Stress léger chronique imprévisible chez les rats basé sur la médecine mongole

Ce protocole décrit un modèle de stress léger chronique imprévisible (CUMS) pour la dépression basé sur la théorie médicale mongole, ainsi que des méthodes de validation des tests comportementaux.

La dépression est un trouble affectif répandu et constitue l’une des principales causes d’invalidité dans le monde. Les limites des interventions pharmacologiques actuelles contribuent au lourd fardeau sanitaire attribué à cette maladie. Il est urgent de mieux comprendre les mécanismes sous-jacents de la dépression, ce qui rend les modèles précliniques à potentiel translationnel très précieux. La médecine mongole, un sous-ensemble de la médecine traditionnelle, postule que l’apparition de la maladie est étroitement liée à l’équilibre du vent, de la bile et des mucosités. Dans cette étude, nous introduisons un protocole pour la méthode du stress léger chronique imprévisible (CUMS) chez le rat. Dans ce cadre, les rats sont soumis à une série de facteurs de stress fluctuants et légers pour induire un phénotype semblable à celui de la dépression, imitant la pathogenèse de la dépression humaine. Les tests comportementaux utilisés dans ce protocole comprennent le test de préférence de saccharose (SPT), indiquant l’anhédonie, un symptôme central de la dépression ; le test en champ ouvert (OFT), qui mesure les niveaux d’anxiété ; et le test du labyrinthe aquatique de Morris (MWM), qui évalue la mémoire spatiale et les capacités d’apprentissage. La méthode CUMS démontre la capacité d’induire une anhédonie et de provoquer des déficits comportementaux à long terme. De plus, ce protocole est plus aligné sur la théorie médicale mongole que d’autres modèles animaux conçus pour susciter un comportement semblable à la dépression. Le développement de ce modèle animal et les recherches ultérieures fournissent une base solide pour de futures études innovantes dans le domaine de la médecine mongole.

Le trouble dépressif majeur (TDM) est une maladie mentale répandue, se classant au troisième rang des causes d’invalidité dans le monde et affectant plus de 300 millions de personnes^1,2,3. On estime notamment qu’au moins la moitié des personnes touchées ne reçoivent pas de traitement adéquat⁴. Compte tenu de cette lacune, les modèles animaux constituent un outil crucial pour étudier l’étiologie de la dépression. À ce jour, il existe plus de 20 modèles animaux différents pour la dépression⁵. Parmi ceux-ci, le modèle de stress léger imprévisible chronique (CUMS), affiné par Paul Winer en 1987, est le plus fréquemment utilisé⁶. Le modèle CUMS part du principe que l’exposition des rongeurs à un large éventail de facteurs de stress socio-environnementaux entraîne des symptômes tels que l’anxiété, la tension et la dépression. La méthodologie consiste à exposer les animaux à divers facteurs de stress légers pendant plusieurs semaines, aboutissant à une série de modifications comportementales, notamment l’anhédonie et les comportements dépressifs^7,8. Ces changements s’accompagnent de changements dans les profils endocriniens et de neurotransmetteurs, tels qu’une réduction de la 5-HT^9,10. Ces résultats reflètent étroitement ceux observés chez les humains diagnostiqués avec un TDM, validant ainsi l’utilité du modèle. Le modèle CUMS est particulièrement apprécié pour son efficacité dans l’évaluation des antidépresseurs, manifestant des niveaux élevés de validité superficielle, structurelle et prédictive^11,12. Contrairement à d’autres modèles, le CUMS est sensible aux effets de l’administration chronique d’antidépresseurs monoaminergiques. Par exemple, il a été démontré que les inhibiteurs sélectifs de la recapture de la sérotonine (ISRS) tels que le citalopram, la paroxétine et la fluoxétine préviennent et inversent l’anhédonie dans des conditions de stress chronique^12,13. De plus, de nouveaux antidépresseurs à action rapide, tels que la kétamine, ont également démontré leur efficacité dans ce modèle^14,15. En revanche, d’autres tests comme le test de nage forcée (FST) et le test de suspension de la queue (TST) sont moins fiables pour modéliser les changements de comportement à long terme, reflétant souvent des adaptations au stress aigu plutôt que des symptômes persistants de dépression¹⁶. Ces caractéristiques soulignent la validité robuste du modèle CUMS dans la recherche sur la dépression. L’une des caractéristiques les plus saillantes du modèle CUMS, reconnu pour sa grande fiabilité dans les études classiques, est l’anhédonie, c’est-à-dire l’incapacité d’éprouver du plaisir ou de l’intérêt pour les activités quotidiennes^17,18. Ce phénomène est couramment évalué à l’aide de tests de préférence pour le saccharose, et il a été démontré que de nombreux antidépresseurs inversent la réduction de la consommation de saccharose. Plusieurs autres paramètres sont également couramment utilisés dans la littérature CUMS, y compris le test en champ ouvert (OFT), qui évalue le comportement moteur volontaire, les tendances exploratoires et la tension, évaluant ainsi la gravité de la dépression¹⁹. D’autres tests tels que le labyrinthe élevé plus (EPM) évaluent les comportements anxiogènes, le test du labyrinthe aquatique Morris (MWM) examine le fonctionnement cognitif²⁰, et le TSF évalue la susceptibilité aux émotions négatives et au désespoir comportemental²⁰. De plus, la majorité des facteurs de stress qui affectent les humains sont de nature sociale. Les personnes ayant des relations sociales sous-optimales, caractérisées par des activités sociales, des réseaux et un soutien limités, courent un risque accru de contracter diverses maladies^21,22. Cela est également pertinent dans le cas des rongeurs, qui sont des animaux sociaux vivant en groupe. Par exemple, les rats qui sont logés en isolement présentent des caractéristiques de ce qu’on appelle le syndrome d’isolement, qui induit un stress social et accélère l’apparition de la dépression²³.

La médecine mongole, une branche importante de la médecine chinoise, postule que l’apparition de la maladie est une interaction complexe entre des facteurs intrinsèques et externes. Ces facteurs externes, appelés les quatre conditions auxiliaires, englobent le changement climatique, l’alimentation, le mode de vie et les événements soudains tels que les infections, les incidents surprenants et les troubles psychologiques. Le processus de la maladie est conceptualisé comme une interaction continue entre trois éléments, appelés les trois types d’homors, et les sept constituants corporels, de concert avec les^{quatre conditions} auxiliaires. La médecine mongole soutient que le corps humain fonctionne comme une entité intégrée, maintenue par un équilibre relatif entre les trois homors. Une perturbation de cet équilibre est considérée comme un précurseur de la maladie²⁴. Étant donné le rôle central de l’expérimentation animale dans le rapprochement entre la médecine traditionnelle et la médecine moderne, il est crucial de développer des modèles animaux pertinents pour la recherche dans le domaine de la médecine mongole. En conséquence, nous avons utilisé une méthodologie d’isolement de 28 jours couplée à CUMS pour simuler ces facteurs de stress physiologiques et psychologiques. Nous avons sélectionné neuf facteurs de stress imprévisibles spécifiques et avons cherché à étayer cette méthode de modélisation à travers la théorie des trois homors de la médecine mongole. L’établissement d’un modèle animal robuste est fondamental pour faire progresser la recherche fondamentale en médecine mongole et contribuera de manière significative à ses études fondamentales.

Les protocoles expérimentaux ont reçu l’approbation du Comité d’éthique des soins de l’expérimentation animale de l’Université de médecine de Mongolie intérieure (YKD202301172) et ont adhéré aux directives des National Institutes of Health en matière de soins et d’éthique des animaux. Le numéro de licence de notre centre animalier est le NO.110324230102364187. Vingt-quatre rats Sprague-Dawley mâles (SD), âgés de 8 semaines chacun (200 g ± 20 g), ont été acquis et logés dans un environnement contrôlé à une température de 22 °C ± 2 °C et à un taux d’humidité de 55 % ± 15 %. Nourrissez les rats avec un régime d’entretien pour rongeurs et de l’eau pure avec des épis de maïs pour la litière. Les rats ont été soumis à un cycle lumière/obscurité de 12 h/12 h pendant 1 semaine avant l’expérimentation.

1. Mise en place du modèle de rat CUMS

1. Groupement
   1. Divisez les 24 rats au hasard en 2 groupes : le groupe témoin (CON), qui ne sera pas exposé à l’isolement ou au stress, et le groupe modèle (MOD). Chaque groupe contient 12 rats.
   2. Hébergez les rats dans des cages standard de 55 cm x 40 cm x 20 cm, avec 6 rats par cage. Conservez l’affectation de la cage tout au long de la période d’acclimatation, sauf indication contraire.
   3. Remplissez chaque cage d’élevage avec de la litière fraîche et remplacez-la deux fois par semaine.
   4. Effectuez une période d’acclimatation de 1 semaine. Laissez les rats avoir un accès illimité à la nourriture et à l’eau, sauf pendant l’application du stresseur CUMS. Maintenez un environnement constant avec une température de 22°C ± 2°C, une humidité de 55% ± 15% et un cycle lumière/obscurité de 12 h/12 h de 08h00 à 20h00, sauf indication contraire.
   5. Avant de commencer l’expérience, manipulez les rats quotidiennement pour les acclimater au chercheur et minimiser le stress supplémentaire pendant la phase expérimentale.
2. Isolement avec stress léger chronique imprévisible
   1. Placez simultanément les groupes MOD et CON dans des pièces séparées. Hébergez les rats du groupe MOD individuellement, tout en gardant les rats du groupe CON ensemble. Maintenez toutes les autres conditions constantes.
   2. Mettre en œuvre un régime de stresseur de 28 jours²⁵. Pour prévenir l’accoutumance et assurer l’imprévisibilité des facteurs de stress, administrez un facteur de stress aléatoire par jour, en évitant d’utiliser le même facteur de stress pendant des jours consécutifs.
   3. Appliquez au hasard l’un des neuf facteurs de stress suivants ^26,27 à des jours différents : privation d’eau²⁴ h, privation de nourriture 24 h, rembourrage humide, inclinaison de la cage, inversion du cycle lumière/obscurité, exposition au froid à 4 °C, exposition à la chaleur à 45 °C, serrage de la queue pendant 1 min ou agitation pendant 15 min à 160 tr/min. La conception spécifique est décrite dans le tableau 1.
   4. Pendant l’application du facteur de stress, limitez l’accès à la nourriture et à l’eau au groupe MOD jusqu’à ce que le stress soit terminé, sauf pendant l’inversion du cycle lumière/obscurité. Le groupe CON n’était pas tenu de restreindre l’eau et l’alimentation.
3. Méthodes de stress
   1. Amorcez l’expérience en appliquant des stimuli de dépression en conjonction avec un isolement de 28 jours à tous les rats, à l’exception du groupe témoin. Hébergez ces rats dans des cages individuelles. Voir le tableau 2 pour les affections liées aux stimuli de la dépression.
   2. Pour effectuer la méthode de serrage de la queue, fixez la queue d’un rat du groupe MOD en serrant la queue avec un trombone standard à une distance de 1 à 2 cm de la racine de la queue du rat. Mesurez le temps de serrage pendant une durée de 1 min (n = 12).
   3. Dans la méthode de privation d’eau, retenez l’eau d’un rat du groupe MOD en retirant sa bouteille d’eau et enregistrez-la pendant 24 heures.
      REMARQUE : L’heure du début de la privation d’eau a été enregistrée afin que l’heure de fin puisse être calculée avec précision ; Le comportement des rats au cours de cette période a été observé, y compris l’activité, l’appétit et l’état mental.
   4. Dans la méthode de privation de nourriture, retenir la nourriture d’un rat du groupe MOD et enregistrer pendant 24 heures.
      REMARQUE : Enregistrez l’heure à laquelle la privation de nourriture commence afin que l’heure de fin puisse être calculée avec précision ; s’assurer que les rats sont correctement hydratés pendant cette période ; et observer le comportement des rats pendant cette période, y compris l’activité et l’état mental, etc.
   5. Pour une stimulation par le froid à 4 °C, placez un rat du groupe MOD dans un seau d’eau froide et enregistrez pendant 5 min. Assurez-vous que la température de l’eau reste constante tout au long du test. À la fin de l’expérience, séchez le rat à l’aide d’un souffleur et remettez-le dans sa cage d’origine.
      REMARQUE : Maintenez la température de l’eau froide à 4 °C à l’aide d’un thermomètre et de glaçons pour réguler la température de l’eau lorsqu’elle augmente. L’eau doit être changée régulièrement pour s’assurer que la qualité de l’eau est propre et que la température est constante. Lors de la natation, tous les membres et troncs des rats doivent être immergés dans de l’eau froide à l’exception de la tête. La profondeur de l’eau doit être supérieure à la longueur du corps du rat pour éviter que le rat ne saute hors de l’eau en raison du contact avec le fond du seau.
