可视化的土壤微生物，通过接触滑动检测和显微镜
Overview
资料来源: 实验室的博士伊恩胡椒和博士查尔斯称-亚利桑那大学
演示作者: 布拉德利施密茨
土壤包括在地球的表面，包含生活做出贡献的生物和非生物因素的薄层。非生物部分包括无机粒子的大小和形状等，确定土壤的质地。生物部分包含了植物残体、 根、 有机物、 微生物。土壤微生物丰度和多样性是膨胀，一克土壤中含有 107 8细菌、 放线菌 106 8 、 105 6真菌、 103酵母、 原生动物4-6月 10 日，103-4藻类和 53线虫。在一起，生物和非生物因素形成周围植物的根部，称为根际，提供有利的条件，为土壤微生物的体系结构。
生物和非生物因素促进土壤中的生活。然而，他们也有助于限制微生物的压力动态。生物胁迫涉及生活适应和生存的环境条件之间的竞争。例如，微生物可以分泌抑制或有毒物质，危害周边的微生物。青霉是臭名远扬的真菌，因为它减少了养分的竞争由生产抗菌、 哪些人收获打造制药青霉素。非生物胁迫引起的物理或化学特性限制微生物的生存，如光、 水分、 温度、 ph 值、 养分和纹理。
Principles
直接观察土壤有机体、 粒子和行为在不同土壤环境之间的相互关系是困难的但接触幻灯片测定，也被称为埋幻灯片技术，开发的罗西等人（1936 年） 入土壤微生物学提供快照观点。此方法是用于观测土壤真菌、 放线菌，细菌通过显微镜。虽然它不是为微生物量化，因为它只意味着更大异构环境中的一小部分。
这种方法容易的通过玻璃滑入土壤埋了好几天，然后用乙酸固定在幻灯片上的微生物。微生物与孟加拉染料染色，显微镜油浸渍法对 100 X 目的通过观察。可以区分三种微生物类群，如细菌显示为小的圆形形状，放线菌丝为薄的字符串和真菌菌丝作为厚实的螺纹。在土壤中，几乎所有的细菌都较小和圆比纯文化营养的应力，导致萎缩和舍入为一个更有利的表面: 体积比。未染色的不规则暗形状是土壤颗粒。不同养分修订可以添加到土壤提供碳和葡萄糖的来源，促进微生物的生长和相互作用。这种技术可以很容易观察土壤微生物学和有助于确定环境中存在的几个生物。
Procedure
1.土壤幻灯片缩影制备
- 从表面收集园土 (0-6"深度)，和成两个单独杯重量 150 克土。
- 如果土壤有机物质密度高，重量 100 克。
- 标签一杯"待遇"和其他"控制"。
- 计算所需改变水分含量的水量。
- 水分含量经常是接近田间持水量。
- 水分含量经常是接近田间持水量。
- 蒸馏水用量筒测量量。
- 倒入两小瓶的蒸馏水量。
- 标签一小瓶"待遇"和其他"控制"。
- 在"待遇"土壤干燥重量依据修订足够葡萄糖为最后一层泥土葡萄糖浓度为 1%，与"治疗"瓶中的水。
- 200 毫克 NH43没有加入"治疗"瓶，搅拌溶解的修订。硝酸盐作为氮源营养物质在土壤中的微生物。
- 不修订"控制"小瓶。
- 在小整除的大约 50 毫克，拌匀成"待遇"杯"待遇"小瓶的内容。用锅铲搅拌后每个分装的加法。
- 在小整除的拌匀成"控制"杯"控制"小瓶的内容。用锅铲搅拌后每个分装的加法。
- 四个干净的显微镜载玻片的标签: 两个"待遇"和"控制"的两张幻灯片。
- 两个"待遇"幻灯片插入"待遇"土杯，并将两个"控制"幻灯片插入到"控制"土杯。离开 2 厘米的每张幻灯片上的土壤表面的突起，一定要两个幻灯片之间留下的缺口。
- 盖杯用塑料包装并确保它用一根橡皮筋。
- 几次穿刺包允许空气，但仍然阻止过度蒸发。
- 记录两个杯子的重量。
- 填土的杯子，在室温下，在一个指定区域孵化器孵育 7 天。
2.幻灯片染色及显微镜
- 记录两个杯子的重量。
- 幻灯片删除时计算土壤水分。
- 按每张幻灯片到倾斜的位置并撤回所以不干扰幻灯片的上部的脸从每个杯子删除两张幻灯片。
- 识别和标识的一侧要染色，观察到的幻灯片。
- 轻轻地敲上台阶顶要删除大型土壤颗粒的幻灯片。
- 使用湿纸巾，洁面低的幻灯片。干燥的室温的幻灯片。
- 戴护目镜及与钳持每张幻灯片，浸泡成 40%(v/v) 乙酸为 1-3 分钟下风柜幻灯片。
- 冲洗掉过剩的酸下一连串温柔的水。
- 使用滴管瓶，覆盖表面的酚醛孟加拉幻灯片。在容器赶上多余染色染色架上支持幻灯片。要小心，不要洗与可能删除幻灯片的表面微生物的力量。
- 染色的幻灯片 5-10 分钟，不要让幻灯片变得干燥。添加所需的更多污点。
- 轻轻地清洗幻灯片删除多余的污点。
- 让室温干燥的幻灯片。
- 使用油浸物镜，观察幻灯片使用显微镜 (图 1)。
图 1。在显微镜下一张幻灯片。
Results
真菌显示厚厚的丝状菌菌丝 (图 2)。放线菌显示薄、 丝状菌的菌丝。细菌显示小球菌或支撑杆的形状。他们经常发现在一丛丛，土壤颗粒或衬砌真菌菌丝。土壤颗粒显示不规则，黑暗形状 (图 3)。
图 2。使用 100 X 物镜的接触幻灯片图像。
照片礼貌的 W.H.富勒。
图 3。使用 100 X 物镜的接触幻灯片图像。
照片礼貌的 W.H.富勒。
Application and Summary
接触的幻灯片测定，也被称为埋幻灯片，是一种简单的技术，利用定性观察土壤生物区系。这种测定方法定性显示真菌菌丝，细丝放线菌、 细菌和土壤颗粒之间的相互作用。个人或行业可以采用这种测定方法收集知识关于特定土壤健康的农业，问候，园艺、 堆肥、 教学、 研究。然而，这种技术不量化土壤微型生物，因为它仅包含一个较大的异构环境小画像。
土壤生物关系可以遵守进行接触幻灯片化验和查看结果通过 100 X 油浸显微镜 （图2和图3）。简单性和易用性表演这种测定方法使它成为一个伟大的起始技术受到了微生物学和第一次可能通过显微镜观察微生物的那些。
References
- Pepper, I. L., & Gerba, C P. 'Contact Slide Assay.' Environmental Microbiology A Laboratory Manual. 2nd ed. Elsevier 19-25 (2004).
- Pepper, I. L., Gerba, C. P., & Gentry, T. J. 'Earth Environments.' Environmental Microbiology. 3rd ed. Elsevier 59-88 (2014).
- Rossi, G., Ricardo, S., Gesue, G., Stanganelli, M., and Want, T.K. Direct Microscopic and bacteriological investigations of the soil. Soil Science. 41, 52 – 66 (1936).
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