Method Article
Chronische Katheterisierung von Blutgefäßen in der Ratte ist oft für die Verwaltung von Stoffen erforderlich, erhalten Blutprobe über einen Zeitraum oder für den direkten bewussten Blutdruckmessungen. Femoralarterie Katheterisierung der Ratte und entsprechende Messungen des Blutdrucks in der bewussten Tier nachgewiesen werden.
In mehreren Bereichen der Studie, die das Kreislaufsystem in Laborstudien Zugang erforderlich ist. Pharmakologische Studien an Ratten mit chronisch implantierten Kathetern ermöglichen ein Forscher, um effektiv und human zu verwalten Substanzen, führen wiederholte Blutentnahme und hilft bei der bewussten direkten Messungen von Blutdruck und Herzfrequenz. Sobald der Katheter implantiert langfristige Probenahme ist möglich. Durchgängigkeit und Katheter Leben hängt von mehreren Faktoren ab, einschließlich der Sperre Lösung, Spülen Regime und Katheter Material. Dieses Video demonstriert die Methodik der Femoralarterie und Katheterisierung der Ratte. Darüber hinaus wird das Video demonstrieren die Verwendung der femoralen venösen und arteriellen Katheter zur Blutentnahme, Medikamentengabe und die Nutzung des arteriellen Katheter in den Messungen von Blutdruck und Herzfrequenz in eine bewusste frei beweglichen Ratten. Eine Leine und Geschirr an einem Schwenk-System wird damit das Tier ho werdeneingesetzt und haben Proben entnommen, indem die Forscher mit minimalen Unterbrechungen für das Tier. Zur Aufrechterhaltung Durchgängigkeit des Katheters ist eine sorgfältige tägliche Pflege des Katheters erforderlich mit Lock-Lösung (100 U / ml heparinisierten Kochsalzlösung), maschinell geschliffen stumpfe Spitze Injektionsnadeln und die Verwendung von Spritzenvorsatzfilter, Verunreinigungen zu minimieren. Mit einer sorgfältigen aseptischen chirurgischen Techniken, richtige Katheter Materialien und sorgfältige Wartung Katheter-Techniken ist es möglich, Patent-Katheter und gesunde Tiere für längere Zeit (mehrere Wochen) aufrecht zu erhalten.
1. Vor Beginn Surgical Procedure
Hinweis: Vor Beginn jedes Tier Verfahren sicher, dass Sie die entsprechende Berechtigung durch Ihre Institution / Organisation erhalten. Wie bei allen Überleben Operationen, stellen Sie sicher, dass die Operation unter sterilen Bedingungen durchgeführt wird und die entsprechende Schmerzmittel und Antibiotika nötig sind für ein erfolgreiches Ergebnis verwendet.
2. Vorbereitung der OP-Bereiche für Katheterplatzierung
3. Tunneling der Katheter
4. Einsetzen der Katheter in die Femoral Vene und Arterie (Abb. 3)
5. Chirurgische Wrap-up
- Für die langfristige Wartung ersetzen Katheter Kochsalzlösung mit 20 U / ml Heparin / Kochsalzlösung.
6. Wartung der Katheter (Sterile Handschuhe sollten während des Eingriffs getragen werden)
7. Blutprobenentnahme (Sterile Handschuhe sollten während des Eingriffs getragen werden)
Klemmen Sie den Katheter mit gepolsterten Zange.
8. Drug Infusion
10. Repräsentative Ergebnisse
Ein Vertreter der Blutdruck gemessen wurde von einer bewussten frei beweglichen Tieren genommen und ist in Abbildung 4 dargestellt. Phenylephrin (3 ug / kg, iv), einen Alpha-1-adrenergen-Rezeptor-Agonist, wurde in die Vena femoralis Linie, um den Blutdruck zu erhöhen verabreicht werden, bei gleichzeitiger Messung des Blutdrucks aus der Femoralarterie Linie. Phentolamin (4 mg / kg, iv)einem nicht selektiven alpha-adrenerge Antagonist, wurde dann verabreicht werden, um den Blutdruck zu senken.