   6. Pour administrer un stress thermique de 45 °C, placez un rat du groupe MOD dans un incubateur et enregistrez-le pendant 5 minutes, en veillant à ce que la température reste stable tout au long de l’essai.
   7. Dans l’inversion du cycle lumière-obscurité, enveloppez la cage dans un tissu noir pendant 1 h pour simuler l’obscurité diurne. Par la suite, illuminez la cage pendant 12 h pendant la nuit pour imiter la lumière du jour. Notez le comportement du rat, sa consommation de nourriture et d’eau et ses habitudes de sommeil pendant 24 heures.
   8. Pour l’expérience de rembourrage humide, introduire 200 mL d’eau dans une cage contenant 100 g de rembourrage. Hébergez un rat du groupe MOD dans la cage humide et enregistrez le comportement des rats soumis au stress de la litière humide, y compris l’activité, l’appétit, la consommation d’eau, etc. Observez s’il n’y a pas de comportements anormaux ou de réactions inconfortables, comme l’état de la peau et des poils des rats, qui peuvent être causés par le rembourrage humide, et enregistrez-les à temps pour une analyse ultérieure pendant 24 heures. Après le test, séchez le rat à l’aide d’un souffleur et remettez-le dans une cage avec des copeaux de bois frais.
   9. Dans la méthode de l’inclinaison de la cage, placez un rat du groupe MOD dans une cage inclinée à un angle de 45° contre un mur et enregistrez pendant 24 h. Utilisez la structure du cadre de la cage pour ajuster l’angle et fixer la cage en place.
      REMARQUE : Calculez le temps du début à la fin et observez le comportement des rats pendant la période d’inclinaison de la cage, y compris l’activité, l’appétit et l’état mental, et assurez-vous que l’angle de la cage inclinée est correctement réglé et reste stable pour assurer la précision et la reproductibilité de l’expérience.
   10. Pour une agitation à grande vitesse, placez un rat du groupe MOD dans un agitateur mécanique réglé à 160 tr/min et enregistrez le rat pendant 15 min. Des méthodes de test comportemental sont ensuite utilisées pour évaluer la réussite de l’établissement du modèle.
   11. Après avoir appliqué des facteurs de stress, déplacez les cages de groupe MOD de la salle CUMS vers la salle d’hébergement. Pendant la période d’exposition au stress de 4 semaines, maintenez le groupe CON dans sa cage domestique située dans la pièce de logement.
4. Précautions pendant les expériences
   1. Transférez les cages du groupe MOD dans la salle d’hébergement générale après avoir appliqué le facteur de stress dans la salle CUMS.
   2. Suivi des animaux pendant la modélisation CUMS
      1. Lors du serrage de la queue, l’animal est susceptible de se débattre en raison de la stimulation induite. Tout au long de cette période, surveillez en permanence la pince. S’il se déloge, mettez la minuterie en pause, réappliquez la pince, puis reprenez la minuterie pendant 1 min.
      2. N’imposez pas simultanément la privation d’eau et les facteurs de stress de la litière humide.
         REMARQUE : Le fait d’éviter l’imposition simultanée d’un rembourrage humide et d’une privation d’eau aide à maintenir l’intégrité expérimentale, à réduire les variables confusionnelles et à promouvoir le bien-être des animaux.
      3. La température corporelle de l’animal et la température ambiante de l’animal peuvent augmenter la température de l’eau pendant la baignade en eau froide. Par conséquent, ajustez en ajoutant de l’eau glacée ou des glaçons pour maintenir une température de l’eau constante.
      4. Observez les rats à des intervalles de 30 minutes pendant l’application des facteurs de stress, sauf pendant l’inversion diurne. Portez une attention particulière aux signes de détresse inhabituelle, tels que les frissons, la léthargie ou le manque de mouvement. Si de tels symptômes sont observés, en particulier une hypothermie potentielle pendant une baignade à 4 °C en eau froide et une litière humide, retirez immédiatement le rat du facteur de stress.
         REMARQUE : Retirer les animaux de l’étude lorsqu’ils ont des problèmes de santé, tels qu’une infection, un traumatisme grave, des comportements agressifs, une mobilité anormale, etc.,Les conditions de retrait des animaux de l’étude tournent généralement autour de la protection de leur santé et de leur sécurité tout en assurant l’intégrité des résultats de l’expérience.
      5. Effectuez des inspections quotidiennes pour détecter des plaies ou d’autres anomalies physiques ou comportementales chez chaque rat. Si des anomalies sont observées, consultez le vétérinaire du laboratoire pour déterminer si le rat doit être exclu de l’expérience.
      6. Pesez chaque rat tous les 3 jours. Si un animal perd plus de 20 % de son poids corporel de base avant l’alimentation, il doit être exclu de l’expérience.

2. Tests comportementaux

1. Pour commencer, administrez les stimuli de la dépression en conjonction avec l’isolement pendant 28 jours à tous les rats, à l’exception du groupe témoin. Hébergez les rats dans des cages individuelles. Reportez-vous au tableau 2 pour plus de détails sur les conditions des stimuli de dépression.
2. Pour l’essai en plein champ, divisez une boîte noire en 25 sections carrées de surface égale. Installez un système d’analyse de suivi vidéo dans la boîte. Placez le rat dans le carré central et surveillez ses activités horizontales et verticales pendant une durée de 5 min.
   REMARQUE : Les dimensions de la boîte sont de 500 mm x 500 mm x 300 mm. Les données d’activité seront recueillies à l’aide du système de suivi vidéo pour évaluer les comportements liés à l’anxiété chez les rongeurs lorsqu’ils sont exposés à un nouvel environnement.
3. Par la suite, comptez le nombre de carrés parcourus par le rat, à l’aide de toutes les pattes, pour quantifier l’activité horizontale. Comptez les cas de station debout et de toilettage comme indicateurs d’activité verticale. Après chaque test, désinfectez la boîte avec de l’alcool à 75 % afin d’éliminer toute odeur résiduelle de rat pour les tests ultérieurs.
4. Ensuite, l’anhédonie est évaluée par le test de préférence en saccharose. Placez deux bouteilles sur le couvercle de la cage : la bouteille A contient de l’eau pure, tandis que la bouteille B contient une solution de saccharose à 1 %. Permettre l’accès ad libitum aux deux solutions pour le rat. Pesez les bouteilles avant et après la consommation pour calculer les taux de préférence pour le saccharose de 60 minutes les jours 0, 7, 14, 21 et 28. La formule est la suivante :
   Consommation de saccharose = × 100%
5. Pour mesurer la mémoire spatiale et les capacités d’apprentissage, utilisez le test du labyrinthe aquatique de Morris. Divisez la piscine en quatre quadrants, en les numérotant de un à quatre. Placez une plate-forme de repos immergée à 1 cm sous la surface de l’eau dans le troisième quadrant.
6. Introduisez du lait dans la piscine pour augmenter l’opacité de l’eau et maintenir une température de l’eau d’environ 23 °C tout au long de la procédure expérimentale.
7. Placez chaque rat dans différents quadrants du labyrinthe, ce qui leur permet de localiser la plate-forme cachée pendant 120 secondes. Les rats doivent s’appuyer sur la mémoire spatiale et les compétences d’apprentissage pour se souvenir de l’emplacement de la plate-forme. Une fois qu’ils connaissent l’emplacement de la plate-forme, ils peuvent nager directement jusqu’à celle-ci. Enregistrez le temps de latence à l’aide du système de suivi vidéo du labyrinthe d’eau Morris.
8. Placez le rat à un endroit fixe dans la piscine. Si l’objet ne parvient pas à localiser la plate-forme cachée dans un délai de 120 s, enregistrez la latence sur 120 s.
9. Enfin, retirez la plate-forme cachée, remettez le rat dans l’eau et notez le nombre de franchissements de zones sur une période de 120 s.

3. Analyse statistique

1. Pour évaluer les différences significatives dans les paramètres biochimiques, utilisez l’analyse de variance à un facteur (ANOVA) suivie du test post hoc de Duncan. Présentez les données sous forme d’erreur type moyenne ± et considérez une valeur p inférieure à 0,05 comme statistiquement significative.

Résultats des tests comportementaux dans le modèle de dépression chez le rat induit par CUMS
Pour corroborer l’efficacité de la procédure CUMS pour induire des comportements de type dépression, un contrôle de manipulation a été effectué. Des rats Sprague-Dawley mâles (SD) ont été répartis au hasard dans le groupe MOD ou CON pendant une période de 4 semaines, comme indiqué à l’étape 1.2.3. Par la suite, les rats ont été sacrifiés et leur hippocampe a été complètement disséqué pour l’évaluation de la 5-HT, un neurotransmetteur fortement associé à la physiopathologie de la dépression¹⁰, à l’aide d’un test immuno-enzymatique (ELISA)²⁸.

Avant l’induction du CUMS, aucune différence significative n’a été observée entre les groupes testés dans le score OFT, la préférence pour le saccharose ou l’analyse MWM.

Après avoir établi le modèle CUMS, une analyse de variance à un facteur (ANOVA) a révélé un impact significatif de CUMS sur les comportements d’anxiété chez les rats. Plus précisément, dans l’OFT, des différences significatives ont été observées entre les groupes. Le groupe MOD a présenté des scores verticaux et horizontaux inférieurs à ceux du groupe CON (**P < 0,01 ; Figure 1A, B, E), suggérant que la procédure CUMS était efficace pour induire de l’anxiété.

Par la suite, le test de préférence du saccharose (SPT) a été administré pendant 5 jours, comme décrit à l’étape 2.4, pour évaluer si les rats présentaient des signes d’anhédonie après l’exposition au CUMS. Les résultats n’ont indiqué aucune différence significative dans le pourcentage de préférence pour le saccharose entre les groupes au jour 0. Cependant, l’ANOVA à un facteur a révélé une différence significative dans l’apport en saccharose entre les groupes au jour 28. Plus précisément, le pourcentage de préférence pour le saccharose dans le groupe MOD était inférieur à celui du groupe CON (**P < 0,01 ; Figure 1C), confirmant l’efficacité du protocole CUMS pour induire l’anhédonie.

Une analyse de variance à sens unique a révélé que la CUMS avait un impact significatif sur la mémoire spatiale et les capacités d’apprentissage des rats, comme l’a évalué le test MWM. La latence du groupe MOD pour localiser la plate-forme était nettement plus longue que celle du groupe CON (**P < 0,01). En termes de temps de traversée, le groupe MOD a traversé moins de fois que le groupe CON (**P < 0,01 ; Figures 1D, F). Ces résultats confirment l’efficacité du protocole CUMS dans l’induction de troubles de la mémoire chez le rat.

Résultats des niveaux de 5-HT dans l’hippocampe dans le modèle de dépression chez le rat induit par CUMS
L’ANOVA à un facteur sur les niveaux de 5-HT de l’hippocampe a indiqué une différence significative entre les groupes (**P < 0,01). Le groupe MOD a présenté des niveaux de 5-HT hippocampiques réduits par rapport au groupe CON (Figure 2). Ces résultats suggèrent que le protocole CUMS a effectivement diminué les niveaux de 5-HT dans l’hippocampe, un phénomène couramment observé dans la dépression humaine²⁹.

Figure 1 : Effets du modèle de dépression chez le rat induit par CUMS. (A) Scores verticaux du test en champ ouvert (OFT). (B) Scores horizontaux des essais en plein champ. (C) Niveaux de consommation de saccharose (%) aux jours 0 et 28. Anhédonie induite par le CUMS et réduction de la préférence pour le saccharose chez les rats. (D) Temps de latence et numéros de franchissement de zone dans l’essai MWM. Les résultats sont présentés sous forme de SE ± moyenne (n = 12 rats par groupe). **P < 0,01 indique des changements significatifs dans le groupe du modèle (MOD) par rapport au groupe de contrôle (CON) calculés à l’aide de l’analyse de variance à un facteur (ANOVA). (E) Traces OFT pour les rats de chaque groupe. (F) Traces MWM pour chaque groupe de rats. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Figure 2 : Effet sur les niveaux de 5-HT dans le cerveau dans un modèle de dépression induite par CUMS chez le rat. Les rats soumis à 4 semaines de CUMS ont montré une réduction significative des niveaux de 5-HT dans l’hippocampe par rapport au groupe témoin (CON). Les résultats sont présentés sous forme de SE ± moyenne (n = 12 rats par groupe). **P < 0,01 indique des changements significatifs dans le groupe du modèle (MOD) par rapport au groupe CON calculés à l’aide de l’analyse de variance à un facteur (ANOVA). Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Tableau 1 : Horaire de stress chronique imprévisible léger (CUMS). Facteurs de stress et dates d’exécution pour l’induction de la CUMS chez les sujets rats.

Tableau 2. Neuf facteurs de stress avec les quatre conditions auxiliaires et la théorie des trois homors dans la médecine mongole. La relation intrinsèque entre les neuf facteurs de stress, la théorie des trois homors et les quatre conditions auxiliaires dans la médecine mongole.

La dépression est un trouble mental caractérisé par des symptômes tels que la mauvaise humeur, le manque de plaisir et une baisse^d’énergie. Dans le domaine de la recherche sur la dépression, l’établissement d’un modèle animal fiable est crucial pour faire progresser les interventions thérapeutiques. Parmi les différents modèles animaux, le modèle CUMS est particulièrement remarquable pour sa grande fiabilité, sa validité et sa congruence avec les caractéristiques de la dépression humaine³¹. Il est bien adapté pour imiter les effets cumulatifs de facteurs de stress de faible niveau sur une période prolongée dans divers contextes. Dans cette étude, nous avons établi un modèle de dépression induite par le CUMS chez le rat, en utilisant une gamme de facteurs de stress décrits à l’étape 1.2.3 et au tableau 2. Plusieurs aspects du protocole de stress sont essentiels au succès du modèle. Tout d’abord, les rats de tous les groupes MOD doivent être logés individuellement, contrairement à ceux du groupe CON. Deuxièmement, le régime de stress CUMS doit être soigneusement planifié pour maintenir l’imprévisibilité. Plus précisément, les rats devraient être soumis à une sélection aléatoire de sept des neuf facteurs de stress possibles sur une base hebdomadaire. La variabilité et l’imprévisibilité de ces facteurs de stress sont essentielles à l’efficacité du modèle^32,33. Enfin, l’utilisation répétée du même facteur de stress doit être réduite au minimum pour empêcher les rats de s’adapter, ce qui pourrait compromettre l’intégrité des résultats expérimentaux. De plus, les paramètres du facteur de stress ont été conçus pour être ajustables tout au long de l’étude.

