출처: 케이 스튜어트, RVT, RLATG, CMAR; 발레리 A. 슈뢰더, RVT, RLATG. 노틀담 대학교, IN
1959년 W.M.S. 러셀과 R.L. 버치가 자신의 저서 '인간 실험 기술의 원리'에서 3R을 소개했다. 3 R은 연구에서 동물의 사용의 교체, 감소 및 정제입니다. 1 연구 동물에서 유래된 세포주 및 조직 배양의 사용은 많은 실험이 체외에서 수행될 수 있기 때문에 대체 기술이다. 세포 및 조직 배양에 사용하기 위해 조직과 장기를 수확하려면 조직의 오염을 피하기 위해 무균 기술이 필요합니다. 멸균 수확은 단백질 및 RNA 분석 및 조직의 대사 프로파일링에도 필요합니다. 이 원고는 쥐와 쥐에서 멸균 기관 수확의 과정을 논의 할 것이다.
무균 기술은 조직의 멸균을 보장하기 위해 따라야합니다. 수확은 알코올에 감염된 라미나르 흐름 후드에서 수행됩니다. 사용된 모든 재료는 살균해야 합니다. 수확을 수행하는 기술자는 마스크, 부퍼, 멸균 수술 가운 및 멸균 수술 장갑을 포함한 개인 보호 장비를 착용해야합니다. 가운은 피부 세포가 열린 신체 구멍, 페트리 접시 또는 멸균 매체로 흘러 들어가는 것을 방지하기 위해 손목을 덮어야합니다. 기술자의 멸균을 유지하기 위해이 절차는 두 번째 비멸 기술자가 동물의 안락사를 통해 멸균 기술자를 도와야합니다.
조직의 대사 프로파일을 필요로하는 실험에서 조직 수확 방법은 수집 된 데이터의 품질에 큰 영향을 미칩니다. 2 안락사 절차와 수확 시간이 모두 조직의 무결성에 영향을 줄 수 있습니다. 저산소증, 이산화탄소와 안락사의 결과, 조직에서 대사 산물에 깊은 영향을 미칠 것으로 나타났습니다. 폐 조직에 있는 혈관의 출혈은 또한 안락사를 위한 이산화탄소의 사용에 기인합니다. 표적 조직의 순차적 해부가 수행될 때 조직 제거의 순서는 조직이 수확 하는 동안 나이 또는 부패를 시작으로 신진 대사 변화를 일으킬 수 있습니다.
대부분의 멸균 수확은 단일 장기를 대상으로하지만, 하나 이상의 기관이 필요한 경우가 있을 수 있습니다. 순차적 해부 동안 필요한 조직은 제거해야 하는 순서를 지시합니다. 2 급속히 저하되는 조직은 안락사 에 따라 가능한 한 빨리 수확해야합니다. 계측기의 멸균을 유지하기 위해 복강에서 수확한 장기는 비장, 간, 신장, 부신, 난소 또는 고환, 부속성 기관(전립선, 정액 소포, 자궁, 나팔관), 췌장 조직, 림프절, 요로 방광 및 장내 (위장, 요로암 방광) 및 장내 (위장, 요로방) 및 장내 (위장) 및 소장 (위장)에서 제거됩니다. 흉부 구멍에서 장기 수확의 순서는 먼저 흉선, 림프절 및 식도의 수집 다음에 심장과 폐를 제거하는 것입니다. 각 마우스에는 3개의 새로운 장갑이 필요합니다.
멸균 수확 장기 중 일부는 보존해야 할 수도 있습니다. 조직의 보존은 액체 질소 (LN2)로플래시 동결 또는 LN2 및 2-메틸부탄의 조합으로 수행됩니다. LN2단독의 경우, 조직은 멸균 식염수로 헹구고, 멸균 흡수성 천에 담그고, 여분의 수분을 고갈시키고, 멸균 알루미늄 호일 광장에 넣고, 즉시 LN2에침수된다. 2 면역학적 표본의 경우 2-메틸부탄이 추가됩니다. 조직은 실제로 LN2에의해 냉각된 2-메틸부탄으로 침수됩니다. 조직이 흰색으로 바뀌면 2-메틸부탄에서 제거되어 멸균 팩에 넣은 다음 LN2에직접 배치됩니다.
1. 준비
2. 조직 수확
멸균 기관 수확을 위한 절차의 대부분은 표준 부검과 유사하더라도, 살균 기술의 사용은 세포가 절제된 조직에서 세포를 수확하는 것을 포함하는 실험 적인 절차에 대한 가치가 있는 조직에 필수적입니다. 불임이 유지되지 않으면 조직에서 RNA를 프로파일링하거나 수집하는 것이 손상될 수 있습니다.
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