JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هذا النموذج الحيواني يمكن الباحثين من حمل الوذمه اللمفية الثانوية ذات الدلالة الاحصائيه في الطرف السفلي من الفئران ، والتي تدوم 8 أسابيع علي الأقل. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الفيزيولوجيا المرضية من الوذمه اللمفية والتحقيق في خيارات العلاج الرواية.

Abstract

النماذج الحيوانية ذات اهميه قصوى في البحث عن الوذمه اللمفية من أجل فهم الفيزيولوجيا المرضية للمرض ولكن أيضا لاستكشاف خيارات العلاج المحتملة. هذا النموذج الماوس يسمح للباحثين للحث علي ذمه لمفية كبيره تدوم 8 أسابيع علي الأقل. يتم الحث علي الوذمه اللمفية باستخدام مزيج من العلاج بالاشعه والاستئصال الجراحي للمفاويات. هذا النموذج يتطلب ان الفئران الحصول علي جرعه من 10 غراي (غراي) الإشعاع قبل وبعد الجراحة. الجزء الجراحي من النموذج ينطوي علي ربط ثلاثه الاوعيه الليمفاوية واستخراج اثنين من الغدد الليمفاوية من مؤخر الماوس. الحصول علي الاداات الجراحية الدقيقة والمجهر أمر ضروري ، وذلك بسبب الهياكل التشريحية الصغيرة من الفئران. ميزه هذا النموذج هو انه يؤدي إلى الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه ، والتي توفر أساسا جيدا لتقييم خيارات العلاج المختلفة. وهو أيضا خيار كبير ومتاح بسهوله للتدريب الجراحي المجهري. الحد من هذا النموذج هو ان الاجراء يمكن ان يكون مضيعه للوقت ، وخاصه إذا لم تمارس مقدما. ينتج النموذج عن الوذمه اللمفية القابلة للقياس الكمي بشكل موضوعي في الفئران ، دون التسبب في اعتلال شديد وقد تم اختبارها في ثلاثه مشاريع منفصلة.

Introduction

تتميز الوذمه اللمفية بتراكم السائل الليمفاوي الذي يؤدي إلى تورم الانسجه الموضعية ، والذي يحدث بشكل رئيسي بسبب ضعف أو تعطل تدفق السائل الليمفاوي في الاوعيه اللمفاوية1. يمكن ان تضعف تدفق الليمفاوية أو تعطل بسبب العدوى, انسداد, أصابه أو عيوب خلقيه في الجهاز اللمفاوي2. هذه المسببات تؤدي إلى تراكم السائل اللمفاوي ، مما يؤدي إلى حاله مزمنة من التهاب ، مما يؤدي إلى التليف اللاحق ، فضلا عن ترسب الانسجه الدهنية3. يمكن تصنيف الوذمه اللمفية علي انها الوذمه اللمفية الاوليه أو الثانوية. وذمه لمفية الاوليه بسبب تشوات النمو أو الطفرة الجينية2,4. تحدث الوذمه اللمفية الثانوية بسبب الامراض الجهازية الاساسيه أو الجراحة أو الصدمات2،4. الوذمه اللمفية الثانوية هي الشكل الأكثر شيوعا من الوذمه اللمفية في العالم2. في البلدان المتقدمة ، السبب الأكثر شيوعا للوذمه اللمفية الثانوية هو العلاج بالأورام مثل المعالجة الاشعاعيه المساعد وتشريح العقدة الليمفاوية5. الوذمه اللمفية هي الأكثر شيوعا بين مرضي سرطان الثدي ، ولكن يمكن أيضا ان تتطور في المرضي الذين يعانون من امراض النسائية ، الميلانوما ، البولي التناسلي أو سرطان الرقبة6. وقد اقترح ان من بين جميع النساء تشخيص سرطان الثدي, 21% سوف تتطور الوذمه اللمفية7.

يمكن ان تكون الوذمه اللمفية مرهقه للمريض جسديا ونفسانيا. المرضي الذين يعانون من الوذمه اللمفية لديهم زيادة خطر الاصابه5,8,9, سوء نوعيه الحياة ويمكن ان تتطور القلق الاجتماعي واعراض الاكتئاب10. مضاعفات الوذمه اللمفية المزمنة تؤدي إلى ارتفاع تكلفه الرعاية وزيادة عبء المرض9,11. وقد أشارت النتائج أيضا إلى ان الوذمه اللمفية قد تترافق مع زيادة خطر الوفاة بعد علاج سرطان الثدي12. الاداره المحافظة مثل ضغط المنطقة المصابة ، والصرف الليمفاوي اليدوي والعناية بالبشرة العامة لا تزال نهج الخط الأول. لا يوجد حاليا اي علاج علاجي6. علي الرغم من التقدم المحرز في مجال العلاج الجراحي والطبي ، لا يزال هناك مجال للتحسين. المزيد من البحوث ، وتوفير البصيرة في الفيزيولوجيا المرضية وتطور المرض ، وهناك حاجه لتمكين الأطباء لتوفير أفضل خيارات العلاج للمرضي5.

وتستخدم النماذج الحيوانية في البحوث قبل السريرية لفهم الفيزيولوجيا المرضية للامراض وتطوير خيارات العلاج المحتملة. وقد أنشئت عده نماذج مختلفه الحيوانية الوذمه اللمفية في أنياب13,14, الأرانب15, الأغنام16, الخنازير17,18 والقوارض19,20, 21،22،23،24. نموذج القوارض يبدو ان النموذج الأكثر فعاليه من حيث التكلفة, عند التحقيق في أعاده بناء الوظيفة اللمفاوية, بسبب القوارض يجري الوصول اليها بسهوله ومنخفضه السعر نسبيا25. وقد ركزت غالبيه نماذج الفئران علي الحث علي الوذمه اللمفية في ذيل الفئران21،22،23. نموذج الذيل موثوق جدا ولكن التقنية الجراحية الدقيقة للحث علي الوذمه اللمفية تختلف بشكل كبير في المواد المنشورة السابقة. وهذا يؤدي إلى تقلبات في مده ومتانة المتقدمة الوذمه اللمفية المقدمة في المعروفة25. ويجري أيضا استخدام تقنيات مختلفه للحث علي الوذمه اللمفية في نموذج الأطراف السفلية ، كما انها تسفر عن نتائج متفاوتة ، ولكن قد يكون من الأسهل فهم نموذج الأطراف السفلية من منظور انتقالي. وقد أعاقت نماذج الوذمه اللمفية السابقة عن طريق قرار الوذمه اللمفية العفوية ، التالي هناك حاجه إلى نموذج اللمفية القابلة للاستنساخ ودائم25. وقد حاول الباحثون في السابق لزيادة جرعه من الإشعاع ، لمنع القرار الوذمه اللمفية العفوية ، ولكن هذا قد ادي في كثير من الأحيان إلى اعتلال شديد اللاحقة25.