Le modèle CUMS offre plusieurs avantages en tant que modèle de dépression. Il s’aligne étroitement sur la pathogenèse de la dépression humaine et représente avec précision la plupart des symptômes cliniques et des mécanismes sous-jacents³⁴. L’une de ses principales forces est qu’il utilise l’anhédonie, ou le manque de plaisir, comme indicateur quantifiable ^6,7. Le modèle tient également compte des divers facteurs qui contribuent à l’apparition de la dépression ^35,36. Il est important de noter que le modèle CUMS est conçu pour une application à long terme, s’étendant sur plusieurs mois. Cette durée est cohérente avec les besoins d’un modèle de dépression et permet d’évaluer les médicaments dans un schéma posologique chronique, ainsi que d’identifier des composés ayant des mécanismes d’action rapides³⁶. En raison de sa nature exhaustive, le modèle CUMS est devenu largement accepté dans la littérature scientifique.

Malgré ces avantages, le modèle CUMS n’est pas sans limites ^5,37. L’un des principaux inconvénients est sa nature gourmande en ressources, nécessitant des investissements importants en environnement, en main-d’œuvre et en temps, ce qui entraîne par conséquent une faible reproductibilité³⁸. Il y a aussi des incohérences dans la littérature concernant la sélection et l’intensité des facteurs de stress, ainsi que l’ordre dans lequel ils sont appliqués³⁸. De telles incohérences rendent difficile la réplication du modèle dans différents laboratoires. De plus, la littérature ne dispose pas d’un calendrier détaillé pour l’application des facteurs de stress, ce qui ajoute une autre couche d’ambiguïté^39,40. Un autre problème découle de la variation des méthodes de combinaison employées dans les différentes études ; Celles-ci manquent souvent de justification explicite, ce qui crée des difficultés dans la réplication des modèles. Les animaux sujets sont très sensibles aux modifications mineures de la conception des facteurs de stress, ce qui contribue également à une faible reproductibilité⁴⁰. De plus, l’utilisation d’un nombre limité de facteurs de stress peut entraîner une accoutumance chez les animaux concernés, ce qui rend la conception des facteurs de stress prévisible. Enfin, les animaux de différents laboratoires montrent des réponses variées aux facteurs de stress, ce qui contribue à la faible reproductibilité entre les études. Dans la littérature existante, les rats Wistar Kyoto (WKY) ont été identifiés comme particulièrement sensibles à un phénotype de type dépression après une exposition au CUMS^25,41. Cela suggère que la variabilité entre les déformations peut affecter de manière significative la susceptibilité aux changements de comportement induits par le stress. De même, le SPT, une mesure clé souvent utilisée pour évaluer l’efficacité des modèles de dépression, présente son propre ensemble de défis. Plus précisément, les rats présentent une variabilité dans leur consommation d’une solution de saccharose à 1%^20,42. Dans des conditions de stress, les animaux sujets au stress et résistants au stress présentent des altérations dans leur consommation de solutions sucrées. Par conséquent, il devient difficile de déterminer la proportion d’animaux d’un lot donné qui sont véritablement résistants au stress ou qui appartiennent à la catégorie opposée. Cette variabilité peut faire en sorte que certains animaux présentent des résultats SPT qui ne reflètent pas fidèlement leur état pathologique.

Pour renforcer la fiabilité du modèle CUMS, nous proposons plusieurs raffinements méthodologiques. Tout d’abord, il est crucial de séparer les animaux du groupe CON de ceux du groupe MOD afin d’atténuer l’impact des stimuli olfactifs, visuels et auditifs, qui peuvent induire un stress chez les animaux^43,44. Deuxièmement, pour minimiser la variabilité, il est conseillé de désigner un ou deux membres du personnel de laboratoire expérimentés pour mener toutes les expériences. Cette approche permet de réduire les erreurs attribuables à des facteurs individuels. De plus, des recherches antérieures ont identifié des animaux de test résistants au stress¹³ ; Par conséquent, il serait prudent de dépister ces groupes soit avant l’expérimentation formelle, soit a posteriori afin de mieux interpréter les résultats. En ce qui concerne le test SPT, qui est une évaluation comportementale basée sur la récompense qui évalue l’anhédonie intrinsèque, il est essentiel de déterminer la concentration optimale de saccharose avant d’initier le protocole CUMS. L’établissement préliminaire d’une préférence basée sur la concentration de saccharose peut améliorer considérablement la sensibilité discriminative du test²⁰. Cependant, il convient de noter que les rats soumis à une privation de nourriture et d’eau 24 heures sur 24 peuvent consommer sans discernement tout liquide disponible en raison d’une soif extrême^35,45. Pour obtenir une mesure plus précise de la préférence pour le saccharose, nous vous recommandons d’évaluer la consommation pendant la phase nocturne du cycle circadien, lorsque les rongeurs sont les plus actifs. Les facteurs de stress appliqués pendant la phase diurne (inactive) pourraient entraîner une privation chronique de sommeil, introduisant ainsi un facteur de stress involontaire^46,47. Enfin, il est impératif de contrôler méticuleusement l’influence des facteurs gérables décrits ci-dessus afin de s’assurer que les données collectées sont aussi fiables que possible.

