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基本护理程序

Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学

老鼠和老鼠占超过90% 的动物用于生物医学研究。对这些研究动物的适当照顾对实验结果至关重要。有一般的程序, 适用于大多数的这些小鼠和老鼠, 但一些动物, 如免疫缺陷的, 需要采取额外的步骤, 以维持他们的实验。

通常使用的免疫缺陷小鼠包括那些自然发生在近交系小鼠和那些通过基因工程创造的。最初用于研究的免疫缺陷小鼠是 "裸鼠"。balb/c/c 裸鼠发现于 1966年, 在一个 balb/c/c 的殖民地, 生产的小鼠缺乏头发和胸腺。这些裸的小鼠有一个抑制免疫系统, 是缺乏 T 细胞。这种动物的价值很快就被发现用于研究微生物感染、免疫缺陷和自身免疫。虽然不像裸鼠一般使用, 也有裸鼠。裸鼠是 T 细胞缺乏, 并显示在胸腺相关区域的周围淋巴器官衰竭细胞的数量。另一个自然出现的免疫缺陷小鼠是严重的联合免疫缺陷小鼠。这些小鼠有一个缺陷, 损害了功能性 B 和 T 细胞的生产。由于无法进行足够的免疫应答, 这些小鼠可以作为移植人体细胞的宿主受体。一些具有免疫缺陷的基因修饰的小鼠菌株在商业上是可用的。1缺陷的严重程度随着基因的改变而变化;然而, 所有的免疫抑制小鼠和大鼠也同样处理。

这份手稿将描述免疫和免疫缺陷动物的照顾。这两组动物的住房, 饮食, 环境要求和处理将被讨论。

Principles

住房/锁定

小鼠和大鼠主要安置在鞋盒型锁定中, 固体底部含有寝具材料。典型的鞋盒鼠标笼提供75平方英寸的地板空间, 这是足够的最多五成年老鼠。然而, 实验设计可能需要四只老鼠。在这种情况下, 小鼠应在接受四组, 以避免在实验开始时社会群体的破坏。一般而言, 大鼠锁定允许最多两个成年动物。如果要长期居住, 应建立在一对住房。

笼可以是静态或单独通风 (下腔)。静态笼子要么盖上一条金属丝盖, 要么放在架子下面, 然后放在笼子的顶部。过滤材料被添加到笼顶, 无论是作为一个阀盖上方的电线酒吧盖, 或作为一张滤纸的货架货架上。IVCs 被设置成一个笼, 线栏盖, 和阀盖放在一个机架上, 提供空气流入笼中。IVCs 的使用消除了改变笼子的需要, 就像静态笼子被改变一样。

标准的网箱系统提供水源和食物分配的区域。水可以通过放置在笼顶的水瓶或通过一个 sipper 管, 是一个内置的动物笼的组成部分。当笼被啮合到机架上时, 水被运入 sipper 管, 用于自动浇水系统, 以满足动物整个动物设施的需要。锁定必须做好适当的准备, 为动物提供适当的照料。在动物笼内放置有喂食器, 或将一条铁丝条盖用作食物贮存。食物必须放在不被动物弄脏的位置。

实验室动物的护理和使用指南2 ("指南") 指出所有锁定的实施必须至少每2周消毒一次。一些笼子和配件可能需要改变更多的往往是由气味和氨的水平在围栏。一般而言, 除非有四或以上男性或女性有垃圾, 否则 IVCs 计划每两星期更换一次;这些机箱可能需要每周更换。由于笼型的改变是小鼠暴露于病原体的机会, 改变免疫缺陷小鼠的锁定应尽可能少做。

饮食

在蛋白质、碳水化合物和脂肪水平上有很多不同的饮食组合。通常, 饲料应该由15-19% 蛋白质, 44% 碳水化合物, 和4-9% 脂肪组成。增加脂肪含量的食物通常用于繁殖菌落以提高繁殖力。由于食物可能是免疫缺陷小鼠的污染源, 所以它必须是蒸汽灭菌或辐照。受灭菌过程的食物必须经过特殊的配制才能经受住这一过程。然而, 辐照过程并不改变食物的含量。