ينتج هذا النموذج عن الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه ، دون التسبب في اعتلال شديد ، من خلال الجمع بين الجراحة المجهرية والإشعاع. وقد تم تنقيح النموذج من نموذج الجراحية السابقة عن طريق أضافه جرعه من التشعيع الذي يحفز الوذمه اللمفية, دون التسبب في اعتلال شديد26. كما يوفر فرصه كبيره للتدريب الجراحي المجهري. الحصول علي المعدات الجراحية الدقيقة والمجهر ضروري ، وذلك بسبب الهياكل التشريحية الصغيرة للفئران. ويمكن اجراء العملية الجراحية عندما يكون المستخدم قد تم تدريس التقنيات الجراحية الدقيقة الاساسيه ، مثل خياطه مع الاداات الجراحية المجهرية. المشغلين الذين يؤدون هذا الاجراء شاهدوا جميع أشرطه الفيديو التعليمية من قبل Acland علي الشروط المسبقة للمهارات الجراحية الدقيقة (1981) وتقنيه الخياطة المجهرية الاساسيه (1985). نوصي بممارسه العملية الجراحية 8 − 10 مرات قبل استخدامها في البحوث. ممارسه الاجراء يضمن ان يتم اجراء عدد اقل من الأخطاء وان الاجراء يمكن ان يؤديها بشكل أكثر كفاءه. عندما يتقن ، يمكن اجراء العملية الجراحية في 45 دقيقه.

Protocol

وتم إيواء الماشية في مرفق رعاية الماشية بجامعه جنوب الدانمرك وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. وقد تمت الموافقة علي جميع الإجراءات المتعلقة بالمواد الحيوانية من قبل مفتشيه التجارب الحيوانية ، وزاره البيئة والاغذيه في الدنمارك.

1. ما قبل الجراحة التشعيع

ملاحظه: يتم التشعيع قبل الجراحة قبل 7 أيام من الجراحة.

  1. الحث علي التخدير.
    1. ضع الماوس في مربع الحث وتعيين المبخر إلى 3 ٪ ايزوفلوراني مع معدل تدفق الأكسجين من 0.8 − 1.2 L/min للحث علي استنشاق التخدير.
      ملاحظه: بدلا من ذلك ، يمكن استخدام التخدير عن طريق الحقن ولكن لمده قصيرة من التشعيع الذي يحفز استنشاق التخدير كان كافيا. للحصول علي النتائج الواردة في هذه المقالة ، تم استخدام الفئران C57BL6 الإناث البالغة من العمر 9 أسابيع.
    2. تاكد من تخدير الماوس بالبالكامل عن طريق الذيل أو مخلب اختبار قرصه.
  2. ضع الماوس للإشعاع.
    1. إذا خدرت تماما ، حرك الماوس من مربع الحث ووضعه تحت مصدر الإشعاع في موقف ضعيف وتثبيت بلطف الأطراف الخلفية مع الشريط.
      ملاحظه: سيبقي الماوس مخدرا لمده قصيرة من الإشعاع.
    2. وضع لوحه الرصاص سميكه 1.5 مم لضمان ان المنطقة التي تخضع لعمليه جراحيه فقط (اي منطقه دائريه قطرها 25 ملم حول الركبة) يحصل المشع.
  3. أداره جرعه من 10 غراي الإشعاع بمعدل جرعه 5.11 غراي/دقيقه (100 kVp ، 10 مللي أمبير).
    تحذير: يجب اتخاذ احتياطات السلامة عند العمل مع الإشعاع. وخلال هذه التجربة ، أجريت جميع التشعيع في غرفه معزولة بالإشعاع ، ولم يتم تشغيل مصدر الإشعاع الا عندما غادر جميع الافراد الغرفة واغلقواها.
  4. وضع الماوس مره أخرى في قفصه.

2-اعداد المعدات

ملاحظه: يجب اجراء الجراحة في غرفه مخصصه للإجراءات الجراحية. يجب ان يكون سطح المنطوق عقيما.

  1. نظيفه تماما جميع الأسطح المنطوق مع 70 ٪ الايثانول. ارتداء الشعر والمعاطف. استخدم أدوات جراحيه معقمه وقفازات معقمه.
  2. أعد التخدير.
    1. وضع 1 مل من الفنتانيل (0.315 ملغ/مل) ، 1 مل من ميدازولام (5 ملغ/مل) ، و 2 مل من الماء المعقم. استخدام المحاقن والابر المختلفة للمكونات المختلفة.
    2. اخلط الفنتانيل والماء المعقم عن طريق إفراغ المحاقن ببطء في أنبوب زجاجي معقم. عندما تختلط ، أضافه ميدازولام لإكمال الحل العمل.
  3. جهز تسكين
    1. رسم ما يصل 0.2 مل من البوبرينورفين (0.3 ملغ/مل) و 2 مل من المحلول الملحي.
    2. خلط وحدات التخزين عن طريق إفراغ المحاقن ببطء في أنبوب زجاجي معقم لإكمال حل العمل.
  4. قم بتشغيل المجهر وتاكد من ان الاضاءه كافيه ، وان المجهر مضبوط بشكل جيد لعيون المشغل.
    ملاحظه: يجب اجراء جميع العمليات الجراحية تحت مجهر التشغيل. نطاق التكبير من 4x− 25x كافيه.