Les schémas de traitement clinique occidentaux actuels de la dépression s’accompagnent souvent d’effets secondaires toxiques prononcés et d’une forte probabilité de rechute à l’arrêt du médicament. L’étude d’approches thérapeutiques ancrées dans la médecine traditionnelle et l’approfondissement de la pathogenèse de la dépression à travers le prisme de la théorie de la médecine mongole pourraient offrir des perspectives novatrices sur l’étiologie de la maladie. Dans ce contexte, le développement de modèles animaux de dépression qui s’alignent sur les principes de la médecine traditionnelle constitue une étape cruciale dans la recherche en médecine mongole. La sélection des neuf facteurs de stress dans la méthode de modélisation CUMS en culture solitaire est particulièrement remarquable ; il s’inspire de la théorie de la médecine mongole des trois homors et de la relation inhérente entre les quatre conditions auxiliaires et les trois homors. Cette approche présente un haut degré de compatibilité avec les principes uniques de la médecine mongole. Les analyses phénotypiques de la dépression, en conjonction avec des facteurs externes, révèlent des corrélations significatives avec les concepts médicaux mongols du vent et des mucosités (voir tableau 2). Plus précisément, les dysfonctionnements liés au vent se manifestent cliniquement par des symptômes tels que la perte d’énergie, l’insomnie, les oublis, la fatigue et la douleur. Les dysfonctionnements liés aux mucosités, en revanche, entraînent des manifestations cliniques telles que l’absence de réponse, la conscience floue, le pessimisme et la négativité. Ces symptômes s’alignent étroitement avec les symptômes principaux du TDM^48,49. Par conséquent, le modèle CUMS susmentionné sert de modèle pathologique qui simule efficacement les interactions complexes entre les conditions externes et l’équilibre des trois types d’homors, comme le postule la théorie de la médecine mongole, contribuant ainsi à l’apparition de la maladie.

Les points forts de ce modèle sont multiples. Tout d’abord, il adhère aux théories étiologiques médicales contemporaines, satisfaisant aux critères fixés pour les modèles animaux dans le domaine de la médecine moderne. Deuxièmement, il incorpore les principes de la médecine traditionnelle mongole pour reproduire des symptômes spécifiques de maladies humaines chez les animaux, incarnant ainsi des caractéristiques uniques aux pratiques médicales mongoles. Étant donné son alignement avec les théories médicales modernes et traditionnelles, ce modèle sert de plate-forme efficace pour la recherche fondamentale en médecine mongole. Par conséquent, l’intégration des maladies et des symptômes dans ce modèle animal représente une confluence de la recherche en médecine mongole et moderne. Bien que le modèle ait ses limites, son perfectionnement continu contribuera de manière significative à l’avenir de la recherche fondamentale en médecine mongole.

Les modèles animaux sont devenus indispensables dans l’exploration de la dépression en raison des défis éthiques et pratiques associés à l’étude directe du cerveau humain. Malgré leurs limites inhérentes à la reproduction complète des complexités de la dépression, l’évolution et la validation de ces modèles restent un processus continu. Dans cette étude, nous avons combiné les principes de la médecine mongole et moderne pour développer un modèle animal de dépression. Cette approche collaborative offre des informations précieuses pour la construction d’un modèle animal plus complet qui englobe à la fois les théories médicales traditionnelles mongoles et modernes.

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Nous sommes reconnaissants pour l’instrumentation et le laboratoire fournis par la faculté de médecine mongole de l’Université de médecine de Mongolie intérieure, en Chine. Cette étude a reçu le soutien financier de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (subvention n° 81760762) et du projet de l’Université médicale de Mongolie intérieure de Chine (subvention n° 100). YKD2022MS074), et le projet de recherche scientifique de l’enseignement supérieur en Mongolie intérieure, en Chine (subvention n°. NJZY22661) et le projet de fonds ouverts du Laboratoire clé de médecine chinoise et mongole dans la région autonome de Mongolie intérieure, Chine (subvention n°. MYX2023-K07).