وقد حظي هذا العمل بدعم جزئي من منحة مقدمة من الصندوق من مؤسسة ميوتونيك ديستروفي (مدف-فف-2014-0013) ومنحة التنمية العلمية من جمعية القلب الأمريكية (16SDG29320001).

تم وضع ويلدتيب والفئران المعدلة وراثيا نيستين-غفب في منشأة الحيوان في جامعة مينيسوتا. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام الحيوان في جامعة مينيسوتا وكانت وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. 1. تشريح العضلات وحيدة الخلية العزلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران الكبار (6-10 أسابيع، على حد سواء الذكور والإناث) مع تريبروميثانول (250 ملغ / كلغ، والملكية الفكرية) وتعقيم الجلد البطن مع الايثانول 70٪. ملاحظة: تم استخدام تريبروميثانول هنا بدلا من الكيتامين للتخدير / القتل الرحيم، كما هو معروف الكيتامين للتفاعل مع مستقبلات نمدا، والتي من المحتمل أن يكون لها تأثير على الدراسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في موقف ضعيف واستخدام مشرط لجعل شق أفقي على الجلد في منطقة البطن. تقشر الجلد باليد، وسحب في الاتجاهات المعاكسة لفضح العضلات هيندليمب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جامعير العضلات من كلا هيندليمبس باستخدام ملقط ومقص. تخزينها في العقيمة الفوسفات مخزنة المالحة (بس) تستكمل مع 1٪ البنسلين الستربتومايسين (P / S) على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العضلات هيندليمب تشريح في برنامج تلفزيوني الجليد الباردة تستكمل مع 1٪ P / S مرتين ونقلها إلى العقيمة لوحة 10 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية من الأعصاب والأوعية الدموية، والنسيج الضام من العضلات باستخدام ملقط ومقص تحت المجهر تشريح في التكبير 2X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقطيع اللحم المفروم ثم يفرخ العضلات إلى قطع صغيرة (1-2 مم 3 ) باستخدام مقص وشفرات معقمة. إذا لزم الأمر، إضافة كمية صغيرة من دولبيكو تعديل النسر المتوسطة (دمم) لضمان أن العضلات لا تجف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كسر ميكانيكيا الأنسجة عن طريق بيبتينغ صعودا وهبوطا من خلال 10 مل ماصة المصلية 10 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حل الهضم الطازجة (دمم تستكمل مع 0.2٪ نوع 2 كولاجيناز) إلى الخليط. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة مع جينتله التحريض في 35 دورة / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تريتورات باستخدام إبرة 18 G لتجانس الخليط. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف ثم ريسوسبيند بيليه في 0.25٪ التربسين / إدتا. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. كرر الخطوة الطرد المركزي مرتين أكثر من مرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 مل من دمم تستكمل مع 20٪ مصل بقري الجنين (فبس) إلى الحل وأجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف و ريسوسبيند بيليه في الدم الحمراء خلية تحلل العازلة (155 ملي نه 4 كل ، 10 ملم خكو 3 ، و 0.1 ملي إدتا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف و ريسوسبيند بيليه في الفرز العازلة (20 ملي هيبيس، ودرجة الحموضة 7.0، 1 ملي إدتا، و 1٪ بسا في كا / مغ 2+ خالية من برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.0). تصفية الخليط من خلال مصفاة الخلية 40 ميكرون للحصول على تعليق خلية واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف و ريسوسبيند بيليه في 1 مل من فرز العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد العدد الخلايا مع عدادة الكريات وتمييع تعليق خلية واحدة إلى 5 × 10 6 / مل في فرز العازلة. </li></ol> 2. تلطيخ الخلية والفرز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الضوابط والعينة كما هو موضح في الجدول 1 . وصمة عار تعليق خلية واحدة مع الأجسام المضادة على الجليد لمدة 30 دقيقة، كما هو موضح في الجدول 1 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق وغسل الكريات مرتين مع الفرز العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة دابي إلى حلول خلية واحدة، كما هو مبين في الجدول 1. استخدام دكبي 5 ميكروغرام / مل (التركيز النهائي) للتحكم لون واحد دابي و 1 ميكروغرام / مل دابي لمراقبة PDGFRβ-بي-فمو والعينة. إبقاء جميع الأنابيب على الجليد في جميع أنحاء التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على فارز والبرمجيات. مسح وإدراج رقاقة الفرز 100 ميكرون عند المطالبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ الإعداد التلقائي ( أي محاذاة رقاقة، معايرة قطرة، معايرة تيار الجانب، وتأخير نوع كاليبراتيعلى) عن طريق تحميل الخرز الإعداد التلقائي عند المطالبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند اكتمال الإعداد التلقائي، انتقل إلى علامة التبويب &quot;التجربة&quot;، وانقر على &quot;جديد&quot;، ثم حدد &quot;النموذج الفارغ&quot; من &quot;النماذج العامة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمن &quot;إعدادات القياس&quot;، أدخل &quot;دابي&quot; ل &quot;FL1&quot; و &quot;نيستن-غفب&quot; ل &quot;FL2&quot; و &quot;PDGFRβ&quot; ل &quot;FL3.&quot; قم بإلغاء تحديد مربعات &quot;FL4&quot; - &quot;FL6&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد المربعات لتنشيط أجهزة الليزر 405 و 488 و 561 وانقر على &quot;إنشاء تجربة جديدة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الخيار &quot;بدء معالج التعويض&quot; واتبع برنامج &quot;معالج التعويض&quot; يطالب بإعداد التعويض. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل السيطرة غير ملوثين وانقر على &quot;ابدأ&quot;. انقر فوق &quot;إعدادات كاشف وعتبة&quot; وضبط كسب أجهزة الاستشعار من فسك و بسك كاشفات لوضع السكان على نطاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ميلاديفقط مستويات كسب قنوات FL1-FL3 مضان لوضع السكان السلبية على الجانب الأيسر من المدرجات التكرارية. انقر على زر &quot;تسجيل&quot; لتسجيل البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل واحد لون الضوابط واحدا تلو الآخر عند المطالبة. انقر فوق &quot;بدء وسجل&quot; لتسجيل البيانات. ضبط بوابات للسكان إيجابية على الرسم البياني. انقر فوق التالي.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتقل إلى &quot;حساب مصفوفة&quot; على علامة التبويب &quot;التعويض&quot; وانقر على &quot;حساب&quot; في لوحة &quot;حساب تعويضات&quot; لأداء التعويض. انقر فوق &quot;إنهاء&quot; للخروج من &quot;معالج التعويض&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل التحكم PDGFRβ-بي-فمو وانقر على &quot;ابدأ&quot;. رسم بوابة المضلع (بوابة A) حول الخلايا ذات الاهتمام تحت مؤامرة &quot;جميع الأحداث&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر نقرا مزدوجا داخل البوابة A لإنشاء مؤامرة الطفل. تغيير المحور Y إلى دابي ورسم بوابة المضلع (بوابة B) حول الخلايا الحية (دابي منخفضة ). انقر نقرا مزدوجا فوق iنزيد بوابة B لخلق مؤامرة الطفل. تغيير المحور السيني إلى فسك-H و Y- محور ل فسك-W ورسم بوابة المضلع (بوابة C) حول سينغليتس للقضاء على دوبلتس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر نقرا مزدوجا داخل البوابة C لإنشاء مؤامرة الطفل. تغيير المحور السيني إلى نستين-غفب و Y- محور ل PDGFRβ-بي. انقر على زر &quot;تسجيل&quot; لتسجيل البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل العينة وكرر الخطوات 2.11-2.12. بعد التسجيل، انقر على &quot;وقفة&quot; للحفاظ على العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد حدود النابضة ل PDGFRβ + وخلايا نستين-غفب + على أساس التحكم PDGFRβ-بي-فمو. رسم بوابات ل PDGFRβ + نستين-غفب - و PDGFRβ + السكان نيستين-غفب + . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت &quot;طريقة الفرز&quot;، حدد &quot;2-واي تيوبيس&quot; وتعيين &quot;PDGFRβ + نيستين-غفب - &quot; و &quot;PDGFRβ + نيستين-غفب + &quot; إلى أنابيب جمع اليسار واليمين، إعادةspectively. جبل الفرز العازلة مليئة 15 مل جمع الأنابيب على مرحلة جمع وانقر على زر &quot;تحميل جمع&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر &quot;استئناف&quot; للحفاظ على عينة تشغيل. انقر فوق &quot;بدء فرز&quot; لجمع PDGFRβ + نستين-غفب - (نوع I بيريسيتس) و PDGFRβ + نستين-غفب + (نوع إي بيريسيتس) الخلايا. </li></ol> 3. بعد فرز التحليلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي الخلايا فرزها في 500 x ج لمدة 5 دقائق، ريسوسبيند بيليه في 1 مل من وسط بيريسيت (انظر الجدول المواد )، والاعتماد على كثافة الخلايا باستخدام عدادة الكريات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نوع البذور الأول والنوع الثاني بيريسيتس على بولي-D- يسين (بدل) كوفرسليبس المغلفة في ~ 1 × 10 4 خلايا / سم 2 . تنمو في المتوسطة بيريسيت لمدة 3 أيام عند 37 درجة مئوية مع 5٪ كو 2 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم 3، وفحص التشكل بيريسيت (تحت المرحلة النقيض) والتعبير نيستين-غفب الذاتية باستخدام الصغرى الفلورسنتنطاق (الإثارة الليزر: 488 نانومتر، مرشح الإثارة: 470/40 نانومتر، وانبعاث مرشح: 515/30 نانومتر). التقاط الصور تحت هدف 20X (0.45 نا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال المتوسطة بيريسيت مع أديبوجينيك (الماوس مسك القاعدية المتوسطة + الملحق التحفيز أديبوجينيك) و ميوجينيك (دمم + 2٪ مصل الحصان) المتوسطة لبدء التمايز أديبوجينيك وميوجينيك، على التوالي، كما هو موضح سابقا 20 . تغيير المتوسطة كل 2-3 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الخلايا في يوم 17 (14 يوما بعد أديبوجينيك / ميوجينيك التمايز) في بارافورمالدهيد 4٪ (بفا) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ملاحظة: الحذر، بفا هو مادة مسرطنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء إمونوسيتوشيميستري ضد بيريليبين (علامة خلية شحمية) و S- ميوسين (ميوتوب ناضجة / ميوفيبر علامة)، كما هو موضح في المنشورات السابقة 19 ، 20 . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا الثابتة 3 مرات في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة العازلة حجب (برنامج تلفزيونيتكمل مع 5٪ مصل حمار، 3٪ بسا، و 0.3٪ تريتون X-100) واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخلايا مع المضادة للبيريليبين (2 ميكروغرام / مل) و / أو المضادة للميوسين (2 ميكروغرام / مل) الأجسام المضادة في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا 3 مرات في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخلايا مع اليكسا 555 حمار المضادة للأرنب (4 ميكروغرام / مل) و / أو اليكسا 555 حمار مكافحة الماوس (4 ميكروغرام / مل) الأجسام المضادة في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا 3 مرات في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الخلايا المناعية مع تصاعد المتوسطة التي تحتوي على دابي (انظر الجدول من المواد). دراسة بيريليبين و S- ميوسين التعبير باستخدام المجهر الفلورسنت (الإثارة الليزر: 543 نانومتر، 540/45 نانومتر الإثارة وانبعاث 600/50 نانومتر) والتقاط الصور تحت هدف 40X (0.60 نا). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Rennert, R. C., Sorkin, M., Garg, R. K., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+recruitment+after+injury:+lessons+for+regenerative+medicine.">Stem cell recruitment after injury: lessons for regenerative medicine.</a> Regenerative medicine. 7 (6), 833-850 (2012).</li><li>Sambasivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7-expressing+satellite+cells+are+indispensable+for+adult+skeletal+muscle+regeneration.">Pax7-expressing satellite cells are indispensable for adult skeletal muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3647-3656 (2011).</li><li>Relaix, F., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+cells+are+essential+for+skeletal+muscle+regeneration:+the+cell+on+the+edge+returns+centre+stage.">Satellite cells are essential for skeletal muscle regeneration: the cell on the edge returns centre stage.</a> Development. 139 (16), 2845-2856 (2012).</li><li>von Maltzahn, J., Jones, A. E., Parks, R. J., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+critical+for+the+normal+function+of+satellite+cells+in+adult+skeletal+muscle.">Pax7 is critical for the normal function of satellite cells in adult skeletal muscle.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (41), 16474-16479 (2013).</li><li>Lepper, C., Partridge, T. A., Fan, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+absolute+requirement+for+Pax7-positive+satellite+cells+in+acute+injury-induced+skeletal+muscle+regeneration.">An absolute requirement for Pax7-positive satellite cells in acute injury-induced skeletal muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3639-3646 (2011).</li><li>Kuang, S., Charge, S. B., Seale, P., Huh, M., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+Pax7+and+Pax3+in+adult+regenerative+myogenesis.">Distinct roles for Pax7 and Pax3 in adult regenerative myogenesis.</a> J Cell Biol. 172 (1), 103-113 (2006).</li><li>Murphy, M. M., Lawson, J. A., Mathew, S. J., Hutcheson, D. A., Kardon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+cells,+connective+tissue+fibroblasts+and+their+interactions+are+crucial+for+muscle+regeneration.">Satellite cells, connective tissue fibroblasts and their interactions are crucial for muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3625-3637 (2011).</li><li>Morgan, J. E., Pagel, C. N., Sherratt, T., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+persistence+and+migration+of+myogenic+cells+injected+into+pre-irradiated+muscles+of+mdx+mice.">Long-term persistence and migration of myogenic cells injected into pre-irradiated muscles of mdx mice.</a> J Neurol Sci. 115 (2), 191-200 (1993).</li><li>Beauchamp, J. R., Morgan, J. E., Pagel, C. N., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+myoblast+transplantation+reveal+a+discrete+minority+of+precursors+with+stem+cell-like+properties+as+the+myogenic+source.">Dynamics of myoblast transplantation reveal a discrete minority of precursors with stem cell-like properties as the myogenic source.</a> J Cell Biol. 144 (6), 1113-1122 (1999).</li><li>Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invited+review:+myoblast+transfer:+a+possible+therapy+for+inherited+myopathies.">Invited review: myoblast transfer: a possible therapy for inherited myopathies.</a> Muscle Nerve. 14 (3), 197-212 (1991).</li><li>Montarras, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration.">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309 (5743), 2064-2067 (2005).</li><li>Asakura, A., Seale, P., Girgis-Gabardo, A., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+specification+of+side+population+cells+in+skeletal+muscle.">Myogenic specification of side population cells in skeletal muscle.</a> J Cell Biol. 159 (1), 123-134 (2002).</li><li>Tamaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle-derived+CD34+/45-+and+CD34-/45-+stem+cells+are+situated+hierarchically+upstream+of+Pax7++cells.">Skeletal muscle-derived CD34+/45- and CD34-/45- stem cells are situated hierarchically upstream of Pax7+ cells.</a> Stem Cells Dev. 17 (4), 653-667 (2008).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+resident+in+postnatal+skeletal+muscle+differentiate+into+muscle+fibres+and+generate+satellite+cells.">Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells.</a> Nat Commun. 2, 499 (2011).</li><li>Mitchell, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+non-satellite+cell+muscle+resident+progenitor+during+postnatal+development.">Identification and characterization of a non-satellite cell muscle resident progenitor during postnatal development.</a> Nat Cell Biol. 12 (3), 257-266 (2010).</li><li>Pannerec, A., Formicola, L., Besson, V., Marazzi, G., Sassoon, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+skeletal+muscle+resident+progenitors+and+their+cell+fate+potentials.">Defining skeletal muscle resident progenitors and their cell fate potentials.</a> Development. 140 (14), 2879-2891 (2013).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+of+human+skeletal+muscle+are+myogenic+precursors+distinct+from+satellite+cells.">Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells.</a> Nat Cell Biol. 9 (3), 255-267 (2007).</li><li>Kostallari, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+in+the+myovascular+niche+promote+post-natal+myofiber+growth+and+satellite+cell+quiescence.">Pericytes in the myovascular niche promote post-natal myofiber growth and satellite cell quiescence.</a> Development. 142 (7), 1242-1253 (2015).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+pericytes+in+skeletal+muscle+regeneration+and+fat+accumulation.">Role of pericytes in skeletal muscle regeneration and fat accumulation.</a> Stem Cells Dev. 22 (16), 2298-2314 (2013).</li><li>Yao, Y., Norris, E. H., Mason, C. E., Strickland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+regulates+PDGFRbeta(+)+cell+stemness+and+muscle+development.">Laminin regulates PDGFRbeta(+) cell stemness and muscle development.</a> Nat Commun. 7, 11415 (2016).</li><li>Armulik, A., Genove, G., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes:+developmental,+physiological,+and+pathological+perspectives,+problems,+and+promises.">Pericytes: developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises.</a> Dev Cell. 21 (2), 193-215 (2011).</li><li>Dore-Duffy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes:+pluripotent+cells+of+the+blood+brain+barrier.">Pericytes: pluripotent cells of the blood brain barrier.</a> Curr Pharm Des. 14 (16), 1581-1593 (2008).</li><li>Dore-Duffy, P., Katychev, A., Wang, X., Van Buren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+microvascular+pericytes+exhibit+multipotential+stem+cell+activity.">CNS microvascular pericytes exhibit multipotential stem cell activity.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (5), 613-624 (2006).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+pericyte+subtypes+differ+in+their+differentiation+potential.">Skeletal muscle pericyte subtypes differ in their differentiation potential.</a> Stem Cell Res. 10 (1), 67-84 (2013).</li><li>Gautam, J., Nirwane, A., Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+differentially+regulates+the+stemness+of+type+I+and+type+II+pericytes.">Laminin differentially regulates the stemness of type I and type II pericytes.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 28 (2017).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes:+multitasking+cells+in+the+regeneration+of+injured,+diseased,+and+aged+skeletal+muscle.">Pericytes: multitasking cells in the regeneration of injured, diseased, and aged skeletal muscle.</a> Front Aging Neurosci. 6, 245 (2014).</li></ol>

