Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi

Embryonic stages are the most susceptible to xenobiotics. Although chemical toxicity depends on salinity, no method exists to test the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we describe a new and high-throughput method for determining the salinity dependence of toxicity to aquatic embryos.

Tuzluluk su ortamında önemli bir özelliğidir. Sudaki organizmalar için tatlı su, tuzlu su ve deniz suyunun yaşam alanları tanımlar. kimyasallar ve Sucul organizmalar için ekolojik riskler değerlendirmelerinin toksisite testleri sıklıkla tatlı yapılmaktadır, ancak Sucul organizmalar için kimyasalların toksisite pH, sıcaklık, tuzluluk ve bağlıdır. Hiçbir yöntem Sudaki organizmalar için toksisite tuzluluk bağımlılığını test etmek için, ancak var. Onlar tatlı su, tuzlu su ve deniz suyuna adapte çünkü Burada, Medaka (Oryzias latipes) kullanılır. embriyo yetiştirme ortamı (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x ve) yumurta (1x ERM ve 30x ERM Medaka gümüş nanocolloidal parçacıklar (SNCS) toksisitesini test etmek için kullanılmıştır sahip ozmotik basıncı eşdeğer farklı konsantrasyonlarda sırasıyla tatlı ve deniz suyu, için). Altı oyuklu plastik tabak olarak, üç kopya halinde 15 Medaka yumurta 10 mg / L ^ve en SNCS maruz bırakıldı# 8722, 1, karanlıkta, pH 7 ve 25 ° C 'de ERM'in farklı konsantrasyonlarda.

Gün 6 ve gündüz (bölüm 4) kuluçkalık üzerine larva tam vücut uzunluğu 15 sn ve göz çapı başına kalp hızını ölçmek için bir diseksiyon mikroskobu ve bir mikrometre kullanılır. embriyolar kuluçka veya gün 14 kadar gözlenmiştir; Daha sonra 14 gün (bölüm 4) her gün çıkma oranı sayıldı. embriyolarda gümüş birikimi görmek için tümevarımsal gümüş testi çözümleri konsantrasyonu (Bölüm 5) ve dechorionated embriyolar (bölüm 6) açıkça tuzluluk arttıkça artan Medaka embriyolar SNCS KAG toksisitesini ölçmek için plazma kütle spektrometresi birleştiğinde kullandık. Bu yeni yöntem bizi farklı tuzluluk kimyasalların toksisite test etmenizi sağlar.

1979 yılında test kimyasallar için Ekonomik İşbirliği ve Kalkınma Örgütü (OECD) test kriterlerine Teşkilatı'nın kuruluşundan bu yana, 38 deney kılavuzları kurallar, Biyotik Sistemleri ¹ üzerine etkileri Bölüm 2'de yayınlanmıştır. tatlı su habitatlarının, yani tatlı su bitkilerden olmuştur test Sudaki organizmalar Tüm; yosun; Böyle piresi ve chironomids olarak omurgasızlar; Bu tür Medaka, Zebra balığı ve gökkuşağı alabalığı gibi balıklar. tuzlu su ortamlarına kıyasla, tatlı su ortamları daha doğrudan insan ekonomik ve endüstriyel faaliyetler etkilenir. Onlar kirlilikten daha yüksek risk altındadır, çünkü bu nedenle, tatlı su ortamları test için ön plana çıkmışlardır.

Haliç dahil kıyı bölgelerde, tuzluluk acı su ve deniz suyu koşulları arasında değişir ve bu alanlar genellikle endüstriyel aktivite ² tarafından kirletilmektedir. Kıyı alanları ve bunların ilişkili sulak h ile karakterizedirüksek ekolojik biyolojik çeşitlilik ve verimlilik. Kıyı ekosistemleri nedenle kimyasal kirlenmeye karşı korunmalıdır. Ancak, acı su ve deniz suyu ortamlarında ekotoksikolojik araştırma var sınırlı kalmıştır.

