Method Article
يسمح الفحص المجهري لتشتت رامان المحفز (SRS) بالتصوير الخالي من الملصقات للجزيئات الحيوية بناء على اهتزازها الجوهري لروابط كيميائية محددة. في هذا البروتوكول ، يتم وصف الإعداد الفعال لمجهر SRS المتكامل والمجهر الفلوري ثنائي الفوتون لتصور الهياكل الخلوية في الحبل الشوكي للفئران الحية.
يتيح الفحص المجهري لتشتت رامان المحفز (SRS) التصوير الخالي من الملصقات للأنسجة البيولوجية في بيئتها الدقيقة الطبيعية استنادا إلى الاهتزاز الجزيئي الجوهري ، وبالتالي توفير أداة مثالية لدراسة العمليات البيولوجية في الجسم الحي بدقة دون الخلايا. من خلال دمج التصوير الفلوري المثير ثنائي الفوتون (TPEF) في مجهر SRS ، يمكن للتصوير المزدوج الوسائط في الجسم الحي للأنسجة الحصول على معلومات كيميائية حيوية وفيزيائية حيوية مهمة من وجهات نظر متعددة مما يساعد على فهم العمليات الديناميكية التي ينطوي عليها التمثيل الغذائي الخلوي والاستجابة المناعية وإعادة تشكيل الأنسجة ، إلخ. في بروتوكول الفيديو هذا ، يتم تقديم إعداد نظام مجهر TPEF-SRS بالإضافة إلى طريقة التصوير في الجسم الحي للحبل الشوكي الحيواني. يلعب الحبل الشوكي ، كجزء من الجهاز العصبي المركزي ، دورا حاسما في التواصل بين الدماغ والجهاز العصبي المحيطي. غمد المايلين ، الوفير في الدهون الفوسفاتية ، يحيط بالمحور العصبي ويعزله للسماح بالتوصيل المالح لإمكانات العمل. في الجسم الحي التصوير من أغماد المايلين في الحبل الشوكي مهم لدراسة تطور الأمراض العصبية التنكسية وإصابة الحبل الشوكي. يصف البروتوكول أيضا إعداد الحيوانات وطرق التصوير TPEF-SRS في الجسم الحي للحصول على صور بيولوجية عالية الدقة.
يظهر مجهر رامان 1,2 كطريقة قوية خالية من الملصقات لتصوير الأنسجة البيولوجية بناء على الترددات المميزة للروابط الكيميائية المختلفة في الجزيئات الحيوية. نظرا لقدرته على التصوير غير الغازية والتكيفية بشكل جيد ، تم استخدام مجهر رامان على نطاق واسع لتصوير المكونات الغنية بالدهون في الأنسجة البيولوجية مثل غمد المايلين 3،4،5 ، الخلايا الشحمية6،7 ، وقطرات الدهون 8،9،10 . إشارة تشتت رامان المحفزة (SRS) المكتسبة ككسب رامان محفز (SRG) أو فقدان رامان محفز (SRL) خالية من الخلفية ، وتظهر تشابها طيفيا مثاليا مع تشتت رامان التلقائي 11,12. بالإضافة إلى ذلك ، يعتمد SRL و SRG خطيا على تركيز التحليل ، مما يسمح بالتحليل الكمي للمكونات الكيميائية الحيوية 9،11،13. تم استخدام المجهر الفلوري المثير ثنائي الفوتون (TPEF) على نطاق واسع للتصوير البيولوجي في الجسم الحي بسبب قدرته المتأصلة على التقسيم البصري ، وعمق الاختراق العميق ، وانخفاض السمية الضوئية 14،15،16. ومع ذلك ، يعتمد أداء تصوير TPEF على خصائص علامات الفلورسنت ، وعدد الألوان القابلة للحل محدود بسبب أطياف التألق عريض النطاق8،17،18،19. يعد تصوير SRS الخالي من الملصقات وتصوير