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화합물 투여 III

Overview

출처: 케이 스튜어트, RVT, RLATG, CMAR; 발레리 A. 슈뢰더, RVT, RLATG. 노틀담 대학교, IN

실험실 마우스와 쥐에서 화합물 관리를 위한 많은 일반적으로 사용 되는 경로. 그러나, 특정 프로토콜 은 상인, 비강 내 및 두개 내 주사를 포함하여 덜 일반적으로 사용되는 경로의 사용을 요구할 수 있습니다. 이러한 절차를 성공적으로 수행하기 위해서는 전문 교육이 필수적입니다. 이러한 경로에 대한 정당성은 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 승인을 얻기 위해 제공 될 수있다.

Principles

Intraderma l주입은 진피의 외부 층으로 전달되며, 상부 피부 층(표피). 이 주사 경로는 일반적으로 항원에 염증, 피부 혈류 진단, 또는 알레르기 반응의 평가를 위해 예약되어 있습니다.

예방 접종 이나 충 혈 스프레이의 로컬 배달에 대 한 자주 사용 하지만, 비 강 내 관리 또한 전신 및 중추 신 경계에 사용할 수 있습니다 (CNS) 배달. 비강을 줄 점막은 급속한 전신 흡수및 CNS에 직접 표적을 허용하는 혈관 및 신경의 풍부한 공급을 가지고 있습니다. 작은 지방 성 분자로 구성 된 물질은 더 큰 분자를 포함 하는 것 보다 훨씬 더 큰 흡수 속도. 2

마취는이 절차에 대 한 필요 하지 않습니다, 그것은 nares에서 화합물의 적절 한 배치를 촉진할 수 있습니다., 정확한 적인 주전을 보장. 마취된 동물은 의식이 있는 동물에 비해 뇌에 약물의 5배 더 큰 전달을 갖는 것으로 입증되었습니다. 2 마취되지 않은 쥐는 비강 내 투여에 매우 내성이 있습니다. 그러나, 자유롭게 움직이는 쥐의 비강 내 투여를 위한 효과적인 전달 기술을 입증한 연구 결과가 있습니다. 3 또한, 경고 동물은 파이펫 팁, 또는 바늘에 물린 시도 할 수 있습니다, 물질의 전달을 어렵게 만들기.

비강 내 투여의 장점은이 기술은 최소한의 훈련과 기술이 필요하며 동물에게 비침습적이라는 것입니다. 그러나, 에어로졸화의 가능성때문에, 특히 의식이 있는 동물과 함께 일할 때, 생물안전 캐비닛및 눈 보호의 사용을 권고합니다. 또한, 동물을 익사 하지 않도록, 가능한 가장 작은 복용량을 사용 해야 합니다. 이 시술 중에 언제든지 시안색, 입 호흡 또는 다른 고민 징후가 동물에서 나타나면 절차는 즉시 중단되어야합니다.

성인 마우스와 쥐에서 두개 내 주사는 주입의 적절한 위치와 깊이를 보장하기 위해 스테레오 탁스 장비의 사용을 사용합니다. 그러나, 생쥐에서 3~28일의 나이, 그리고 14까지의 쥐는, 두개골은 그것을 통해 직접 주입할 만큼 충분히 얇습니다; 스테레오탁스 장치를 지원하기에는 너무 취약합니다. 마우스 또는 쥐 새끼는 절차가 완료 될 때까지 어머니와 함께 남아 있어야하며, 절차가 완료되면 가능한 한 빨리 그녀에게 반환해야합니다. 사후 관리는 간호를 포함하여 일반적인 운동 및 행동이 관찰될 때까지 열원에 대한 지속적인 모니터링을 포함합니다. 이 기술을 사용하는 주된 이유는 혈액-뇌 장벽을 교차해야 하는 중추 신경계에 약리학제를 제공하거나 전신 경로에 관련된 효과를 피하기 위한 것입니다. 1