Sakaizumi ³ Japon Medaka yumurta metil civa ve tuzluluk arasındaki toksik etkileşimler okudu ve test çözeltisi ozmotik basıncı artırarak metil civa toksisitesini arttırdı bulundu. . Sumitani ark ⁴ sızıntı suyu toksisitesini araştırmak için Medaka yumurta kullanıldı; Onlar yumurtalara sızıntı suyunun osmotik denklik embriyogenez sırasında anormallikleri uyaran anahtarı olduğunu ortaya koymuştur. Buna ek olarak, Kashiwada ⁵ plastik nanopartiküller (çapı 39,4 nm) kolay tuzlu koşullar altında Medaka yumurta koryon (15x embriyo yetiştirme ortamı (ERM)) üzerinden nüfuz bildirmiştir.

Tipik bir küçük balık modeli, Japon Medaka (Oryzias latipes ) Temel biyoloji ve ekotoksikolojisine ⁶ kullanılmaktadır. Japon Medaka deniz suyuna tatlı gelen dolayı son derece gelişmiş klorür hücrelerinin ⁷ arasında değişen koşullarda yaşayabilir. Bunlar tuzluluk geniş bir yelpazede olan koşullarda test etmek için yararlı olduğu umulmaktadır.

Bu çalışmada kullanılan Japon Medaka sıkıntı ve rahatsızlık hafifletilmesi için göz önünde bulundurularak, insani Toyo Üniversitesi kurumsal kurallarına uygun olarak tedavi edildi.

1. Gümüş Nanocolloids (SNCS)

1. Saflaştırılmış SNCS satın (20 mg / ^L-1,% 99.99 saflıkta, partikül damıtılmış su içinde süspansiyon haline getirilmiş 28.4 ± 8.5 nm ila ortalama çap).
2. Indüktif eşleşmiş plazma kütle spektrometresi ile gümüş saflık ve konsantrasyon doğrulamak (ICP-MS) kullanma kılavuzuna ^8'e göre analiz eder. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7'de açıklanan analizler.

SNC Çözümleri Farklı tuzluluk ile (Gümüş Colloids ve Ag ⁺ Karışımlarının) 2. Hazırlık

1. 60 g NaCl, 1.8 g KCI, 2.4 g _CaCI2 · 2H ₂ O ve 9.78 gr MgSO ₄ · 7H ₂ O Arıza sebebinin L 1 aşağıdakilerden oluşan 60 x ERM'yi hazırlanmasırapure su; ultra saf su içinde NaHCO _3% 1.25 ile 7.0 arasında pH değeri ayarlanır.
2. gece boyunca 25 ° C'de bir ERM çözeltisi karıştırılır.
3. seyreltilmiş ERM ile SNCS karıştırın. Her SNC-ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlayın. Nihai konsantrasyon ERM farklı konsantrasyonlarda SNCS 10 mg / L ^-1 (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x veya).
4. Ultra saf su içinde% 0.625 ile 7.0 arasında SNC-ERM karışık çözelti NaHCO ₃ pH ayarlayın. Ag ⁺ salma asidik koşullar ⁹ kolaylaştırılır, çünkü pH ayarlaması SNC çözeltisinin hazırlanması için çok önemlidir.
5. SNCS için bir referans bileşiği olarak iyodinin ₃ kullanın.
   1. Sulandırılmış ERM ile Agno ₃ karıştırın. 15.7 mg / L arasında bir iyodinin ₃ konsantrasyonda iyodinin ₃ -ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlamak ^-1 ERM'in farklı konsantrasyonlarda (10 mg / ^L-1 gümüş) (1 x, 5x, 10x, 15x, 20x veya 30x) .
      Not: AgNO ₃ gümüş kolloid toksisitesini incelemek içinçözünür bir gümüş kaynağı solüsyonu, gümüş koloitler ve çözünür gümüş karışımı SNCS için bir referans bileşik olarak kullanılır.

3. Medaka Kültür ve Yumurta Hasat

1. Medaka (O. latipes) (turuncu-kırmızı suşu) (60 erkek ve 60 kadın) edinin.
2. gruplar olarak kültür Medaka (20 erkek ve bir grup olarak 20 kadın) bir Medaka akış kültür sistemi kullanılarak 3 L tanklarda 1x ERM.
   1. Aşağıdaki koşullarda Kültür:
      kültür ortamının pH aralığı 6.2 ila 6.5
      Işık: karanlık döngüsü: 16: 8 saat
      Kültür ortamının sıcaklığı: 24 ± 0.5 ° C
      kültür ortamının ozmotik basınç: 257 mOsm
3. (Günde beş kez) (günde bir kez) saat 10:00 'Artemia salina nauplii üzerinde Medaka Yem ve 09:00, 11:00, 13:00, 15:00 ve 17:00 yapay kuru balık diyet yem.
   1. A. elde salina nauplii.
   2. plastik kabı içinde bir% 3.0 tuz solüsyonu 5 L hazırlayın.
   3. beher tuz çözeltisine tuzlu su karidesi yumurta 30 g ekleyin.
   4. Bir havalandırma pompası kullanılarak (4 L / ^dk-1) geçirilerek, 48 saat boyunca 25 ° C'de kuluçkaya.
   5. 48 saat sonra, köpüren durdurun.
   6. 5 ila 10 dk yumurtadan A. ayırmak için çözüm bekletin çıkmamış yumurta ve yumurta kabuğu arasından salina nauplii (çözelti alt kısmı) (çözelti üst kısmı).
   7. durultma yoluyla çözeltinin üst tabakayı çıkarın.
   8. 283 um gözenekli bir elekten çözelti alt kısmının filtre ve 198 um arasında açıklıkları olan bir net geçmesine nauplii toplar.
   9. 6 saat içerisinde Medaka için nauplii besleyin.
4. kadın Medaka olurken sonra, dişilerin organları hafifçe dış yumurta kümeleri kaldırmak veya sm kullanarak akvaryum dibinden yumurta toplamakTüm ağ (net büyüklüğü 5 cm x 5 cm, delik boyutu 0.2 mm x 0.2 mm).
5. 5 saniye boyunca musluk suyu akan yumurta küme durulayın.
6. 30x ERM çözüm durulanır yumurta kümelerinin tüm ekleyin.
7. 1 dakika sonra çözeltiden kümeleri kaldırın ve yavaşça kuru kağıt havlu ve silindir arasındaki yumurta kümeleri yerleştirin.
8. 30x ERM geri yumurta koymak.
9. bir mikroskop altında döllenmiş yumurta seçin.
10. forseps kullanarak altı-iyi plastik plakalar 1x ERM 810 yumurta, seçilen yerin.
11. 21. gelişim aşamasına kadar bir kuluçka 25 ± 0.1 ° C'de kuluçkaya (Medaka embriyoların gelişim aşamaları Iwamatsu ¹⁰ çalışmalarından tanımlanmıştır.)
12. bir mikroskop altında gelişme aşamasında 21 inkübe yumurta dışarı seçin.
13. 1x ERM ile seçilen yumurta durulayın.
14. Pozlama deneyleri (bölüm 4) ile durulanır yumurta Konu.

