Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

ركز بحثنا بشكل أساسي على تأثير الحبل السري للمركبات خارج الخلية المشتقة من MSC على التئام الجروح على مستوى الخلية الواحدة. والهدف الأساسي من هذا الجزء من الدراسة هو إنشاء نموذج كتلة إصابة مستقر وحاد وكامل السماكة ، وهو أساس حاسم لتجاربنا. عملية التئام الجروح معقدة للغاية ، وتتضمن التفاعل المتزامن بين الخلايا المختلفة في الزمان والمكان.

أصبحت الخلية المفردة والتسلسل أحدث طريقة لدراسة البراعة الخلوية والتنبؤ بتمايز الخلايا ومسارات النمو أثناء التئام العظام. والحصول على تعليق خلية واحدة عالي الجودة من الأنسجة المشوهة هو مفتاح هذا البحث. يخلق بروتوكولنا سمكا أكثر استقرارا وكاملا في نموذج الفئران المصابة ، ويتجنب دورة الشعر ومشاكل التوتر الجانبي ، ويمنع خدش الفأر والنشاط الطبيعي من التأثير على النتائج.

بالإضافة إلى ذلك ، نستخدم الإنزيمات المختلطة لتفكك الأنسجة بكفاءة ، مما ينتج عنه معلقات خلية واحدة عالية الجودة. للبدء ، قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي لمجموعات التحكم والتجربة وإيوائها في منشأة حيوانية محددة خالية من مسببات الأمراض. تزويد الفئران بوصول غير مقيد إلى الطعام القياسي وماء الصنبور الأوتوكلاف.

قم بتأمين الماوس برفق في وضع الانبطاح وتنظيف البطن بمسحات قطنية كحولية. بعد تخدير الماوس ، ضعي كريم إزالة الشعر على الظهر وانتظري لمدة دقيقتين. امسحي الكريم برفق بشاش رطب لتجنب إتلاف الجلد.

ثم امسح الجلد بشاش معقم مجفف. رتب لكمة خزعة الجلد بالأوتوكلاف والمقص والملقط والقماش الجراحي الجديد على منصة معقمة. ضع الفأر المخدر في وضع الانبطاح وقم بتطهير الجلد الظهري بثلاث مسحات متناوبة من البيتادين و 70٪ كحول.

اغمس الختم في الحبر وقم بوضع علامة على الجزء الأوسط العلوي من ظهر الماوس. باستخدام المقص الجراحي ، قم باستئصال طبقة الجلد الكاملة من الظهر بعناية على طول العلامة الدائرية ، مما يؤدي إلى تعريض طبقة العضلات تماما. اترك الجرح مفتوحا بدون ضمادة ، مما يسمح له بتكوين جرب بشكل طبيعي.

يتناول 0.1 ملليلتر من 10٪ بوبرينورفين هيدروكلوريد تحت الجلد بالقرب من الجرح. ضع الماوس مرة أخرى في قفصه الفردي في وضع الانبطاح. بعد التخدير ، راقب جرح الفأر وقم بتصويره كل يومين لقياس حجم الجرح.

تحت الجلد ، حقن 100 ميكروغرام من الخلايا الجذعية الوسيطة الوسيطة للحبل السري البشري المشتق حول موقع شق الفأر المخدر من مجموعة العلاج. حقن 200 ميكرولتر من PBS حول موقع شق فأر المجموعة الضابطة. أدى وضع الجروح على جانبي الفأر إلى اختلافات ملحوظة في منطقة الجرح بسبب مرونة جلد الفأر.

أظهرت مجموعة العلاج بالإكسوسوم المشتق من الخلايا الجذعية الوسيطة للحبل السري البشري شفاء أسرع مقارنة بالمجموعة الضابطة. حدث الشفاء الكامل بسرعة أكبر في نموذج الطوابع مقارنة بمجموعة الحلقات المعدنية المخيطة.