无菌技术在环境科学中

1.无菌工作的准备

1. 获取并应用下列个人防护装备项目: 白大褂、 乳胶或丁腈手套 （免费从眼泪或孔） 和护目镜 (图 1)。为安全起见在使用明火，绑回长长的头发。
   
   图 1: PPE: 白大褂、 乳胶手套和护目镜。
2. 无菌技术的第二个重要方面是正确的消毒和存储的媒体/试剂在实验室中使用。用称重基干粉适量的去离子水中加入适量准备液肉汤培养基 （例如，胰酪胨大豆肉汤） 和基于琼脂的媒体 （例如，R2A）。
3. 肉汤培养基，放在铁板上的粉溶解与应用，低热量和液体要么在 100 毫升容量入玻璃螺丝顶烧瓶内，或在 10 毫升卷分赐玻璃-螺口试管。用磁力搅拌棒，在热板搅拌器搅拌琼脂糖培养基中，直到粉充分溶解。
4. 适用于容器和高压釜媒体按照制造商的说明 （例如，20 分钟在 121 ° C） 的高压釜磁带 （图 2 和图 3）。请注意在高压釜磁带上条纹的颜色应该从白色 （前高压釜） 更改为黑色 （后高压釜）。虽然颜色的变化通常表明绝育是成功，不育检查使用孢子地带工具包可进行验证灭菌过程。
   
   图 2: 高压釜磁带适用于材料。
   
   图 3:注意颜色的变化上高压釜磁带从白色 （前高压釜） 为黑色 （后高压釜） 条纹。
5. 冷却至室温，液体肉汤，然后储存在室温或冷藏在 4 ° c。
6. 酷将容器放入水浴琼脂糖凝胶介质设置为 ~ 50 ° c。一旦冷却，媒体可以倒入无菌培养皿。允许介质冷却和固化，然后巩固由制造商指定的温度条件下存放。
7. 有几个品种的高温度降低关键要素不能蒸压的文化媒体。消毒这些需要过滤灭菌使用真空过滤系统采用 0.22 微米过滤器，其次是存储在适当的温度。
8. 之前在台式上执行工作，消毒使用适当的解决方案 （例如，500 ppm 漂白剂） 的表面。这降低了将从工作表面的污染物转移到文化和不育的媒体的风险。
9. 要建立一个无菌的字段，请打开本生灯。最适合接种环灭菌金属的火焰类型是强烈的蓝色火焰，与明确的蓝色锥体 (图 4) 中观察到。
   
   图 4: 细菌从一个培养皿显示生长的细胞转移到另一个未接种培养皿含琼脂基础培养基隔离。
10. 慢慢地通过接种循环遍历的火焰 （蓝色锥尖） 最热门的一部分。循环应该变成红色热为绝育。

2.细菌转移: 从到培养皿培养皿

1. 一种应用场景转移细菌是从一个培养皿显示含琼脂基础培养基培养分离到另一个，无菌培养皿增长。
2. 首先，稍稍打开培养皿含纯细菌培养，并轻轻地敲琼脂表面热、 灭菌的接种环。
3. 检索一个孤立的群体从使用冷却接种环，板的表面和关闭平皿。
4. 执行隔离使用新鲜的培养皿，含培养基，略有半开盖的条纹。
5. 为隔离条纹 (3 总每板) 的每一部分，火焰-消毒接种环只是事先使用。此外，火焰-消毒循环刚最后条纹进行防止污染的台阶面以及考虑其他人在实验室里可能稍后使用或接触的接种环。
6. 将条纹的板放入孵化器一夜之间的增长。

3.细菌转移: 从肉汤文化到培养皿

1. 第二种方案的转移细菌是从肉汤文化参展增长，作为普遍观察到的浊度，对含有生长介质的无菌培养皿。
2. 删除帽从试管 （或瓶） 含纯细菌培养，并通过容器的开放通过火焰的热门部分 2-3 倍。为防止污染，做不设置上限到工作台上。
3. 仔细向下放入管瓶无菌接种环，轻轻地按对容器的侧冷却之前插入到肉汤文化。
4. 删除一个染剂的培养液 (图 5)，并立即盖上盖子。
   
   图 5:一个染剂的汤文化。
5. 执行隔离使用新鲜的培养皿，含培养基，略有半开盖的条纹。
6. 为每个部分的条纹 (3 总每板)，火焰-消毒接种环只是事先使用。此外，火焰-消毒循环刚最后条纹进行防止污染的台阶面以及考虑其他人在实验室里可能稍后使用的接种环。
7. 将条纹的板为隔离到孵化器增长一夜之间放。

4.细菌转移: 从增长到无菌的液体培养基培养皿

1. 转移的细菌的三种情况是从含管/瓶含无菌液体培养基分离的培养条纹的培养皿。
2. 稍打开培养皿含纯细菌培养，并冷却热的接种环通过琼脂表面轻轻敲击它。
3. 检索一个孤立的群体从使用冷却接种环，板的表面和关闭平皿。
4. 删除帽从试管 （或烧瓶） 中的无菌液体培养基中，并通过 2 至 3 倍通过火焰的热门部分容器的开放。为防止污染，做不设置上限到台式.
5. 仔细进液肉汤培养基中，降低提取的殖民地并轻轻搅动循环以释放细菌。立即盖上盖子。
6. 火焰-消毒接种环以防止污染的台阶面以及考虑其他人在实验室里可能稍后使用的接种的循环。
7. 孵化器增长成瓶的地方过夜。
8. 删除从孵化第二天的烧瓶。要枚举的文化执行稀释系列。
9. 板上琼脂培养基，系列稀释和培养板过夜。
10. 删除板第二天，并观察任何污染。

5.细菌转移: 从肉汤文化到无菌液体培养基

1. 四种情况转移细菌是从参展管/瓶含无菌液体培养基生长的培养液。
2. 删除帽从试管 （或瓶） 含纯细菌培养，并通过两次通过火焰的热门部分容器的开放。为防止污染，做不设置上限到工作台上。
3. 仔细地降低接种环管/瓶，并轻轻地按对容器的侧冷却之前插入到肉汤文化。
4. 删除一个染剂的培养液，并立即盖上盖子。
5. 删除帽从试管 （或烧瓶） 中的无菌液体培养基中，并通过两次通过火焰.的热部分容器的开口为防止污染，做不设置上限到工作台上。
6. 仔细地降低提取的染剂到无菌液体发酵培养基，并轻轻搅动循环以释放细菌。立即盖上盖子。
7. 火焰-消毒接种环 (图 6) 为防止污染的台阶面以及考虑其他人在实验室里可能稍后使用的接种环。
   
   图 6: 接种环变红热而被消毒用本生灯。
8. 孵化器增长成瓶的地方过夜。
9. 删除从孵化第二天的烧瓶。要枚举的文化执行稀释系列。
10. 板上琼脂培养基，系列稀释和培养板过夜。
11. 删除板第二天，并观察任何污染。