4. Toksisite SNCS test veya AgNO ₃ Farklı ERM tuzluluk de

1. Medaka yumurta yıkayın (aşama 21), test çözeltisi [SNCS (10 mg / ^L-1) ya da iyodinin ₃ ile üç kez ERM'in her bir konsantrasyonu (1 x, 5x (15.7 mg / ^L-1, 10 mg / ^L-1, gümüş gibi) , 10x, pH 7'de 15x, 20x, 30x veya)]. Kontroller olarak, pH 7, 30 x ERM'e 1 x yumurta kullanımı.
2. Altı oyuklu plastik plakalar her bir test çözeltisi, 5 ml 15 durulandı yumurta ekleyin. (SNC için poz deneyler üç kez yapın veya AgNO ₃ toksisite her test solüsyonu kullanarak test.)
3. alüminyum folyo tabak sarın.
4. Enkübasyon kadar ya da 14 gün boyunca karanlıkta 25 ° C 'de sarılmış inkübe edin.
5. Biyolojik değişiklikler ve ölü yumurta maruz yumurta her 24 saat gözlemlemek (Şekil 1 ve 2).
6. Test çözümleri her 24 saat değişimi.
7. aşağıdaki gibi gözlemleri gerçekleştirin.
   1. maruz kalma 6. günde, o (15 saniyede) kalp hızını saymakbir kronometre (Şekil 3a) ile bir mikroskop altında F Medaka embriyolar.
   2. Maruziyet 6. günde, bir mikrometre (Şekil 3b) kullanılarak bir mikroskop altında Medaka embriyoların göz boyutu (çap) ölçün.
   3. Kuluçka gününde, bir mikrometre (Şekil 3c) kullanarak bir mikroskop altında larva tam vücut uzunluklarının.
   4. 14 gün (Şekil 3d) üzerinde yumurtadan maruz yumurta sayısını saymak.

SNC Çözüm Çözünür Gümüş ve Gümüş Analizi 5. İzolasyon

1. 14,000 x bir 3 kDa'lık bir zar filtre ile filtre her SNC çözeltisi (gümüş kolloidler ve çözünür gümüş bir karışımı) çözünür gümüş izole g ve 10 dakika süre ile 4 ° C. 1x ERM'in agrege SNCS bildirilen ortalama çapı 67.8 mil ^11, çünkü SNCS çözünür gümüş izole etmek için 3 kDa'lık bir zar filtresi kullanınnd Ag ⁺ o 0.162 nm ^12'dir; 3 kDa'lık bir membran 2 nm ¹³ ya da daha fazla bir çapa sahip olan parçacıklar hariç tutar.
2. ICP-MS yapan kılavuzu ^8'e göre, ICP-MS analizi (Şekil 3E) tarafından filtre edilmiş çözelti (= çözünebilen gümüş konsantrasyonu), 50 ul gümüş konsantrasyonu ölçümü. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7'de açıklanan analizler.

Medaka Embriyolar Gümüş Biyoakümülasyon 6. Ölçüm

1. Bölüm 4'de anlatıldığı gibi Medaka SNCS yumurta (evre 21) ya da iyodinin ₃ Açığa.
2. Maruziyet 6. günde, Medaka Kitap ^14'te tarif edilen protokole göre enzim kuluçka Medaka'nın kullanılarak yumurta (yani, dechorion) koryon çıkarın.
3. ICP-MS işletim manuel ⁸ (Şekil 3f) 'ye göre ICP-MS analizi ile dechorioned yumurta gümüş konsantrasyonu ölçün. önICP-MS yöntemi, Bölüm 7'de açıklanan analizler.

ICP-MS Analizi ile Gümüş Konsantrasyon 7. ölçümü

1. (; Bölüm 1 gümüş konsantrasyonu doğrulama için) örnekleri [gümüş çözeltisi 50 ul ekleyin; Üç dechorionated embriyolar (bölüm 5); ya da bir 50 mL teflon çanağa filtre edilmiş çözelti (bölüm 5)], 50 ul.
2. 50 ml'lik bir cam kap, aşırı saf, nitrik asit 2.0 ml ilave edilir.
3. (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar 110 ° C'de sıcak bir plaka üzerinde karışımı ısıtın.
4. Tamamen organik madde çözülür 2.0 ultra saf nitrik asit ilave edildi ve beher için hidrojen peroksit, 0.5 ml ekleyin.
5. (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar sıcak plaka üzerinde yine karışımı ısıtın.
6. % 1.0, aşırı saf, nitrik asit çözeltisinin 4 ml artığı içinde çözündürülür.
7. Transfer santrifüj tüpüne 4 ml.
8. (Üç kez olmak üzere toplam) iki kez 7.7 7.6 tekrarlayın. Nihai hacim 12.0;mi.
9. Kullanma kılavuzuna ^8'e göre ICP-MS analizi ile (% 1.0 ultra saf nitrik asit içinde eritilmiş) numune gümüş konsantrasyonu ölçümü.
   1. Bir iç ve bir dış standart solüsyonu kullanın gümüş konsantrasyonu ölçmek için (Malzeme Listesi). iç ve dış standart bir çözüm Laboratuvar Akreditasyon Amerikan Derneği (A2LA) tarafından akredite edilmiştir. Gümüş tespit limitleri 0.0018 ng / ml ^-1 (çözüm) ve 0.016 ng mg ağırlık ^-1 (embriyo gövdesini) idi.

SNC toksisite tuzluluk etkisi çok açıktı: deformite veya ölüm indüksiyon tuzluluk bağımlı (Şekil 1 ve 2). Biz (10 mg / L ^-1) -exposed embriyolar SNC fenotipik biyobelirteçleri (kalp atım hızı, göz boyutu, tam vücut uzunluğu ve çıkma oranı) ölçüldü. Bu fenotipik biyomarkırlar tuzluluk bağımlı SNC toksisite ortaya koydu.

Kalp hızı 29.6 32.2 atım / kontrollerde 30x ERM 1x boyunca 15 sn arasında değişmektedir. Bununla birlikte, SNC ya 30x erm (Şekil 3a) 'de iyodinin ₃ maruz kalma ile belirgin (P <0.01) azalmıştır. kalp hızını azaltarak sağlığını bozan gösterir. Kontrol altında larva veya ilgili 1x ERM s ile karşılaştırıldığında 5x, 30x ERM değişen tuzluluk de AgNO ₃ maruz kalma tam vücut uzunluğu anlamlı bir fark saptanmadıÇözeltileri. Vücut uzunluğu 4.69 mm sürekli 4.55 oldu. Ancak, vücut uzunluğu önemli ölçüde azalmıştır (P <0.01) 4.33 ve 3.77 mm'ye 15x ve ilgili 1x ERM çözümleri ile karşılaştırıldığında 20x ERM yılında SNC maruz kalmanın bir sonucu olarak; dahası, (Şekil 3c) (istatistiksel analiz tek yumurtadan çünkü 30x ERM mevcut değildi) 30x ERM 3.75 mm azalmış. tam vücut uzunluğunun azaltılması büyüme inhibisyonu belirtir. 1x 1x ERM ile karşılaştırıldığında 30x ERM değişen tuzluluk de kontrollerde göz çapı açısından anlamlı fark vardı; Göz çapı 0.366 mm sürekli 0.357 idi. Bununla birlikte, ilgili 1x Erm Çözümleri (Şekil 3b) ile karşılaştırıldığında 20 kat ya da 30X Erm SNC ya iyodinin ₃ maruziyet üzerine önemli ölçüde azalmıştır. Göz çapı azaldıkça sinir sistemi gelişim inhibisyonu belirtir. Tüm kontrol yumurtaları 14 gün içinde yumurtadan. Bununla birlikte, 20x ve 30x in SNC maruz kaldıktan sonra ERM çıkma oranı 1 x erm (p <0.01) (Şekil 3D) 'de oranı sırasıyla% 71 ve% 2 önemli ölçüde azalmıştır. Ayrıca, AgNO ₃ maruz kaldığında o 30x ERM (p <0.01) önemli ölçüde azalmıştır. Oranı kuluçka azaltılması SNCS veya AgNO ₃ varlığı toksik etkisini gösterir. Bu dört fenotipik biyomarkerlar nedenle tuzluluk bağımlı SNC toksisite göstermektedir.

Tuz suda çözünebilir metal kompleks oluşumunu arttırır ve bu kompleksler toksik etkileri ^3,8 sahip olabilir. Bizim çalışmamızda, ICP-MS gümüş analizleri tuzluluk arttıkça test çözeltileri çözünür gümüş konsantrasyonları arttığını ortaya koydu; embriyolarda gümüş konsantrasyonu da artmıştır (Şekil 3e, 3f).

"/>
Şekil 1: tuzluluk artırılması SNC toksisitesini artırır. Anormal gelişmiş embriyo mortalite ve sayısı SNC maruz kaldığında tuzluluk birlikte artmaktadır., 10 mg / ^L-1, farklı konsantrasyonlarda ERM SNC çözeltisine maruz Medaka yumurta (a) Görüntü dizisi. Çıkan Medaka yumurta SNCS maruz bırakılmış ve bir mikroskop altında gözlendi tipiktir. Kontrol Medaka yumurta iyi geliştirilmiş ve hepsi 30x ERM 1x yumurtadan. 10 mg / L ^-1 SNC pozlama, 1x yumurtadan Medaka yumurta tüm rağmen 14 gün içinde çıkmamış 15x ERM, gelişimsel deformiteler (kırmızı çıkmamış, dikdörtgenler özetlenen) ve embriyolar (yeşil dikdörtgenler ana hatlarıyla, çıkmamış) 20x gözlendi ve 30x ERM. (b) (a). sağ alt görüntüleri Büyütülmüş bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 2:. Tipik fenotipik SNCS maruz Medaka yumurta biyolojik Medaka yumurta gelişim aşamasında 21 6 gün ERM'in farklı konsantrasyonlarda (10 mg / ^L-1) SNCS maruz kalan normal gelişim (a) Kontrol Medaka embriyo.. (b) Gelişimsel deformitesi (hasar ışık derecesi). Bu embriyo pericardiovascular ödem görüntülenen; tübüler kalp; kan pıhtıları; yetersiz kan damarlarının gelişimi (ve dolayısıyla işemi), omurilik, kuyruk, gözler ve beyin; ve kısa bir kuyruk. (c) Gelişim deformitesi (hasar ağır derece). Bu embriyo sarısı çuval imha gösterdi; yetersiz kan damarlarının gelişimi (ve dolayısıyla işemi), omurilik, kuyruk, gözler ve beyin; ve kısa bir kuyruk. (B) ve (c) 'de işaret 20x ve 30x ERM SNC maruziyet üzerine gözlenmiştir. bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3: Medaka yumurta gelişimi sırasında toksikolojik biyolojik ilgili SNCS veya gümüş nitrat maruz kalma etkileri A SNCS (10 mg / ^L-1) ya da gümüş nitrat (10 mg / ^L-1 gümüş gibi) maruz gelişim safhası 21 Medaka yumurta. ERM'lerden dizisi 6 gün boyunca gözlendi. [Mavi] Kontrol (ERM); [kırmızı] ERM 10 mg / L ^-1 at SNCS; ERM gümüş olarak 10 mg / L ^-1 de [yeşil] AgNO _3. 15 saniyede (a) Kalp hızı. Kalp hızını azaltarak sağlığını bozan gösterir. (B) Göz çapı. Göz çapı azaldıkça sinir sistemi gelişim inhibisyonu belirtir. (C) Tüm vücut uzunluğu. detam vücut uzunluğu katlama büyüme inhibisyonu belirtir. (d) oranı Kuluçka. Azalan çıkma oranı SNCS varlığı toksik etkisini gösterir. (E) test çözeltisi (mg / ^L-1) 'de SNCS veya gümüş nitrat çözünebilen gümüş kompleksleri konsantrasyonları. (F) SNCS veya gümüş nitrat maruz embriyolar gümüş konsantrasyonu ERM'lerden bir dizi. * Söz konusu 1x ERM çözeltisi ile karşılaştırıldığında önemli bir fark (varyans analizi, p <0.05). NA: Sadece bir yumurtadan çünkü mevcut değil. Hata çubukları standart sapmayı göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Medaka deniz suyu son derece hoşgörülü bir tatlı su balığıdır; o da bu balığın orijinal doğal yaşam Japon sahil ⁶ kapalı tuzlu su olduğu bilinmemektedir. Bu nedenle, Medaka balık klorid hücreleri ⁷ iyi gelişmiştir. Bu benzersiz özellik balık sadece tek bir tür kullanarak (tatlı su deniz suyu için) tuzluluk bir fonksiyonu olarak çevre kimyasalların toksisite test etmek için yeni bir yol ile bilim adamları sağlar.

aşamada 21, Medaka yumurta elde etmek için, yumurta Genellikle aşamada 20 her sabah hasat ve seçilmelidir, Medaka çiftleri (gün doğumundan hemen önce) sabah erken çiftleşme ve gündoğumu tarafından yumurta üretmek başlar. Deneyin başlamasından önce, yumurta gelişimini kontrol etmek için bir ihtiyaç vardır, sabah hasat yumurta aşama 10 veya 11 ile ilgili olmalıdır yumurta geliştirme aşaması 21 ulaşılmadan önce 20 ° C'ye kadar 15 kullanılarak sıcaklıklardan yavaşlatılabilir. gümüş konsantrasyonunun ölçülmesi (çözünür silv) Er Test çözümleri ve dechorionated embriyolarda SNC toksisite tuzluluk bağımlılığı bizim soruşturma önemliydi. yüksek özgüllük hiçbir zararlı proteinaz sahip olduğu anlamına gelir, çünkü enzim Kuluçka, koryon kaldırmak için en iyi biyolojik olarak uygun bir enzimdir. Diğer proteinazlar tavsiye edilmez. Şimdiye kadar yalnızca kuluçka enzim Medaka için olduğunu; bu metodun bir sınırlamadır.

Kimyasal toksisite testlerinin sonuçlarına tuzluluk bariz etkisi bizim deneylerde olduğu gibi, aynı gerçekçi mümkün olduğunca doğal su özellikleri taklit, çevre kimyasalların toksisite araştırmak için yararlı olduğunu göstermiştir. yüksek gümüş konsantrasyonları nedeniyle SNC toksisite tuzluluk artmıştır keşif tüm sucul alanlarda kirletici kimyasalların ekotoksikolojisine son derece uygulanabilir. Deniz suyunda genel kimyasal toksisite testi durumunda, henüz hiç balık modeli nominat oradaYetkili uluslararası kuruluşlar (örneğin, OECD tarafından ed International Organization for Standardization). Kimyasal toksisite testi için kullanılmıştır tatlı su balıkları (örneğin, Medaka, Zebra balığı, sazan, alabalık ve fathead minnow) arasında sadece Medaka enzim kullanılabilirliği yüksek doğurganlığını ve kuluçkalık, tuzluluk adaptasyon tüm avantajlarını sahiptir Laboratuar deneylerinde kolay kullanım için yeterince küçük boyutu. Ayrıca, Medaka geniş bir sıcaklık aralığında uyarlanabilir (2 38 ° C) ^6. Sucul ortamlarda, tuzluluk ve sıcaklık kimyasalların kaderi üzerinde en önemli çevresel etkileri vardır; Önerilen yöntem, bu nedenle suda çevresel araştırma aralığı için değiştirilebilir olmalıdır.

The authors declare that they have no competing financial interests.

We are grateful to Ms. Kaori Shimizu and Mr. Masaki Takasu of the Graduate School of Life Sciences, Toyo University, for their technical support. This project was supported by research grants from the Special Research Foundation and Bio-Nano Electronics Research Centre of Toyo University (to SK); by the Science Research Promotion Fund of the Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan (to SK); by the New Project Fund for Risk Assessments, from the Ministry of Economy, Trade and Industry (to SK); by a Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research (award 23651028 to SK); by a Grant-in-Aid for Scientific Research (B) and (C) (award 23310026 and 26340030 to SK); and by a Grant-in-Aid for Strategic Research Base Project for Private Universities (award S1411016 to SK) from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology of Japan.