Sign In

ניהול מתחם III

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

ישנם מסלולים נפוצים רבים לניהול מורכב בעכברים במעבדה וחולדות. עם זאת, פרוטוקולים מסוימים עשויים לדרוש שימוש בנתיבים פחות נפוצים, כולל זריקות תוך-עוריות, תוך גולגולתיות ותוך גולגולתיות. הכשרה מיוחדת חיונית להליכים אלה להתבצע בהצלחה. ייתכן שיהיה צורך בהצדקה למסלולים אלה כדי לקבל אישור של ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים (IACUC).

Principles

לינג'ים תוך-דרמה מועברים לשכבות החיצוניות של הדרמיס, מתחת לשכבת העור העליונה (האפידרמיס). מסלול הזרקה זה שמור בדרך כלל להערכת דלקת, אבחון זרימת דם עורית, או תגובות אלרגניות לאנטיגן.

למרות המשמש לעתים קרובות עבור משלוח מקומי של חיסונים או תרסיס decongestant, ניהול תוך נאוי יכול לשמש גם עבור משלוח מערכת העצבים המערכתית והמרכזית (CNS). הרירית המיישרת את חלל האף כוללת אספקה עשירה של כלי דם ועצבים המאפשרים ספיגה מערכתית מהירה ומיקוד ישיר למערכת העצבים המרכזית. חומרים המורכבים ממולקולות ליפופיליות קטנות יש שיעור ספיגה הרבה יותר מאשר אלה המכילים מולקולות גדולות יותר. 2

למרות הרדמה אינו נדרש עבור הליך זה, זה יכול להקל על מיקום נכון של המתחם ב nares, הבטחת מנונים מדויקים. הוכח כי בעלי חיים מרדים יש משלוח גדול פי חמישה של תרופה למוח לעומת חיה מודעת. 2 חולדות לא מנוטות עמידות מאוד בפני ניהול תוך-אנליסטי. עם זאת, יש מחקר שהפגין טכניקות מסירה יעילות לניהול תוך-נאואלי של חולדות נעות בחופשיות. 3 בנוסף, בעלי חיים התראה עשויים לנסות לנשוך את קצה פיפטה, או מחט, מה שהופך את המסירה של החומר קשה.

היתרונות לניהול תוך-נאואלי הם שטכניקה זו דורשת אימון ומיומנות מינימליים, והיא אינה פולשנית לחיה. עם זאת, בשל האפשרות של אירוסוליזציה, מומלץ להשתמש בארון בטיחות ביולוגית והגנה על העיניים, במיוחד כאשר עובדים עם בעל חיים מודע. יתר על כן, כדי למנוע הטבעת בעלי החיים, המינון הקטן ביותר האפשרי יש להשתמש. אם בכל עת במהלך הליך זה כיחלון, נשימה בפה, או סימנים אחרים של מצוקה נראים בבעלי החיים, ההליך צריך להיות בוטל מיד.

זריקות תוך גולגולתיות בעכברים מבוגרים וחולדות משתמשות בציוד סטריאוטקסי כדי להבטיח את המיקום והעומק הנכונים של ההזרקה. עם זאת, בעכברים 3 עד 28 ימים של גיל, וחולדות עד 14 ימים של גיל, הגולגולת היא רזה מספיק כדי להזריק ישירות דרכו; הוא שביר מכדי לתמוך במכשיר הסטריאוטקסי. העכבר או גורי החולדה צריכים להישאר עם האם עד ההליך, והם צריכים להיות מוחזרים אליה בהקדם האפשרי לאחר השלמת ההליך. טיפול לאחר ההסתה כולל ניטור רציף על מקור חום עד תנועה רגילה והתנהגויות, כולל סיעוד, נצפים. הסיבה העיקרית להשתמש בטכניקה זו היא לספק סוכנים פרמקולוגיים למערכת העצבים המרכזית הדורשים לחצות את מחסום הדם - מוח, או כדי למנוע את ההשפעות הכרוכות במסלול המערכתי. 1