جميع المؤلفين ليس لديهم تضارب في المصالح للكشف.

بيريسيتس متعددة الخلايا المحيطة بالأوعية 22 ، 23 تقع على السطح الشعري للشعيرات الدموية 21 ، 26 . في العضلات والهيكل العظمي، بيريسيتس هي قادرة على التفريق على طول مسارات أديبوجينيك و / أو عضلي 19 ، 20 ، 24 . كشفت الدراسات الحديثة اثنين من المجموعات الفرعية من بيريسيتس، مع التعبير علامة مختلفة وامتيازات متميزة التمايز 19 ، 24 ، 25 . النوع الأول (NG2 + نستين - ) بيريسيتس هي أديبوجينيك، في حين أن النوع الثاني (NG2 + نستين + ) بيريسيتس هي عضلية المنشأ. عزل هذه المجموعات السكانية في الدراسات المختبرية يتطلب NG2-دسرد و نستين-غفب خط الماوس المعدلة وراثيا مزدوجة. اعتماد هذه تنقيةبروتوكول على الفئران المعدلة وراثيا مزدوج يحد بشكل كبير من تطبيقه وبالتالي البحث في علم الأحياء من المجموعات السكانية الفرعية بيريسيت. يوضح هذا المقال فيديو طريقة بديلة لعزل النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس من العضلات والهيكل العظمي الماوس. هذه الطريقة الجديدة لا تزال تعتمد على تقنية القائمة على نظام مراقبة الأصول الميدانية لفصل الخلايا. ومع ذلك، بدلا من استخدام مضان المعدلة وراثيا NG2-دسرد، فإنه يستهدف إشارة PDGFR end الذاتية. ويستند هذا على ملاحظة أن التعبير NG2-دسرد يشارك في توطين مع PDGFRβ في العضلات والهيكل العظمي 19 . وبالمقارنة مع الطريقة الأصلية، وهذا البروتوكول لديه العديد من المزايا. أولا، فإنه لا يتطلب NG2-دسرد خلفية وراثية، على الرغم من أن خلفية نستين-غفب لا تزال هناك حاجة. ثانيا، بدلا من استهداف NG2، يستخدم هذا البروتوكول PDGFRβ، علامة تتميز جيدا مع التحقق من صحة والأجسام المضادة المتاحة تجاريا. ثالثا، فإنه يسمح لعزل في وقت واحد من بومن النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس. على سبيل المثال، PDGFRβ-بي + نستين-غفب - و PDGFRβ-بي + نستين-غفب + الخلايا المعزولة باستخدام هذا البروتوكول إثبات قدرات التمايز متميزة. على وجه التحديد، PDGFRβ-بي + نستين-غفب - ، ولكن ليس PDGFRβ-بي + نستين-غفب + ، تفرق الخلايا في الخلايا الشحمية في حالة أديبوجينيك، في حين PDGFRβ-بي + نيستين غفب + ، ولكن ليس PDGFRβ-بي + نيستين غفب - ، والخلايا تخضع التمايز عضلي تحت شرط عضلي المنشأ. هذه البيانات تتفق مع التقارير السابقة التي تبين أن NG2-دسرد + نيستين-غفب - الخلايا (نوع I بيريسيتس) هي أديبوجينيك و NG2-دسرد + الخلايا نيستين-غفب + (نوع إي بيريسيتس) هي عضلي 19 ، 24 ، مما يشير إلى أن PDGFR isolated معزولة -PE + نيستين-غفب - و PDGFRβ-بي + Nإستين-غفب + الخلايا هي في الواقع نوع I ونوع الثاني بيريسيتس، على التوالي. معا، تشير هذه النتائج إلى أن هذا البروتوكول الجديد يسمح لعزل سهلة نسبيا / تنقية من المجموعات السكانية بيراسيت من العضلات والهيكل العظمي الماوس، وربما الأنسجة الأخرى. وهذا من شأنه تعزيز الدراسات على بيراسيت البيولوجيا والترجمة العلاجية لمختلف الاضطرابات. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى وجود قيود على هذه الطريقة بسبب استخدام PDGFRβ. وقد تبين في دراسة سابقة أن PW1 + الخلايا الخلالية (بيكس) أيضا التعبير عن PDGFRβ 20 . لذلك، قد تحتوي PDGFRβ-بي + نيستين-غفب المعزولة - و PDGFRβ-بي + نيستين-غفب + على بيكس. ومع ذلك، فإن مساهمة هذه الجزر إلى التمايز بيراسيت محدودة، نظرا لأن بيريسيتس تفوق بيكس في العضلات والهيكل العظمي 20 وأن النوع الأول بيريسيتس لا تخضع ليأوجينيسيس 19 ، 25 . باستخدام هذه الطريقة، تم الحصول على النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس في عوائد 9.5٪ و 2.1٪ على التوالي. وكانت هذه الأرقام مماثلة للغلة المبلغ عنها من 2.8٪ و 3.4٪ على التوالي، في الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة 19 . قد يكون الاختلاف طفيف بسبب استراتيجيات التباعد مختلفة أو بروتوكولات الهضم. هذه النتائج تشير مرة أخرى إلى أن البروتوكول المقترح يمكن أن تستخدم لعزل الأنواع الفرعية من بيريسيتس من العضلات والهيكل العظمي. الخطوات الحاسمة من هذا البروتوكول تشمل النقاط التالية: (1) تأكد من أن عضلات الهيكل العظمي هي مفروم تماما وقادرة على المرور بسهولة من خلال ماصة 10 مل المصلية. كتل العضلات الكبيرة تتداخل مع الهضم الأنزيمي وتقلل إلى حد كبير الغلة. (2) استخدام حل كولاجيناز طازجة لعملية الهضم العضلات والسماح الإثارة لطيف (35 دورة / دقيقة) أثناء الحضانة. (3) الحفاظ علىالضوابط وعينة على الجليد في جميع أنحاء تلطيخ والفرز الخطوات. (4) استخدام ضوابط فمو لإعداد حدود النابضة. بالإضافة إلى القدرة على التمايز، اكتب الأول والنوع الثاني بيريسيتس أيضا تظهر مورفولوجيا مختلفة. على وجه التحديد، النوع الأول بيريسيتس لها أجسام الخلايا المستديرة، مع عمليات قصيرة ونوى كبيرة نسبيا. النوع الثاني بيريسيتس، من ناحية أخرى، وعادة ما يكون أجسام الخلايا الصغيرة، مع عمليات طويلة ورقيقة ونوى صغيرة. الاختلافات المورفولوجية تشير إلى أن النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس مختلفة جوهريا، وهو ما يتفق مع طبيعة غير متجانسة من بيريسيتس 21 . ما الأسباب / يحافظ على الفرق بين النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس، فضلا عن الآليات الجزيئية الكامنة، لا تزال غير واضحة وتتطلب المزيد من التحقيق. هذا البروتوكول العزلة سوف تساعد على الإجابة على هذه الأسئلة الهامة.

ضمور العضلات هو اضطراب العضلات التنكسية التي ليس لديها علاجات فعالة حتى الآن. وقد كان تطوير العلاجات التي تعزز تجديد الأنسجة دائما ذات فائدة كبيرة. الأنسجة تجديد وإصلاح بعد الضرر تعتمد على الخلايا الجذعية المقيمين / الخلايا السلف 1 . وتلتزم الخلايا الأقمار الصناعية الخلايا السلائف عضلي التي تسهم في تجديد العضلات 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 . إلا أن استخدامها السريري يعوقه هجرة محدودة ومعدل البقاء على قيد الحياة بعد الحقن، فضلا عن انخفاض القدرة على التمايز بعد تضخيم في المختبر 8 ، 9 ، 10 ، 11 . بالإضافة إلى ساتليالخلايا التائية، والعضلات الهيكل العظمي تحتوي أيضا على العديد من السكان الخلايا الأخرى مع إمكانات عضلية 12 ، 13 ، 14 ، 15 ، 16 ، مثل الصفائح الدموية المستمدة من عامل النمو المستقبلة بيتا (PDGFRβ) الخلايا الخلالية إيجابية. هناك أدلة تبين أن خلايا PDGFRβ + المشتقة من العضلات هي قادرة على التفريق في الخلايا العضلية وتحسين أمراض العضلات وظيفة 14 ، 17 ، 18 ، 19 ، 20 . PDGFRβ في الغالب تسميات بيريسيتس 21 ، والتي هي خلايا حول الأوعية مع تعدد القدرات 22 ، 23 . بالإضافة إلى PDGFRβ، وتستخدم أيضا العديد من علامات أخرى، بما في ذلك الخلايا العصبية 2 (NG2) و CD146، ل iدنتيفي بيريسيتس 21 . ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن أيا من هذه العلامات هو بيريسيت محددة 21 . كشفت الدراسات الحديثة نوعين فرعيين من بيريسيتس العضلات، ودعا النوع الأول والنوع الثاني، والتي تعبر عن علامات الجزيئية المختلفة وتنفيذ وظائف متميزة 19 ، 24 ، 25 . بيوشيميكالي، نوع I بيريسيتس هي NG2 + نيستين - ، في حين أن النوع الثاني بيريسيتس هي NG2 + نيستين + 19 ، 24 . وظيفيا، النوع الأول بيريسيتس يمكن أن يخضع التمايز أديبوجينيك، والمساهمة في تراكم الدهون و / أو التليف، في حين أن النوع الثاني بيريسيتس يمكن التفريق على طول مسار عضلي، والمساهمة في تجديد العضلات 19 ، 24 ، 25 . وتظهر هذه النتائج ما يلي: (1) النوع الأول بيريسيتس قد به المستهدفة في علاج الاضطرابات التنكسية الدهنية / التليف، و (2) النوع الثاني بيريسيتس لديها إمكانات علاجية كبيرة لضمور العضلات. مزيد من التحقيق وتوصيف هذه المجموعات السكانية تتطلب بروتوكول العزل التي تمكن من فصل النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس على مستوى عال من النقاء. حاليا، ويعتمد على العزلة من المجموعات السكانية بيريسيت على NG2-دسرد و Nestin- غفب الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة 19 ، 24 . توافر الفئران NG2-دسرد ونوعية معظم الأجسام المضادة NG2 تحد من الاستخدام الواسع النطاق لهذه الطريقة. وبالنظر إلى أن جميع NG2 + بيريسيتس أيضا التعبير عن PDGFRβ في العضلات والهيكل العظمي 19 و 20 و 24 ، ونحن نفترض أن NG2 يمكن الاستعاضة عنها PDGFRβ لعزل بيريسيتس والقطاعات السكانية الفرعية. يصف هذا العمل بروتوكول يستند إلى نظام مراقبة الأصول الميدانيةيستخدم تلطيخ PDGFR and وإشارة نيستن-غفب. هذه الطريقة أقل تطلبا للمحققين بسبب: (1) أنها لا تتطلب خلفية NG2-دسرد و (2) أنها تستخدم تجاريا PDGFR available المتاحة الأجسام المضادة، والتي تتميز جيدا. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يتيح العزلة في وقت واحد من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس في نقاء عالية، مما يسمح لمزيد من التحقيق في البيولوجيا والإمكانات العلاجية لهذه المجموعات السكانية بيراسيت. بعد تنقية، يمكن زرع هذه الخلايا في الثقافة، ويمكن تصور مورفولوجيس بهم. ويظهر هذا العمل أيضا أن النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس معزولة باستخدام هذه الطريقة، مثل تلك المنقى من الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة، هي أديبوجينيك و ميوجينيك، على التوالي.

<table><tbody><tr><td>Cell Sorter</td><td>Sony</td><td>SH800</td><td></td></tr><tr><td>Automatic Setup Beads</td><td>Sony</td><td>LE-B3001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11995</td><td></td></tr><tr><td>Avertin&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td></td></tr><tr><td>Pericyte Growth Medium</td><td>ScienCell</td><td>1201</td><td></td></tr><tr><td>MSC Basal Medium (Mouse)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>5501</td><td></td></tr><tr><td>Adipogenic Stimulatory Supplement (Mouse)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>5503</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>16000</td><td></td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Sigma</td><td>H1270</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 2</td><td>Worthington</td><td>LS004176</td><td></td></tr><tr><td>0.25% Trypsin/EDTA&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>PDL</td><td>Sigma</td><td>P6407</td><td></td></tr><tr><td>PDGFR&amp;beta;-PE Antibody</td><td>eBioscience</td><td>12-1402</td><td></td></tr><tr><td>Perilipin Antibody</td><td>Sigma</td><td>P1998</td><td></td></tr><tr><td>S-Myosin Antibody</td><td>DSHB</td><td>MF-20</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 555-anti-rabbit antibody&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-31572</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 555-anti-mouse antibody</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-31570</td><td></td></tr><tr><td>Mounting Medium with DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>BP120</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A2058</td><td></td></tr><tr><td>NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;Cl</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661</td><td></td></tr><tr><td>KHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P184</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>18 G Needles</td><td>BD</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Serological Pipette</td><td>BD</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of type i and type ii pericytes from mouse skeletal muscles

بيريسيتس هي الخلايا متعددة الأوعية المحيطة بالأوعية التي تظهر عدم التجانس في أجهزة مختلفة أو حتى داخل نفس الأنسجة. في العضلات والهيكل العظمي، وهناك ما لا يقل عن اثنين من المجموعات السكانية بيريسيت (تسمى النوع الأول والنوع الثاني)، والتي تعبر عن علامات الجزيئية المختلفة ولها قدرات التمايز متميزة. باستخدام NG2-دسرد و نستين-غفب الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة، نوع I (NG2-دسرد + نستين-غفب) والنوع الثاني (NG2-دسرد + نستين-غفب + ) بيريسيتس تم عزلها بنجاح. ومع ذلك، فإن توافر هذه الفئران المعدلة وراثيا المزدوج يمنع الاستخدام الواسع النطاق لهذه الطريقة تنقية. يصف هذا العمل بروتوكول بديل يسمح لعزل سهلة ومتزامنة من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس من العضلات والهيكل العظمي. يستخدم هذا البروتوكول تقنية الفلورسنت تنشيط الفرز (فاكس) ويستهدف PDGFRβ، بدلا من NG2، جنبا إلى جنب مع إشارة نستن غفب. بعد العزلة، اكتب الأول و تيبي بيريتسيتس الثاني تظهر مورفولوجيز متميزة. وبالإضافة إلى ذلك، النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس معزولة مع هذه الطريقة الجديدة، مثل تلك المعزولة من الفئران المعدلة وراثيا مزدوجة، هي أديبوجينيك و ميوجينيك، على التوالي. وتشير هذه النتائج إلى أن هذا البروتوكول يمكن أن تستخدم لعزل المجموعات السكانية بيراسيت من العضلات والهيكل العظمي وربما من أنسجة أخرى.

يتم تصحيح المعلمات فاكس، بما في ذلك كثافة الليزر وتعويض القناة، استنادا إلى نتائج التحكم غير ملوثين والضوابط لون واحد. يتم استخدام التحكم PDGFRβ-بي-فمو لضبط التباعد للسكان PDGFRβ-بي + ( الشكل 1A ). بين PDGFRβ-بي - الخلايا، وهما السكان التي تمثل نيستين غفب + و نستين-غفب - الخلايا بشكل واضح ( الشكل 1A ). يتم تعيين حدود التباعد ل PDGFRβ-بي + نستين-غفب + و PDGFRβ-بي + نستين-غفب - السكان على أساس النابضة ل PDGFRβ-بي + و نستين-غفب + ( الشكل 1A ). وتستخدم هذه الحدود لتحديد وفرز PDGFRβ-بي + نستين-غفب + (النوع الثاني بيريسيتس) و PDGFRβ-بي + نستين-غفب - (نوع I بيريسيتإس) الخلايا من العينة ( الشكل 1B ). بدغفرβ-بي + نستين-غفب - و PDGFRβ-بي + نستين-غفب + الخلايا تمثل 9.5٪ و 2.1٪ من إجمالي الخلايا في حل خلية واحدة، على التوالي. فاكس معزولة من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس تظهر الاختلافات المورفولوجية بعد ثلاثة أيام في الثقافة. نوع I بيريسيتس عرض التشكل الأميبايد، مع الهيئات الخلية مستديرة والعمليات القصيرة ( الشكل 2 ). النوع الثاني بيريسيتس، ومع ذلك، تظهر التشكل التشعب، وتتميز أجسام الخلايا الصغيرة وطويلة، والعمليات رقيقة ( الشكل 2 ). في هذا الوقت، تبقى معظم بيريسيتس من النوع الثاني كما نيستين-غفب + ، في حين أن النوع الأول بيريسيتس هي نيستين-غفب - ( الشكل 2 ). وبالإضافة إلى ذلك، اكتب الأول، ولكن ليس من النوع الثاني، بيريسيتيس التفريق في الشحميات معربا عن بيريليبين بعد 14 يوما في المتوسطة أديبوجينيك ( الشكل 3 ). النوع الثاني، ولكن ليس اكتب الأول، بيريسيتس التفريق في S- ميوسين معربا عن ميوتوبيس بعد 14 يوما في المتوسطة عضلي ( الشكل 4 ). هذه النتائج تشير بقوة إلى أن النوع الأول بيريسيتس هي أديبوجينيك، في حين أن النوع الثاني بيريسيتس هي عضلي. <img alt="شكل 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55904/55904fig1.jpg" /> الشكل 1 : حدود النابضة والفرز التمثيلي. ( A ) مؤامرة الفلورسنت للسيطرة PDGFRβ-بي-فمو، مما يدل على PDGFRβ-بي + نستين-غفب - و PDGFRβ-بي + نيستين غفب + حدود الانطلاق. ( B ) مؤامرة ممثل الفلورسنت من العينة التي تبين توزيع PDGFRβ-بي + نستين-غفب <s&gt; - (نوع I بيريسيتس) و PDGFRβ-بي + نيستين-غفب + (نوع إي بيريسيتس) الخلايا. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55904/55904fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55904/55904fig2.jpg" /> الشكل 2: مورفولوجيا والتعبير نيستن غفب في نوع الفرز الأول والنوع الثاني بيريسيتس. تم فرز النوعين الأول والثاني من نوع بيريسيتس على كوفرسليبس ونمت في وسط بيريسيت لمدة 3 أيام. نوع I بيريسيتس أظهرت أجسام الخلايا المستديرة، مع عمليات قصيرة، ولا إشارة غفب الذاتية تحت المجهر الفلورسنت (الإثارة ليزر: 488 نانومتر؛ الإثارة والانبعاثات مرشحات: 470/40 نانومتر و 515/30 نانومتر، على التوالي). النوع الثاني بيريسيتس أظهرت الهيئات خلية صغيرة، مع عمليات طويلة ورقيقة، وإشارة غفب الذاتية قوية تحتالمجهر الفلورسنت تحت نفس الإعدادات. شريط مقياس = 100 ميكرون <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55904/55904fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55904/55904fig3.jpg" /> الشكل 3: التمايز أديبوجينيك من نوع الفرز الأول والنوع الثاني بيريسيتس. تمت زراعة النوع الأول من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس في وسط بيريسيت لمدة 3 أيام. ثم كانت متباينة في وسط أديبوجينيك لمدة 14 يوما. تم إصلاح الخلايا و إمونوستيند مع الأجسام المضادة المضادة بيريليبين تليها Alexa555 حمار المضادة للأرنب الأجسام المضادة. وأظهرت إمونوسيتوشيميستري أن النوع الأول، ولكن ليس من النوع الثاني، بيريتسيتس أعرب عن علامة بيليليبين (خلية حمراء) تحت المجهر الفلورسنت (الإثارة الليزر: 543 نانومتر؛ الإثارة والانبعاثات مرشحات: 540/45 نانومتر و 600/50 نانومتر، واحترام<html> ively). مقياس شريط = 50 ميكرون <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55904/55904fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55904/55904fig4.jpg" /> الشكل 4 : التمايز العضلي من نوع الفرز الأول والنوع الثاني بيريسيتس. تم فرز النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس في وسط بيريسيت لمدة 3 أيام، ثم تم التمييز في المتوسطة عضلي لمدة 14 يوما. تم إصلاح الخلايا و إمونوستيند المضادة لل S- ميوسين الأجسام المضادة و Alexa555 حمار المضادة للماوس الأجسام المضادة. وأظهرت إمونوسيتوشيميستري أن النوع الثاني، ولكن ليس اكتب الأول، أعرب بيريسيتس ناضجة ميوتوب / ميوفيبر علامة S- ميوسين (الأحمر) تحت المجهر الفلورسنت (الإثارة الليزر: 543 نانومتر؛ الإثارة والانبعاثات مرشحات: 540/45 نانومتر و 600/50 نانومتر ، على التوالي). شريط مقياس = 50 ميكرون//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55904/55904fig4large.jpg &quot;تارجيت =&quot; _ بلانك &quot;&gt; الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> أنابيب </td><td> تلطيخ </td></tr><tr><td> السيطرة غير ملوثين </td><td> تعليق خلية واحدة من الفئران ويلديب </td></tr><tr><td> دابي تحكم لون واحد (استبعاد الخلايا الميتة) </td><td> تعليق خلية واحدة من الفئران ويلديب + دابي (5 ميكروغرام / مل) </td></tr><tr><td> غفب التحكم لون واحد </td><td> تعليق خلية واحدة من الفئران نستين-غفب </td></tr><tr><td> بي واحد-- اللون السيطرة </td><td> أونيباد إبيدس + PDGFRβ-بي الأجسام المضادة (4 ميكروغرام / مل) </td></tr><tr><td> بي-فمو السيطرة </td><td> تعليق خلية واحدة من الفئران نيستين-غفب + دابي (1 ميكروغرام / مل) </td></tr><tr><td> عينة </td><td> تعليق خلية واحدة من الفئران نستين-غفب + PDGFRβ-بي الأجسام المضادة (4 ميكروغرام / مل) +دابي (1 ميكروغرام / مل) </td></tr></tbody></table> الجدول 1: بروتوكول تلطيخ للضوابط لون واحد، ومراقبة PDGFRβ-بي-فمو، وعينة العضلات.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Type I and Type II Pericytes from Mouse Skeletal Muscles at JoVE.com

Isolation of Type I and Type II Pericytes from Mouse Skeletal Muscles

يصف هذا العمل بروتوكول يستند إلى فاكس التي تسمح لعزل سهلة ومتزامنة من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس من العضلات والهيكل العظمي.

عزل من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس من عضلات الماوس الهيكل العظمي

Pericytes are perivascular multipotent cells that show heterogeneity in different organs or even within the same tissue. In skeletal muscles, there are at ...

isolation-of-type-i-and-type-ii-pericytes-from-mouse-skeletal-muscles

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

9.1K Views.  University of Minnesota.  يصف هذا العمل بروتوكول يستند إلى فاكس التي تسمح لعزل سهلة ومتزامنة من النوع الأول والنوع الثاني بيريسيتس من العضلات والهيكل العظمي. 

Video: Isolation of Type I and Type II Pericytes from Mouse Skeletal Muscles

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated from human muscle biopsy samples using enzymatic digestion and their myogenic properties studied in culture. Quantitatively, the two main adherent cell types obtained from enzymatic digestion are: (i) the satellite cells (termed myogenic cells or muscle precursor cells), identified initially as CD56+ and later as CD56+/desmin+ cells and (ii) muscle-derived fibroblasts, identified as CD56&#8211; and TE-7+. Fibroblasts proliferate very efficiently in culture and in mixed cell populations these cells may overrun myogenic cells to dominate the culture. The isolation and purification of different cell types from human muscle is thus an important methodological consideration when trying to investigate the innate behavior of either cell type in culture. Here we describe a system of sorting based on the gentle enzymatic digestion of cells using collagenase and dispase followed by magnetic activated cell sorting (MACS) which gives both a high purity (&#62;95% myogenic cells) and good yield (~2.8 x 106 &#177; 8.87 x 105 cells/g tissue after 7 days in vitro) for experiments in culture. This approach is based on incubating the mixed muscle-derived cell population with magnetic microbeads beads conjugated to an antibody against CD56 and then passing cells though a magnetic field. CD56+ cells bound to microbeads are retained by the field whereas CD56&#8211; cells pass unimpeded through the column. Cell suspensions from any stage of the sorting process can be plated and cultured. Following a given intervention, cell morphology, and the expression and localization of proteins including nuclear transcription factors can be quantified using immunofluorescent labeling with specific antibodies and an image processing and analysis package.

The main adherent cell types derived from human muscle are myogenic cells and fibroblasts. Here, cell populations are enriched using magnetic-activated cell sorting based on the CD56 antigen. Subsequent immunolabelling with specific antibodies and use of image analysis techniques allows quantification of cytoplasmic and nuclear characteristics in individual cells.

العزلة والكمية Immunocytochemical توصيف الخلايا عضلي الابتدائية والخلايا الليفية من العضلات الهيكلية البشرية

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to differentiate into later stages of muscle development. The protocol provided here describes a robust method for the isolation and culture of a highly proliferative population of myoblast cells from young adult mouse skeletal muscle explants. These cells are useful for the study of the metabolic properties of skeletal muscle of different mouse models, as well as in other downstream applications such as transfection with exogenous DNA or transduction with viral expression vectors. The level of differentiation and metabolic profile of these cells depends on the length of exposure, and composition of the media used to induce myoblast differentiation. These methods provide a robust system for the study of mouse muscle cell metabolism ex vivo. Importantly, unlike in vivo models, the methods described here provide a cell population that can be expanded and studied with high levels of reproducibility.

Myoblasts are proliferating precursor cells that differentiate to form polynucleated myotubes and eventually skeletal muscle myofibers. Here, we present a protocol for efficient isolation and culture of primary myoblasts from young adult mouse skeletal muscles. The method enables molecular, genetic, and metabolic studies of muscle cells in culture.

العزلة والتمايز من المقاطع الاساسيه من الماوس الهيكل العظمي العضلات الشرح

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal muscles regulating the exchange of fluids and nutrients as well as the immune response against infectious agents by controlling immune cell migration. For these functions, MMEC form a functional &#34;myovascular unit&#34; (MVU), with further cell types, such as fibroblasts, pericytes and skeletal muscle cells. Consequently, a dysfunction of MMEC and therefore the MVU contributes to a vast variety of myopathies. However, regulatory mechanisms of MMEC in health and disease remain insufficiently understood and their elucidation precedes more specific treatments for myopathies. The isolation and in-depth investigation of primary MMEC functions in the context of the MVU might facilitate a better understanding of these processes.
This article provides a protocol to isolate primary murine MMEC of the skeletal muscle by mechanical and enzymatic dissociation including purification and culture maintenance steps.

Microvascular endothelial cells of skeletal muscles (MMEC) shape the inner wall of muscle capillaries and regulate both, exchange of fluids/molecules and migration of (immune) cells between muscle tissue and blood. Isolation of primary murine MMEC, as described here, enables comprehensive in vitro investigations of the &#34;myovascular unit&#34;.

عزل خلايا بطانية Microvascular الابتدائي مورين الهيكل العظمى والعضلات

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Neuroscience

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Muscle regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite cells. Satellite cells are defined by their position between the basal lamina and the sarcolemma of each myofiber. Current knowledge of their behavior heavily relies on the use of the single myofiber isolation protocol. In 1985, Bischoff described a protocol to isolate single live fibers from the Flexor Digitorum Brevis (FDB) of adult rats with the goal to create an in vitro system in which the physical association between the myofiber and its stem cells is preserved 1. In 1995, Rosenblattmodified the Bischoff protocol such that myofibers are singly picked and handled separately after collagenase digestion instead of being isolated by gravity sedimentation 2, 3. The Rosenblatt or Bischoff protocol has since been adapted to different muscles, age or conditions 3-6. The single myofiber isolation technique is an indispensable tool due its unique advantages. First, in the single myofiber protocol, satellite cells are maintained beneath the basal lamina. This is a unique feature of the protocol as other techniques such as Fluorescence Activated Cell Sorting require chemical and mechanical tissue dissociation 7. Although the myofiber culture system cannot substitute for in vivo studies, it does offer an excellent platform to address relevant biological properties of muscle stem cells. Single myofibers can be cultured in standard plating conditions or in floating conditions. Satellite cells on floating myofibers are subjected to virtually no other influence than the myofiber environment. Substrate stiffness and coating have been shown to influence satellite cells' ability to regenerate muscles 8, 9 so being able to control each of these factors independently allows discrimination between niche-dependent and -independent responses. Different concentrations of serum have also been shown to have an effect on the transition from quiescence to activation. To preserve the quiescence state of its associated satellite cells, fibers should be kept in low serum medium 1-3. This is particularly useful when studying genes involved in the quiescence state. In serum rich medium, satellite cells quickly activate, proliferate, migrate and differentiate, thus mimicking the in vivo regenerative process 1-3. The system can be used to perform a variety of assays such as the testing of chemical inhibitors; ectopic expression of genes by virus delivery; oligonucleotide based gene knock-down or live imaging. This video article describes the protocol currently used in our laboratory to isolate single myofibers from the Extensor Digitorum Longus (EDL) muscle of adult mice (6-8 weeks old).

Isolation and culture of myofibers is the gold standard in vitro system to study the transition of satellite cells through quiescence, activation and differentiation. Importantly, the single myofiber culture system preserves the myofiber/stem cell association, which is an essential component of the muscle stem cell niche.

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Biology

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal nuclei in muscle fibers. In adult muscle, satellite cells are normally mitotically quiescent. Following injury, however, satellite cells initiate cellular proliferation to produce myoblasts, their progenies, to mediate the regeneration of muscle. Transplantation of satellite cell-derived myoblasts has been widely studied as a possible therapy for several regenerative diseases including muscular dystrophy, heart failure, and urological dysfunction. Myoblast transplantation into dystrophic skeletal muscle, infarcted heart, and dysfunctioning urinary ducts has shown that engrafted myoblasts can differentiate into muscle fibers in the host tissues and display partial functional improvement in these diseases. Therefore, the development of efficient purification methods of quiescent satellite cells from skeletal muscle, as well as the establishment of satellite cell-derived myoblast cultures and transplantation methods for myoblasts, are essential for understanding the molecular mechanisms behind satellite cell self-renewal, activation, and differentiation. Additionally, the development of cell-based therapies for muscular dystrophy and other regenerative diseases are also dependent upon these factors.

However, current prospective purification methods of quiescent satellite cells require the use of expensive fluorescence-activated cell sorting (FACS) machines. Here, we present a new method for the rapid, economical, and reliable purification of quiescent satellite cells from adult mouse skeletal muscle by enzymatic dissociation followed by magnetic-activated cell sorting (MACS). Following isolation of pure quiescent satellite cells, these cells can be cultured to obtain large numbers of myoblasts after several passages. These freshly isolated quiescent satellite cells or ex vivo expanded myoblasts can be transplanted into cardiotoxin (CTX)-induced regenerating mouse skeletal muscle to examine the contribution of donor-derived cells to regenerating muscle fibers, as well as to satellite cell compartments for the examination of self-renewal activities.

The isolation and culture of a pure population of quiescent satellite cells, a muscle stem cell population, is essential to the understanding of muscle stem cell biology and regeneration, as well as stem cell transplantation for therapies in muscular dystrophy and other degenerative diseases.&#160;

العزلة والثقافة، وزرع خلايا العضلات الأقمار الصناعية

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling pathways involved in vascular smooth muscle contraction in PASMC from fetal sheep. While sheep make an excellent model of term pulmonary hypertension, they are very expensive and lack the advantage of genetic manipulation found in mice. Conversely, the inability to isolate PASMC from mice was a significant limitation of that system. Here we described the isolation of primary cultures of mouse PASMC from P7, P14, and P21 mice using a variation of the previously described technique of Marshall et al.26 that was previously used to isolate rat PASMC. These murine PASMC represent a novel tool for the study of signaling pathways in the neonatal period. Briefly, a slurry of 0.5% (w/v) agarose + 0.5% iron particles in M199 media is infused into the pulmonary vascular bed via the right ventricle (RV). The iron particles are 0.2 &#956;M in diameter and cannot pass through the pulmonary capillary bed. Thus, the iron lodges in the small pulmonary arteries (PA). The lungs are inflated with agarose, removed and dissociated. The iron-containing vessels are pulled down with a magnet. After collagenase (80 U/ml) treatment and further dissociation, the vessels are put into a tissue culture dish in M199 media containing 20% fetal bovine serum (FBS), and antibiotics (M199 complete media) to allow cell migration onto the culture dish. This initial plate of cells is a 50-50 mixture of fibroblasts and PASMC. Thus, the pull down procedure is repeated multiple times to achieve a more pure PASMC population and remove any residual iron. Smooth muscle cell identity is confirmed by immunostaining for smooth muscle myosin and desmin.

We have developed a novel and reproducible technique to isolate primary cultures of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) from mice as young as P7, thereby allowing better study of the signaling pathways involved in neonatal smooth muscle cell contraction and relaxation.

عزل الشريان الرئوي خلايا العضلات الملساء من الفئران حديثي الولادة

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Isolation and Purification of Murine Cardiac Pericytes

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier integrity. However, their tissue-specific functions in the heart are not well understood. Moreover, there is currently no protocol utilizing readily accessible materials to isolate and purify pericytes of cardiac origin. Our protocol focuses on using the widely used mammalian model, the mouse, as our source of cells. Using the enzymatic digestion and mechanical dissociation of heart tissue, we obtained a crude cell mixture that was further purified by fluorescence activating cell sorting (FACS) by a plethora of markers. Because there is no single unequivocal marker for pericytes, we gated for cells that were CD31-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+. Following purification, these primary cells were cultured and passaged multiple times without any changes in morphology and marker expression. With the ability to regularly obtain primary murine cardiac pericytes using our protocol, we hope to further understand the role of pericytes in cardiovascular physiology and their therapeutic potential.

We have optimized a protocol to isolate and purify murine cardiac pericytes for basic research and investigation of their biology and therapeutic potential.

عزل وتنقية البيريكيتالقلبي ة المورين

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier ...

Medicine

Single Myofiber Isolation and Culture from a Murine Model of Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy in Early Post-Natal Development

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate filament proteins that sustain the nuclear envelope and the components of the nucleoplasm. We recently reported that muscle wasting in EDMD can be ascribed to intrinsic epigenetic dysfunctions affecting muscle (satellite) stem cells regenerative capacity. Isolation and culture of single myofibers is one of the most physiological ex-vivo approaches to monitor satellite cells behavior within their niche, as they remain between the basal lamina surrounding the fiber and the sarcolemma. Therefore, it represents an invaluable experimental paradigm to study satellite cells from a variety of murine models. Here, we describe a re-adapted method to isolate intact and viable single myofibers from post-natal hindlimb muscles (Tibialis Anterior, Extensor Digitorum Longus, Gastrocnemius and Soleus). Following this protocol, we were able to study satellite cells from Lamin &#916;8-11 -/- mice, a severe EDMD murine model, at only 19 days after birth.
We detail the isolation procedure, as well as the culture conditions for obtaining a good amount of myofibers and their associated satellite-cells-derived progeny. When cultured in growth-factors rich medium, satellite cells derived from wild type mice activate, proliferate, and eventually differentiate or undergo self-renewal. In homozygous Lamin &#916;8-11 -/- mutant mice these capabilities are severely impaired.
This technique, if strictly followed, allows to study all processes linked to the myofiber-associated satellite cell even in early post-natal developmental stages and in fragile muscles.

Here, we propose a method to efficiently obtain single muscle fibers at early post-natal developmental stages from homozygous mutant Lamin &#916;8-11 mouse model, a very severe model for Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD).

عزلة وثقافة ميفيبر واحدة من نموذج مورين من ضمور العضلات إيمري-دريفوس في وقت مبكر بعد الولادة

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate ...

A High Output Method to Isolate Cerebral Pericytes from Mouse

In recent years, cerebral pericytes have become the focus of extensive research in vascular biology and pathology. The importance of pericytes in blood brain barrier formation and physiology is now demonstrated but its molecular basis remains largely unknown. As the pathophysiological role of cerebral pericytes in neurological disorders is intriguing and of great importance, the in vitro models are not only sufficiently appropriate but also able to incorporate different techniques for these studies. Several methods have been proposed as in vitro models for the extraction of cerebral pericytes, although an antibiotic-free protocol with high output is desirable. Most importantly, a method that has increased output per extraction reduces the usage of more animals.
Here, we propose a simple and efficient method for extracting cerebral pericytes with sufficiently high output. The mouse brain tissue homogenate is mixed with a BSA-dextran solution for the separation of the tissue debris and microvascular pellet. We propose a three-step separation followed by filtration to obtain a microvessel rich filtrate. With this method, the quantity of microvascular fragments obtained from 10 mice is sufficient to seed 9 wells (9.6 cm2 each) of a 6-well plate. Most interestingly with this protocol, the user can obtain 27 pericyte rich wells (9.6 cm2 each) in passage 2. The purity of the pericyte cultures are confirmed with the expression of classical pericyte markers: NG2, PDGFR-&#946; and CD146. This method demonstrates an efficient and feasible in vitro tool for physiological and pathophysiological studies on pericytes.

We present a protocol for the extraction of murine cerebral pericytes. Based on an antibiotic-free enrichment oriented pericyte extraction, this protocol is a valuable tool for in vitro studies providing high purity and high yield, thus decreasing the number of experimental animals used.

طريقه إخراج عاليه لعزل Pericytes الدماغي من الماوس

In recent years, cerebral pericytes have become the focus of extensive research in vascular biology and pathology. The importance of pericytes in blood ...

Isolation of Quiescent Stem Cell Populations from Individual Skeletal Muscles

Skeletal muscle harbors distinct populations of adult stem cells that contribute to the homeostasis and repair of the tissue. Skeletal muscle stem cells (MuSCs) have the ability to make new muscle, whereas fibro-adipogenic progenitors (FAPs) contribute to stromal supporting tissues and have the ability to make fibroblasts and adipocytes. Both MuSCs and FAPs reside in a state of prolonged reversible cell cycle exit, called quiescence. The quiescent state is key to their function. Quiescent stem cells are commonly purified from multiple muscle tissues pooled together in a single sample. However, recent studies have revealed distinct differences in the molecular profiles and quiescence depth of MuSCs isolated from different muscles. The present protocol describes the isolation and study of MuSCs and FAPs from individual skeletal muscles and presents strategies to perform molecular analysis of stem cell activation. It details how to isolate and digest muscles of different developmental origin, thicknesses, and functions, such as the diaphragm, triceps, gracilis, tibialis anterior (TA), gastrocnemius (GA), soleus, extensor digitorum longus (EDL), and the masseter muscles. MuSCs and FAPs are purified by fluorescence-activated cell sorting (FACS) and analyzed by immunofluorescence staining and 5-ethynyl-2&#180;-deoxyuridine (EdU) incorporation assay.

This protocol describes the isolation of muscle stem cells and fibro-adipogenic progenitors from individual skeletal muscles in mice. The protocol involves single muscle dissection, stem cell isolation by fluorescence activated cell sorting, purity assessment by immunofluorescence staining, and quantitative measurement of S-phase entry by 5-ethynyl-2&#180;-deoxyuridine incorporation assay.

عزل مجموعات الخلايا الجذعية الهادئة عن العضلات الهيكلية الفردية

Skeletal muscle harbors distinct populations of adult stem cells that contribute to the homeostasis and repair of the tissue. Skeletal muscle stem cells ...