Nossa pesquisa se concentrou principalmente no impacto dos cordões umbilicais de veículos extracelulares derivados de MSC na cicatrização de feridas no nível de uma única célula. E o objetivo principal com esta parte do estudo é estabelecer um modelo de massa de lesão estável, aguda e de espessura total, que é uma base crucial para nossos experimentos. O processo de cicatrização de feridas é extremamente complexo, envolvendo a interação sincronizada de várias células no tempo e no espaço.
A célula única e o sequenciamento tornaram-se o método mais recente de estudar a engenhosidade celular e prever a diferenciação celular e as trajetórias de desenvolvimento durante a cicatrização óssea. E obter a suspensão unicelular de alta qualidade a partir de tecidos distorcidos é a chave para esta pesquisa. Nosso protocolo cria um modelo de camundongos mais estável e de espessura total lesionado, evitando problemas de ciclo capilar e tensão lateral, e evita que arranhões no mouse e a atividade natural afetem os resultados.
Além disso, usamos as enzimas mistas para dissociação eficiente do tecido, produzindo suspensões de células únicas de alta qualidade. Para começar, atribua aleatoriamente camundongos a grupos de controle e experimentais e os aloje em uma instalação específica para animais livres de patógenos. Forneça aos ratos acesso irrestrito a alimentos padrão e água da torneira em autoclave.
Prenda suavemente o mouse em uma posição de bruços e limpe o abdômen com cotonetes com álcool. Depois de anestesiar o mouse, aplique o creme depilatório nas costas e aguarde dois minutos. Limpe suavemente o creme com gaze úmida para evitar danificar a pele.
Em seguida, limpe a pele com gaze estéril seca. Organize o punção de biópsia de pele em autoclave, tesoura, fórceps e pano cirúrgico fresco em uma plataforma estéril. Coloque o camundongo anestesiado em decúbito ventral e desinfete a pele dorsal com três cotonetes alternados de Betadine e álcool 70%.
Mergulhe o carimbo na tinta e faça uma marca na parte central superior das costas do mouse. Usando uma tesoura cirúrgica, excise cuidadosamente toda a camada de pele das costas ao longo da marca circular, expondo completamente a camada muscular. Deixe a ferida aberta sem curativo, permitindo que ela forme naturalmente uma crosta.
Administre 0,1 mililitros de cloridrato de buprenorfina a 10% por via subcutânea perto da ferida. Coloque o mouse de volta em sua gaiola individual em uma posição de bruços. Após a anestesia, observe e fotografe a ferida do camundongo a cada dois dias para medir o tamanho da ferida.
Por via subcutânea, injete 100 microgramas de exossomo derivado de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano ao redor do local da incisão de um camundongo anestesiado do grupo de tratamento. Injete 200 microlitros de PBS ao redor do local da incisão do camundongo do grupo controle. A colocação de feridas em ambos os lados de um camundongo resultou em diferenças perceptíveis na área da ferida devido à elasticidade da pele do camundongo.
O grupo de tratamento com exossomos derivados de células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano exibiu cicatrização mais rápida em comparação com o grupo controle. A cicatrização completa ocorreu mais rapidamente no modelo de carimbo do que no grupo de anéis de metal suturado.
