Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

Наши исследования в основном были сосредоточены на влиянии пуповины внеклеточных транспортных средств, полученных из МСК, на заживление ран на уровне отдельных клеток. И основной целью этой части исследования является создание стабильной, острой модели травмированной массы на всю толщину, которая является важнейшей основой для наших экспериментов. Процесс заживления ран чрезвычайно сложен, он включает в себя синхронное взаимодействие различных клеток во времени и пространстве.

Одиночные клетки и секвенирование стали новейшим методом изучения клеточной изобретательности и прогнозирования дифференцировки клеток и траекторий развития во время заживления костей. И получение высококачественной суспензии одиночных клеток из деформированных тканей является ключом к этому исследованию. Наш протокол создает более стабильную модель мышей с полной толщиной тела, избегая проблем с циклом волос и боковым натяжением, а также предотвращая царапание мышей и естественную активность и влияние на результаты.

Кроме того, мы используем смешанные ферменты для эффективной диссоциации тканей, получая высококачественные суспензии одиночных клеток. Для начала случайным образом распределите мышей по контрольной и экспериментальной группам и разместите их в определенном помещении для животных, свободных от патогенов. Предоставьте мышам неограниченный доступ к стандартному корму и автоклавной воде из-под крана.

Аккуратно закрепите мышь в положении лежа и очистите брюшную полость спиртовыми ватными палочками. Обезболив мышку, нанесите крем для депиляции на спину и подождите две минуты. Аккуратно сотрите крем влажной марлей, чтобы не повредить кожу.

Затем протрите кожу высушенной стерильной марлей. Расположите автоклавный перфоратор для биопсии кожи, ножницы, щипцы и свежую хирургическую салфетку на стерильной платформе. Поместите мышь под наркозом в положение лежа и продезинфицируйте спинную поверхность кожи тремя чередующимися тампонами бетадина и 70% спирта.

Обмакните штамп в чернила и сделайте отметку на верхней, средней части спины мыши. С помощью хирургических ножниц аккуратно иссекают весь слой кожи спины по круговой отметке, обнажая мышечный слой полностью. Оставьте рану открытой без повязки, позволив ей естественным образом образовать струп.

Введите 0,1 миллилитра 10%-ного бупренорфина гидрохлорида подкожно в область раны. Поместите мышь обратно в отдельную корзину в положении лежа. После анестезии осматривайте и фотографируйте рану мыши каждые два дня, чтобы измерить размер раны.

Подкожно введите 100 микрограммов экзосомы, полученной из мезенхимальных стволовых клеток пуповины человека, вокруг места разреза мыши под наркозом из группы лечения. Введите 200 микролитров PBS вокруг места разреза мыши контрольной группы. Наложение ран с обеих сторон мыши привело к заметным различиям в площади раны из-за эластичности кожи мыши.

В группе лечения мезенхимальными стволовыми клетками пуповины человека наблюдалось более быстрое заживление по сравнению с контрольной группой. Полное заживление происходило быстрее в штамповой модели, чем в сшитой металлической кольцевой группе.