Techniques d'identification des rongeurs I

Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana

Une exigence fondamentale de la recherche biomédicale est l’identification des animaux de recherche. Il est essentiel que l’animal de droite est utilisé pour la collecte de données et des procédures. Rats et des souris de laboratoire peuvent être identifiés avec les méthodes permanentes suivantes : marques auriculaires, codes de perforation d’oreille, implantation de la micropuce, tatouages de queue de souris adultes et orteil tatouages chez les nouveau-nés. Méthodes de colorants et de stylos de marquage temporaire peuvent également servir pour les études de toxicité aiguë. Cette vidéo couvre les aspects techniques de l’oreille de marquage et de poinçonnage pour souris et rats, ainsi que les avantages de chacun en ce qui concerne le type de recherches menées sur les animaux. Pour ces méthodes d’identification pour se faire correctement, il faut connaître les techniques de base retenue manuelle pour chaque animal (couverts dans une vidéo séparée).

Les marques auriculaires sont peu coûteux et facile à exécuter et par conséquent sont couramment utilisés pour l’identification des rats et des souris. Étiquettes peuvent être faits sur mesure avec une série de chiffres et/ou de lettres. Attribution des codes spécifiques à une souche de souris/rat, ou à un enquêteur principe (PI), aides en gestion tenue de dossiers et base de données, notamment dans les colonies reproductrices grandes où il y a plusieurs souches et PIs. En outre, il existe une variété d’étiquettes disponibles dans le commerce. Étiquettes métalliques ont des caractères gravés sur eux. Bien que cette gravure est claire, en travaillant avec une souris, il est souvent nécessaire de le ramasser pour lire le code sur les balises en raison de l’exiguïté des balises. Les autres options sont des étiquettes en plastique avec chiffres ou lettres sur des fonds colorés, ou plastique tags avec un code à barres sur la face avant. Ces deux options permettent les balises à lire sans avoir à manipuler les animaux. Un autre avantage d’étiquettes en plastique est leur compatibilité avec la formation image de MRI.

Le positionnement de l’étiquette à l’oreille est essentiel, comme le mauvais positionnement peut avoir plusieurs conséquences fâcheuses. Tags doivent être placées telles que ne pas provoquer une courbure dans le pavillon, gêner la mobilité de l’animal ou attraper sur n’importe quelle partie de la mise en cage. Si l’étiquette est placée trop près de la pointe de l’oreille, il peut facilement être arraché le tissu pinna. Si placé trop près de la tête, la peau de la région du cou peut attraper dans la balise, qui va créer une irritation, douleur et mouvement restreint. Cela peut mener à soi-traumatisme de l’animal à se gratter à la balise, il déchirant de l’oreille, ou d’obtenir un pied pris dans la balise. Formation pour un placement correct et sa technique est essentielle. ¹

Tandis que les balises fournissent des identificateurs individuels pour souris ou de rats, ils ne sont pas infaillibles. Tags peuvent être perdus en raison des combats, toilettage excessif, la dermatite chez les souches sensibles, auto-traumatisme ou une infection. ² rats adultes en particulier sont moins tolérants des marques auriculaires et souvent les supprimer, infligeant self-trauma. Le comportement plus agressif de la reproduction chez le rat peut aussi conduire à une étiquette d’oreille étant arrachée à la Penne. Si la souris ou rats sont appariés ou logés en groupe, la perte d’une marque auriculaire sur plus d’un animal peut être gênante. Pour contourner ce problème, une forme secondaire d’identification-comme un coup de poing le code utilisé sur l’oreille opposée de la balise ou un tatouage de queue ou de l’orteil-devraient être utilisées. Une installation doit normaliser tant le choix de l’oreille à baliser et le code à utiliser sur l’autre oreille ou sur les orteils. Tous les codes doivent être indiquées sur la carte de la cage.

L’utilisation de codes de perforation d’oreille permet une méthode rapide et simple d’identification, mais la technique a des limites. Les codes couramment utilisés ont une limite supérieure pour les numéros utilisables, habituellement un maximum de 100 à 399. Pour lire les codes de perforation d’oreille, la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou. Les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage de la PCR, qui permet l’identification des animaux et échantillonnage de génotype pour se faire simultanément. Il en résulte moins de stress aux animaux de manutention répétée. ³

Il existe trois styles d’oreille poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Bien que tous soient aussi efficaces, il y a avantages et inconvénients de chacun. Par exemple, comme l’âge des rats, la peau de leurs oreilles s’épaissit. Il est préférable d’effectuer les poinçons de l’oreille chez le jeune rat comme ils sont sevrés. Pour rats adultes nécessitant une identification, l’utilisation de l’inhalant anesthésie doit être envisagée. Ergonomique, le niveau punch est plus facile à utiliser qu’un coup de poing de pouce, surtout pour les oreilles plus épais des rats plus âgés. Toutefois, les deux de ces poinçons exigent un mouvement de pincement des doigts. Le poinçon de ciseaux a l’avantage ergonomique de ne pas nécessiter un mouvement de pincement, évitant ainsi les blessures et la fatigue du canal carpien. En revanche, le punch de pouce est avantageux pour la collecte de génotypage des échantillons, comme les pointes avec le matériel tissulaire seront adaptera dans un tube Eppendorf. Le style de coup de poing à utiliser doit être déterminé par les individus effectuant la tâche et l’âge des rats.

Pour les rats, bien que les étiquettes métalliques sont souvent utilisés, ont démontré qu’il y a des conséquences de leur utilisation. Inflammation et douleur chronique même modifications néoplasiques ont été observés chez les animaux qui portent des marques auriculaires métal pendant plusieurs mois. ^3,4,5,6 les balises doivent être rapidement retirés de l’oreille s’il y a un effet indésirable, et le préjudice en résultant devrait être examiné et traité, si nécessaire, par le personnel vétérinaire.

Entretien et maintenance des poinçons prolongera leur utilisation. Tous les types de coups de poing seront alourdira si stérilisés à l’autoclave, il est donc recommandé de les nettoyer avec un produit désinfectant et les rincer avec de l’alcool. Ensuite, ils doivent être séchés soigneusement pour éviter l’oxydation. Si les punchs sont utilisés pour l’ACP, ils devraient être trempées pendant 3 minutes dans une solution qui élimine les résidus ADN ou ARN. Avant utilisation, ils sont rincés dans de l’alcool et essuyés.

1. identification de poinçon oreille

Codes de perforation d’oreille ont été développés comme une méthode rapide et peu coûteuse d’étiqueter des animaux individuels. Il existe trois styles d’oreille poinçons : le poinçon de ciseaux et le poinçon de pouce le punch de levier. Oreille droite de l’animal est utilisé pour les chiffres uniques, l’oreille gauche pour les dizaines et au milieu des oreilles pour des centaines.

1. Retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Plupart des souris sont oreille avec étiquette d’identification individuelle au moment du sevrage. Cela nécessite un traitement doux en raison de leur taille plus petite et plus fragile. Certaines souris sont moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface comme le sommet d’une cage ou un comptoir.
2. Déterminer les coups d’oreille nécessaires pour correspondre au nombre expérimental de l’animal ou pour l’identifier dans une cage.
   1. Poinçons seront des entailles ou des trous selon le code utilisé.
   2. Le dernier numéro sur la marque auriculaire est souvent utilisé comme l’identificateur de perforation d’oreille quand c’est la méthode secondaire d’identification.
   3. Si les animaux sont sur une étude à court terme dans des groupes stables de cage, ils peuvent être données des numéros séquentiels. Cela se fait souvent quand il n’y a aucun présent de marques auriculaires.
3. Faire l’oreille coup de poing.
   1. Pour faire l’entaille, le poinçon est placé sur le bord du pavillon de l’oreille.
   2. Pour faire un trou, placez l’oreille dans le punch pour que le trou du poinçon est placé loin de la marge de pinna dans la position désirée.
   3. Appliquer une pression du pouce ou poinçon de levier ou de fermer le ciseaux punch rapidement et fermement pour couper à travers la peau de l’oreille.
   4. Soulevez doucement le poinçon de l’oreille lorsque vous utilisez les coups de pouce ou d’un levier. Ouvrez le punch de ciseaux pour enlever de l’oreille.
   5. Évitez de traction ou de torsion le punch pour éviter le déchirement de l’oreille.
   6. Coups de poing terne après un temps. Si un coup de poing ne pas couper à travers l’oreille, le poinçon de sortie et sélectionnez un nouveau poinçon d’oreille. Repositionner le nouveau poinçon au même endroit.
4. Nettoyez le poing après chaque utilisation.
   1. Tous les types de coup de poing seront alourdira si stérilisés à l’autoclave. Il est recommandé qu’ils être nettoyées avec un désinfectant et rincés avec de l’alcool. Séchez-les soigneusement pour éviter l’oxydation.
   2. Poinçons d’oreille à utiliser pour l’ACP sont systématiquement trempées pendant 3 minutes dans une solution pour enlever les résidus ADN ou ARN. Avant utilisation, ils sont rincés dans de l’alcool et essuyés.

La figure 1. Oreille perforation chez la souris à l’aide ciseaux poinçon.

2. identification de balise oreille

Marques auriculaires personnalisés peuvent être commandés de fabricants avec codes alphabétique ou numériques, qui permet la différenciation des souches de souris ou des enquêteurs. Les marques auriculaires sont possibles de métal ou de plastique.

1. Sélectionnez les marques auriculaires appropriées pour les animaux d’être identifié. Il y a plusieurs styles d’applicateurs disponibles auprès de fabricants de balise oreille. N’oubliez pas de commander l’applicateur qui est pour la taille spécifique et le style des marques auriculaires utilisées.
2. Doucement le support en carton lui enlever une étiquette et l’orienter dans l’applicateur afin que l’extrémité avec le trou est placée au-dessus de la zone crantée de l’applicateur. L’extrémité pointue de la balise doit être en face de l’encoche.
3. Retenir l’animal afin que les oreilles sont facilement accessibles. Animaux peuvent être moins susceptibles de se battre si les membres postérieurs peuvent reposer sur une surface, comme un haut de cage ou un comptoir.
4. Positionner correctement la marque auriculaire pour le placement.
   1. Positionner le point de la marque auriculaire lorsque profondément dans la concha de l’oreille que possible, si les numéros des marques face au dos de l’animal.
   2. Pour avoir des numéros d’étiquettes oreille vers le nez de l’animal, placez le point de la balise à la base de la Penne sur l’arrière de l’oreille.
5. Appliquer la balise.
   1. Bien ferme la squeeze l’applicateur. La marque auriculaire perceront le verrouillage et les oreilles ensemble.
   2. Relâchez l’applicateur et l’oreille tagged va tomber hors de l’applicateur.

La figure 2. Une souris avec une étiquette d’oreille qui est correctement positionnée sur le pavillon.

6. Enlever les marques auriculaires métalliques.
   NOTE : À l’occasion, étiquettes d’oreille métal peuvent causer une irritation et un gonflement de l’oreille. L’enflure et l’irritation souvent conduit à des infections de la Penne. Le traitement devrait inclure le retrait de l’étiquette ; Toutefois, en cas d’infection ou irritation sévère, l’animal peut doivent être anesthésiés.
   1. Enlever les débris d’autour de la balise avec un coton-tige imbibé d’une solution antiseptique.
   2. Couper dans la partie supérieure de la boucle de la balise de bord à bord avec coupe-fil. Ne pas couper à travers la surface plane, car cela va compresser la balise, pincer l’oreille et causer d’autres dommages.
   3. Évitez d’appliquer le couple pendant la coupe pour éviter la déchirure de l’oreille.
7. Utilisez une pince hémostatique pour écarter les extrémités coupées de la marque auriculaire part.
   1. Guidez la marque auriculaire à travers- et à l’extérieur de l’oreille à l’aide d’une pince hémostatique. Réduire les traumatismes en évitant l’élargissement du trou perçant et glisser la balise dehors afin que l’extrémité sertie ne passe pas par l’oreille.
   2. Une fois que la balise est partie, nettoyer l’oreille avec un bâtonnet de coton imbibé d’antiseptique.
   3. S’il y a un écoulement purulent de l’oreille, suivi médical peut être nécessaire et consultation avec le personnel vétérinaire pour évaluation est recommandée.

Lors du choix de la méthode d’identification appropriées, de nombreux facteurs doivent être délibérés. Chaque technique a des avantages et des inconvénients qui doivent être examinées en fonction des besoins expérimentaux. Alors que les coûts doivent être soupesés avec d’autres facteurs, la simplicité de la technique et le niveau d’inconfort pour les animaux devraient être les principales considérations. ^{3, 4}

Oreille de poinçonnage/découpe est couramment utilisé dans les souris et les rats parce qu’il y a peu de frais, et la procédure est facile à faire. Il y a un nombre limité de codes qui peuvent être utilisés, avec la plupart des codes ayant un plafond de 100 à 399. Pour lire les codes de perforation d’oreille, la plupart des animaux doivent être saisies à la peau du cou. Toutefois, les coups de poing peuvent doubler comme des échantillons de tissus pour le génotypage de la PCR, qui permet pour l’identification et l’échantillonnage du génotype doit s’accomplir en même temps, provoquant ainsi, moins de stress aux animaux des manipulation répétée. ⁵