Procedure

1. 인트레이더말 관리

  1. 대부분의 상인 주사는 수성 기반 화합물. 주사 부위에서 조직 괴사를 피하기 위해 중성 pH를 갖기 위해 생리적으로 완충되어야 한다.
  2. 바늘 크기 범위는 25-30 게이지이며 가능한 가장 작습니다.
  3. 주사 부위당 투여량 범위는 50-100 μL입니다. 과도한 부피를 주입하면 주사 부위에 괴사또는 압력으로 인해 화합물이 누출될 수 있다.
  4. 빈상인 공간에 바늘을 정확하게 배치하려면 쥐와 쥐를 마취할 필요가 있습니다. 흡입 마취는 급속한 유도 및 회복을 허용합니다; 그러나, 주 사용 마취는 지역의 준비를 위한 충분한 시간을 제공하고 주입을 능력을 발휘하는 장점이 있습니다. 1
  5. 탈필 크림을 사용하거나 부위를 면도하여 주사 부위에서 머리카락을 제거하십시오.
  6. 잔류 제분 크림이나 헤어 이물질을 철저히 제거하십시오.
  7. 요오드 용액, 클로르헤시딘 용액 또는 알코올과 같은 국소 살균제를 적용하십시오.
  8. 관리 절차
    1. 엄지와 검지 손가락 사이에 팽팽한 피부를 스트레칭합니다. 이것은 바늘을 배치 할 때 피부에 안정성을 제공합니다.
    2. 바늘을 피부에 베를 놓습니다.
    3. 표피와 진피 사이에 피부에 바늘을 부드럽게 삽입합니다. 바늘을 배꼽 너머로 전진시다.
    4. 물질을 천천히 주입하십시오. 화합물의 주입은 피부에 출혈, 또는 작은 물집을 만들 것입니다.
    5. 바늘을 철회하기 전에 피부가 스트레칭하고 조정할 수 있도록 주입 후 일시 중지합니다.
  9. 예방 조치
    1. 플런저를 다시 당기는 것은 필요하지 않습니다.
    2. 바늘이 피하 공간에 삽입되면 출혈이 형성되지 않습니다. 너무 깊이 주입 피하 주사 결과.
    3. 화합물이 주입 부위에서 누출될 수 있으므로 부위를 블로팅하거나 닦지 마십시오.
    4. 여러 주사를 수행 할 때, 블렙이 겹치지 않도록 그들을 공간.

Figure 1
그림 1. 쥐에서 상인 주사.

2. 비강 내 관리

  1. 설비
    1. 정확한 볼륨을 제공하기 위해 보정할 수 있는 마이크로파이프팅 유닛 파이펫을 사용합니다.
    2. 일회용 파이펫 팁은 교차 오염을 방지하기 위해 사용되어야 합니다. 결핵 주사기, 무딘 바늘 및 유연한 튜브도 투약에 사용할 수 있습니다.
    3. 쥐에 대한 총 사출 부량은 40-100 μL을 초과해서는 안되며 6-10 μL 방울로 주어져야합니다. 마우스의 경우 최대 총 부피는 24 μL이며 3-4 μL 방울로 제공됩니다.
  2. 의식적인 동물의 행정
    1. 의식동물의 수동 구속은 피펫 팁이나 무딘 바늘이 화합물을 전달하기에 충분히 가까이 배치될 수 있도록 머리가 상대적으로 움직이지 않도록 해야 하지만, 비강을 찌르거나 레이스화하는 것만큼 가깝지 않다.
    2. 동물을 억제하고 수직 위치에 고정합니다.
    3. 비강 개구부에 액체 화합물의 작은 방울을 놓습니다. 동물은 물방울을 흡입해야합니다.
    4. 전체 볼륨이 주어질 때까지 nares를 번갈아 가며 추가 볼륨을 관리합니다.
    5. 더 큰 볼륨을 투여 할 때 구속 하는 동안 가슴을 수축 하지 않는 것이 중요 하다. 가슴 압박은 동물이 기관지와 폐에 액체를 그리기 위해 충분히 심호흡을 하는 능력을 방해합니다.

Figure 2
그림 2. 의식마우스에서 비강 내 투여.

  1. 무의식적인 동물의 행정
    1. 흡입 마취제를 사용하면 화합물의 접근 및 전달 중에 고정 된 동물을 허용합니다. 이것은 동물이 투약 장비를 물고, 머리의 경련으로 인한 화합물의 손실, 동물의 비강 조직, 눈 또는 얼굴 피부에 부상을 입을 가능성을 제거합니다. 동물은 또한 흡입 하 고 투여 시 nares에서 화합물을 스프레이 가능성이 적습니다.
    2. 동물을 척추 위치에 놓습니다. 헤드의 위치는 나레에 솔루션의 배치에 영향을 미칩니다. CNS 전달에 이상적인 위치는 동물 척추와 함께 있음을 입증되었습니다. 이것은 더 나은 흡수를 허용합니다. 2
    3. 화합물의 절반을 비강 개구부의 한쪽으로 직접 투여하고 흡입으로 타이밍을 맞춰 다. 그런 다음 동물을 뒤집습니다.
    4. 위와 같이, 다른 비강 개구부로 부피의 나머지 절반을 관리한다.

Figure 3
그림 3. 무의식성 마우스에서 비강 내 투여.

