Kan Örnekleme, İlaç İdaresi ve Bilinçli Kan Basıncı ve Nabız ölçümleri Femoral Arter ve Venöz Kateterizasyon

Sıçanlarda kan damarlarının Kronik kateterizasyon sık sık bir süre üzerinden veya direkt bilinçli bir kan basıncı ölçümü için kan örneği almak, maddelerin yönetimi için gereklidir. Sıçan ve ilgili bilinçli hayvan kan basıncı ölçümleri Femoral arteriyel kateterizasyon gösterilmelidir.

Birden fazla çalışma alanlarında, gerekli laboratuvar çalışmalarında dolaşım sistemine erişim. Farmakolojik çalışmalar sıçanlarda kronik implante edilen kateterler kullanılarak etkili bir araştırmacı izni ve insanca maddeler yönetmek, tekrarlanan kan örnekleme yapmak ve bilinçli doğrudan kan basıncı ve kalp hızı ölçümleri yardımcı olur. Sonra kateter yerleştirilir uzun vadeli örnekleme mümkündür. Açıklığı ve kateter ömrü kilit kullanılan çözüm, kızarma rejimi ve kateter malzemesi de dahil olmak üzere birçok faktöre bağlıdır. Bu video sıçan femoral arter ve venöz kateterizasyon yöntemi gösterecektir. Buna ek olarak video, femoral ven ve arteriyel kan örneklemesi, ilaç ve bilinçli bir serbestçe hareket eden sıçan kan basıncı ve kalp hızı ölçümleri alarak arteriyel kateter kullanımı için kateterler kullanımını göstermek. Dönebilen bir sisteme bağlı bir halata ve koşum takımı, hayvan ho olmasını sağlayacaktırhayvan minimal bozulma ile araştırmacı tarafından kullanılan ve örnekler almış. Kateter açıklığını korumak için, kateter dikkatli günlük bakım potansiyel kontaminasyonu en aza indirmek için kilit çözüm (100 U / ml heparinize salin), makine zemin künt uçlu şırınga iğneleri ve şırınga filtreleri kullanmak gereklidir. Dikkatli cerrahi aseptik teknikler, uygun kateter malzemeleri ve dikkatli bir kateter bakım teknikleri sayesinde, uzun süre (birkaç hafta) için patent kateterler ve sağlıklı hayvanlar sürdürmek mümkün.

1. Başlangıç ​​Cerrahi Prosedür önce

Not: önce herhangi bir hayvan prosedürleri, kurum / kuruluş aracılığıyla uygun izni almış olmasını sağlamak . Tüm hayatta kalma ameliyatları olduğu gibi, cerrahi steril koşullar altında yapılır ve uygun ağrı kesiciler ve başarılı bir sonuç için gerekli antibiyotik kullanılır emin olun.

1. Kateterizasyon prosedürü başlamadan önce onlar patent sağlamak için steril serum fizyolojik ile püskürtülerek kateterler değerlendirir.
2. Sıçan anestezisi.
3. Cerrahi prosedür için sıçan hazırlayın.
   1. Tıraş, boynun arka (kürek kemikleri arasında) ve iç bacak bölgesini içeren cerrahi bölgelerde, kürk.
   2. Sırasıyla Betadine ve% 70 etanol fırçalayın kullanarak, traş cerrahi bölgelerde merkezinde başlayan ve dairesel bir süpürme dışa fırçalayın. Tekrar% 70 etanol ile son bir temizlik ile biten 3 kez, her bölge için bu.
   3. Cerrahi alanlar üzerinde steril bir yüzey ve yer steril örtüyü hayvan yerleştirin. (Basın-n-Seal araştırmacı prosedür boyunca hayvan izlemenize olanak veren ideal bir cerrahi olmayan örtü.)
4. Cerrahi prosedür için tüm cerrahi aletler olun sterilize edilmiştir.

2. Kateter Yerleştirme Cerrahi Alanları hazırlanması

1. Rat (midesi) eğilimli döşeme ile, yaklaşık ½ inç (12 mm), omuz kanatları veya makas ile bir neşter sonra disseke künt bir subkutan "cep" seviyesinde boynun arka tarafında yatay bir kesi yapmak arka yaklaşık dörtte bir boyutu. Bu kateter arter çekti ve bu nedenle de kaldırılmıştır olduğunu yani, bu yüzden hayvan büyüme ve / veya hareket için telafi edecek küçük bir miktar tüp yerleştirmek için bir alan olarak kullanılacaktır yerdid inç (Alternatif olarak bu adımı hemen önce kateter tünel yapılabilir.)
2. Sıçan sırtını (yatar pozisyonda) üzerine yerleştirin ve inguinal bölgede yaklaşık ½ inç (12 mm) kesi, arka bacak doğal açısı boyunca bir kesi yapmak.
3. (Künt uçlu makas ve / veya pamuklu genellikle 45 derecelik bir açıyla tutarak bu kolay lokalizasyon sağlar (künt ucu makas, hemostat, pamuklu, vb kullanabilirsiniz) bağ dokusu (Şekil 1) ayırmak için disseke Blunt femoral arter ve ven kadar ilgi bölge) maruz kalmaktadır.
   1. Ven koyu kırmızı renkli ve arter ven daha net ve parlak. Arter boyunca uzanan sinir ton beyazımsı.
4. Cathete küçük bir bölümüne yerleştirme için bacağın iç yanında bacak bölgede cilt altında küçük bir açık bölge (yani cebinde, yaklaşık dörtte bir boyutu) teşrih Bluntr (tekrar hesap hayvan hareketi içine almak ve kronik yerleşimi hayvan büyüme).
5. Arter ve ven tam olarak görebilecek şekilde retraktörlere kesi alanı içine yerleştirin.
6. Ince ucu hafifçe arter ve ven femoral arter boyunca sinir (beyaz renkli) ayrı forsepsi. (Şekil 2) sinir kesmek veya zarar vermemeye dikkat edin.
7. Arter / ven yaklaşık ¼ inç (5-7 mm) uzunluğundaki bölümde teşhir etmeye çalışıyor, tek bir birim olarak arter ve ven ayırın.
8. Arter ven ayırma işlemi tekrarlayın. Gemilere, cerrahi aletler (yani ince uçlu forseps) dik tutun ve paralel olarak gemilerin ayrı. Bu gemilerin, yırtılma, batıcı veya zarar kaçınarak yardımcı olur. Altında ve yavaş yavaş açılması ve forseps Bu yinelenen arter ve ven arasındaki ince ucu forseps yavaşça koyarak, yavaş yavaş gemilerin ayrı olacaktır. Not: bazı yırtılma ya da gözlemlemek eğerkanama, kanama durana kadar steril bir pamuklu çubukla ve / veya 2 x 2 alan üzerinde yer gazlı bez ve basınç kullanmak ardından cerrahi ile devam ediyor.

3. Kateter Tünel

1. Yeri steril tuzlu su kesi üzerinde 2 x 2 gazlı bez ıslatılır ve onun mide hayvan çevirmek.
2. Rochester daha önce yapılan ve kalça seviyesine kadar geri subkutan forseps kılavuzu [hemostat ipuçları omurganın doğru (değil işaret edilir sağlamak arkasındaki kesi içine Pean forseps (uzun düz forseps) yerleştirin. ) omurilik yaralanmasına önlemek için]. Yaklaşık kalça bölgesi, bacak bölgede yapılan kesi doğru hemostat ucu açmak ve hazırlanan bacak insizyonu hemostat ucu itin.
3. Forseps ile kateter (arter / ven eklenecektir sonu) sonuna hafifçe kavrayın ve yavaşça yapıldı boşluğu yoluyla kateterler çekinve sonuçta boyun insizyonu dışarı.
4. , Ilgili kateter ucunda 20 U / ml Heparin / tuzlu su ile doldurulur uygun körelmiş ucu iğne şırınga yerleştirin ve kateterler (hiç hava kabarcığı olmadığından emin olmak) heparinize / tuzlu su ile doldurun. Kateterler patent olduğunu bir kez daha kontrol edin ve herhangi bir hasar kateterler geldi. Kateter hatları içine almak ve tekrar sırtına sıçan açmak için herhangi bir hava sağlamak için kateter hatlarının sonuna kadar bağlı olan şırınga bırakın.