Procedure

1. ניהול תוך-עורי

  1. רוב זריקות תוך עוריות הן תרכובות מבוססות מימיות. הפתרונות חייבים להיות חוצצים פיזיולוגית כדי לקבל pH נייטרלי, על מנת למנוע נמק רקמה באתר ההזרקה.
  2. טווח גודל המחט הוא 25-30 מד, הקטן ביותר האפשרי.
  3. טווח המינון לכל אתר הזרקה הוא 50-100 μL. הזרקת נפחים מוגזמים עלולה לגרום לנמק באתר ההזרקה או לדליפת המתחם מהאתר עקב לחץ.
  4. עבור מיקום מדויק של המחט לתוך החלל התוך עורי, יש צורך למרדים הן עכברים והן חולדות. הרדמה שאיפה מאפשרת אינדוקציה מהירה והתאוששות; עם זאת, הרדמה להזרקה יש את היתרון של מתן מספיק זמן להכנת האזור וביצוע הזריקה. 1
  5. הסר את השיער באתר ההזרקה באמצעות קרם depilatory או על ידי גילוח האזור.
  6. יש להסיר ביסודיות כל שאריות של קרם דפילטרי או פסולת שיער.
  7. החל חיטוי אקטואלי, כגון פתרון יוד, פתרון כלורהקסידין, או אלכוהול.
  8. נהלי ניהול
    1. מתחו את העור מתוח בין האגודל לאצבע המורה. זה מספק יציבות לעור בעת מיקום המחט.
    2. מניחים את המחט משופעת על העור.
    3. הכנס בעדינות את המחט לתוך העור בין האפידרמיס והדרמיס. לקדם את המחט ממש מעבר שיכול.
    4. הזריקו את החומר לאט. הזרקת המתחם תיצור bleb, או שלפוחית קטנה, בעור.
    5. השהה לאחר ההזרקה כדי לאפשר לעור למתוח ולהתאים לפני משיכת המחט.
  9. אמצעי זהירות
    1. אין צורך לסגת בבוקעת.
    2. אם המחט מוכנסת לחלל התת עורי, לא נוצר bleb. הזרקת עמוק מדי גורמת לזריקה תת עורית.
    3. הימנע נפיחות או ניגוב האזור, כמו זה יכול לגרום המתחם לדלוף מאתר ההזרקה.
    4. בעת ביצוע זריקות מרובות, רווח אותם כך blebs לא חופפים.

Figure 1
איור 1. הזרקה תוך עורית בעכברים.

2. ניהול תוך-נאואלי

  1. ציוד
    1. השתמש בצינור יחידת מיקרו-פיקפיק שניתן לכייל כדי לספק נפח מדויק.
    2. יש להשתמש בטיפים חד פעמיים לפיפטה כדי למנוע זיהום צולב. מזרקי שחפת, מחטים קהות וצינורות גמישים יכולים לשמש גם למינום.
    3. נפחי הזרקה הכולל עבור חולדות לא יעלה על 40-100 μL, ויש לתת 6-10 טיפות μL. עבור עכברים, הנפח הכולל המרבי הוא 24 μL, נתון 3-4 טיפות μL.
  2. ניהול בבעלי חיים מודעים
    1. איפוק ידני בבעלי חיים מודעים דורש כי הראש להיות יחסית חסר תנועה, כך קצה פיפטה או מחט קהה ניתן להציב קרוב מספיק nares כדי לספק את המתחם, אבל לא כל כך קרוב כמו לתקוע או לקרוע את רקמת האף.
    2. לרסן את החיה ולהחזיק אותו במצב אנכי.
    3. מניחים טיפה קטנה של תרכובת נוזלית בפתח האף. החיה צריכה לשאוף את הטיפה.
    4. נהל אמצעי אחסון נוסף, ערך נלווה לסירוגין עד להינתן אמצעי האחסון כולו.
    5. בעת מתן כרכים גדולים יותר, חשוב לא לכווץ את החזה במהלך איפוק. דחיסת חזה פוגעת ביכולתו של בעל החיים לנשום נשימות עמוקות מספיק כדי למשוך את הנוזל לתוך הסימפונות והריאות.

