Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

私たちの研究は主に、MSC由来細胞外ビヒクルの臍帯が単一細胞レベルでの創傷治癒に与える影響に焦点を当てていました。そして、この研究のこの部分の主な目的は、私たちの実験の重要な基盤である、安定した急性の全層損傷質量モデルを確立することです。創傷治癒プロセスは非常に複雑で、時間と空間におけるさまざまな細胞の同期した相互作用が関与します。

シングルセルとシーケンシングは、細胞の創意工夫を研究し、骨治癒中の細胞分化と発生過程を予測する最新の方法となっています。そして、歪んだ組織から高品質の単一細胞懸濁液を得ることが、この研究の鍵です。私たちのプロトコルは、傷害マウスモデルでより安定した全層を作成し、ヘアサイクルやサイドテンションの問題を回避し、マウスの引っ掻き傷や自然な活動が結果に影響を与えるのを防ぎます。

さらに、混合酵素を使用して効率的な組織解離を行い、高品質の単一細胞懸濁液を生み出します。まず、マウスを対照群と実験群にランダムに割り当て、特定の病原体を含まない動物施設に収容します。マウスに標準的な餌とオートクレーブの水道水への無制限のアクセスを提供します。

マウスを腹臥位にそっと固定し、アルコール綿棒で腹部を清掃します。マウスに麻酔をかけた後、背中に脱毛クリームを塗布し、2分間待ちます。クリームは肌を傷つけないようにしっとりとしたガーゼでやさしく拭き取ります。

次に、乾燥した滅菌ガーゼで皮膚を拭きます。オートクレーブ皮膚生検パンチ、はさみ、鉗子、および新鮮な手術用布を滅菌プラットフォームに配置します。麻酔をかけたマウスを腹臥位に置き、ベタジンと70%アルコールの3つの交互の綿棒で背側の皮膚を消毒します。.

スタンプをインクに浸し、マウスの背面の上部中央部分に印を付けます。外科用ハサミを使用して、円形のマークに沿って背中の皮膚層全体を慎重に切除し、筋肉層を完全に露出させます。包帯をせずに傷口を開いたままにして、自然にかさぶたを形成するようにします。

0.1ミリリットルの10%ブプレノルフィン塩酸塩を創傷の近くに皮下投与する。マウスを腹臥位で個々のケージに戻します。麻酔後、2日ごとにマウスの傷を観察および撮影して、創傷のサイズを測定します。

皮下投与では、治療群から麻酔をかけたマウスの切開部位の周囲に 100 マイクログラムのヒト臍帯間葉系幹細胞由来エクソソームを注入します。対照群マウスの切開部位の周囲に200マイクロリットルのPBSを注入します。マウスの両側に傷口を留置すると、マウスの皮膚の弾力性により、創傷面積に顕著な違いが見られました。

ヒト臍帯間葉系幹細胞由来エクソソーム治療群は、対照群と比較してより速い治癒を示した。完全な治癒は、縫合された金属リンググループよりもスタンプモデルでより迅速に起こりました。