3-الاعداد

  1. تزن الماوس قبل الجراحة عن طريق وضع الماوس في حاويه فارغه علي نطاق مسح.
  2. أداره التخدير.
    1. رسم ما يصل 0.1 مل من مخدر لكل 10 غرام من وزن الجسم الماوس. حقن جلد التخدير كحقنه بوليوس.
    2. اسمحوا الماوس بقية في قفص مع الكثير من الفراش والماوي لمده 10 دقيقه تقريبا حتى مخدر تماما. فحص عمق التخدير عن طريق تقييم استرخاء العضلات واجراء اختبار مخلب أو ذيل قرصه.
  3. عند تخدير كامل ، حلق الطرف الخلفي الذي تم اختياره للاجراء باستخدام المقصات الكهربائية. تاكد من مسح الشعر الزائد.
  4. قم بتشغيل جهاز التسخين ، مثل لوحه التسخين وغطيه بقطعه قماش جراحيه.
  5. تعيين تدفق الأكسجين إلى 0.8 لتر/دقيقه وتوصيله مع nosecone. استخدام الأكسجين 100 ٪.
    ملاحظه: الnosecone هو فقط لتسليم الأكسجين وليس التخدير.
  6. تطبيق مرهم العيون وحقن 0.5 مل من جلد المالحة ، ويفضل في الوازع من الماوس ، لمنع نقص بوتاسيوم الدم اثناء الجراحة.
  7. ضع الماوس للجراحة.
    1. ضع الماوس علي القماش الجراحي في موقف ضعيف. ضع الانفيه فوق الخطم.
    2. Fixate نهاية المؤخرات برفق مع الشريط لمنع الماوس من التحول اثناء الجراحة.
    3. تعقيم الجلد باستخدام الكحول/كلوهيكسيدين أو الكحول/اليود povidone.

4-الجراحة

ملاحظه: في هذا المثال ، الطرف الخلفي الأيسر (عند عرض الماوس في موضع ضعيف) ، تم اختيار الاجراء.

  1. اجراء شق دائري.
    1. ارفع الجلد بملقط ناعم ومقطع فتحه صغيره تقريبا 5 مم القريبة إلى الحفرة البوبليضيه.
    2. الشريحة مقص حاد في الفتحة ومقطع نحو الركبة بحيث ينتهي الشق فقط فوق الركبة. تاكد من عدم ثقب الاوعيه الاساسيه عن طريق رفع الجلد مع ملقط اثناء القص.
    3. تحريك الماوس إلى موقف المعرضة والاستمرار في مقطع من الركبة نحو الحفرة المتحجرة حتى يكتمل الشق المحيط.
  2. تشريح الجلد تحت الركبة.
    1. برفق تشريح المنطقة تحت الركبة إلى بضعة ملليمترات فوق الكاحل ، عن طريق فتح ببطء وإغلاق المقص الصغير في حين رفع الجلد مع ملقط.
    2. قص التصاقات المرئية المتبقية بعناية باستخدام المقص المجهري. استخدام المحلول الملحي المعقم بانتظام للحفاظ علي الانسجه رطبه خلال العملية برمتها.
  3. تشريح الجلد في الحافة القريبة من الشق المحيط بحيث يمكن سحبه مع أعاده الجرار المرنة.
    ملاحظه: الجرار يسمح للمشغل بعرض أفضل للسفينة الليمفاوية القريبة ويمنع الحافة القريبة من التحول اثناء الجراحة.
  4. في حين لا تزال في موقف المعرضة ، تدوير المؤخر برفق وتثبيته مع الشريط ، بحيث يكون الوريد نسا مرئية من النقطة الأكثر القريبة من المنطقة المكشوفة إلى النقطة الأكثر البعيدة.
  5. حقن حوالي 0.01 مل من براءات الاختراع الأزرق الخامس جلد بين اصبع القدم الثاني والثالث باستخدام حقنه 0.5 mL مع ابره 30 G. اضغط برفق علي مخلب بضع مرات لتوزيع براءات الاختراع الأزرق V. تصور الاوعيه الليمفاوية والعقدة الليمفاوية من خلال المجهر كما الأزرق براءات الاختراع V يملا الاوعيه الليمفاوية.
    ملاحظه: إذا كان اللون الأزرق من الاوعيه الليمفاوية يتلاشى اثناء العملية ، تدليك بلطف مخلب لتعزيز امتصاص ، بدلا من حقن المزيد من براءات الاختراع الأزرق الخامس. الاستخدام الزائد من براءات الاختراع الأزرق الخامس قد يؤدي إلى تسرب وتلوين الانسجه المحيطة بالاوعيه الليمفاوية التي قد تسويه الاجراء.
  6. حدد موقع الهياكل الهامه: العقدة الليمفاوية التي لا تمابيال (PLN) ، والاوعيه الليمفاوية البعيدة إلى العقدة الليمفاوية (DLV1 و DLV2) ، والوعاء الليمفاوي القريب من العقدة الليمفاوية (PLV).
    ملاحظه: جميع الاوعيه الليمفاوية يمكن العثور عليها بجوار الوريد الدهني. وعاده ما يتم العثور علي الاوعيه الليمفاوية القريبة الإنسي إلى الوريد ، والاوعيه الليمفاوية البعيدة وجدت الوسطي والجانبية علي الوريد. وتستخدم اختصارات الهياكل في الفيديو المصاحب.
  7. تكبير لتصور بوضوح plv ونربط مع خياطه النايلون 10-0 باستخدام الصغيرة ابره حامل والملقط المجهري. اضغط علي مخلب بضع مرات للتاكد من ان اي براءة اختراع الأزرق الخامس يمر القريبة إلى خياطه.
    ملاحظه: قد يكون من الضروري تشذيب الدهون المحيطة بالوعاء اللمفاوي.
  8. كرر الخطوة 4.7 لربط الاوعيه الليمفاوية البعيدتين. اضغط علي مخلب عده مرات للتاكد من ان اي براءة اختراع الأزرق الخامس يمر القريبة إلى الاربطه. إذا كانت الاوعيه الليمفاوية تقع علي مقربه من الوريد الدهني ، فحاول تشريحها بشكل أكثر انتفاخا.
    ملاحظه: في هذا المثال ، يمكن ان نري ان واحده من الاوعيه الليمفاوية رشقات ناريه بسبب الاربطه التي تعيق تدفق الليمفاوية. وغالبا ما تنقسم الاوعيه الليمفاوية من الوريد إلى أسفل.
  9. أزاله العقدة الليمفاوية التي لا تمابيال.
    1. حدد موقع العقدة الليمفاوية التي لا تمبليه وقم بقص ثقب صغير مع مقصات مجهريه للوصول اليها وأزالها بالملقط المجهري والمقص المجهري.
      ملاحظه: تحتوي العقدة الليمفاوية علي سطح أملس يشبه اللؤلؤ علي النقيض من الانسجه الدهنية المحيطة.
    2. لاختبار إذا كان النسيج المزال هو العقدة الليمفاوية ، وضعه في أنبوب اختبار مليئه بالماء.
      ملاحظه: إذا كان النسيج يتكون من الدهون ، وسوف تطفو الانسجه. إذا كان النسيج هو العقدة الليمفاوية ، فانه سوف تغرق إلى القاع.
  10. أزاله لوحه الدهون الاربيه والعقدة الليمفاوية.
    1. قبل أزاله وساده الدهون الاربيه ، استخدم التخثر ثنائي القطب لكي الاوعيه التي تعمل من خلال الدهون.
    2. Resect وساده الدهون الاربيه باستخدام الملقط المجهري والمقص الصغير. مقطع برفق الاوعيه التي تعمل بالكي من خلال الدهون. ثم استئصال بلطف الانسجه الدهنية في المنطقة الاربيه.
      ملاحظه: نادرا ما يتم تلوين العقدة الليمفاوية الموجودة في الدهون من قبل الأزرق براءات الاختراع الخامس ويمكن ان يكون من الصعب التفريق من الدهون. أزاله وساده الدهون في قطعه واحده هو أفضل طريقه لضمان أزاله العقدة الليمفاوية.
  11. اشطف الساق جيدا بمحلول ملحي معقم وتاكد من خلال المجهر انه قد تم أزاله اي شعره صغيره وجزيئات من منطقه الجراحة لتجنب تلوث الجروح والعدوى. تاكد من عدم وجود نزيف نشط.
  12. خياطه حواف الجلد وصولا إلى جاهيه العضلات مع خياطه النايلون 6-0 باستخدام ملقط وحامل ابره ، وترك فجوه من 2 − 3 ملم لتقييد تدفق الليمفاوية السطحية.
    ملاحظه: يظهر الفيديو المصاحب مثالا علي الغرز المكتملة.
  13. أداره تسكين. رسم ما يصل 0.1 مل من تسكين لكل 30 غرام من وزن الجسم الماوس. حقن تسكين جلد كحقنه بوليوس.
  14. تزن الماوس لمرحله ما بعد الجراحة للمقارنة.
  15. وضع الماوس في قفص في خزانه تسخينها للانتعاش.

