样品混合物是安置在列的顶部和吸收到顶部的固定相上。随后，流动相是应用于列和用于洗脱通过固定相混合。柱层析法利用分子极性分离的化合物。在极性差异导致分子穿越了列，这有效地分离开来另一个化合物的速率的差异。流动相收集在试管中的小分数作为它洗脱了列，从而使分离和纯化化合物。最后，用旋转蒸发仪产生孤立的 ④，去除了溶剂。

柱层析的多功能性和便利性使得净化化合物的使用最广泛的技术之一。与再结晶 （另一种常用净化技术） 不同化合物与柱层析纯化不必是固体。柱层析法也是有能力的一些孤立的化合物的混合物。柱色谱法的另一个优点是，很少需要有关化合物的物理属性被使用这种方法提纯，使这种技术合成或隔离新化合物，其中知之甚少 ④ 时非常有价值。

溶剂

一种化合物遍历列率是高度依赖于正在使用的流动相。通常情况下，更多极性化合物将通过列的溶剂得越快。极性溶剂有固相，限制 ④ 与固相，之间的相互作用使化合物洗脱更快更大的亲和力。必须小心以确保选择的柱色谱溶剂系统已创建分离混合物中化合物之间的适当极性。溶剂的选择是成功分离柱层析法的关键。要确定最佳的溶剂体系，应执行柱色谱试验之前进行一系列的薄层色谱法 (TLC) 实验。在某些情况下可能有必要使用二元溶剂体系。

选择一个溶剂系统

1. 在薄层板上所需要的化合物为 0.2-0.3 之间确定产生阻滞因子 (R_f ) 溶剂体系。
2. 用乙酸乙酯或二氯甲烷开始作为流动相薄层色谱法实验。
   1. 如果R_f大于 0.3，试着少极性的溶剂，如正己烷。如果R_f小于 0.2，可以尝试添加极少量的极性溶剂，如甲醇。
   2. 最佳的溶剂系统可能需要两种溶剂的混合物。
   3. 作为流动相硅胶柱会小心不使用超过 10%的甲醇。

成功分离了含有四苯基卟啉 （TPP，5 毫克） 和芴酮 （45 毫克） 的混合物样品，每种化合物已被隔离。TPP 洗脱第一列作为一个暗紫色红乐队和芴酮洗脱列作为一个黄色的乐队（图 2)。洗脱收集在试管中，由他们与众不同的色彩 (图 3)。包含分离得到的化合物的分数被合并到单独的 RBs 和溶剂中移除了使用旋转蒸发仪起高度纯净 TPP 和芴酮。Chromatographed 化合物的纯度由核磁共振 (NMR) 进行了验证。如果为所需的 ④ 熔点先前已经确定，另外可通过熔点，但只验证化合物。

图 2。由于化合物遍历固定相他们开始分离。在这个实验中 TPP （暗紫色红带） 穿过列略快于芴酮 （黄色带）。

图 3。为化合物洗脱剂列被收集在试管里。在这个实验中分离的化合物被上色，所以他们可以直观地标识。

摘要

柱层析法是净化化合物的方便和灵活的方法。此方法分离基于极性的化合物。利用分子的极性的差异，柱层析法可以轻便分隔各个化合物化合物遍历列的固定相的速率。柱层析 （特别是当相比再结晶） 的好处之一是，很少需要净化过程之前已知的化合物。对柱层析法的另一个优势是，它可以用于净化固体和油，而再结晶不仅可以用于净化固体。这种技术也可以用于分离化合物从混合物的数目。

应用程序

柱层析法是净化化合物最方便和广泛使用的方法之一。通常情况下，合成反应会产生多个产品和柱层析法可用于隔离每个化合物作进一步检验。柱层析是极其宝贵的当合成或分离化合物，因为很少需要了解一种化合物及其 ' 之前的净化过程的物理性能。

制药业经常利用柱层析分离纯化化合物作为其早期阶段的药物开发过程的一部分。³通常情况下的在这些初步阶段研究人员将构建图书馆周围的铅化合物，化合物，然后随后用柱层析净化新合成的化合物。⁴的广泛使用和多功能性的此种净化技术促使教育工作者将技术纳入本科课程。^5，6