水是免疫缺陷动物的另一个潜在污染源。水应该通过高压釜或过滤器来处理, 包括通过紫外线过滤的水。蒸汽灭菌釜中的水, 个别瓶的水覆盖铝箔。瓶盖与 sipper 管在高压釜袋中单独灭菌。水的酸化到 pH 值为 2.5-3 帮助控制生长细菌有机体在水瓶。水是酸化的, 加入两滴12摩尔 (M) 盐酸 (HCl) 到八升的反渗透 (RO) 水。自动浇水系统可以在整个系统中使用, 包括微粒过滤器和紫外线滤光器的一系列过滤。

环境

动物保育设施内的环境条件必须严格控制。联邦法规和指导方针已经确立了对常用动物的护理和处理标准。提供照明、环境温度、湿度和气流, 以满足动物的生理需要。除了需要略微增加室温外, 免疫缺陷动物的参数与常规动物相同。裸裸动物还需要额外的寝具和碎纸类型的巢状材料, 在他们的笼子, 以协助调节。

动物的房间应保持在68-72°F 之间的温度, 湿度水平为40-60%。2湿度水平低于40% 会导致老鼠和老鼠的浣, 这种情况会导致尾部的皮肤干燥到它在尾部收缩的地步, 从而导致尾部脱落。光照周期应设置为避免因不适当的光或光照强度而引起的动物的压力。正常情况下, 光是12小时, 12 小时休息。照明强度应根据房间内的活动而变化。当技术人员在动物室工作时, 可以使用更高的光照水平。然而, 一旦所有的活动结束, 照明应该降低到大约325勒克斯。2指示灯应为计时器和通过监视系统验证的周期。按照指南的指示, 动物房间必须至少有10-15 的空气变化, 每小时100% 新鲜空气。2空气的变化会减少动物室的微生物和异味。在人口稠密的动物房间里, 每小时的空气变化数量可能需要增加。

网箱中的环境因素包括锁定型、笼内使用的基质、输水系统和饮食。社会住房是强制性的, 除非科学合理, 或动物是不相容的所有其他。环境富集的规定, 如纸棚屋和筑巢材料, 允许动物表现出 species-specific 的行为, 反过来又降低了压力水平, 增加了动物的整体福祉。筑巢材料还提供了一个沉睡的区域, 在平静的信息素中, 帮助同一个笼子里的多个雄性老鼠的外壳。巢区被移动到干净的笼子在笼子改变, 以帮助防止攻击在男性, 当他们被介绍入一个新的环境。3

Procedure

1. 处理免疫 (常规) 小鼠

已经证明, 小鼠的免疫失调与人类非常相似。2由于这些动物具有有限的免疫能力, 因此在处理和照料这些动物的过程中, 通过使用工程控制、个人防护设备来减少感染性疾病的风险。动物护理人员和标准操作规程;这些减少了锁定和其他动物接触的设备的污染。

  1. 从装运容器中取出: 从其他机构或动物供应商处接收动物对已在动物设施内的动物构成风险。在转运过程中, 动物运输箱可以接触到致病剂。因此, 在拆解装运集装箱时应执行适当的程序。
    1. 最小的个人防护装备 (PPE) 要求是手套, 清洁的实验室大衣或磨砂, 一个微粒口罩, 和安全眼镜, 当处理动物。
    2. 选择适当的笼子, 包括电线酒吧盖子和障碍顶端。笼应配备适当的床上用品和筑巢材料。所有锁定应在动物到达之前准备好并放置在接收区。
    3. 抵达后, 运输箱放置在一个安全和温度控制的房间。然后, 检查容器是否损坏。
    4. 用胆碱产品对装运容器的外表面进行消毒, 以消灭任何有害的病原体。确保消毒剂与包装箱的接触符合厂家的推荐, 通常为15-30 分钟。
    5. 将容器放置在动物转移站 (ATS) 中。ATS 在引擎盖内提供高效过滤的气流, 通过在用户和工作区之间创建真空空气屏障来提供过敏原保护。这确保了最小的接触动物毛发/毛屑和笼床上用品材料。单向空气也能保护动物免受周围空气的污染。
    6. 一旦装运集装箱打开, 评估动物的整体健康状况。记下任何受伤或患病的动物。
    7. 把动物放在合适的群体大小的组合笼子里。分组应符合空间规则, 以及它们将被分配到的实验协议。
    8. 用铁丝条盖住笼子。确保线栏盖上的分隔条在盖子上创建两个区域。
    9. 选择合适的食物, 把食物放在铁丝条盖子的一侧。离开第二方开放, 以便更好地流通空气。
    10. 水将通过水瓶或自动浇水系统提供。水瓶是用于新断奶的小鼠, 以确保他们能够保持其水化水平。对于有自动浇水的下腔锁定, 在将其放在机架上之前, 先将浇水管充电。
    11. 把笼子放在架子上。如果使用 IVCs, 检查笼是否完全啮合到机架上, 并确保 sipper 管固定在浇水系统上。
  2. 笼型改变常规小鼠
    1. 在安非他明类兴奋剂中改变动物笼。在每届会议结束时对苯丙胺类兴奋剂进行消毒。
    2. 一次只能打开一个笼子。
    3. 用适当的床上用品和筑巢材料准备的锁定被带进动物室。在安非他明类兴奋剂中放置了少量的笼子。
    4. 有内部 sipper 管的下腔静脉笼必须充电以迫使水进入 sipper, 以消除 sipper 管内空气的死亡空间。如果没有适当的充电, 老鼠可能无法提供足够的压力, sipper 管, 以消除空气。
    5. 最小的个人防护装备 (PPE) 要求是手套, 清洁的实验室大衣或磨砂, 一个微粒口罩, 和安全眼镜, 当处理动物。
    6. 将被改变的动物笼放在一个新的笼子里, 然后放在 ATS 里。
    7. 动物可以用手或用填充钳来转移。手套在笼子之间或在小组之间改变老鼠。手套也可以用无毒化学物质在笼子之间消毒。
    8. 已经证明, 将小鼠的筑巢区域转移到一个干净的笼子里有助于过渡到干净的笼子里, 特别是对于那些在人群中的雄性。其他浓缩物也转移到新的笼子里。
    9. 一旦笼顶或送料器放置在新的笼子, 食品添加。
    10. 屏障顶部被放置在新的笼子和笼子返回到机架。
    11. 下腔的笼子必须正确地停靠在机架上, 以确保空气和水阀门的啮合。

2. 处理免疫力低下的小鼠

  1. 从装运集装箱拆箱
    1. 免疫缺陷动物必须在无菌条件下进行解压。所有处理免疫缺陷小鼠的人都必须佩戴蒸汽灭菌的礼服、面罩、头发罩和无菌手套。在搬运这些动物时, 应时刻使用无菌技术。
    2. 所有设备和锁定应已消毒的蒸汽, 紫外线辐射, 或化学灭菌, 浸泡在70% 乙醇至少30分钟有两种选择无菌锁定: 标准锁定, 已被包装和蒸汽灭菌, 或锁定被消毒-通常通过辐照-由供应商。这些笼子是一个用途, 一次性单位。
    3. 在操作小鼠的层流罩, 发动机罩是喷洒70% 乙醇与鼓风机操作。风帽鼓风机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。每次使用后, 引擎盖喷上消毒剂, 擦拭所有杂物, 再喷洒70% 乙醇。
    4. 最理想的情况是, 两个人需要适当的接受免疫缺陷小鼠: 一个处理动物使用无菌技术 (无菌技术员), 一个将处理污染的项目 (菌技术员)。菌的人还要穿一件干净的长袖礼服;实验室大衣或工作服;掩;盖;和无菌手套, 以防止污染的内部不育, 如果他们需要达到的遮光罩。
    5. 准备一个层流罩, 如前所述。最好有一个专门为免疫缺陷动物的遮光罩。建议在抽油烟机的内部使用紫外线 (UV) 杀菌灯, 可用于杀菌。使用定时器来确保引擎盖表面有足够的紫外线照射。
    6. 所有放置在罩内的物品的外部都喷洒了70% 酒精, 包括食品、水和锁定的外包装。
    7. 装运集装箱在被放置在引擎盖之前喷洒二氧化氯溶液。一旦放置在引擎盖, 他们将保持未开封15-30 分钟。
    8. 指定的动物处理员打开无菌食物和水在敞篷之下。
    9. 菌技术员打开引擎盖下的装运箱。必须由菌技术员, 以避免接触的内部表面的引擎盖和内部的航运箱。
    10. 动物处理员打开无菌笼子, 并把食物和水放在笼子顶端来准备笼子。然后将小鼠从装运箱中取出, 放入无菌笼中。
    11. 动物状态由无菌动物处理员注意。任何出现疾病或有明显伤害的动物都将被隔离。所有标记有动物需要兽医注意的笼子将被放置在处理, 笼子改变, 或实验操作最后, 减少其他动物的潜在的污染。
    12. 菌的人将从引擎盖上取下填充的笼子。笼子可以放在一个标准的架子上作为静态笼子, 或在通风架上作为 IVCs。在 IVCs, 小鼠应提供额外的筑巢材料, 以协助热调节。
    13. 动物处理员应在每个装运容器后更换手套, 以避免可能的动物群的交叉污染。装运集装箱号记录在笼卡上, 以便在发生疾病时跟踪动物的起源。
    14. 如果原始容器可以密封, 则可以保存未使用的耗材以备将来使用。未使用的食物从房间被去除。
    15. 小鼠在实验前应经过一个星期的至少一周的驯化期。
  2. 免疫缺陷小鼠的笼型改变
    1. 鼠标笼至少每周更改一次, 如果认为有必要, 则更频繁。
    2. 为胡德准备, 笼子准备, 和人员 PPE 的步骤是相同的, 为动物打开。
    3. 动物要么用手转移, 要么用填充钳。指定的动物处理员应在每5-10 笼后 reglove, 如果手套被撕裂或被污染, 或者动物出现不适。
    4. 任何有动物出现病的笼子将被放置在笼子的末端改变顺序, 避免可能暴露健康动物对病原生物或污染物。
    5. 如果食物和/或水必须在下一个预定的笼子改变之前添加到笼子里, 它必须在准备好的引擎盖下菌完成。

Application and Summary

对生物医学研究中使用的动物进行适当的护理和处理对实验结果至关重要。条例和既定的准则决定了许多使用的做法。然而, 对于那些有免疫缺陷的小鼠和老鼠, 还需要采取额外的措施来减少偶然接触到的机会病原体。实践证明, 实验动物的健康和福祉得到了提高, 实验结果得到了较好的效果。

Tags

Care ProceduresMiceRatsBiomedical ResearchAnimalsExperimentsUnpackingCage ChangingHousing ConditionsDietEnvironmentImmunocompromised AnimalsStandardsEssential Care ProceduresImmunocompetent AnimalsExample ExperimentsReceiving AnimalsTransport BoxesPathogenic AgentsPersonal Protective Equipment PPELab CoatGlovesSafety Glasses

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Overview

1:11

Unpacking and Cage Changing Procedures

7:16

Housing

9:14

Diet

10:30

Environment

12:35

Applications

14:09

Summary

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