TPEF القائم على التألق طريقتين للتصوير التكميلي ، ويمكن أن يوفر مزيجهما معلومات فيزيائية حيوية وكيميائية حيوية وفيرة للأنسجة. تعتمد هاتان الطريقتان للتصوير على العمليات البصرية غير الخطية (NLO) ، والتي تسمح بالتكامل البسيط في نظام مجهري واحد. يتيح الجمع بين التصوير SRS و TPEF ، ما يسمى بالتصوير ثنائي الوسائط ، التصوير عالي الأبعاد وتوصيف الخلايا والأنسجة ، مما يسهل فهما شاملا للأنظمة البيولوجية المعقدة. وعلى وجه التحديد، يمكن للفحص المجهري للبيكوثانية (ps) SRS تحقيق تصوير الرابطة الكيميائية بدقة طيفية عالية مقارنة بتقنية الفيمتو ثانية (fs) SRS11، مما يسمح بالتمييز بين مكونات كيميائية حيوية متعددة في الأنسجة البيولوجية، خاصة في منطقة بصمات الأصابع المزدحمة20،21. بالإضافة إلى ذلك، بالمقارنة مع نظام مجهر NLO مزدوج الوسائط شائع الاستخدام مع دمج مجهر متماسك مضاد لتشتت ستوكس (CARS)، يظهر SRS أداء متفوقا على CARS من حيث التفسير الطيفي والصورة وكذلك حساسية الكشف11. تم استخدام مجهر SRS-TPEF كأداة قوية لدراسة الأنظمة البيولوجية المختلفة ، مثل Caenorhabditis elegans9,22 ، Xenopus laevis tadpole brain5 ، دماغ الفأر 23,24 ، الحبل الشوكي 25,26 ، العصب المحيطي 27 ، والأنسجة الدهنية7 ، إلخ.
يشكل الحبل الشوكي مع الدماغ الجهاز العصبي المركزي (CNS). يعد تصور الأنشطة الخلوية في الجهاز العصبي المركزي في الجسم الحي في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية أمرا بالغ الأهمية لفهم آليات اضطرابات الجهاز العصبي المركزي28،29،30 ولتطوير العلاجات المقابلة31،32،33. يلعب غمد المايلين ، الذي يلف ويعزل المحاور العصبية للتوصيل المحتمل للعمل عالي السرعة ، دورا مهما في تطوير الجهاز العصبي المركزي. يعتقد أن إزالة الميالين هي السمة المميزة في اضطرابات المادة البيضاء، مثل التصلب المتعدد34. بالإضافة إلى ذلك ، بعد إصابة الحبل الشوكي35 ، يمكن لحطام المايلين تعديل تنشيط البلاعم ، مما يساهم في الالتهاب المزمن والإصابة الثانوية36. لذلك ، فإن التصوير في الجسم الحي لغمد المايلين مع الخلايا العصبية والخلايا الدبقية في نماذج الفئران الحية يساعد بشكل كبير على فهم العمليات الديناميكية في اضطرابات الجهاز العصبي المركزي.
في هذا البروتوكول ، يتم وصف إجراءات الإعداد الأساسية لمجهر TPEF-SRS المصنوع في المنزل ويتم تقديم طرق التصوير ثنائية الوسائط في الجسم الحي للحبل الشوكي للفأر.
يتم إجراء جميع الإجراءات الحيوانية التي يتم تنفيذها في هذا العمل وفقا للمبادئ التوجيهية لمرفق المختبر التابع لجامعة هونغ كونغ للعلوم والتكنولوجيا (HKUST) وقد تمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في HKUST. مطلوب تدريب على السلامة للتعامل مع الليزر لإعداد وتشغيل مجهر TPEF-SRS. دائما ارتداء نظارات السلامة الليزر مع نطاق الطول الموجي المناسب عند التعامل مع الليزر.
1. إعداد مجهر TPEF-SRS (للإعداد التخطيطي انظر الشكل 1)
2. TPEF-SRS معايرة نظام المجهر
3. التحضير الجراحي للفأر للتألق في الجسم الحي والتصوير SRS
4. في الجسم الحي TPEF-SRS التصوير من الحبل الشوكي الماوس
في الجسم الحي ، يتم إجراء التصوير ثنائي الوسائط للمحاور الشوكية وكذلك أغماد المايلين باستخدام الفئران المعدلة وراثيا Thy1-YFPH ، والتي تعبر عن EYFP في الخلايا العصبية العقدية الجذرية الظهرية (الشكل 3). تنقل هذه الخلايا العصبية القريبة المعلومات الحسية من العصب المحيطي إلى الحبل الشوكي ، مع وجود الفرع المركزي في العمود الظهري للحبل الشوكي. باستخدام مجهر TPEF-SRS ، يمكن تصور غمد المايلين الموزع بكثافة بوضوح باستخدام تصوير SRS الخالي من الملصقات ، ويمكن ملاحظة محاور YFP ذات العلامات المتناثرة باستخدام تصوير TPEF. ويكشف التصوير ثنائي النموذج أن المحاور العصبية ملفوفة عن كثب بواسطة طبقة سميكة من أغماد المايلين (الشكل 3C). تلعب عقد رانفييه (NR) ، حيث يكون axolemma عاريا من غمد المايلين ، دورا أساسيا في الانتشار الملحي السريع لإمكانات العمل. كما يتضح من صورة الحبل الشوكي TPEF-SRS (الشكل 3C) ، يظهر NR انخفاض القطر المحوري والمحور المعرض مباشرة للمصفوفة خارج الخلية. من الضروري تصوير المحاور العصبية مع أغماد المايلين المحيطة بها لتأكيد وجود وموقع NR. لذلك ، يسمح لنا الفحص المجهري TPEF-SRS بمراقبة التغيرات الديناميكية للمحاور العصبية وأغماد المايلين في تطور اضطرابات الحبل الشوكي ، وهو أمر مهم لفهم آليات الديناميكيات الخلوية.
الشكل 1: الرسم التخطيطي لنظام المجهر TPEF-SRS. يتم الجمع بين المضخة وعوارض ستوكس مع مرآة ثنائية اللون (D1) في ليزر بيكو ثانية (ps). يتم تجميع شعاع ps وشعاع الفيمتو ثانية (fs) وتوسيعهما / تضييقهما بواسطة زوج من العدسات (L3 و L4 و L1 و L2 على التوالي) لمطابقة مرايا الجلفانومتر XY-scan مقاس 3 مم. يتم تدوير شعاع fs من الاستقطاب الأفقي إلى الرأسي بواسطة لوحة نصف موجة (HWP) ، ثم يتم دمجه مع شعاع ps بواسطة مقسم شعاع استقطابي (PBS). يتم اقتران مرايا المسح الضوئي والبؤبؤ الخلفي للعدسة الموضوعية بعدسة مسح ضوئي عن بعد L5 وعدسة أنبوبية L6 مصححة إلى ما لا نهاية. يتم توسيع شعاع الليزر بواسطة عدسة المسح الضوئي والأنبوب لملء الفتحة الخلفية لهدف 25x. بالنسبة لتصوير تشتت رامان المحفز (SRS) ، ينعكس شعاع المضخة المتناثر الخلفي الذي تم جمعه بواسطة الهدف بواسطة PBS ويتم توجيهه إلى مساحة كبيرة (10 مم × 10 مم) من السيليكون الثنائي (PD). بالنسبة للتصوير ثنائي الفوتون ، تنعكس إشارة التألق المثار ثنائي الفوتون (TPEF) بواسطة مقسم شعاع ثنائي اللون D2 إلى وحدة الكشف الضوئي. يتم استخدام وحدة المضاعف الضوئي الحالية (PMT) للكشف عن إشارة TPEF. الاختصارات-L1-L10: العدسات. OL: عدسة موضوعية. D1-D3: المرايا ثنائية اللون ؛ Fs1 ، Fs2: مجموعات المرشحات ؛ M: المرايا. OM1 ، OM2: المرايا البصرية ؛ P0-P2: لوحات المحاذاة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: واجهة مدير التأخير على برنامج التحكم OPO. يشير السهم الأحمر إلى خانة الاختيار الخاصة بتطبيق بيانات التأخير المعايرة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: تصوير TPEF-SRS في الجسم الحي للحبل الشوكي للفأر. (أ) رسم تخطيطي للتحضير الجراحي للحبل الشوكي للفأر وصورة المجال الساطع للحبل الشوكي. (ب) مخطط تركيب الماوس للتصوير في الجسم الحي للحبل الشوكي. (ج) صور الإسقاط القصوى z للمحاور العصبية وأغماد المايلين في الحبل الشوكي للفأر. تشير رؤوس الأسهم البيضاء إلى موقع عقدة رانفييه. يتم التقاط صور SRS للمايلين عند تحول رامان من 2863.5 سم إلى 1. تم إنشاء الشكل A باستخدام BioRender (https://biorender.com/). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
في هذا البروتوكول ، يتم وصف الإعداد الأساسي لمجهر TPEF-SRS بالتفصيل. بالنسبة لتصوير SRS ، تتداخل المضخة وحزم Stokes زمنيا ومكانيا داخل OPO. ومع ذلك ، يمكن تعطيل هذا التداخل بعد المرور عبر نظام المجهر. لذلك ، فإن كل من التحسين المكاني والزماني للتوطين المشترك للمضخة وعوارض ستوكس ضروري وحاسم لتحقيق التصوير الأمثل SRS. يرتبط التأخير الزمني بين المضخة وشعاع ستوكس باختلاف المسار البصري للحزمتين، والذي يتم تحديده من خلال تشتت العناصر البصرية في نظام المجهر38. عندما يتم ضبط الطول الموجي لشعاع المضخة لتصوير SRS عند إزاحات رامان المختلفة، يتغير طول المسار البصري لشعاع المضخة وفقا لذلك لأن معامل الانكسار للعدسات البصرية يعتمد على الطول الموجي38. لذلك ، يتغير التأخير الزمني بين المضخة ونبضة ليزر ستوكس مع الطول الموجي لشعاع المضخة وبالتالي يحتاج إلى معايرة. تم تجهيز OPO بخط تأخير يتم التحكم فيه بواسطة برنامج للمزامنة الزمنية للمضخة وشعاع Stokes. بالنسبة لنفس الإعداد البصري ، تظل بيانات التأخير مستقرة وتحتاج إلى معايرة مرة واحدة فقط. ونتيجة لذلك ، يمكن حفظ بيانات التأخير عند أطوال موجية مختلفة لشعاع المضخة عند القياس الأول للاستخدام في المستقبل. يمكن تطبيق بيانات التأخير المعايرة تلقائيا بواسطة برنامج التحكم OPO عند تغيير الطول الموجي لشعاع المضخة ، وهو مناسب لتصوير SRS في نوبات رامان المختلفة أو تصوير SRS الفائق الطيف. بالنسبة لتصوير TPEF-SRS ، يعد التداخل المكاني الصارم لحزم ps و fs بعد الدمج خطوة حاسمة لتجنب أي تحول FOV بين طرازي التصوير. أولا ، يتم محاذاة شعاع مضخة ps وشعاع fs للتأكد من وجودهما على المحور البصري لنظام المجهر ، وهو أمر بالغ الأهمية لتجنب أي تحول FOV عند تبديل نموذجي التصوير. بعد ذلك ، باستخدام شعاع المضخة كمرجع ، يتم ضبط موضع شعاع ستوكس وفقا لذلك لتحقيق توطين مكاني صارم. يتطلب كل إجراء محاذاة عدة تجارب للوصول إلى المستوى الأمثل.
إذا انخفضت إشارة SRS بشكل كبير ، فيجب التحقق أولا من قيمة الطور لمضخم القفل وبيانات تأخير الوقت. نظرا لأن مضخم القفل يخرج من الطور بمجرد تعطل إشارة المزامنة، فإن قيمة الطور تتطلب إعادة ضبطها في كل مرة بعد انقطاع مزود الطاقة أو إشارة مزامنة EOM. يمكن التحقق بسرعة من التزامن الزمني للمضخة وشعاع ستوكس عن طريق ضبط خط التأخير قليلا داخل OPO. إذا كانت بيانات تأخير الوقت المعايرة بعيدة كل البعد عن القيمة المثلى، فيجب إجراء فحص صفري لإعادة معايرة إزاحة التأخير بالنقر فوق الزر "مسح ضوئي صفري " في مربع حوار مدير التأخير. يستغرق إجراء المسح الضوئي الصفري بأكمله حوالي 10 دقائق. إذا فشلت إشارة SRS في الاسترداد بعد تحسين قيمة الطور والتأخير الزمني ، فيجب التحقق من تعديل EOM لشعاع Stokes كما هو موضح في الخطوات 2.1.3-2.1.4. إذا كانت نسبة الانقراض أقل بكثير من 10 ديسيبل مع ملاحظة قمم النبض الصغيرة في الموقع الخارجي لقطار نبض ستوكس ، فيجب إعادة تشغيل EOM ، ويجب إعادة ضبط قوة التشكيل والطور لتحقيق أقصى عمق للتعديل. عادة ، يمكن حل مشكلة التشكيل عن طريق إعادة تعيين EOM. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فيجب أن يكون الدعم الفني من الشركة المصنعة مطلوبا.
لتصوير الأنسجة السميكة في الجسم الحي ، يجب استخدام وضع الكشف epi-SRS. في هذا البروتوكول ، يتم استخدام PBS لتمرير ليزر الإثارة وعكس إشارة SRS المتناثرة إلى الكاشف. تعتمد إشارة SRL المكتشفة على التشتت الخلفي لشعاع المضخة الأمامية بواسطة الأنسجة. يحتوي ليزر الإثارة على استقطاب خطي ويمكن أن يمر بالكامل عبر PBS ، في حين أن الحزمة المتناثرة عكسيا قد حولت الاستقطاب وبالتالي لا يمكن أن تنعكس إلا جزئيا بواسطة PBS. لذلك ، يظهر مخطط جمع الإشارات الحالي كفاءة أقل مقارنة بالاستراتيجية التي تضع مباشرة كاشفا ضوئيا حلقيا أمام الهدف12. ومع ذلك، ونظرا للتشتت القوي للأنسجة الغنية بالدهون39، يمكن الحصول على صور SRS عالية النسبة من الإشارة إلى الضوضاء (512 × 512 بكسل) من الحبل الشوكي مع وقت تكامل 1-2 ثانية، مما يجعل مخطط التجميع القائم على PBS نهجا مناسبا لتصوير الحبل الشوكي. من ناحية أخرى ، ومع ذلك ، فإن تشتت الأنسجة القوية يحد من عمق اختراق الضوء. بالنسبة لكل من تصوير SRS و TPEF ، يقتصر عمق التصوير للحبل الشوكي على حوالي 50 ميكرومتر.
يعد إجراء التصوير المتسلسل لتصوير SRS و TPEF هو القيد الرئيسي لطريقة التصوير ثنائية الوسائط الحالية. في البروتوكول ، يتم إجراء تصوير TPEF و SRS في نفس الموقع بالتتابع مع فاصل زمني 1 ثانية عن طريق تبديل الزعانف الآلية تلقائيا. قد تتسبب القطع الأثرية المتحركة في دمج غير كامل لصور TPEF و SRS ، مما يحد من قدرة هذه الطريقة على تصوير العمليات أو الأنسجة الديناميكية للغاية المتأثرة إلى حد كبير بتنفس الحيوانات ونبضات قلبها. أحد الحلول الممكنة هو جمع التألق ثنائي الفوتون المثير بالليزر في وقت واحد أثناء تصوير SRS9. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة قابلة للتطبيق فقط على الهياكل البيولوجية ذات إشارات التألق القوية ، لأن نبضة ps لديها كفاءة إثارة تألق أقل بكثير مقارنة بنبض fs 14. بدلا من ذلك ، يمكن حل المشكلة باستخدام نظام fs-SRS22,40 ، حيث يسمح مصدر ليزر fs بالإثارة المتزامنة لإشارات SRS و TPEF بفعالية ، على حساب الدقة الطيفية المنخفضة لتصوير SRS. حل آخر هو استخدام التألق المثار بالليزر ps الذي تم الحصول عليه أثناء تصوير SRS كمرجع لتسجيل صور التألق fs. كما هو موضح في الشكل 3 ، تعمل استراتيجية التسجيل هذه بشكل جيد إذا لم تحدث حركة كبيرة أثناء التصوير الفلوري والتصوير الفلوري.
يظهر SRS مزايا فريدة في التصوير البيولوجي لأنه يوفر معلومات كيميائية عن الجزيئات الحيوية بناء على آلية التباين المحددة الخالية من الملصقات41. بالمقارنة مع CARS التي تم دمجها أيضا مع TPEF للتصوير NLO متعدد الوسائط ، أظهرت SRS قدرة أفضل على تفسير الطيف والصور11. لذلك ، تم تطبيقه على نطاق واسع لتصوير الدهون 9,11 ، البروتين 42,43 ، DNA44 ، والمكونات الحيوية المتعامدة التي تحتوي على الألكين (C ≡ C) 13,45 ، الكربون - الديوتيريوم (C−D) 9،46 وروابط الأكسجين والديوتيريوم (O-D) 47،48 في الأنسجة البيولوجية. في هذا البروتوكول ، استخدمنا مصدر ليزر PS لتصوير SRS ومصدر ليزر fs لتصوير TPEF ، والذي يجمع بين مزايا الإثارة الفلورية الفعالة ودقة رامان الطيفية العالية ، مما يسمح بالتمايز الفعال للجزيئات الحيوية المتنوعة 42,44. في الحبل الشوكي، تساهم التفاعلات المعقدة بين الخلايا والبيئة الدقيقة التي تنطوي على الخلايا الدبقية والخلايا العصبية والخلايا المناعية المعينة في تطور الإصابة49 والأمراض50. جنبا إلى جنب مع العديد من تحقيقات التصوير الفلورية و SRS ، يمكن للفحص المجهري TPEF-SRS تحقيق التصوير المتزامن لمختلف الهياكل الخلوية بالإضافة إلى مكوناتها الجزيئية الحيوية المتميزة ، والتي يمكن أن تسهل بشكل كبير فهمنا لظهور وتطور اضطرابات الحبل الشوكي.
وليس لدى المؤلفين ما يفصح عنه وليس لديهما مصالح مالية منافسة.
تم دعم هذا العمل من قبل مجلس هونغ كونغ للمنح البحثية من خلال المنح 16103215 16148816 16102518 16102920 و T13-607/12R و T13-706/11-1 و T13-605/18W و C6002-17GF و C6001-19E و N_HKUST603/19 ولجنة الابتكار والتكنولوجيا (ITCPD/17-9) ومخطط مجال التميز للجنة المنح الجامعية (AoE / M-604/16 و AOE / M-09/12) وجامعة هونغ كونغ للعلوم والتكنولوجيا (HKUST) من خلال المنحة RPC10EG33.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
#2 Forceps | Dumont | 11223-20 | For laminectomy |
10X objective | Nikon | CFI Plan Apo Lambda 10X | |
25X objective | Olympus | XLPLN25XSVMP2 | |
Burn cream | Betadine | ||
Camera | Sony | α6300 | |
Current amplifier | Stanford research | SR570 | |
Current photomultiplier modules | Hamamatsu | H11461-01 | |
D2 665 nm long-pass dichroic mirror | Semrock | FF665-Di02-25x36 | For directing epi-fluorescence signal to the detection module |
D3 700 nm short-pass dichroic mirror | Edmund | 69-206 | For separating SRS from TPEF detection path |
Depilating cream | Veet | ||
FS1 975 nm short-pass filter | Edmund | 86-108 | For blocking stokes beam |
FS1 Bandpass filter | Semrock | FF01-850/310 | For blocking stokes beam |
Fs2 Bandpass filter | Semrock | FF01-525/50 | For selecting YFP signal |
Fs2 Shortpass filter | Semrock | FF01-715/SP-25 | For blocking fs excitation laser beam |
Half-wave plate | Thorlabs | SAHWP05M-1700 | |
High-speed photodetector | MenloSystems | FPD 310-F | For checking Stokes beam modulation |
Iodine | Betadine | ||
IR Scope | FJW | FIND-R-SCOPE Infrared Viewer 2X Kit Model 84499C2X | |
Iris | Thorlabs | CPA1 | |
L1 | Thorlabs | AC254-060-B-ML | |
L10 | Thorlabs | LA4052-A | |
L2 | Thorlabs | LA1422-B | |
L3 | Thorlabs | AC254-050-B | |
L4 | Thorlabs | AC254-060-B-ML | |
L7 | f=100 mm, AB coating | ||
L8 | Thorlabs | LA4874-A | |
L9 | Thorlabs | AC254-035-B-ML | |
Lock-in amplifier | APE | ||
Mirror | Thorlabs | PF10-03-P01 | |
Motorized flipper | Thorlabs | MFF101/M | |
multifunctional acquisition card | National Instrument | PCIe-6363 | |
Oscilloscope | Tektronix | TDS2012C | |
Photodiode | APE | For detecting SRS signal | |
Picosecond laser source | APE | picoEmerald | |
Polarizing beam splitter | Thorlabs | CCM1-PBS252/M | |
Power meter | Newport | 843-R | |
Saline | Braun | ||
Scan lens L5 | Thorlabs | SL50-CLS2 | |
Scanning mirror | Cambridge Technology | 6215H | |
Silicone gel | World Precision Inc. | KWIK-SIL | |
Ti:sapphire fs laser | Coherent | Chameleon Ultra II | |
Tube lens L6 | Thorlabs | TTL200-S8 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved