Wir erkennen an Mr. Enes Mehmet, Frau Kiara Andrade, Frau Pilar Rodriguez, Chris Kwok und Frau Danna Ghafir für ihre immense Unterstützung für das Projekt.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
w*; parkΔ21/TM3, P{GAL4-Kr.C}DC2, P{UAS-GFP.S65T}DC10, Sb1 | Bloomington Drosophila Stock Center | 51652 | Balancer was switched to TM6B |
PBac{WH}parkf01950 | Exelixis at Harvard Medical School | f01950 | Balancer was switched to TM6C |
NaCl | Fisher Scientific | S640-500 | |
Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Fisher Scientific | 02-003-990 | |
Potassium Chloride (KCl) | Fisher Scientific | BP366-500 | |
Sodium phosphate, monobasic monohydrate (NaHCO3) | Fisher Scientific | 02-004-198 | |
Magnesium Chloride (MgCl2) | Fisher Scientific | 02-003-265 | |
D-Sorbitol | Sigma-Aldrich | S1876-500G | Replaces glucose |
Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Sigma-Aldrich | C5670-500G | |
EMD Millipore Durapore PVDF Membrane Filters: Hydrophilic: 0.22 µm Pore Size | Fisher Scientific | GVWP14250 | |
Formalin Solution, 10% (Histological) | Fisher Scientific | SF98-20 | |
Potassium Phosphate, Dibasic, Powder, Ultrapure Bioreagent | Fisher Scientific | 02-003-823 | |
Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-500 | |
Excelta Precision Tweezers with Very Fine Points | Fisher Scientific | 17-456-055 | Protocol does not require very fine points. |
Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody | Pel-Freez Biologicals | P40101 | |
Rat-Elav-7E8A10 anti-elav | The Developmental Studies Hybridoma Bank | Clone 7E8A10 | |
Goat anti-Rat IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 647 conjugate | ThermoFisher Scientific | A-21247 | |
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594 conjugate | ThermoFisher Scientific | A-11037 | |
DAPI Solution (1 mg/mL) | ThermoFisher Scientific | 62248 | |
Propyl gallate powder | Sigma-Aldrich | P3130-100G | |
Glycerol ACS reagent, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | G7893-500ML | |
Zeiss Axioimager Z1 | Zeiss | Quote | |
Zeiss Apotome.2 | Zeiss | Quote | |
Zen lite software | Quote |
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