Figure 2
איור 2. ניהול תוך-נאוי בעכברים מודעים.

  1. ניהול בבעלי חיים חסרי הכרה
    1. שימוש בהרדמה משאיפת אלכוהול מאפשר בעל חיים משותק במהלך הגישה והלידה של המתחם. זה מבטל את האפשרות של החיה לנשוך את ציוד מנון, אובדן המתחם עקב jerking של הראש, ופגיעה ברקמת האף של החיה, עיניים, או עור הפנים. החיה גם פחות סביר להסניף ולרסס את המתחם מן nares על הממשל.
    2. מניחים את החיה בתנוחה השופית. מיקום הראש משפיע על מיקום הפתרון ב nares. הוכח כי המיקום האידיאלי עבור משלוח מערכת החולים הוא עם supine בעלי חיים; זה מאפשר ספיגה טובה יותר. 2
    3. לנהל מחצית המתחם ישירות לתוך צד אחד של פתח האף, תזמון זה עם שאיפה. ואז, להפוך את החיה מעל.
    4. כאמור, נהל את החצי השני של הנפח לתוך פתח האף האחר.

Figure 3
איור 3. ניהול תוך-נאוי בעכברים מחוסרי הכרה.

3. ניהול תוך גולגולתי בעכברים וחולדות יילודים

  1. עכברים או חולדות חייבים להיות מרדים לזריקות תוך גולגולתיות.
עכבר חולדה
גיל (ימים) מד מחט (גרם) גיל (ימים) מד מחט (גרם)
0-7 29-30 0-5 27-29
7-14 27 5-10 25-27
14-28 25 10-14 25
גיל (ימים) אורך המחט (מ"מ) גיל (ימים) אורך המחט (מ"מ)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4-7 3
14-21 4 7-10 4
21-28 5 10-14 5
גיל (ימים) אמצעי אחסון (μL) גיל (ימים) אמצעי אחסון (μL)
0-5 <20 1-3 <20
6-20 <60 4-10 <60
20-28 <100 11-14 <100

טבלה 1. מד מחט, אורך מחט ונפח מרבי של ניהול תוך גולגולתי לפי גיל העכברים והחולדות. 4

  1. ציוד
    1. קבע את מד המחט הנכון ואת נפח הניהול המרבי לפי טבלה 1.
    2. הכן שומר מחט לפני שהוא מרדים את החיה.
      הערה: עומק ההזרקה של המחט נשלט באמצעות שומר שנוצר עם מכסה המחט.
      1. כדי ליצור את השומר, מחט נמדדת כנגד מכסה המחט, וסימן ממוקם על הכובע כדי לציין היכן לחתוך. החתך צריך להיעשות כך 2 עד 5 מ"מ של המחט חשופים כאשר המכסה מוחלף על המחט.
      2. אורך המחט החשופה חייב להיות ארוך מספיק כדי לחדור את העור והגולגולת, ולהגיע לעומק הרצוי במוח.
      3. אורכי המחט הדרושים לעכברים וחולדות מפורטים בטבלה 1.
    3. מקור חימום נדרש כדי למנוע היפותרמיה אצל הגורים. ישנם מספר סוגים: כרית חימום חשמלית על נמוך, שמיכת מים במחזור, או כיס חום תגובה כימית רב שימוש חוזר.
  2. איפוק
    1. עכבר וגורי חולדה 10 ימים ומטה אינם דורשים הרדמה עבור הליך זה. לרסן אותם באופן ידני על ידי החזקתם ממש מאחורי הראש ומשיכת העור בקהילות כדי להפעיל לחץ קל על הכתפיים.
    2. גורים מרדים מעל גיל 10 ימים עם שאיפת איזופלוראן. חברו תא אינדוקציה לאידוי מדויק או לצנצנת פעמון עם כדור כותנה ספוג באיזופלוראן. ברגע שהגור משותק, ההרדמה יעילה למשך כ -40 שניות, מה שמספק מספיק זמן להזרקה.
  3. טכניקת הזרקה
    1. צייר את החומר לתוך המזרק ומניחים את מדריך הכובע / המחט מעל המחט.
    2. נפח ההזרקה המומלץ כמו נפח המרבי לכל עכבר יילודים או חולדה הוא 100 μL, וכי עבור גגמול או עכברים מבוגרים הוא עד 300 μL.
    3. כדי להזריק לתוך קליפת המוח של יילודים, להכניס את המחט 5 מ"מ מאחורי העין, כ 3 מ"מ את קו האמצע של הגולגולת.
    4. אתר הזרקת העכבר הגומלי נמצא בערך באמצע הדרך בין העין לאוזן, ממש ליד קו האמצע.

Figure 4
איור 4. ניהול תוך גולגולתי בגור עכבר.

Application and Summary

ניהול תרכובות לבעלי חיים יכול להיות בעל השפעה משמעותית הן על רווחת החיה והן על התוצאה של הנתונים הניסיוניים והערך המדעי. שיטת המסירה הנכונה חיונית להצלחת הניסוי. גורמים רבים חייבים להיחשב כדי לקבוע את המסלול הטוב ביותר, כולל המטרה המדעית של המחקר, ה- pH של החומר, נפח המינון הנדרש, צמיגות החומר, ואת הרווחה של בעלי החיים. מומחיות טכנית היא גם דרישה לכל שיטות ההזרקה.

References
  1. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., and Brabb, T. 2011. Administration of substances to laboratory animals: equipment and considerations, vehicle selection, and solution preparation. JAALAS. 50: 614-627.
  2. Dhuria, S.V., Hanson, L.R., and Frey II, W.H. 2010. Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. Journal of Pharmaceutical Sciences. 99: 1654-1673.
  3. Stevens, J., Suidgeest, E, Van der Graaf, P.H., Danhof, M., and De Lange, E.C. 2008. Development and evaluation of a new, minimal-stress animal model for intranasal administration in freely moving rats. Poster presentation at American Association of Pharmaceutical Scientists Annual Meeting, Atlanta, Georgia.
  4. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35: 1-41.
Tags

Skip to...

0:00

Overview

1:09

Considerations for the Specialized Injections

4:46

Intradermal Administration

6:30

Intranasal Administration

7:59

Intracranial Administration in Neonatal Rodents

10:38

Applications

11:56

Summary

Videos from this collection:

article

Now Playing

ניהול מתחם III

Lab Animal Research

31.2K Views

article

טכניקות טיפול וריסון מכרסמים

Lab Animal Research

173.2K Views

article

נהלי טיפול בסיסיים

Lab Animal Research

27.6K Views

article

יסודות הרבייה והנגייה

Lab Animal Research

35.5K Views

article

זיהוי מכרסמים I

Lab Animal Research

54.4K Views

article

זיהוי מכרסמים II

Lab Animal Research

25.5K Views

article

ניהול מורכב I

Lab Animal Research

99.9K Views

article

ניהול מתחם II

Lab Animal Research

34.6K Views

article

ניהול מורכב 4

Lab Animal Research

51.2K Views

article

נסיגת דם I

Lab Animal Research

170.7K Views

article

נסיגת דם II

Lab Animal Research

72.7K Views

article

אינדוקציה ותחזוקה של הרדמה

Lab Animal Research

50.0K Views

article

שיקולים לניתוח מכרסמים

Lab Animal Research

22.3K Views

article

אבחון נקרופסיה וקציר רקמות

Lab Animal Research

57.8K Views

article

קציר רקמות סטריליות

Lab Animal Research

34.7K Views

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved