Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

Araştırmamız temel olarak MSC'den türetilmiş hücre dışı araçların göbek kordonlarının tek hücre düzeyinde yara iyileşmesi üzerindeki etkisine odaklanmıştır. Ve çalışmanın bu bölümünün temel amacı, deneylerimiz için çok önemli bir temel olan kararlı, akut, tam kalınlıkta bir yaralanma kütle modeli oluşturmaktır. Yara iyileşme süreci, çeşitli hücrelerin zaman ve mekanda senkronize etkileşimini içeren son derece karmaşıktır.

Tek hücre ve dizileme, hücresel yaratıcılığı incelemenin ve kemik iyileşmesi sırasında hücre farklılaşmasını ve gelişimsel yörüngeleri tahmin etmenin en son yöntemi haline geldi. Ve çarpık dokulardan yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonun elde edilmesi bu araştırmanın anahtarıdır. Protokolümüz, yaralanma fareleri modelinde daha kararlı, tam kalınlıkta bir model oluşturur, saç döngüsü ve yan gerginlik sorunlarından kaçınır ve fare çizilmesinin ve doğal aktivitenin sonuçları etkilemesini önler.

Ek olarak, verimli doku ayrışması için karışık enzimleri kullanıyoruz ve yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonlar elde ediyoruz. Başlamak için, fareleri kontrol ve deney gruplarına rastgele atayın ve onları belirli bir patojen içermeyen hayvan tesisinde barındırın. Farelere standart yiyeceğe ve otoklav musluk suyuna sınırsız erişim sağlayın.

Fareyi yüzüstü pozisyonda nazikçe sabitleyin ve karnı alkollü pamuklu çubuklarla temizleyin. Fareyi uyuşturduktan sonra sırtına tüy dökücü krem sürün ve iki dakika bekleyin. Cilde zarar vermemek için kremi nemli gazlı bezle nazikçe silin.

Ardından cildi kurutulmuş steril gazlı bezle silin. Otoklav cilt biyopsi zımbasını, makası, forsepsleri ve taze cerrahi bezi steril bir platform üzerine yerleştirin. Anestezi uygulanmış fareyi yüzüstü pozisyona getirin ve sırt derisini üç alternatif Betadin ve% 70 alkol ile dezenfekte edin.

Damgayı mürekkebe batırın ve farenin sırtının üst orta kısmına bir işaret koyun. Cerrahi makas kullanarak, sırtın tüm cilt tabakasını dairesel işaret boyunca dikkatlice çıkarın ve kas tabakasını tamamen açığa çıkarın. Yarayı pansuman yapmadan açık bırakın ve doğal olarak bir kabuk oluşturmasına izin verin.

Yaranın yakınında deri altına 0.1 mililitre% 10 buprenorfin hidroklorür uygulayın. Fareyi yüzüstü pozisyonda kendi kafesine geri yerleştirin. Anesteziyi takiben, yara boyutunu ölçmek için her iki günde bir fare yarasını gözlemleyin ve fotoğraflayın.

Deri altına, tedavi grubundan anestezi uygulanmış bir farenin kesi bölgesi etrafına 100 mikrogram insan göbek kordonu mezenkimal kök hücre türevi eksozom enjekte edin. Kontrol grubu faresinin insizyon bölgesine 200 mikrolitre PBS enjekte edin. Yaraların bir farenin her iki tarafına yerleştirilmesi, fare derisi elastikiyeti nedeniyle yara alanında gözle görülür farklılıklara neden oldu.

İnsan göbek kordonu mezenkimal kök hücre türevi eksozom tedavi grubu, kontrol grubuna kıyasla daha hızlı iyileşme gösterdi. Tam iyileşme, damga modelinde dikişli metal halka grubuna göre daha hızlı gerçekleşti.