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啮齿动物识别 I

Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学

生物医学研究的一个基本要求是研究动物的正确识别。必须将正确的动物用于程序和数据收集。实验室小鼠和大鼠可以用下列永久性方法识别: 耳标签、耳打码、微芯片植入、成年小鼠的尾部纹身和新生儿脚趾纹身。染料和标记笔的临时方法也可用于急性研究。这段视频涵盖了对小鼠和老鼠的耳贴标签和冲压的技术方面, 以及每种对动物进行的研究类型的好处。对每个动物的基本手工约束技术 (包括在一个单独的视频) 的知识是必要的, 这些识别方法是正确的完成。

Principles

耳标签是便宜和易于执行, 并因此通常用于识别个别小鼠和老鼠。标签可以用一系列的数字和/或字母 custom-made。将特定的代码分配给一只老鼠/大鼠, 或者给一个原则调查员 (PI), 在记录记录和数据库管理方面的助手, 特别是在有多重菌株和 pi 的大型育种群中。此外, 市面上还有各种各样的标签。金属标签上刻有字符。虽然这种蚀刻是明确的, 当使用鼠标时, 通常需要把它捡起来, 以便读取标签上的代码, 由于小的标签大小。其他选项是塑料标签, 无论是数字和/或字母鲜艳的背景, 或塑料标签的条形码在前面的表面。这两个选项都允许读取标签, 而不必处理这些动物。塑料标签的另一个优势是它们与 MRI 成像的兼容性。

标签在耳朵上的定位是至关重要的, 因为不正确的定位可能会产生一些不幸的后果。标签必须放置, 这样他们不会造成在耳廓的弯曲, 干扰动物的机动性, 或捕获的任何部分的锁定。如果标签放得太靠近耳朵的边缘, 它可以很容易地从耳廓组织撕裂。如果定位太靠近头部, 颈部的皮肤可以捕捉到标签, 这将造成刺激, 疼痛, 和限制运动。这可以导致 self-trauma 从动物抓痕的标签, 翻录它的耳朵, 或得到一只脚抓住了标签。适当的安置和技术培训是必不可少的。1

尽管标签为老鼠或老鼠提供了单独的标识符, 但它们并不是万无一失的。标签可以丢失, 由于战斗, over-grooming, 皮炎易感菌株, 感染, 或 self-trauma。2特别是成年大鼠对耳标签的耐受性较差, 通常会将其移除, 从而造成 self-trauma。在大鼠的更积极的繁殖行为也会导致耳朵标签被撕裂的耳廓。如果老鼠或老鼠是配对或集体安置的, 那么在不止一个动物身上丢失一个耳朵标签就会很麻烦。为了绕过这个问题, 应该使用第二种形式的识别--例如, 在耳对面的标签上使用的打孔代码, 或尾巴或脚趾纹身。一个设施应该规范的选择耳朵被标记和代码要使用的其他耳朵或脚趾。所有的代码应在笼卡上注明。

使用耳打码可以快速而简单的识别方法, 但该技术有局限性。常用的代码对可用的数字有上限, 通常最多可使用100到399。要阅读耳打码, 大多数动物必须掌握在颈背上。该方法可作为 PCR 基因分型的组织样本, 同时进行动物鉴定和基因组取样。这会减少对动物重复处理的压力。3

有三种风格的耳朵拳: 剪刀拳, 拇指拳, 和杠杆冲床。虽然都是同样有效的, 但都有各自的优缺点。例如, 当老鼠衰老时, 耳朵的皮肤会变厚。在幼鼠断奶时, 最好对它们进行耳部击打。对于需要鉴定的成年大鼠, 应考虑使用吸入麻醉。人体工程学, 比拇指拳更容易使用的水平冲床, 特别是对较厚的老老鼠的耳朵。然而, 这两种拳都需要手指的捏动。剪刀冲床具有人体工程学的优点, 不需要挤压运动, 从而避免腕管疲劳和损伤。相比之下, 拇指拳是有利于收集基因分型样本, 因为提示与组织材料将适合离心管。使用的拳打方式应由执行任务的个人和大鼠的年龄来决定。

对老鼠来说, 虽然最常用的是金属标签, 但研究表明, 使用它们是有后果的。炎症, 肿瘤的变化, 甚至慢性疼痛已被观察到的动物已经磨损金属耳标签几个月。34, 56如果有不良反应, 应立即将标签从耳中移除, 并在必要时由兽医人员检查和处理随后的损伤。

适当的保养和维护拳打将延长他们的使用。所有类型的冲床将沉闷, 如果蒸压, 所以建议用消毒剂清洗, 并用酒精冲洗。然后, 必须彻底干燥, 以防止生锈。如果是用于 PCR, 他们应该浸泡3分钟的解决方案, 去除残留的 DNA 或 RNA。使用前, 用酒精冲洗, 擦干。

Procedure

1. 耳冲识别

耳打码已发展成为一种快速和廉价的方法来标记个别动物。有三种风格的耳朵拳: 剪刀拳, 拇指拳, 和杠杆冲床。动物的右耳用于单位数, 左耳为十, 耳朵中间为数百人。

  1. 抑制动物, 使耳朵容易接近。大多数老鼠在断奶时都被标记为个体识别。这需要温和的处理, 由于其较小, 更脆弱的大小。如果后肢可以在笼顶或台面等表面上休息, 一些老鼠就不太可能挣扎。
  2. 确定所需的耳拳, 以符合动物的实验数量或在笼子内识别。
    1. 根据所使用的代码, 冲床将是凹槽或孔。
    2. ear 标记上的最后一个数字通常用作识别的第二种方法时的耳打孔标识符。
    3. 如果动物在稳定的笼群中进行短期研究, 它们可以得到连续的数字。这通常是在没有耳朵标签的情况下完成的。
  3. 打耳朵
    1. 为了使一个缺口, 冲床是放置在边缘的耳朵耳廓。
    2. 要制造一个洞, 把耳朵放在拳孔中, 使冲头的洞远离耳廓边缘的位置。
    3. 将压力施加到拇指或杠杆上, 或快速、牢固地将剪刀冲进耳朵的皮肤。
    4. 当使用拇指或杠杆拳时, 轻轻地将冲床从耳朵上抬起来。打开剪刀, 把它从耳朵里移开。
    5. 避免拉或扭拳, 以防止撕裂耳朵。
    6. 拳击会在一段时间后变得迟钝。如果一拳打不进耳朵, 松开冲床, 并选择一个新的耳朵冲床。在同一位置重新定位新冲床。
  4. 每次使用后都要清洗拳头。
    1. 所有冲床类型将沉闷, 如果蒸压。建议用消毒剂清洗, 用酒精冲洗。彻底干燥, 防止生锈。
    2. 用于 PCR 的耳拳通常在溶液中浸泡3分钟以去除残留的 DNA 或 RNA。使用前, 用酒精冲洗, 擦干。

Figure 1
图1。用剪刀冲压的小鼠耳朵。

2. 耳标签识别

定制的耳标签可以订购的制造商与字母和/或数字代码, 这允许分化的小鼠菌株或调查。耳标签可以用金属或塑料制成。

  1. 选择适合于要识别的动物的耳标签。有几种风格的 appliers 可从耳标签制造商。一定要订购的变更是特定的大小和风格的耳朵标签正在使用。
  2. 轻轻地从纸板架上取下一个标签, 并将其定向到变更, 以便与孔的末端位于变更的缺口区域上。标记的尖端应该在缺口的对面。
  3. 抑制动物, 使耳朵容易接近。如果后肢可以在一个表面上休息, 例如笼顶或台面, 动物可能会更不容易挣扎。
  4. 正确定位耳标签的位置。
    1. 把耳朵标记的点和耳朵的最深的位置尽可能地放在一起, 这样标签号就会面对动物的背部。
    2. 要使耳朵标记数字面对动物的鼻子, 放置标记的点在耳廓的基地在耳朵的后面。
  5. 应用标签。
    1. 牢牢地挤压变更关闭。耳朵的标签会刺穿耳朵和锁在一起。
    2. 释放变更, 标记的耳朵将从变更中脱落。

Figure 2
图2。在耳廓上正确定位的带有耳标签的鼠标。

  1. 卸下金属耳标签。
    注意: 有时, 金属耳标签会引起耳朵发炎和肿胀。肿胀和刺激往往导致感染的耳廓。治疗应包括去除标签;然而, 在严重刺激或感染的情况下, 动物可能需要麻醉。
    1. 用一个用防腐溶液浸湿的棉签将碎片从标签周围移走。
    2. 从边与线切割器的标签环顶部切割。不要穿过平坦的表面, 因为这会压缩标签, 捏耳朵, 并造成进一步的损害。
    3. 避免在切割时使用扭矩, 以防止撕裂耳朵。
  2. 使用止血将耳标签的切端分开。
    1. 用止血轻轻地引导耳朵标签通过-和出-耳朵。减少创伤, 避免扩大穿孔孔和滑动的标签, 使卷曲的结束没有通过耳朵。
    2. 一旦标签不见了, 用防腐浸泡的棉签棒擦拭耳朵。
    3. 如果耳朵有脓性分泌物, 则可能需要进行后续治疗, 并建议与兽医人员进行协商以进行评估。

Application and Summary

在选择合适的识别方法时, 必须慎重考虑多种因素。每种技术都有优缺点, 必须考虑与实验需要。虽然成本必须与其他因素一起权衡, 但技术的简单性和对动物的不适程度应该是首要考虑。34

在小鼠和大鼠中常用的是耳冲孔/凹槽, 因为成本不高, 操作简单。可以使用的代码数量有限, 大多数代码的上限为100到399。要阅读耳打码, 大多数动物必须掌握在颈背上。然而, 这种拳打可以作为 PCR 基因分型的组织样本, 从而使鉴定和基因组取样能够同时完成, 从而减少对动物重复处理的压力。5

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Cover, C.E., Keenan, C.M., and Bettinger, G.E. 1989. Ear tag-induced Staphylococcus infection in mice. Laboratory Animals. 23:229-233.
  3. Kitagaki, M., Suwa, T., Yanagi, K., and Shiratori, K. 2003. Auricle chondritis in young ear-tagged Crj:CD(SD)IGS rats. Laboratory Animals. 37:249-253.
  4. Kasanen, H.E., Voipio, H.M., Leskinen, H., Luodonpää, M., and Nevalainen, T.O. 2011. Comparison of ear tattoo, ear notch and microtattoo in rats undergoing cardiovascular telemetry. Laboratory Animals. 45:154-159.
  5. Dalhborn, K., Bugnon, P., Nevalainen, T., Raspa, M., Verbost, P., and Spangenberg, E. 2013. Report of the Federation of European Laboratory Animal Science Associations Working Group on animal identification. Laboratory Animals. 47:2-11.
  6. Waalkes, M.P., Rehm, S., Kasprzak, K.S., et al. 1987. Inflammatory, proliferative, and neoplastic lesions at the site of metallic identification ear tags in Wistar [Crl:(WI)BR] rats. Cancer Research. 47:2445-2450.

Tags

Rodent IdentificationLab AnimalsBiomedical ResearchAnimal Identification MethodsEar TaggingEar PunchingEar Punch CodeNotchHoleAnimal Labeling

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Overview

0:48

Ear Punching: Code, Types, Benefits and Disadvantages

3:51

Method of Ear Punching

5:46

Ear Tagging: Types, Benefits and Disadvantages

7:20

Method of Applying and Removing an Ear Tag

10:46

Applications

12:06

Summary

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