3. 신생아 쥐와 쥐의 두개 내 투여

  1. 마우스 또는 쥐는 두개 내 주사를 위해 마취되어야 합니다.
마우스
나이(일) 니들 게이지(g) 나이(일) 니들 게이지(g)
0-7 29-30 0-5 27-29
7-14 27 5-10 25-27
14-28 25 10-14 25
나이(일) 바늘 길이(mm) 나이(일) 바늘 길이(mm)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4-7 3
14-21 4 7-10 4
21-28 5 10-14 5
나이(일) 부피(μL) 나이(일) 부피(μL)
0-5 <20 1-3 <20
6-20 <60 4-10 <60
20-28 <100 11-14 <100

표 1. 바늘 게이지, 바늘 길이 및 쥐와 쥐의 나이에 따라 두개 내 투여의 최대 볼륨. 4

  1. 설비
    1. 표 1에따라 올바른 바늘 게이지 및 최대 투여 량을 결정합니다.
    2. 동물을 마취하기 전에 바늘 가드를 준비하십시오.
      참고 : 바늘의 주입 깊이는 바늘 캡으로 생성 되는 가드의 사용을 통해 제어 됩니다.
      1. 가드를 만들려면 바늘이 바늘 캡에 대해 측정되고 캡에 마크가 놓아 절단 위치를 나타냅니다. 캡을 바늘에 교체 할 때 바늘의 2 ~ 5mm가 노출되도록 절단해야합니다.
      2. 노출된 바늘의 길이는 피부와 두개골을 관통하고 뇌의 원하는 깊이에 도달할 만큼 길어야 합니다.
      3. 마우스와 쥐에 필요한 바늘 길이는 표 1에나열됩니다.
    3. 새끼의 저체온증을 방지하기 위해 가열 원이 필요합니다. 낮은 전기 난방 패드, 순환 하는 물 담요, 또는 재사용 가능한 화학 반응 열 파우치 : 여러 가지 유형이 있습니다.
  2. 구속
    1. 마우스와 쥐 새끼 10 나이 의 일 또는 더 젊은이 절차에 대 한 마취를 필요로 하지 않습니다. 머리 바로 뒤에 그들을 잡고 어깨에 약간의 압력을 넣어 피부 caudally 당겨 수동으로 그들을 억제.
    2. 이소플루란 흡입으로 10 일 이상 새끼를 마취합니다. 유도 챔버를 정밀 기화기 또는 이소플루란으로 담근 면공을 가진 벨 항아리에 부착하십시오. 강아지가 고정되면 마취는 약 40 초 동안 효과적이며 주입에 충분한 시간을 제공합니다.
  3. 사출 기술
    1. 주사기에 물질을 넣고 캡/바늘 가이드를 바늘 위에 놓습니다.
    2. 신생아 마우스 또는 쥐당 최대 부피로 권장되는 주사 부피는 100 μL이며, 짜는 쥐또는 더 오래된 마우스의 경우 최대 300 μL입니다.
    3. 신생아의 대뇌 피질에 주입하려면, 눈 뒤에 바늘 5mm를 삽입, 두개골의 중간선에서 약 3mm.
    4. 짜는 마우스 주입 부위는 눈과 귀 사이의 약 절반 정도이며 중간선 바로 바 떨어져 있습니다.

Figure 4
그림 4. 마우스 새끼의 두개 내 투여.

Application and Summary

동물로 화합물의 관리 동물의 웰빙과 실험 데이터 및 과학적 가치의 결과 모두에 중요 한 영향을 미칠 수 있습니다. 적절한 전달 방법은 실험의 성공에 필수적입니다. 연구의 과학적 목표, 물질의 pH, 필요한 투여량, 물질의 점도, 동물의 웰빙 등 최상의 경로를 결정하는 데 많은 요소를 고려해야 합니다. 기술 전문 지식은 또한 모든 주입 방법에 대한 요구 사항입니다.

References

  1. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., and Brabb, T. 2011. Administration of substances to laboratory animals: equipment and considerations, vehicle selection, and solution preparation. JAALAS. 50: 614-627.
  2. Dhuria, S.V., Hanson, L.R., and Frey II, W.H. 2010. Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. Journal of Pharmaceutical Sciences. 99: 1654-1673.
  3. Stevens, J., Suidgeest, E, Van der Graaf, P.H., Danhof, M., and De Lange, E.C. 2008. Development and evaluation of a new, minimal-stress animal model for intranasal administration in freely moving rats. Poster presentation at American Association of Pharmaceutical Scientists Annual Meeting, Atlanta, Georgia.
  4. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35: 1-41.

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Overview

1:09

Considerations for the Specialized Injections

4:46

Intradermal Administration

6:30

Intranasal Administration

7:59

Intracranial Administration in Neonatal Rodents

10:38

Applications

11:56

Summary

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