4. Femoral Ven ve arter içine kateterler takılması (Şekil 3)

1. Femoral ven altında steril 4.0 ipek / iplik katlanmış bir parçası yerleştirin ve sonra katlanmış sonunda ipek kesmek. Şimdi iki adet ipek ven altında olacaktır. Veya alternatif olarak, tek tek damar altında 2 adet 4.0 ipek.
2. Ven altına ipek, bacak doğru parçası (distal ucu) ve diğer vücut doğru ayırın. Tsonra küçük hemostat kullanarak, yani vücuda yakın tarafında gevşek bir ligatür, ipek kavramak ve öğretilen çekin ama düğüm sıkmayın. Bacak (distal uç) doğru çekin ve mümkün olduğunca diğer ipek parçası bu üçlü bir düğüm içine kravat, ipek küçük hemostat kavramak ve öğretilen çekin. Bu yöntem damar kateter (adım 4) takılması için gerekli olan kesi yapmak daha kolay yapma, kan ile doldurmak için izin verecektir.
3. Lidokain damar üzerine 1-2 damla yerleştirin.
4. Vanna mikro diseksiyon makas kullanarak, yaklaşık venin küçük bir kesi yapmak ¼ ve 45 derecelik bir açıyla.
5. Insizyon ve forseps başka bir çifti kullanılarak içine ince uçlu forseps (45 forseps) yerleştirin; ven kateter dikkatle beslenirler. Araştırmacı forseps altında ve damar içine yavaşça venöz kateter yerleştirmek için izin verecek, damar içine yerleştirilir forseps yavaşça açın.
6. Kateter tam olarak takıldığında (uygunx. 6-7 cm) (kateter yaparken işareti cerrah, kateterin tam olarak takıldığında belirlenmesinde yardımcı olmak için kateter yerleştirilir) (bu karın vena kava venöz kateter yerleştirir), damar çevresinde ön ligatür sıkın üçlü bir düğüm bağlama ve kateter (ven kapatılmasıy değil olduğundan emin olun). Bacak yakın ipek sütür (posterior ligatürün), daha güvenli bir kateter (üçlü düğüm) ve yerleştirme sağlamak için kullanın. Dikiş düğüm çok sıkı ve kateter işlevsel olduğunu olmadığını sağlamaya yardımcı olur kateter, gözle görülür küçük bir kan kalmayıncaya kadar yavaş yavaş şırınga geri çekin. Kontrol ettikten sonra, pistonu kan kateter artık görünür oluncaya kadar bastırın.
   Not: gerekirse 2 kateter femoral ven içine eklemek mümkündür.
7. Aşağıdaki istisnalar ile femoral arter kateteri yerleştirmek için 9-13 arasındaki adımları tekrarlayın:
   1. Üçlü bir düğüm ile bacak (posterior) en yakın ipek kravat ve tau çekinkateter yerleştirme için kesi yapmadan önce vücut (ön) yakınındaki gevşek ligatür ipe önce GHT. Bu arter kan daha kolay kesim yapma ile doldurmak için izin verecektir. Proksimal dikiş arter arter kesim için önce kapamak için öğretilen çekilir olun. Kesim yapıldığında kan kaybını önlemek.
   2. Arteriyel kateter femoral arter yaklaşık 5 cm (abdominal aorta kateter) yerleştirin.
   3. Dikiş ile kateter tespit ederken, dikiş ve kateter kapatılmasıy çok sıkı olmadığından emin olun.

5. Wrap-up Cerrahi

1. Bacak iç kateter ve yeri (döngü künt önceki disseke alanında sığmalı) çeyrek boyutlu döngü bir kuruş olun. Hem de kateter yerleştirildikten sonra, kas tabakası içine 5.0 cerrahi sütür 1-2 dikiş ile sabitleyin.
2. 4.0 sürekli olmayan sütür Ethilon ile insizyon kapatınes.
3. Sıçan midesi üzerine getirin ve kateterler, arka disseke cebinde çeyrek yeri ve büyüklüğü hakkında başka bir döngü yapmak. Kesi dikiş ile kapatın.
4. Vetbond bir damla kullanarak, arka kateterler güvenli.
5. Kelepçe yastıklı hemostat ile geri kesi yakın kateter ve şırınga ucundan kaldırın.
6. Fit bir ip tipi ceket ile sıçan, kateterler (heparin kilit korumak için) kap ve yastıklı hemostat kaldırmak.

- Uzun vadeli bakım için 20 U / ml heparin / serum fizyolojik salin çözeltisi ile kateter değiştirin.

6. Kateter bakımı (prosedür sırasında steril eldiven giyilmelidir)

1. Kelepçe yastıklı forseps ile kateter.
2. Kateter fişini çıkartın.
3. Kateter üzerine kilit solüsyonu ile künt uçlu bir şırınga yerleştirin.
4. Forseps çözülme.
5. Kateter kilit solüsyonu ile doldurun (hacim pre-determined genellikle 0.3 ml).
6. Kateter, kateter ucu herhangi bir kan akışı önlemek ve şırınga kaldırmak için kızarma ise sıkıştırın.
7. Kateter fişi değiştirin.
8. Forseps çözülme ve kateterin ucu kan olduğundan emin olmak için biraz fiş hafifçe itin.

7. Kan Örnekleme (prosedür sırasında steril eldiven giyilmelidir)

Kelepçe yastıklı forseps ile kateter.

1. Kateter fişini çıkartın.
2. Künt uçlu bir şırınga ve atın kullanarak kilidi çözüm yavaşça geri çekin.
3. Kateter örnekleme şırınga takın ve yavaş yavaş örnek çekilme.
4. Kelepçe yastıklı forseps ile kateter ve kateter üzerine kilit solüsyonu ile bir şırınga ve kilit solüsyonu ile kateter yeniden doldurmak.
5. Çözeltisi ile kateter yeniden dolum esnasında kateter sıkıştırın.
6. Kateter fişini tekrar takın.
7. Yastıklı forseps kaldırın ve yavaşça itin t o biraz daha takın.

8. İlaç İnfüzyon

1. Kelepçe yastıklı forseps ile kateter.
2. Kateter fişini çıkartın.
3. Künt uçlu bir şırınga ve atın kullanarak kilidi çözüm yavaşça geri çekin.
4. Kateter ilaç şırınga takın ve hayvan içine madde demlenmeye.
   • çoklu enjeksiyon gerekiyorsa bir hayvan böylece daha az sıvı infüzyon gerektiren, 3 yollu stopcock yanı sıra bir ara kullanabilirsiniz.
   • bir de sürekli infüzyon steril bir filtre ile sabit bir infüzyon şırınga pompası ekleyebilirsiniz.
5. Yastıklı forseps ile kelepçe ve kilit bir çözüm olan bir şırınga ve kateter üzerine kilit çözüm kateter yeniden doldurmak.
6. Çözeltisi ile kateter yeniden dolum esnasında kateter sıkıştırın.
7. Kateter fişini tekrar takın.
8. Yastıklı forseps fişi kaldırın ve yavaşça biraz daha itin.

1. Kelepçe yastıklı forseps ile arteriyel kateter ve kateter fişi çekin.
2. Arteriyel hat basınç dönüştürücü takın.
3. Kan basıncı toplama yazılımı kullanarak üretim yönergeleri izleyin.
4. Kan basıncı izleme süresi bitiminde, yastıklı forseps kullanarak kateter kelepçe ve transdüser bağlantısını kesmek.
5. Kateter kilit solüsyonu ile temizleme ve kateter fişi yerine yukarıda açıklandığı gibi.

10. Temsilcisi Sonuçlar

Bir temsilci kan basıncını ölçmek serbestçe hareket bilinçli bir hayvan alınmış ve Şekil 4'te sunulmuştur. Fenilefrin (3 ug / kg, iv), bir alfa 1 adrenerjik reseptör agonisti, eş zamanlı olarak femoral arteriyel hattan kan basıncı ölçümü sırasında, kan basıncı artırmak için femoral ven hattı içine verildi. Fentolamin (4 mg / kg, iv)seçici olmayan bir alfa-adrenerjik antagonist, sonra kan basıncı düşürmek için verildi.

Şekil 1 doku Künt diseksiyon. Sırtında sıçan, arka bacak açısı yaklaşık ½ inç (12 mm) kesi yapılmış ve künt, femoral arter ve ven maruz bağ dokusu disseke künt makas veya hemostat kullanarak olacaktır.

Şekil 2, femoral arter ve bağ dokusundan ven ayrılması .

Şekil 3. Kateter yerleştirme. Vanna mikro diseksiyon makas, damar yoluyla yolu 45 derecelik bir açı (üst) = yaklaşık küçük bir kesi yeri ve th içine ince uçlu forseps yerdee insizyon ve forseps başka bir çifti kullanılarak (orta) damar içine kateter beslenirler. Son olarak, kateter yerleştirilmesi tamamlandıktan sonra kateter yeri (alt) dikin.

Şekil 4 serbestçe hareket bilinçli bir hayvandan alınan Temsilcisi kan basıncını ölçmek.

Arter ve ven kateterizasyonu tarihsel hem de akut ve kronik kan basıncı, örnek kan izlemek için kullanılan ve deneysel sıçan hayvan modeli ^1-4 maddelerin teslim edilmiştir. Bu cerrahi instrumentations önemli yararı, kan örneklemesi, ilaç ve kan basıncı izleme dahil olmak üzere izleme prosedürleri, ^hayvan 1 minimal bozuklukları ve / veya stres ile yapılacak izin vermesidir . Sayısız araştırmacılar protokolleri yazılı ve laboratuvar, cerrahi ^prosedür 5-8 gerçekleştirir hangi özel metodolojiler var . Video ve resimler Laboratuvarımızda femoral arteriyel ve venöz kateterizasyon prosedürü konusunda başarılı olmak için ne bulmuştur göstermektedir.

Sıçanlar yaygın alınmasında kendi küçük boyut ve kolaylık nedeniyle bilimsel çalışmalar çok sayıda laboratuvarda kullanılır. Kronik bir kaç yer vardırkateter, birkaç isim juguler ven, abdominal aorta, karotis arter ve femoral arter, de dahil olmak üzere, bir hayvan içinde yerleştirilebilir. Sıçan femoral kateter açıklığı arttırılmış olan uzunluğu kronik kateterizasyon sonuçları için konumu ve diğer kateter yerlerde ⁹ ile karşılaştırıldığında cerrahi öncesi hayvan ağırlığı en hızlı kurtarma vardı.

Sayısız araştırmacılar akut hem de kronik kan örneklemesi ^1-5,11-13 için kalıcı kateterler kullandık. Birçok çalışmada, bir hayvan birden fazla kan gereklidir ve dış kanülasyon / kateterizasyon-travmatik olmayan doğası nedeniyle avantajlı bir metodoloji çizer; hayvan bilinçli ise ayrıca böylece anesteziklerin etkileri sınırlı değildir, yapılabilir. ve aynı zamanda hayvan serbestçe ^1,10 hareket olabilir. Kan örnekleri elde etmek ve kemirgenlerde stres hormonları ölçmek için en iyi yöntem, uzun ^6,13 tartışıla gelmiştir. Farmakokinetik Studi ile ilgili olarakkronik olarak implante kateter sistemini kullanarak, es, araştırma hayvan kateterizasyon en az kısıtlama ile tekrar kan örnekleme izin verir. Ayrıca, çalışmalar ele (30 saniye) ve ¹⁴ (5 dakika) ölçülü hayvanların serbestçe göre sıçan (juguler kateter) hareket plazma adrenalin, noradrenalin ve dopamin azalmış bazal konsantrasyonları gösterilmiştir. Plazma kortikosteron düzeylerini ölçerek stres artar ayırt etmek için ek bir yöntem. Daha önce bile, plazma kortikosteron düzeylerinin kronik kanüllü ^sıçan 15 yüksek olduğunu cerrahi kurtarma kez 3-4 gün olduğunu öne sürüldü . Ancak, metodoloji son gelişmeler uncannulated sıçanlarda ¹⁶ juguler ven kanüle sıçanlarda bazal plazma kortikosteron seviyeleri açısından hiçbir fark olmadığını tespit ettik. Buna ek olarak, kortikosteron analizi için HPLC metodoloji de göstermiştir ki kortikosteroidkısıtlama stresi bir seviyeleri yükseltilmiş, ancak istikrarlı juguler kateterizasyon sonrası ^16.

Kronik kateterizasyon ek bir kullanımı, kan basıncı ve kemirgenler kalp hızı ölçümü. Sıçan, kan basıncı ve kalp hızı ölçmek için kullanılan birden fazla metodolojileri vardır, bu non-invaziv kuyruk manşet metodolojileri, radiotelemetry prosedürleri ve doğrudan kalıcı kateterler. Her yöntemin avantajları ve dezavantajları, diğer yayınlarda ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Kalıcı sıvı dolu kateterler sıçan içinde birden çok arterler içine implante edilebilir. Femoral arter bu ölçmek için kullanılabilecek bir arter. Kateterin distal ucunda kan basıncı / kalp hızı ölçümleri, kalibre edilmiş bir basınç dönüştürücü bağlanmıştır. Kateter hayvan serbest dolaşımına izin döner bağlı bir koruyucu bahar aylarında ev sahipliği, ya da bir düğmeye cerrahi bağlı olabilirolarak hayvan implante. Kalıcı kateterler uzun vadeli hayvan ^17,18 stresi en aza indirerek avantajı var. Malzemeleri ucuz yanı sıra, kalibrasyon ¹⁹ sayısız hafta nispeten düşük stres koşullarında basıncını ölçer ve sürekli uzun vadeli önlemler için kolay elde edilebilir. Dezavantajları da dahil olmak üzere, bu tekniği vardır söz olmasaydı Biz gafil olurdu, cerrahi invaziv tekniği, kateter bakımı, açıklık, kateter implantasyon nedeniyle arter hasar ve korumak için gerekli potansiyel bir kaç isim enfeksiyon.

Kronik implante arteriyel kateterler kan basıncı doğrudan kayıtları kronik önlemler için daha fazla teknik olarak oldukça zor ama daha doğru ve hayvan bozmadan sürekli yapılabilir. Kuyruk manşet ölçümleri daha az doğru, ancak bunlar ameliyat gerektirmez ve de tekrar edilebilired. Kuyruk manşet metodolojileri darbe ²⁰ tespiti kolaylaştırmak için kuyruk damarlarını genişletecek hayvan ısıtma yanı sıra dikkatle ele alınmayı gerektirir. İşleme ve eklenen ısı stresi böylece gerçekten doğru önlemlerin sağlanması, kan basıncı ölçümleri etkileyebilir. Ayrıca, doğrudan olmayan tail-cuff metodu kolay eş zamanlı kan örneklemesi veya ilaç idaresi izin vermez.

Doğrudan bir ölçümü elde edilebilecek ek bir yöntem telemetrik metodoloji kullanıyor. Telemetri sürekli kısıtlama olmadan veya anestezi ¹⁸ bilinçli serbestçe hareket hayvanlar uzun süre kan basıncı (ve diğer tedbirler) yüksek kaliteli kayıtlar sağlar. Ancak, telemetri cihazları ideal ise çok pahalı. Telemetri ile karşılaştırıldığında, kateterizasyon faydaları şunlardır: azalmıştır "kurulum" ve operasyonel maliyetler, ilaçların kolayca yönetmek ve kolayca bilinçli serbestçe hareket hayvanların kan örnekleri almak yeteneği. Administratminimal, böylece hayvan için stresi en aza indirmek ve daha doğru ölçmek için izin, hayvan rahatsız ederken, ilaçlar ve kimyasal maddeler ve araştırma hayvandan kan örnekleri elde iyon yapılabilir.

Bu video-makale Üretim ve Serbest Giriş ADInstruments tarafından desteklenmektedir.

Yazarlar illüstrasyonlar katkılarından dolayı Dr. Andrew King, doktora ve Katrina Kral kabul etmek istiyoruz. NIH hibe: R00HL087927.