5. الرعاية بعد الجراحة

  1. إعطاء الفئران أقفاص الفردية للتعافي بعد الجراحة مع الماء والغذاء libitum الإعلان.
  2. أداره جرعه تحت الجلد بوليوس من 0.02 مل من البوبرينورفين 3x يوميا لمده 3 أيام لتسكين.
  3. مراقبه الحيوانية يوميا للتئام الجروح المناسبة ، علامات الم والعدوى. إذا كانت علامات العدوى موجودة ، استخدم مرهم المضادات الحيوية.

6-التشعيع بعد الجراحة

  1. بعد ثلاثه أيام من الجراحة ، كرر الاجراء الخاص بالتشعيع قبل الجراحة (الخطوات 1.1 − 1.4).

النتائج

وقد سبق استخدام هذا الاجراء في ثلاث تجارب منفصلة. وأجريت جميع التجارب من قبل المحققين الرصاص مختلفه الذين هم جميعا المشاركين في تاليف هذه المادة. وفي جميع التجارب الثلاث ، تم توخي الحرص الشديد علي التزام بنفس الاجراء الموصوف في هذا البروتوكول. وفي جميع التجارب الثلاثة ، كانت الوذمه اللمفية الثانوية مستحثه في أحد الأطراف السفلية بينما كان الطرف الآخر الآخر بمثابه عنصر تحكم. وكانت احجام الأطراف السفلية هي النتيجة الرئيسية في جميع التجارب الثلاث. ويوضح الشكل 1 تصميم الدراسة.

خضعت جميع الفئران لفحص التصوير المقطعي المجهري (μCT) في الأسابيع التالية للجراحة لقياس حجم الأطراف السفلية. وأجريت عمليات المسح المقطعية المحوسبة علي ماسح ضوئي متعدد الطرائق قبل السريرية (جدول المواد) وتم قياس حجم الأطراف السفلية من خلال وظيفة منطقه الفائدة في البرامج المرتبطة بها كما سبق وصفها في26. وكانت التيبيوفيبولار البعيدة المشتركة موجودة في صور ثلاثية الابعاد (3D) باستخدام طريقه وصفت سابقا27. بدا العائد علي الاستثمار في المفصل التيبيوفيبولار البعيد وشمل جميع الانسجه البعيدة إلى تلك النقطة. تم تعيين نطاق هونسفيلد للتحليل إلى-500 إلى 4000.

وتم تحليل جميع البيانات باستخدام البرمجياتالاحصائيه (جدول المواد). تم استخدام اختبار المقارنة المتعددة sidak لمقارنه حجم الجزء السفلي المستحث الوذمه اللمفية ، مع المؤخر السيطرة. ويعرف الفرق الكبير بين الطرف السفلي المسيطر والمؤخر اللمفية الليمفاوية بأنها قيمه P < 0.05.

figure-results-1651
الشكل 1: تصميم الدراسة والنقاط الزمنيه لقياسات النتائج. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

وشملت التجربة 126 32 الفئران الموزعة في مجموعات من أربعه. وكان أحد الأهداف هو دراسة عده جرعات مختلفه من الإشعاع والعثور علي الجرعة الأكثر تفضيلا ، للحث علي الوذمه اللمفية الدائمة دون التسبب في اعتلال شديد. وشملت المجموعة التي أعطيت جرعتين من التشعيع بالاشعه التي تبلغ 10 غراي أربعه فئران. ويبين الشكل 2 انه تم تحقيق حاله ثابته من الوذمه اللمفية في جميع الأسابيع الثمانية. ويبين الجدول 1 ان هناك اختلافا كبيرا في الحجم بين الطرف السفلي للوذمه اللمفية والسيطرة المؤخر في الأسابيع 1 و 7 و 8. في حين تم تحقيق حاله ثابته من الوذمه اللمفية المستحثة ، لم يكن هناك فرق كبير إحصائيا بين الأطراف السفلية خلال جميع الأسابيع 8. وتختلف هذه النتيجة عن التجربتين الأخريين ويمكن تفسيرها بسبب حجم العينة الأصغر نسبيا المكون من أربعه فئران. وزيادة عدد القياسات من شانه ان يزيد من قوه الدراسة التالي احتمال اكتشاف فرق إذا كان هناك فرق28.

figure-results-2981
الشكل 2: متوسط حجم الطرف المؤخر: التجربة 1. ويتضمن هذا الرقم قياسات 4 فئران من المجموعة التي أعطيت جرعتين من التشعيع بنسبه 10 غراي. يظهر هذا الرسم البياني متوسط حجم الأطراف السفلية في3 مم في الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. تمثل أشرطه الخطا الانحراف المعياري (SD). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

الاسبوعحجم اللمفية في مم3 (n = 4)حجم التحكم في مم3 (n = 4)ف-القيمة95% الفاصل الزمني للثقة
1218.53 ± 9.3136.78 ± 2.480.00253.77 − 109.73
2202.25 ± 10.24141.88 ± 8.020.066(-6.53) − 127.28
3193.28 ± 10.80141.20 ± 6.800.060(-3.7) − 107.85
4194.95 ± 21.05141.50 ± 8.030.224(-41.85) − 148.75
5193.75 ± 7.07141.70 ± 8.600.051(-0.27) − 104.37
6193.23 ± 3.42141.78 ± 10.290.054(-1.56) − 104.46
7194.95 ± 7.26143.23 ± 8.900.0500.17 − 103.28
8195.8 ± 9.65152.18 ± 5.810.00919.88 − 67.38

الجدول 1: اختبار المقارنات المتعددة في Sidak: التجربة 1. يوضح هذا الجدول المقارنة الاحصائيه بين الكميات المتوسطة لأطراف الوذمه اللمفية المستحثة والأطراف السفلية المسيطرة خلال الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. وتقدم القيم علي النحو التالي: يعني ± SD في مم3. وتعتبر القيمة المضافة < 0.05 بمثابه فرق كبير بين الطرف السفلي المسيطر والمؤخر اللمفية. n (عدد الملاحظات) = 4.

وشملت التجربة 2 45 الفئران. 15 الفئران بمثابه الضوابط وأعطيت حقن المالحة. يتم استخدام عناصر التحكم كنتائج تمثيليه كما نفترض ان الحقن الملحية لم يكن لها تاثير علي حجم الوذمه اللمفية المستحثة. ويبين الشكل 3 ان الوذمه اللمفية كانت اقل استقرارا مما كانت عليه في التجربة 1. بالاضافه إلى ذلك ، زاد حجم المؤخرات السيطرة خلال 8 أسابيع. وهذا يقلل من الفرق النسبي المعروض في الجدول 2. وقد تكهن بان الفئران استخدام المؤخر غير المشغلة أكثر من ذلك ، في الأسابيع التالية للجراحة ، وان هذا يؤدي إلى تضخم وزيادة في حجم الأطراف من المؤخر غير المشغلة. والاهم من ذلك ، يبين الجدول 3 ان هناك فرقا كبيرا من الناحية الاحصائيه بين مؤخرات الوذمه اللمفية والطرف المسيطر خلال الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. يثبت العدد الأكبر من الفئران ان هذا الاجراء يمكن ان يحفز الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه لمده 8 أسابيع علي الأقل.

figure-results-6342
الشكل 3: متوسط حجم الأطراف السفلية: التجربة 2. يتم تضمين قياسات 15 الفئران من مجموعه التحكم في هذا الرقم. يظهر هذا الرسم البياني متوسط حجم الأطراف السفلية في3 مم في الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. تمثل أشرطه الخطا SD. الرجاء النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

التجربة 1التجربة الثانيةالتجربة 3التجربة 1 و 2 و 3 مجتمعه
الاسبوعالفرق المطلق (مم3)الفرق النسبي (%)الفرق المطلق (مم3)الفرق النسبي (%)الفرق المطلق (مم3)الفرق النسبي (%)الفرق المطلق (مم3)الفرق النسبي (%)
181.75 ± 7.200.60 ± 0.04104.34 ± 25.960.76 ± 0.2385.20 ± 35.050.64 ± 0.2794.02 ± 29.570.69 ± 0.24
260.38 ± 17.210.43 ± 0.14107.12 ± 44.330.79 ± 0.3385.63 ± 37.940.63 ± 0.2992.77 ± 41.680.68 ± 0.31
352.08 ± 14.350.37 ± 0.1178.77 ± 39.450.57 ± 0.2874.67 ± 49.570.54 ± 0.3873.74 ± 41.510.53 ± 0.31
453.45 ± 24.510.38 ± 0.1950.67 ± 29.940.36 ± 0.2150.62 ± 16.350.37 ± 0.1151.01 ± 24.030.37 ± 0.17
552.05 ± 13.460.37 ± 0.1132.74 ± 24.660.22 ± 0.1742.67 ± 11.810.31 ± 0.0739.08 ± 20.020.27 ± 0.14
651.45 ± 13.630.36 ± 0.1126.80 ± 22.350.18 ± 0.1432.86 ± 10.900.22 ± 0.0832.32 ± 18.960.21 ± 0.13
751.73 ± 13.260.36 ± 0.1119.04 ± 17.220.12 ± 0.11--25.92 ± 21.150.17 ± 0.15
843.63 ± 6.110.29 ± 0.0415.15 ± 11.700.10 ± 0.08--21.15 ± 15.960.14 ± 0.10

الجدول 2: الفرق المطلق والنسبي. يظهر هذا الجدول الفرق المطلق في الحجم بين الوذمه اللمفية-والسيطرة المؤخرات ± SD في مم3 والفرق النسبي ± sd في المئة.

الاسبوعحجم الوذمه اللمفية في مم3 (ن = 15)حجم التحكم في مم3
(ن = 15)		ف-القيمة95% الفاصل الزمني للثقة
1241.82 ± 35.69137.48 ± 21.54< 0.00182.21 − 126.47
2242.41 ± 45.13135.29 ± 5.81< 0.00169.33 − 144.89
3216.85 ± 41.47138.08 ± 5.31< 0.00145.15 − 112.39
4193.10 ± 31.27142.43 ± 5.29< 0.00125.15 − 76.18
5180.03 ± 26.03147.29 ± 6.450.00211.72 − 53.76
6179.89 ± 25.00153.09 ± 6.560.0047.74 − 45.85
7176.45 ± 19.77157.41 ± 7.490.0084.35 − 33.71
8166.97 ± 11.8151.82 ± 10.070.00225.12

الجدول 3: اختبار المقارنات المتعددة في Sidak: التجربة 2. يوضح هذا الجدول المقارنة الاحصائيه بين الكميات المتوسطة لأطراف الوذمه اللمفية المستحثة والأطراف السفلية المسيطرة في الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. وتقدم القيم علي النحو التالي: يعني ± SD في مم3. وتعتبر القيمة المضافة < 0.05 بمثابه فرق كبير بين الطرف السفلي المسيطر والمؤخر اللمفية. n (عدد الملاحظات) = 15.

وشملت التجربة 3 36 الفئران. 12 الفئران بمثابه الضوابط وأعطيت حقن المالحة. وتستخدم الضوابط كنتيجة تمثيليه ونحن نفترض ان الحقن الملحية لم يكن لها تاثير علي حجم الوذمه اللمفية المستحثة. في هذه التجربة تم قياس حجم الأطراف السفلية من الفئران لمده 6 أسابيع بدلا من 8. استمرت التجربة 6 أسابيع فقط بسبب الصعوبات اللوجستية عند اجراء التجربة. الشكل 4 يظهر الوذمه اللمفية أكثر اتساقا من التجربة 2. يبين الجدول 4 ان هناك الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه في الأسابيع الستة التالية للجراحة.

figure-results-11915
الشكل 4: متوسط حجم الأطراف السفلية: التجربة 3. يتم تضمين قياسات 12 الفئران من مجموعه التحكم في هذا الرقم. يظهر هذا الرسم البياني متوسط حجم الأطراف السفلية في3 مم في الأسابيع الستة التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. تمثل أشرطه الخطا SD. الرجاء النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

الاسبوعحجم اللمفية في مم3 (n = 12)حجم التحكم في مم3 (n = 12)ف-القيمة95% الفاصل الزمني للثقة
1219.06 ± 35.00133.86 ± 10.02< 0.00151.66 − 118.74
2220.90 ± 36.98135.27 ± 5.89< 0.00149.33 − 121.94
3211.74 ± 47.30137.07 ± 7.560.00227.24 − 122.11
4186.09 ± 20.36135.47 ± 5.70< 0.00134.98 − 66.27
5182.35 ± 18.25139.68 ± 7.45< 0.00131.37 − 53.98
6183.44 ± 12.11150.58 ± 8.37< 0.00122.42 − 43.29

الجدول 4: اختبار المقارنات المتعددة Sidak: التجربة 3. يوضح هذا الجدول المقارنة الاحصائيه بين الكميات المتوسطة لأطراف الوذمه اللمفية المستحثة والأطراف السفلية المسيطرة في الأسابيع الستة التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. وتقدم القيم علي النحو التالي: يعني ± SD في مم3. وتعتبر القيمة المضافة < 0.05 بمثابه فرق كبير بين الطرف السفلي المسيطر والمؤخر اللمفية. n (عدد الملاحظات) = 12.

ويبين الشكل 5 والجدول 5 حجم الأطراف السفلية المتوسطة لجميع التجارب الثلاث مجتمعه. ويبين الجدول 5 ان استخدام هذا الاجراء يؤدي إلى الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه التي تدوم 8 أسابيع علي الأقل. البيانات من الأسابيع الستة الاولي ، هي القياسات المجمعة من 31 الفئران من التجارب 1 و 2 و 3. في الأسبوع 7 − 8 لم يكن لدينا سوي البيانات من التجارب 1 و 2 مما ادي إلى قياسات مجتمعه من 19 الفئران.

figure-results-14571
الشكل 5: حجم الأطراف السفلية المتوسطة المشتركة: التجربة 1 و 2 و 3. واحد وثلاثين الفئران المدرجة في الأسابيع الستة الاولي بعد الجراحة و 19 الفئران المدرجة في 2 أسابيع التالية. يظهر هذا الرسم البياني متوسط حجم الأطراف السفلية في3 مم في الأسابيع الثمانية التالية للجراحة. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. تمثل أشرطه الخطا SD. الرجاء النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.

الاسبوعحجم الوذمه اللمفية في مم3 (الأسبوع 1 − 6 ن = 31)
(الأسبوع 7 − 8 ن = 19)		حجم التحكم في مم3 (الأسبوع 1 − 6 ن = 31)
(الأسبوع 7 − 8 ن = 19)		ف-القيمة95% الفاصل الزمني للثقة
1230.00 ± 34.46135.99 ± 16.03< 0.00178.19 − 109.84
2228.90 ± 40.91136.13 ± 6.32< 0.00170.47 − 115.07
3211.83 ± 41.15138.09 ± 6.36< 0.00151.53 − 95.95
4190.63 ± 25.81139.62 ± 6.54< 0.00138.15 − 63.87
5182.70 ± 21.52143.62 ± 7.79< 0.00128.36 − 49.79
6182.98 ± 19.11150.66 ± 8.36< 0.00122.18 − 42.47
7180.34 ± 19.31154.43 ± 9.60< 0.00111.61 − 40.22
8173.04 ± 16.42151.89 ± 9.19< 0.00135/10 − 31.94

الجدول 5: اختبار المقارنات المتعددة في Sidak: التجربة 1 و 2 و 3 مجتمعه. يوضح هذا الجدول المقارنة الاحصائيه بين الكميات المتوسطة لأطراف الوذمه اللمفية المستحثة والأطراف السفلية للسيطرة علي 31 فئران في الأسابيع الستة الاولي بعد الجراحة و 19 فاره في الأسبوعين التاليين. تلقت جميع الفئران جرعه من 10 غراي التشعيع قبل وبعد الجراحة. وتقدم القيم علي النحو التالي: يعني ± SD في مم3. وتعتبر القيمة المضافة < 0.05 بمثابه فرق كبير بين الطرف السفلي المسيطر والمؤخر اللمفية. n (عدد الملاحظات) = 31.

Discussion

وهناك بضع خطوات حاسمه في هذا البروتوكول. أولا ، من المهم ان الباحثين اتخاذ احتياطات السلامة عند العمل مع النشاط الإشعاعي. ثانيا ، خلال الجزء الجراحي من هذا البروتوكول ، من المهم ان تبدا الاجراء مره واحده وقد تم تخدير الماوس والانتهاء منه دون فواصل لا لزوم لها. هذا أمر مهم لتجنب فتره طويلة بشكل مفرط الجراحية للحيوان ومنع ان التخدير يفقد تاثير اثناء الجراحة. فمن المستحسن فقط لأداره حقنه واحده من المخدرات وإكمال العملية الجراحية في جلسة واحده. بل هو أيضا خطوه حاسمه ، وليس لأداره الكثير من براءات الاختراع الأزرق الخامس ، والزائدة براءات الاختراع الأزرق الخامس سوف تلطيخ الانسجه المحيطة الاوعيه الليمفاوية. إذا كان النسيج المحيطة يحصل مشوه يمكن ان يكون من المستحيل تقريبا لتصور الاوعيه الليمفاوية وهذا يضر الاجراء. حتى لو لم يتمكن أحد من تصور الاوعيه الليمفاوية ، فان النسيج المشوه سيجعل من الصعب تقييم ما إذا كانت البراءة الزرقاء الخامسة تمر قريبا إلى الاربطه ام لا. وهذا أمر مشكوك فيه لان المشغل يجب ان يكون متاكدا من ان الحروف المركبة الموضوعة تضيق تدفق الليمفاوية ، للتاكد من ان الاجراء سيكون ناجحا. من المهم أيضا ترك فجوه من 2 − 3 مم عند إغلاق الجرح. كفجوة جلديه مؤقته غالبا ما تكون هناك حاجه لتقليد عمليه التئام الجروح البشرية29.

القيود المفروضة علي هذه الطريقة هي انه اجراء يستغرق وقتا طويلا ويتطلب الوصول إلى المجهر والتدريب الجراحي المجهري السابق. عند تنفيذ الجزء الجراحي من هذا البروتوكول ، من المهم التخطيط للوقت بين الإجراءات الجراحية. وهناك الكثير من الوقت يذهب إلى انتظار الحيوانية ليتم تخديرها ، وحلق المؤخر والاستعداد عموما لكل عمليه جراحيه. ولذلك ، فمن المستحسن لاعداد السكن ومخدر مقدما. من المهم ان نلاحظ انه للتاكد من انه قد تم المستحثة الوذمه اللمفية المزمنة ، يجب تحليل التشريح. لم يتم تضمين العلم المرضي في هذه المقالة ، وهو قيد. بدون علم الأورام الذي يدعم حقيقة ان التغيرات النسيجية قد حدثت للاوعيه الليمفاوية فان التغيرات في الحجم في الأطراف السفلية لا يمكن وصفها الا بأنها الوذمه. تتضمن المقالة التي تتضمن كافة البيانات الموجودة علي الفئران الاربعه من التجربة 126 علم التشريح وتبين ان هناك تغييرات كبيره في علم التشريح باستخدام هذه التقنية. يتضمن المقال أيضا التصوير اللمفاوي. وقد استخدم الاجراء نفسه علي الفئران في التجربة 2 و 3 ، ولكن لم تظهر الامراض الليمفاوية فرقا كبيرا بين المؤخر اللمفية والسيطرة المؤخر في هذه التجارب. هناك حاجه إلى المزيد من الدراسات بما في ذلك علم الامراض التناسلية لهذا النموذج لتوضيح ما إذا كان يتم المستحثة الوذمه اللمفية علي مستوي الانسجه. ولم تنشر بعد التجربتان 2 و 3 ، ولذلك لا يمكننا الرجوع اليهما.

في حين ان استخدام الاشعه المقطعية لقياس حجم الأطراف السفلية يمكن القول بأنه أكثر موضوعيه من استخدام طريقه أزاحه الماء أو القياسات المحيطة ، الا انه لا يزال لديه حدوده. تقنيه القياس مكلفه وتستغرق وقتا طويلا وتتطلب الوصول إلى الماسح الضوئي μCT وتحليل البرامج.

واحده من أكبر التحديات مع نماذج الوذمه اللمفية القوارض بشكل عام ، وكانت القرار التلقائي الوذمه اللمفية ، الا إذا تم اجراء الإشعاع المفرط25. عند تطوير هذا النموذج ، اختبرنا عده جرعات مختلفه من الإشعاع للعثور علي جرعه من شانها ان تحفز الوذمه اللمفية الدائمة دون التسبب في اعتلال شديد26. في السابق ، لم يتم توحيد نماذج الوذمه اللمفية في أساليب الاستقراء اللمفي أو تقييمات النتائج. واستخدمت اواشي وآخرون20 جرعه واحده من التشعيع بمقدار 30 غراي ، وربطت كل وعاء لمفاوي بثلاث نقاط منفصلة. في تلك الدراسة ، استغرق الاجراء الجراحي 90 دقيقه لأداء. وعلي الرغم من ان الطريقة المعروضة في هذه المقالة يمكن اعتبارها مضيعه للوقت ، الا ان الجزء الجراحي من الاجراء لا يزال يمكن أداؤه مرتين تقريبا بالسرعة التي يقدمها Oashi et al.20. كما ان لها فتره متابعه مدتها 6 أشهر ، وهو ما يعد أطول بكثير من اي من الدراسات الواردة في هذه المادة. ومع ذلك ، فانها تضمنت فقط ماوس واحد وانها يدويا قياس محيط الأطراف لتقييم التورم ، في حين ان وحدات التخزين المعروضة في هذه المقالة تم قياسها علي 31 الفئران باستخدام الاشعه المقطعية والبرمجيات تحليل 3D. كوماتسو et al.30 أزاله الغدد الليمفاوية الاربيه والاوعيه الليمفاوية الطرفية المرتبطة بها والانسجه الدهنية باستخدام سكين كهربائي. استخدام سكين الكهربائية قد يكون نهج ابسط والتي لا تتطلب التدريب الجراحي المجهري ، ولكن وذمه المستحثة حلها بعد اليوم 4 في حين ان الطريقة المعروضة في هذه المادة تقدم الوذمه اللمفية متسقة تدوم ما لا يقل عن 8 أسابيع.

ويؤمل ان يمكن هذا البروتوكول الباحثين من النظر في القيود والمزايا الخاصة بنموذج الوذمه اللمفية المنقح. وينبغي ان يساعد البروتوكول أيضا الباحثين علي تكرار النموذج بنجاح. ويمكن استخدام هذه الطريقة في الدراسات المستقبلية المراقبة والتداخلية لفهم الفيزيولوجيا المرضية من الوذمه اللمفية وخيارات العلاج رواية البحث. في الدراسات المستقبلية, سيكون أيضا من المثير للاهتمام ان يكون متابعه أطول من 8 أسابيع لمراقبه فقط كم من الوقت يستمر اللمفية المستحثة. سيكون من المثير للاهتمام أيضا ان نلاحظ تاثير التعرض للإشعاع أكثر استهدافا للفئران قبل وبعد الجراحة. ويمكن القيام بذلك عن طريق اجراء فحص التصوير المقطعي المحوسب والتخطيط لحجم الهدف. في الدراسات المستقبلية ، يمكن دعم هذا النموذج أيضا من خلال دراسات التصوير اللمفاوي الموجهة بشكل مضان ، أو القياس أو المقاومة الحيوية. تقدم هذه الطريقة الوذمه اللمفية ذات الدلالة الاحصائيه التي تدوم 8 أسابيع علي الأقل ، والتي تم قياسها مباشره عن طريق التصوير المقطعي المحوسب في ثلاث تجارب منفصلة من قبل محققين رئيسيين مختلفين.

Disclosures

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

ويشكر المؤلفان بيتر بولين ، رئيس المختبر الطبي الحيوي لإقراضهما المعدات اللازمة لتسجيل اللقطات التي شوهدت من خلال المجاهر.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
10-0 Nylon sutureS&T12051-10
6-0 Nylon suture - DafilonB BraunC0933112
Coagulator - ICC 50ERBE
Cotton tipped applicatorsYibon medical co
Dissecting forcepsLawton09-0190
Elastic retractorsOdense University Hospital
Electrical clipperAesculapGT420
Fentanyl 0,315 mg/mlMatrix
Heating pad - PhysioSuiteKent Scientific Corp.
Isoflurane 1000mg AttaneScan Vet
Isoflurane vaporizer - PPVPenlon
Micro jewler forcepsLawton1405-05
Micro Needle holderLawton25679-14
Micro scissorsLawton10128-15
Micro tying forcepsLawton43953-10
Microfine U-40 syringe 0,5mlBD328821
Microlance syringe 25gBD
Microlance syringe 27gBD
Midazolam 5 mg/ml (hameln)Matrix
Needle holder - Circle woodLawton08-0065
Non woven swabsSelefa
Opmi pico microscope F170Zeiss
Patent blue V - 25 mg/mlGuerbet
Scissors - JosephBDRH1630
Siemens INVEON multimodality pre-clinical scannerSiemens pre-clinical solutions
Source of radiation - D3100Gulmay
Stata Statistical Software: Release 15StataCorp LLC
Temgesic - 0,2 mgIndivior
Vet eye ointment - viscotearsBausch & Lomb

References

  1. Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).
  2. Greene, A. K., Greene, A. K., Slavin, S. A., Brorson, H. Epidemiology and morbidity of lymphedema. Lymphedema: Presentation, Diagnosis, and Treatment. , 33-44 (2015).
  3. Hespe, G. E., Nores, G. G., Huang, J. J., Mehrara, B. J. Pathophysiology of lymphedema-Is there a chance for medication treatment?. Journal of Surgical Oncology. 115 (1), 96-98 (2017).
  4. Grada, A. A., Phillips, T. J. Lymphedema: Pathophysiology and clinical manifestations. Journal of the American Academy of Dermatology. 77 (6), 1009-1020 (2017).
  5. Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. Lymphedema: Surgical and Medical Therapy. Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 209S-218S (2016).
  6. Carl, H. M., et al. Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema. Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).
  7. DiSipio, T., Rye, S., Newman, B., Hayes, S. Incidence of unilateral arm lymphoedema after breast cancer: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Oncology. 14 (6), 500-515 (2013).
  8. Douglass, J., Graves, P., Gordon, S. Self-Care for Management of Secondary Lymphedema: A Systematic Review. PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (6), e0004740 (2016).
  9. Shih, Y. C. T., et al. Incidence, treatment costs, and complications of lymphedema after breast cancer among women of working age: a 2-year follow-up study. Journal of Clinical Oncology. 27 (12), 2007-2014 (2009).
  10. Ridner, S. H. The psycho-social impact of lymphedema. Lymphatic Research and Biology. 7 (2), 109-112 (2009).
  11. Gutknecht, M., et al. Cost-of-illness of patients with lymphoedema. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 31 (11), 1930-1935 (2017).
  12. Hayes, S., et al. Prevalence and prognostic significance of secondary lymphedema following breast cancer. Lymphatic Research and Biology. 9 (3), 135-141 (2011).
  13. Danese, C. A., Georgalas-Bertakis, M., Morales, L. E. A model of chronic postsurgical lymphedema in dogs' limbs. Surgery. 64 (4), 814-820 (1968).
  14. Das, S. K., Franklin, J. D., O'Brien, B. M., Morrison, W. A. A practical model of secondary lymphedema in dogs. Plastic and Reconstructive Surgery. 68 (3), 422-428 (1981).
  15. Huang, G. K., Hsin, Y. P. An experimental model for lymphedema in rabbit ear. Microsurgery. 4 (4), 236-242 (1983).
  16. Tobbia, D., et al. Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep. Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).
  17. Lahteenvuo, M., et al. Growth factor therapy and autologous lymph node transfer in lymphedema. Circulation. 123 (6), 613-620 (2011).
  18. Honkonen, K. M., et al. Lymph node transfer and perinodal lymphatic growth factor treatment for lymphedema. Annals of Surgery. 257 (5), 961-967 (2013).
  19. Wang, G. Y., Zhong, S. Z. A model of experimental lymphedema in rats' limbs. Microsurgery. 6 (4), 204-210 (1985).
  20. Oashi, K., et al. A new model of acquired lymphedema in the mouse hind limb: a preliminary report. Annals of Plastic Surgery. 69 (5), 565-568 (2012).
  21. Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema. Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).
  22. Cheung, L., et al. An experimental model for the study of lymphedema and its response to therapeutic lymphangiogenesis. BioDrugs : Clinical Immunotherapeutics, Biopharmaceuticals and Gene Therapy. 20 (6), 363-370 (2006).
  23. Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9. Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).
  24. Tammela, T., et al. Therapeutic differentiation and maturation of lymphatic vessels after lymph node dissection and transplantation. Nature Medicine. 13 (12), 1458-1466 (2007).
  25. Frueh, F. S., et al. Animal models in surgical lymphedema research--a systematic review. Journal of Surgical Research. 200 (1), 208-220 (2016).
  26. Jorgensen, M. G., et al. Quantification of Chronic Lymphedema in a Revised Mouse Model. Annals of Plastic Surgery. 81 (5), 594-603 (2018).
  27. Frueh, F. S., et al. High-resolution 3D volumetry versus conventional measuring techniques for the assessment of experimental lymphedema in the mouse hindlimb. Scientific Reports. 6, 34673 (2016).
  28. Biau, D. J., Kerneis, S., Porcher, R. Statistics in brief: the importance of sample size in the planning and interpretation of medical research. Clinical Orthopaedics and Related Research. 466 (9), 2282-2288 (2008).
  29. Korula, P., Varma, S. K., Sunderrao, S. Inhibition of wound contraction by point-to-point adherent splintage. Plastic and Reconstructive Surgery. 95 (4), 725-730 (1995).
  30. Komatsu, E., et al. Lymph Drainage During Wound Healing in a Hindlimb Lymphedema Mouse Model. Lymphatic Research and Biology. 15 (1), 32-38 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

153

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved