養殖および土壌試料からの細菌を列挙します。

ソース: ドクターペッパー イアン博士チャールズ Gerba - アリゾナ大学所
示す著者: ブラッドリー ・ シュミッツ、ルイサ ・ Ikner

表層土壌無機・有機粒子二次集合体を形成するために一緒に結合する異種混合物であります。内および凝集体間が空隙または視覚的に両方を含む毛穴空気や水します。これらの条件はすべて土に細菌、通常 100 万土のグラム当たりの広大な人口が含まれているので、細菌のための理想的な生態系を作成します。

細菌は原核生物と呼ばれる微生物の最も簡単です。この原核生物のグループ内で放線菌として知られている糸状微生物があります。放線菌は、細菌では実際が、よくフォーム菌糸に一緒にひもでつながれる複数のセルから成る糸状構造の為、細菌の分類内でユニークなグループであると考えられています。この実験は、希釈、めっき中に放線菌コロニーのため選択グリセロール ケース メディアを使用します。通常、放線菌、細菌の総人口の約 10% であります。細菌や放線菌が地球上のあらゆる環境であるが、これら土壌微生物の多様性と豊富な比類のないです。これらの微生物は、人間の生活に影響を与える人々 は何を食べる、飲む、呼吸、またはタッチも欠かせない。さらに、人々 に感染でき、病気を引き起こす細菌の種がある、癒しの人々 の自然な製品を作り出すことができる細菌があります。放線菌はストレプトマイシンなどの抗生物質を生産するため特に重要です。細菌は、栄養循環、植物成長の有機汚染物質の分解に重要です。

細菌は、生理と代謝多様なために土中では、一部で見つけることが種の数の面で非常に多様。細菌は、従属栄養、食品とエネルギーのためのブドウ糖などの有機化合物を利用する意味や栄養、食品とエネルギーのための硫黄などの無機化合物を利用する意味をすることができます。有酸素、呼吸のための酸素を利用することができます。 または嫌気性、酸素、硝酸や硫酸、レスピールするなどの形態を組み合わせて利用します。いくつかの細菌は酸素を使用することができます酸素の形態を組み合わせてや通性嫌気性菌として知られています。

土壌試料中の細菌の数を列挙する方法の 1 つは、希釈やめっき方法論を利用します。この方法論は、細菌の増殖、プロセスと呼ばれる、「培養技術」のための媒体として寒天を利用して土壌内で見つかった細菌の広大な数のため土壌の小さなサンプルは直列ペトリ プレート内の寒天にメッキされている前に、水で希釈しました。通常、少量の希釈土壌懸濁液の 0.1 を 1 mL に含まれている土は「広がる」寒天プレートの表面。プレートには、溶融時ホット、固体ですがクールである寒天が含まれています。寒天、に加えてペプトン酵母や R₂A として市販製品などの栄養素は、従属栄養細菌の増殖は、中長期に追加されます。

希釈・ メッキは、土壌細菌の列挙体の安価な比較的簡単な技術です。しかし、手法にいくつかの欠点があります。いくつかの一般的なエラーと希釈とめっきの試金に関連付けられている前提条件は、次のとおり: 植民地を生じさせるすべての単一の土壌のバクテリアが、現実の植民地真人為的カウントの過小評価の結果、細胞の塊から発生する可能性と見なされます。土のシリアル希釈時に土壌粒子 (底に落下) を解決することはので、土壌の真の約数は次の希釈に渡されません。実行可能な多くの土壌微生物は、非培養可能です。合理的な時間枠 (1-2 週間) 内で目に見えるコロニーいない遅い成長する細菌があります。

また、嫌気性菌は、好気性の条件の下では成長しない、成長することは細菌の培地に添加栄養素によって対象として選択されます。したがって栄養硫黄酸化剤の硫黄を選択しながら、R₂A は従属栄養細菌の選択します。全体的にみて、それはすべて土壌細菌の 0.1 を 1% だけを培養することができることが推定されます。したがって、希釈のめっき土壌細菌培養細菌のみアカウントし、1 ~ 2 桁の真の実行可能な土人口を過小評価します。土壌の希釈とめっきに起因する従属栄養細菌のコロニーの例は図 1に示します。肉眼に目に見えるようにするコロニーの約 100 万の細菌細胞が必要であるに注意してください。

この実験は、希釈や拡散めっき方法論の土壌サンプル中の細菌の数を列挙するために使用を示します。具体的には、2 つのメディアが使用される: すべての細菌や放線菌の選択したその他のもの。寒天版の細菌のコロニーが育てた、一度ストリーク プレート法による選択したコロニーの純粋培養を分離します。このような純粋培養し、さらに解析でき特定の特性や機能の特徴します。

図 1。R₂寒天プレートに従属植民地します。多様な形態を持つ離散コロニーの数は、土壌から希釈とめっき後発生します。学術出版物によって与えられる使用するためのアクセス許可。

1. 土壌の希釈液の調製

1. 手順を開始するには、土壌サンプルの 10 g を量り、95 mL の脱イオン水を加えます。よく、懸濁液を振るし、"A"としてラベルを付けます。
2. 土が落ち着く前に滅菌ピペットで懸濁液の 1 mL を削除し、容量 9 mL の脱イオン水空白にそれを転送します。渦徹底的と"B"とラベル。
3. この希釈手順 3 回、毎回前懸濁液 1 mL、9 mL の脱イオン水空。C、D、および E をチューブ、順番にこれらをラベルします。これは、結果 10^-1 10^-5グラムの 1 mL あたり土 ~ のシリアル希薄、

2 細菌培養用、拡散板

1. 細菌のコロニーを成長し、C、D、および e. 渦のサンプル C として、D と E、および各プレート上に 0.1 mL のピペットなど 3 つの事前に用意されたペプトン酵母寒天とラベルを取る。これは 10 の要因によってさらに、希釈価値を高める (C 10^-3D = 10^-4E を = = 10^-5)。
2. 次に、ガラス スプレッダーをエタノールに浸し。数秒を発火させ、エタノールを燃焼火炎の拡散機を配置します。これは、スプレッダーを滅菌します。
3. 炎が消滅するまでは、最初のプレートの上散布を保持します。蓋を閉じるを保持しているプレートを簡単に開けます。接種から寒天にスプレッダーをタッチ (接種文化を開始するために使用するセルの =) クール、そして自由液体の痕跡が消えるまで寒天の表面を菌のドロップを普及します。プレート蓋を取り付けます。
4. 再炎の拡散機と次のプレートは、迅速に作業を繰り返して浮遊生物、寒天培地を汚染しないように
5. 1 週間室温で細菌の版を孵化させなさい。寒天培地の表面に落下からの凝縮から水分の低下を防ぐために潜伏中にプレートが反転されていることを確認します。

放線菌のため 3. 拡散板

1. 放線菌の成長、3 つの事前に用意されたグリセロール-カゼイン プレートを取ると前述のテクニックとして B、C、および D. を使用してそれらのラベル、拡散板 B、C、および D. 懸濁液から 0.1 mL放線菌は、通常細菌の人口の 1/10^thとしているため、低い希釈 (B = 10^-2C = 10^-3D = 10^-4)。
2. 2 週間室温 (反転) 放線菌プレートを孵化させなさい。

4. 細菌や放線菌数

1. インキュベーション後、慎重に、すべての細菌の版を調べるし、コロニーのサイズと形状の違いに注意してください。寒天上に成長した、細菌は無色透明からピンクや黄色、明るいオレンジ色に至るまでぬるぬるしたコロニーを生成します。対照的に、放線菌のコロニーは、しっかりした、革のようなされて、他の細菌のコロニーが中傷する圧力の下で入ります。これにより滅菌ループとの接触によって区別される植民地です。
2. カウントし、放線菌を含む細菌のコロニーの数を記録します。プレート プレートごと 30 200 コロニーとカウントされます。

5. 純粋培養の分離

1. 個々 の細菌のコロニーをプレートのいずれかから選択します。土に特に興味がある場合より多くの植民地を選択できます。それは、よく分離されている純粋な植民地を持っている傾向がある高希釈プレートを使用します。近隣植民地から十分に分離、互いから明瞭な形態学的に見えるコロニーだけを選択します。
2. ループをアルコールに浸漬し、それを炎で滅菌します。すぐに、関心のペトリ皿を開き、それを冷却する寒天培地の裸地にループをタッチします。少量のループに関心の植民地を削除します。
3. 連勝数センチを作る新鮮なペプトン酵母プレートを取って 1 つの側面に長い。消毒し、再度、クールな最初のパスでのみ初期の連勝を越える連勝をします。同様にさらに 2 回繰り返します。この光線「希釈」は、互いから分離されているループのセルに結果します。2 週間室温でインキュベートする暗い部分にプレートを配置します。

乾燥重量ベースで 20% の含水土壌 10 g サンプルは、メッキ技術と希釈による培養細菌を分析します。希釈は、表 1に示すように、行われました。1 mL の溶液 E 適切な媒体に注ぐメッキは、200 のバクテリアのコロニー。

しかし、湿った土の 10 g

そこで

ステップ		希釈
土壌 10 g (重量/体積)	95 mL 生理食塩水 (溶液)	10-1
1 mL の溶液 (ボリューム/ボリューム)	9 mL 生理食塩水 (溶液 B)	10-2
1 mL の溶液 B (ボリューム)	9 mL 生理食塩水 (溶液)	10-3
1 mL の溶液 C (ボリューム)	9 mL 生理食塩水 (溶液)	10-4
1 mL の溶液 D (ボリューム)	9 mL 生理食塩水 (溶液 E)	10-5

表 1: 希釈し、試料のめっき。

希釈の 2 つの基本的なアプリケーションと土壌細菌のめっきがあります。最初のアプリケーションは、特定の土壌内培養の細菌の列挙体です。土壌細菌の数の定量化は、土壌の健康の徴候を与えます。たとえば、10 がある⁶ 10⁸培養細菌土壌 1 g に存在する、これと思われる健全な数字。A 数 10 未満 1 グラムあたり⁶を示します; 低有機物の土壌の栄養素の不足が原因である可能性があります貧しい土壌の健康極端な土壌 pH 値によって課されたストレス耐性誘導機構 (pH < 5 または > 8);や毒性が有機又は無機の汚染物質によって課されます。

2 番目の主要なアプリケーションの可視化と細菌の純粋培養の分離であります。純粋培養は、特徴とし、医療や環境のアプリケーションに有用である可能性があります特定の特性のために評価します。例: 抗生物質の生産;有毒な有機物の分解または特定根粒菌豆や豆などのマメ科作物の窒素固定に便利。