Abbildung 1. Stumpfe Präparation von Gewebe. Mit der Ratte auf den Rücken, werden Sie ungefähr eine ½ Zoll (12 mm) Schnitt auf den Winkel der Hinterlauf gemacht haben und mit stumpfen Schere oder Hämostatika Sie stumpfen sezieren das Bindegewebe um die Arteria und Vena femoralis aussetzen wird.
Abbildung 2. Trennung von Arteria und Vena femoralis aus Bindegewebe.
Abbildung 3. Katheterplatzierung. Mit Vanna Mikro-Präparierscheren Ort einen kleinen Schnitt ca. ¼ der Weg durch das Schiff zu einem Winkel von 45 Grad (oben) und Platz spitzen Pinzette in the Schnitt und mit einer anderen Pinzette füttern den Katheter in das Gefäß (Mitte). Schließlich, nach Abschluss der Platzierung des Katheters Nahtmaterial der Katheter (unten).
Abbildung 4. Representative Blutdruck messen Sie von einer bewussten frei beweglichen Tier entnommen.
Arterielle und Venenkatheterverfahren haben in der Vergangenheit sowohl akut und chronisch-Monitor Blutdruck, Blut-Probe eingesetzt und liefern Substanzen in der experimentellen Ratten-Tiermodell 1-4. Ein großer Vorteil dieser OP-Besetzungen ist, dass es Verfahren zur Überwachung, einschließlich Blutentnahme, Medikamentengabe und Überwachung des Blutdrucks, um mit minimalen Störungen und / oder Stress für das Tier 1 durchgeführt werden kann. Zahlreiche Forscher haben Protokolle geschrieben und haben spezielle Methoden, mit denen ihr Labor führt die Operation 5-8. Das Video und Illustrationen zeigen, was unser Labor gefunden hat, erfolgreich zu sein im Hinblick auf die femoralen arteriellen und venösen Katheterisierung Verfahren.
Ratten werden in der Regel im Labor für eine Vielzahl von wissenschaftlichen Studien wegen ihrer geringen Größe und Bequemlichkeit in der Handhabung verwendet. Es gibt mehrere Orte, an denen eine chronischeKatheter kann innerhalb eines Tieres gestellt werden, einschließlich der Halsschlagader, Bauchschlagader, Halsschlagader und der Femoralarterie, um nur einige zu nennen. Die Ratte femoral Standort für chronische Katheterisierung führt zu einer erhöhten Länge der Katheter Durchgängigkeit und hatte die schnellste Erholung der präoperativen Tier Gewicht im Vergleich zu anderen Standorten Katheter 9.
Zahlreiche Forscher haben verwendet Verweilkatheter für akute sowie chronische Blutentnahme 1-5,11-13. In vielen Studien mehrere Blutabnahmen sind eines Tieres erforderlich und externe Kanülierung / Katheterisierung ist eine Methodik, die vorteilhaft aufgrund ihrer nicht-traumatischer Natur ist, außerdem kann es geschehen, während das Tier bei Bewusstsein ist, wird also nicht durch die Wirkung von Anästhetika beschränkt und auch das Tier frei bewegen 1,10. Die beste Methode, mit der Blutproben zu erhalten und zu Stresshormone bei Nagern zu messen ist seit langem 6,13 debattiert. Im Hinblick auf die Pharmakokinetik studies erlaubt Katheterisierung der Forschung Tier wiederholt Blutproben mit minimaler Zurückhaltung bei der Verwendung eines chronisch implantierten Katheter-System. Darüber hinaus haben Studien reduzierte basale Konzentrationen von Adrenalin, Noradrenalin und Dopamin im Plasma von sich frei bewegenden Ratten (Vena Katheter) im Vergleich zu Tieren, die behandelt worden sind (30 Sekunden) und oder zurückhaltend (5 Minuten) 14 gezeigt. Eine weitere Methode, mit der Zunahme der Belastung zu erkennen, um durch Messung Plasma Corticosteron Ebenen. Bisher wurde vermutet, dass auch nach drei Minuten vor vier Tagen chirurgischen Recovery-Zeiten, dass Plasma-Corticosteron Ebenen in der chronischen kanülierten Ratten 15 wurden erhöht. Allerdings haben die jüngsten Verbesserungen in der Methodik ermittelt, dass es keine Unterschiede in der Baseline-Plasma-Corticosteron Ebenen in die Jugularvene kanülierten Ratten im Vergleich zu uncannulated Ratten 16. Darüber hinaus HPLC-Methode für Corticosteron Analyse ergab auch, dass corticosterFallstecker durch Zurückhaltung Stress erhöht, aber stabil, nachdem Vena Katheterisierung 16.
Ein zusätzlicher Einsatz von chronischer Katheterisierung ist die Messung von Blutdruck und Herzfrequenz bei Nagetieren. Es gibt mehrere Methoden, die genutzt werden, um den Blutdruck und die Herzfrequenz in der Ratte zu messen sind, dazu gehören die nicht-invasive Schwanz Manschette Methoden, Radiotelemetrie Verfahren und direkte Verweilkatheter. Jede Methode hat ihre Vor-und Nachteile, die im Detail in anderen Publikationen beschrieben sind. Indwelling Flüssigkeit gefüllte Katheter kann in mehrere Arterien innerhalb der Ratte implantiert werden. Die Femoralarterie ist nur eine Arterie, die für diese Maßnahme verwendet werden können. Für Blutdruck / Herzfrequenz misst, ist das distale Ende des Katheters mit einem kalibrierten Druckmessumformer verbunden. Der Katheter kann in eine schützende Feder, die an einem Schwenkarm verbunden ist, um freie Bewegung des Tieres erlauben untergebracht werden, oder an eine Schaltfläche chirurgischentisch an das Tier implantiert. Dauerkatheter haben den Vorteil der Minimierung der langfristigen Belastung des Tieres 17,18. Neben den Materialien sind preiswert, ist die Kalibrierung einfach für Druck misst und kontinuierliche langfristige Maßnahmen können unter den Bedingungen der relativ geringen Belastung für viele Wochen 19 bezogen werden. Wir wäre nachlässig, wenn wir nicht erwähnen, dass es Nachteile dieser Technik, einschließlich, es ist ein chirurgisch-invasive Technik ist, ist die Wartung des Katheters erforderlich, um die Durchgängigkeit, Schäden an der Arterie durch die Implantation des Katheters und die Aufrechterhaltung Potenzial der Infektion um einige zu nennen.
Bei chronischen Maßnahmen des Blutdrucks direkte Aufnahmen von chronisch implantierten arteriellen Katheter sind technisch anspruchsvoll, aber sind genauer und kann kontinuierlich, ohne die Tiere getan werden. Tail-Manschette Messungen sind weniger genau, aber sie nicht operiert werden und kann auch wiederholthg. Tail-Manschette Methoden erfordern sowie Handhabung Erwärmung des Tieres bis zum Schwanz Schiffe erweitern, um den Nachweis der Puls 20 zu erleichtern. Handhabung und den zusätzlichen Hitzestress kann Auswirkungen auf den Blutdruck-Messungen, also nicht, dass wirklich genau misst. Außerdem sieht die non-direct tail-cuff-Methode nicht zulassen, einfach gleichzeitige Blutentnahme oder Medikamentengabe.
Eine weitere Methode, durch die direkte Maßnahme erreicht werden kann, ist mit telemetrischen Methoden. Telemetry ermöglicht hochwertige Aufnahmen des Blutdrucks (und andere Maßnahmen) kontinuierlich für längere Zeit in der bewussten frei beweglichen Tieren ohne Zurückhaltung oder Anästhetika 18. Allerdings, Telemetrie-Geräte, während ideal sind sehr teuer. Wenn die Telemetrie Vergleich gehören Katheterisierung Vorteile: verringerte "setup" und Betriebskosten, die Fähigkeit, leicht zu verwalten Drogen und leicht nehmen Blutproben in bewusster frei beweglichen Tieren. Die administriertion von Medikamenten und Substanzen, und, um Blutproben aus der Forschung Tier kann geschehen, während minimal der Tiere zu stören, damit Minimierung von Stress für das Tier und damit für eine genauere Messung werden.
Produktions-und Free Access dieses Video-Artikel ist von ADInstruments gesponsert.
Die Autoren danken Dr. Andrew King, PhD und Katrina König für den Beitrag der Abbildungen erkennen. NIH: R00HL087927.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Name | Typ | Firma | Katalog-Nummer |
Arteriellen Katheter | Verbrauchsmaterial | SAI Infusion | RFA-01 |
Venenkatheter | Verbrauchsmaterial | Scientific Commodities, Inc. | BB518-20 & BB31785-V / 2 |
27g 1 / 2 "stumpfen Nadel | Ausrüstung | Integrierte Dispensing Solutions, Inc. | 9991113 |
23g 1 / 2 "stumpfen Nadel | Ausrüstung | Integrierte Dispensing Solutions, Inc. | 9991109 |
PowerLab/8SP | Ausrüstung | ADInstruments | w.adinstruments.com/products/hardware/research/product/PL3508 / "target =" _blank "> ML765 |
Quad-Brücke | Ausrüstung | ADInstruments | ML118 |
LabChart 7,2 | Software | ADInstruments | |
BP Transducer mit Hahn & Cable | Ausrüstung | ADInstruments | MLT844 |
Single Channel Swivel | Ausrüstung | Instech | 375/22PS |
Single Axis-Counter Balance Swivel Mount | Ausrüstung | Instech | CM375BP |
Covance Infusion Harness | Ausrüstung | Instech | CIH105 |
Table Top Isofluran-Narkose-Einheit | Ausrüstung | Protech International, Inc. | 61020 |
Rodent Anesthesia Mask | Ausrüstung | Protech International, Inc. | RAM-02 |
Rodent Induction Kammer | Ausrüstung | Protech International, Inc. | RIC-01 |
Anästhesie Gas Filterbehälter | Ausrüstung | Protech Internationalenal, Inc. | 80120 |
Tabletop Laminar Flow Hood | Ausrüstung | Sentry Air Systems, Inc. | SS-200-WSL |
Oster Golden A5 | Ausrüstung | Oster Professional Products | 78005-140 |
Fiber Optic Light mit Dual-Schwanenhals-Führer | Ausrüstung | LW Scientific, Inc. | ILL-1502-DGG1 |
Deltaphase Isotherme Pad | Ausrüstung | Braintree Scientific | 39DP |
Wattestäbchen | Verbrauchsmaterial | Solon Manufacturing Company | 36200 |
Gazetupfer 2 "x2" | Verbrauchsmaterial | Kendall cherheit | 2146 |
5-0 Nylonfaden | Verbrauchsmaterial | Ethicon | 661G |
4-0 Seidenfaden | Verbrauchsmaterial | Deknatel | 8-S, 136075-0208 |
Gewebekleber | Verbrauchsmaterial | 3M | 1469SB |
Splinter & Fasszange | Ausrüstung | George Tiemann & Company | 160-55 |
Studentische Tissue Zange | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 91121-12 |
Micro Pinzetten / Pinzette Bracken | Ausrüstung | George Tiemann & Company | 10-1942 |
Extra Fine Graefe Zange | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 11152-10 |
Olsen-Hegar Nadelhalter | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 12002-12 |
Studentische Halsted-Mosquito Hemostat | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 91308-12 |
Rochester Pean Kraftp | Ausrüstung | Biomedical Research Instruments, Inc. | 31-1640 |
Studentische Chirurgische Schere | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 91402-12 |
Dumont Pinzetten | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 11251-35 |
Micro Präparierscheren | Ausrüstung | George Tiemann & Company | 160-210 |
Strabismus Schere | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 14075-11 |
Hartman Hemostat | Ausrüstung | Feine Science Tools, Inc. | 13003-10 |
Tissue Scissors | Ausrüstung | George Tiemann & Company | 160-150 |
Retractor | Ausrüstung | Custom Made |
Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden
Genehmigung beantragenThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten