Bu çalışma NIH-NICHD&#39;den MS&#39;e intramural hibe ile desteklenmiştir. Tatlandırıcı madde dağıtım sisteminin tasarımı ile ilgili yardım için NIH-NIMH Enstrümantasyon Çekirdeği Tesisinin G. Dold ve T. Talbot&#39;a teşekkür ediyoruz.

<ol>
	<li>Chandrashekar, J., Hoon, M. A., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+and+cells+for+mammalian+taste.">The receptors and cells for mammalian taste.</a> Nature. 444 (7117), 288-294 (2006).</li><li>Chen, X., Gabitto, M., Peng, Y., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Gustotopic+Map+of+Taste+Qualities+in+the+Mammalian+Brain.">A Gustotopic Map of Taste Qualities in the Mammalian Brain.</a> Science. 333 (6047), (2011).</li><li>Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+Sense+about+Taste:+From+Mammals+to+Insects.">Common Sense about Taste: From Mammals to Insects.</a> Cell. 139 (2), 234-244 (2009).</li><li>Mueller, K. L., Hoon, M. A., Erlenbach, I., Chandrashekar, J., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+and+coding+logic+for+bitter+taste.">The receptors and coding logic for bitter taste.</a> Nature. 434 (7030), 225-229 (2005).</li><li>Zhao, G. Q., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+for+mammalian+sweet+and+umami+taste.">The receptors for mammalian sweet and umami taste.</a> Cell. 115 (3), 255-266 (2003).</li><li>Huang, A. L., Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cells+and+logic+for+mammalian+sour+taste+detection.">The cells and logic for mammalian sour taste detection.</a> Nature. 442 (7105), 934-938 (2006).</li><li>Pfaffmann, C., Carl, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+afferent+code+for+sensory+quality.">The afferent code for sensory quality.</a> Am Psychol. 14 (5), 226-232 (1959).</li><li>Lemon, C. H., Katz, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+processing+of+taste.">The neural processing of taste.</a> BMC Neurosci. 8 (Suppl 3), (2007).</li><li>Barretto, R. P. J., Gillis-Smith, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+representation+of+taste+quality+at+the+periphery.">The neural representation of taste quality at the periphery.</a> Nature. 517 (7534), 373-376 (2015).</li><li>Reiter, S., Campillo Rodriguez, C., Sun, K., Stopfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+Coding+of+Individual+Chemicals+by+the+Gustatory+System.">Spatiotemporal Coding of Individual Chemicals by the Gustatory System.</a> J Neurosci. 35 (35), 12309-12321 (2015).</li><li>Wilson, D. M., Boughter, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bitter+Taste+Stimuli+Induce+Differential+Neural+Codes+in+Mouse+Brain.">Bitter Taste Stimuli Induce Differential Neural Codes in Mouse Brain.</a> PLoS ONE. 7 (7), e41597 (2012).</li><li>Glendinning, J. I., Davis, A., Ramaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+different+taste+cells+and+signaling+pathways+to+the+discrimination+of+"bitter"+taste+stimuli+by+an+insect.">Contribution of different taste cells and signaling pathways to the discrimination of "bitter" taste stimuli by an insect.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 22 (16), 7281-7287 (2002).</li><li>Kay, L. M., Stopfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Information+processing+in+the+olfactory+systems+of+insects+and+vertebrates.">Information processing in the olfactory systems of insects and vertebrates.</a> Semin Cell Dev Biol. 17 (4), 433-442 (2006).</li><li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+Coding+of+Taste.">Peripheral Coding of Taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li><li>Carleton, A., Accolla, R., Simon, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coding+in+the+Mammalian+Gustatory+System.">Coding in the Mammalian Gustatory System.</a> Trends Neurosci. 33 (7), 326-334 (2010).</li><li>Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organization+of+the+chemosensory+system+in+Drosophila+melanogaster:+a+rewiew.">The organization of the chemosensory system in Drosophila melanogaster: a rewiew.</a> Cell Tissue Res. 275 (1), 3-26 (1994).</li><li>Mitchell, B. K., Itagaki, H., Rivet, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+and+central+structures+involved+in+insect+gustation.">Peripheral and central structures involved in insect gustation.</a> Microsc Res Tech. 47 (6), 401-415 (1999).</li><li>Falk, R., Bleiser-Avivi, N., Atidia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labellar+taste+organs+of+Drosophila+melanogaster.">Labellar taste organs of Drosophila melanogaster.</a> J Morphol. 150 (2), 327-341 (1976).</li><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+a+primary+chemoreceptor+unit.">Physiology of a primary chemoreceptor unit.</a> Science. 122 (3166), 417-418 (1955).</li><li>Delventhal, R., Kiely, A., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recording+from+Drosophila+labellar+taste+sensilla.">Electrophysiological recording from Drosophila labellar taste sensilla.</a> J Vis Exp. (84), e51355 (2014).</li><li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+cellular+basis+of+bitter+taste+in+Drosophila).">The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila).</a> Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).</li><li>Descoins, C., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+responses+of+gustatory+sensilla+of+Mamestra+brassicae+(Lepidoptera,+Noctuidae)+larvae+to+three+ecdysteroids:+ecdysone,+20-hydroxyecdysone+and+ponasterone.">Electrophysiological responses of gustatory sensilla of Mamestra brassicae (Lepidoptera, Noctuidae) larvae to three ecdysteroids: ecdysone, 20-hydroxyecdysone and ponasterone.</a> A. J Insect Physiol. 45 (10), 871-876 (1999).</li><li>Popescu, A., Couton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+central+projections+of+gustatory+receptor+neurons+on+the+antenna+of+the+noctuid+moth+Spodoptera+littoralis.">Function and central projections of gustatory receptor neurons on the antenna of the noctuid moth Spodoptera littoralis.</a> J Comp Physiol. 199 (5), 403-416 (2013).</li><li>Morita, H., Yamashita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generator+potential+of+insect+chemoreceptor.">Generator potential of insect chemoreceptor.</a> Science. 130 (3380), 922 (1959).</li><li>Davis, N. T., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroanatomy+of+the+sucking+pump+of+the+moth,+Manduca+sexta+(Sphingidae,+Lepidoptera).">Neuroanatomy of the sucking pump of the moth, Manduca sexta (Sphingidae, Lepidoptera).</a> Arthropod Struct Dev. 35 (1), 15-33 (2006).</li><li>St&#252;rckow, B., Adams, J. R., Wilcox, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Neurons+in+the+Labellar+Nerve+of+the+Blow+Fly.">The Neurons in the Labellar Nerve of the Blow Fly.</a> Z Vergl Physiol. 54, 268-289 (1967).</li><li>St&#252;rckow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+studies+of+a+single+taste+hair+of+the+fly+during+stimulation+by+a+flowing+system.">Electrophysiological studies of a single taste hair of the fly during stimulation by a flowing system.</a> Proceed 16 Intern Contr Zool. 3 (8), 102-104 (1963).</li><li>Christensen, T. A., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific,+sex+pheromone-selective+projection+neurons+in+the+antennal+lobes+of+the+moth+Manduca+sexta.">Male-specific, sex pheromone-selective projection neurons in the antennal lobes of the moth Manduca sexta.</a> J Comp Physiol A. 160, 553-569 (1987).</li><li>Reiter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gustatory Information Processing. , (2014).</li><li>Saha, D., Leong, K., Katta, N., Raman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-unit+Recording+Methods+to+Characterize+Neural+Activity+in+the+Locust+(Schistocerca+Americana)+Olfactory+Circuits.">Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits.</a> J Vis Exp. (71), (2013).</li><li>Pouzat, C., Mazor, O., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+noise+signature+to+optimize+spike-sorting+and+to+assess+neuronal+classification+quality.">Using noise signature to optimize spike-sorting and to assess neuronal classification quality.</a> J Neurosci Methods. 122 (1), 43-57 (2002).</li><li>Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Metrics+to+Accompany+Spike+Sorting+of+Extracellular+Signals.">Quality Metrics to Accompany Spike Sorting of Extracellular Signals.</a> J Neurosci. 31 (24), 8699-8705 (2011).</li><li>Fee, M. S., Mitra, P. P., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+sorting+of+multiple+unit+neuronal+signals+in+the+presence+of+anisotropic+and+non-Gaussian+variability.">Automatic sorting of multiple unit neuronal signals in the presence of anisotropic and non-Gaussian variability.</a> J Neurosci Methods. 69 (2), 175-188 (1996).</li><li>Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mushroom+body+memoir:+from+maps+to+models.">Mushroom body memoir: from maps to models.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (4), 266-275 (2003).</li><li>Naraghi, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-induced+oscillations+in+the+mushroom+bodies+of+the+locust.">Odorant-induced oscillations in the mushroom bodies of the locust.</a> J Neurosci. 14, 2993-3004 (1994).</li><li>Laurent, G., Wehr, M., Davidowitz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+representations+of+odors+in+an+olfactory+network.">Temporal representations of odors in an olfactory network.</a> J Neurosci. 16, 3837-3847 (1996).</li><li>Perez-Orive, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+and+sparsening+of+odor+representations+in+the+mushroom+body.">Oscillations and sparsening of odor representations in the mushroom body.</a> Science. 297, 359-365 (2002).</li><li>Stopfer, M., Jayaraman, V., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+identity+vs.+intensity+coding+in+an+olfactory+system.">Odor identity vs. intensity coding in an olfactory system.</a> Neuron. 39, 991-1004 (2003).</li><li>Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+network+dynamics+and+the+coding+of+multidimensional+signals.">Olfactory network dynamics and the coding of multidimensional signals.</a> Nature Re Neurosci. 3, 884-895 (2002).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Burada açıklanan yöntemler, nispeten basit bir hayvandan Manduca sexta&#39;nın, tat verici doğum öncesi, sırasında ve sonrasındaki çoklu, rasgele seçilmiş GRN&#39;lerin aktivitelerini (2 saatten fazla) uzun süreler boyunca karakterize etmesine izin verir. Bu yöntemler, aynı zamanda, hassas tatlısı kontrollü, çoklu tat arttırıcı uyarıcıların hızlı ve sıralı olarak verilmesine, tatların gösterilmesinin altında yatan sinirsel mekanizmaların incelenmesine yarayan avantajlara izin verir. Bu protokol, monosinaptik olarak bağlı olan internöronlarla 10 aynı anda GRN&#39;leri izleyerek , postsinaptik hedef nöronlarına ( örn., SEZ&#39;de) gönderildiklerinde, tatlara karşı GRN&#39;lerin yanıtlarının nasıl dönüştürüldüğünü incelemek için kullanılmıştır. Buna ek olarak, bu yöntemler tatmin edici kodlamanın temel özelliklerini incelemek için karmaşık paradigmaların yürütülmesine izin vererek deneycinin ihtiyaçlarına göre uyarlanabilir. BaşlarkenÇalışmalarımız, bazen gidermek zorunda olduğumuz bir teknik problem, maksiller sinirden tetrode telleri ile sızdırma sinyalleri bulamamamızdı. Bunun olası sebepleri diseksiyon protokolü zor olduğu için çeşitlidir ve iyi bir hazırlık elde etmek için bazı uygulamalar gereklidir. İlk olarak, güve disseksiyonu esnasında, maksiller sinirler, özellikle sinir dokusunu çevreleyen kılıfın çıkartılması sırasında zarar görürler. İkincisi, eğer kılıf tamamen kaldırılmazsa, tetrode teller sinire erişemeyebilir. Her iki durumda da, genellikle yeni bir hazırlık başlatmak, bu sorunları çözmenin en kolay yoludur. Üçüncüsü, tetrode telleri ile ilgili bir problem olabilir. Bu, 1kHz&#39;de ~ 270 kΩ olmalı tellerin empedansının ölçülmesi ile kontrol edilebilir. Empedans değeri ~ 300 kΩ&#39;un üzerindeyse, istenilen empedansı elde etmek için telleri altın ile elektroplozlayın (bkz. Referans 30 ). Dördüncüsü, bir parça ekipman yanlış bağlanabilirYa da yanlış davranan. Bir diğer olası problem, sızdırma sinyallerinin kaydedilmesidir ancak nöronlar, tat arttırıcılara tepkisiz görünmektedir. Kayıtlı nöronlar, teslim edilen tat sahiplerine karşı duyarsız oldukları için olabilir. Ayrıca, GRN&#39;lerin aksonlarının yanı sıra maksiller sinirin de makro duyusal lifleri taşıdığını akılda tutmak önemlidir. Böylece, GRN&#39;ler yerine ya da GRN&#39;lere ilaveten mekanosensör nöronlardan kayıt yapmak mümkündür. Bununla birlikte, tastant uygulama sistemi, deney boyunca sabit bir mekanik girdi sağlayacak şekilde tasarlanmıştır, çünkü bir tat vericisine verilen yanıtların, teslimatının mekanik bileşenine verilen tepkilerle karıştırılması olası değildir. Bazılarına, diğerlerine değil çeşitli lezzetçilere cevap veren nöronlar, açıkça GRN&#39;ler olarak sınıflandırılabilir. Bileşik bozulması veya buharlaştırma nedeniyle tastant konsantrasyonunda veya bileşimde değişiklik yapılmasını önlemek için yeni seyreltilmiş tat vericilerini kullanmanızı öneririzÇözücü. Hortumun kirlenmesini ve / veya tıkanmasını önlemek için sistemi düzenli olarak temizlemenizi öneririz. Olas bir teknik problem, dezavantajlı bir sinyal / gürültü oranıdır. Bu problem çoğunlukla banyo zemin elektrodunun pozisyonunun yeniden kristalleştirilmesi veya ayarlanması ile çözülebilir. Diğer çözümler, cihazdaki her bir elektrik bağlantısının korunması ve minimum tutulması gerektirebilir. Son olarak, tetrode kayıtları kullanılarak elde edilen verilerin doğru analizinin dikkatli bir şekilde sivri uçlu sıralama yapılmasını gerektirdiğini belirtmek önemlidir. Tam otomatik yöntemlerin genellikle yetersiz olduğunu tespit ettik. Tetrode verilerini analiz etmeden önce 10 , 29 , 31 , 32 , 33 numaralı virüslü virüs türlerinin incelenmesini öğrenmenizi öneririz. Diseksiyon proğimize alternatiflerTocol kullanılabilir. Burada, maksilanın kafasının ventral kısmı boyunca maksiller sinirlere ve SEZ&#39;e erişim sağlayan bir diseksiyon tarif ettik, ancak bu yapılara dorsal taraftan diseke ederek erişmek de mümkündür. Dorsal yan hazırlığın, bu tatlı yapılardan derinliklerine bağlı olarak kayıt yapmak için uygun olmadığını tespit ettik, ancak bu hazırlama, mantar cismi gibi yüksek dereceli yapılardaki kayıtları etkinleştirme imkânı sağlıyor, bu alan çoklu -Sensör entegrasyonu, birleştirici öğrenme ve bellek işleme 34 . Maksiller sinirden kayıt yapmak için tetrode elektrodların kullanımına odaklandık, ancak resimde olduğu gibi standart hücre içi keskin elektrotlar da bu amaçla kullanılabilir. Buna ek olarak, her iki teknik birden fazla beyin bölgesinden ( 10) eşzamanlı kayıt yapmak için birleştirilebilir. Sinirbilimi literatürü i35 , 36 , 37 , 38 , 39 böcekler ve omurgalılara uygulanan olfaktör kodlama gibi duyusal işlemenin temel ilkelerini ortaya koymak için güçlü araçlar olduğu kanıtlanmış omurgasız modeller. Umarız yöntemlerimiz, tatlılık kodlamasıyla ilgili temel yeni anlayışlara götürecektir.

Tatlılık ve koku alma sistemleri, sırasıyla, tat ve koku algılamalarına neden olarak, çevredeki kimyasalların içsel temsillerini üretirler. Bu kimyasal duyu, organizmanın hayatta kalması için kritik olan sayısız davranışları ortaya çıkarmak için, arkadaşları ve yemekleri bulmaya, yırtıcı hayvanlardan ve toksinlerden kaçınmaya kadar çok önemli. Bu süreç, çevresel kimyasallar, duyusal reseptör hücrelerinin plazma membranlarında bulunan reseptörlerle etkileşime girdiğinde başlar; Doğrudan ya da nöronlarla olan etkileşimler yoluyla bu hücreler, kimyasalların kimliği ve konsantrasyonu hakkında elektrik sinyallerine dönüştürürler. Bu sinyaller daha sonra daha üst düzey nöronlara ve diğer beyin yapılarına iletilir. Bu adımlar ilerledikçe, orijinal sinyal her zaman organizmanın duyu bilgisini algılama, ayırma, sınıflandırma, karşılaştırma ve saklama yeteneğini teşvik eden ve uygun bir eylemi seçmek için değişikliklere uğrar. Sutyenin nasıl olduğunu anlamaÇeşitli görevleri en iyi gerçekleştirmek için çevresel kimyasallar hakkında bilgi dönüştürürken, nörobilimdeki temel bir sorundur. Tatlı kodlamanın nispeten basit olduğu düşünülmektedir: yaygın olarak kabul edilen bir görüş, bir tadı ortaya çıkaran her kimyasal molekülün (&quot;tastant&quot;) doğal olarak yaklaşık beş veya çok temel lezzet kalitesinden birine ( yani tatlı, acı, ekşi) ait olduğunu göstermektedir , Tuzlu ve umami) 1 . Bu &quot;temel lezzet&quot; görünümünde, tatlı sisteminin görevi, bu temel zevklerin hangisinin bulunduğunu belirlemektir. Ayrıca, sinir sisteminde temel tadı göstermenin altında yatan sinirsel mekanizmalar belirsizdir ve &quot;etiketli bir çizgi&quot; 2 , 3 , 4 , 5 , 6 veya &quot;çapraz lif deseni&quot; 7 tarafından yönetildiği düşünülmektedir </suP&gt; , 8 kod. Etiketli bir satır kodunda, her bir duyumsal hücre ve her bir sinirsel takipçisi, tek bir tat kalitesine tepki verir ve merkezi sinir sistemindeki yüksek işleme merkezlerine bu tada adanmış doğrudan ve bağımsız bir kanal oluştururlar. Aksine, bir lif boyunca desen kodunda, her bir duyumsal hücre, birden fazla tat kalitesine tepki verebilir; böylece, tatma maddesi hakkındaki bilgi, duyusal nöron popülasyonunun genel tepkisi ile temsil edilir. Tatlı bilgi, temel beğenilerle, etiketli çizgilerle veya başka bir mekanizma ile temsil edilip edilmediği belli değildir ve son araştırmanın odağı 3 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12&#39;dir . Yaptığımız son çalışmamız, tatlı sistemin, üretmek için spatiotemporal bir nüfus kodu kullandığını düşündürmektedirTemel lezzet kategorilerinden ziyade kişilerin zevklerini temsil etme 10 . Burada, tatlılık kodlaması çalışmasına yardımcı olacak 3 yeni araç sunuyoruz. İlk olarak, hawkmoth Manduca sexta&#39;nın, tadı elektrofizyolojik olarak incelenmesi için nispeten basit bir model organizma olarak kullanılmasını ve bir diseksiyon prosedürünü tarif etmesini öneriyoruz. İkinci olarak, bireysel GRN&#39;lerin aktivitesini kaydetmek için hücre dışı &quot;tetrodes&quot; kullanımını öneriyoruz. Ve üçüncü olarak, hayvan için tat vericinin kesin zamanlı atımlarını sağlamak ve izlemek için yeni bir cihaz önermekteyiz. Bu araçlar laboratuvarımızın ve diğerlerinin koku sistemini incelemek için kullandıkları tekniklerden uyarlanmıştır. Meyve sinek Drosophila melanogaster , çekirge Schistocerca americana ve Manduca cinsiyeti kelebekleri gibi böcekler onlarca yıldır neredeyse tüm dünyadaki temel prensipleri anlamak için güçlü kaynaklar sağlamıştır.( Örneğin, olfaksiyon 13 ). Memelilerde, tat alıcıları karmaşık ikinci elçi haberci yolları 1 , 14 aracılığıyla nöronlarla iletişim kuran uzmanlaşmış hücrelerdir. Böceklerde daha basit: tat alıcıları nöronlardır. Dahası, çevredeki memelilerin tat yolakları nispeten daha karmaşıktır, çok sayıda paralel sinir yolları vardır ve önemli bileşenler, küçük kemikli yapılarda bulunan erişilmesi zor 15 . Böcek tadı yolları daha basit gözükmektedir. Böceklerde, GRN&#39;ler, anten, ağız parçaları, kanat ve bacaklarda bulunan sensilla olarak bilinen özel yapılarda bulunur 16,17. GRN&#39;ler direk olarak tatlısı 17 olduğu düşünülen ve ikinci mertebe içeren alt ekzofajiyal bölgeye (SEZ) doğrudan yansırTatlı nöronlar 10 . Buradan bilgi refleksleri sürmek için vücuda gider ve davranışsal tercihleri ​​yönlendirmek için entegre edilmek, depolanmak ve nihayetinde yüksek beyin bölgelerine ilerlemektedir 16 . Tadı bilgisinin sinir sistemi boyunca noktadan noktaya nasıl aktarıldığını ve dönüştürdüğünü anlamak için çevresel tat tepkilerini karakterize etmek gereklidir. Böceklerde GRN&#39;lerin sinirsel aktivitesini doğrudan izlemek için en yaygın kullanılan yöntem ucu kayıt tekniği 12 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23&#39;dur. Bu, birçoğunun, erişilebilirliği nispeten kolay olan bir elektrodun doğrudan bir sensillum üzerine yerleştirilmesini içerir. Tadı, elektrot içine dahil edilir ve aktif hale getirilip extRasemiküler olarak sensillumdaki GRN&#39;lerin nöronal yanıtlarını ölçer. Ancak, tat maddesi elektrot içinde bulunduğu için, tat verici madde verilmeden önce veya çıkarıldıktan sonra GRN aktivitesinin ölçülmesi veya elektrodun 20 değiştirilmeden tatların değiştirilmesi mümkün değildir. Bir başka yöntem olan &quot;yan duvar&quot; kayıt tekniği, GRN aktivitelerini kaydetmek için kullanılmıştır. Burada, bir tat elektroniğinin ( 24) tabanına bir kayıt elektrodu yerleştirilir ve tatlar, sensillumun ucundaki ayrı bir cam kılcaldan geçirilir. Her iki teknik de GRN&#39;lerden belirli bir sensilluma kaydı sınırlar. Burada, yeni bir teknik öneriyoruz: rastgele seçilen GRN aksonlarından farklı sensilla&#39;dan kayıt yaparken, burun burunlarına da ayrı ayrı tat veriyoruz. Akson kayıtları, keskin cam elektrotlar veya hücre dışı elektrot demetleri (tetrodes), aksonları taşıyan sinire yerleştirerek elde edilirSEZ 10&#39;da püsküren GRN&#39;ler. Manduca&#39;da , bu aksonlar, tamamen aktive olduğu bilinen maksiller siniri dolaşarak, duyusal yanıtların kesin bir şekilde kaydedilmesine imkân sağlar. Aksonlardan kayıt yöntemi, iki saatten fazla bir süre boyunca, bir dizi tat verici sunumundan önce, sırasında ve sonrasında GRN yanıtlarının istikrarlı bir şekilde ölçülmesine izin verir. Burada, maksiller sinirleri SEZ ile birlikte sunmak için diseksiyon prosedürünü açıklıyoruz ve SEZ 10&#39;daki birden fazla GRN ve nöronun yanıtlarını aynı anda kaydetmeliyiz. Aynı zamanda, bir sivri sıralama yöntemi ile kombine edildiğinde, aynı anda birden fazla (ellerimizde, altıya kadar) GRN&#39;lerin analizine izin veren, ısmarlama 4 kanal bükülmüş tel tetrode kullanarak GRN&#39;lerin hücre dışı kayıtlarının kullanımını tanımlıyoruz. Tetrozlarla yapılan kayıtları, keskin hücre içi kayıtlarlaelektrotlar. Sonunda, tat arttırıcı uyaranlara yönelik yeni bir aparat tanımlıyoruz. Olumsuzluk araştırmalarında odorantlar sunmak için birçok araştırmacı tarafından uzun süre kullanılan ekipmanlardan uyarlanan yeni cihazımız, gustation çalışması için avantajlar sunar: Stürckow ve meslektaşları tarafından geliştirilen (bkz. Referanslar 26 , 27 ) önceki çok kanallı dağıtım sistemini geliştirerek aparatımız hassas hale getirir Bu zamanlamanın gerilim okumasını sağlarken, tat üreticisinin zamanlamasını kontrol etme; Ve çok sayıda tat arttırıcı uyaranın hızlı ve sıralı iletilmesini sağlar 10 . Cihaz, kontrollü nevresim verici içeceklerin verilebileceği düzenli bir temiz su akışı ile burun tıkanır. Her tastant nabzı, burun deliğinden geçer ve sonra yıkanır. Tatlar, az miktarda tatsız gıda boyası içerir; renk sensörünün, hassas zamanlamayla, tastant ovun geçişini izlemesine olanak tanırAmeliyatı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Dissection and specimen preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tube, 15 ml -Falcon</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, Short bevel, 19G x 1-1/2&#34;&#160;</td>
			<td>&#160;MONOJET</td>
			<td>888200144</td>
			<td>For aplying air to remove the hair from the moth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modeling Clay-Van Aken Plastalina&#160;</td>
			<td>DickBlick</td>
			<td>33268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish-100 x 15 mm&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>89000-304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip (1-200 &#181;L)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1111-0806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Techni Edge</td>
			<td>TE05-071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 AWG standard hookup wire</td>
			<td>AlphaWire</td>
			<td>1551</td>
			<td>For inserting the proboscis into the pippete tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Batik wax</td>
			<td>Jacquard</td>
			<td>7946000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric waxer</td>
			<td>Almore International</td>
			<td>66000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Myscroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #1 forceps (coarse)&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500335</td>
			<td>For removing fat and non nervous tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 titanium forceps (fine)&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14096</td>
			<td>For removing fat and non nervous tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF forceps (super-fine)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500085</td>
			<td>For desheathing the nervious tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (fine)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td>For removing the cuticle.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase/Dispase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11097113001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy</td>
			<td>Permatex</td>
			<td>84101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Saline perfusion system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension set with rate flow regulator</td>
			<td>&#160;B Braun Medical Inc.</td>
			<td>V5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV administration set with Y injection site</td>
			<td>&#160;B Braun Medical Inc.</td>
			<td>V1402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Tastant delivery system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Translucent Nylon Tubing OD 1/4&#34;, ID 1/8&#34;</td>
			<td>Small Parts Inc.</td>
			<td>B001JJT4SA</td>
			<td>Rigid tube that connects the four main elements of the system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering iron</td>
			<td>Circuit Specialists</td>
			<td>ZD200BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary tool-Dremel</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene mesh, hole size (hole size 0.1 x 0.13 cm)&#160;</td>
			<td>Industrial Netting</td>
			<td>XN5170</td>
			<td>For ensuring that the probosises of different animals are placed in the same location.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressurized 16-Channel perfusion system&#160;</td>
			<td>Bioscience Tools</td>
			<td>PS-16H</td>
			<td>For tastant delivery. This system includes pinch valves, tubing, manifold, solution cylinders, valve controler and fitting accesories.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubing, ID 0.034&#34;, ID 0.050&#34;</td>
			<td>Becton, Dickinson &#38; Co</td>
			<td>427421</td>
			<td>&#160;Output tube from the perfusion system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic PicoPump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>SYS-PV820</td>
			<td>For controlling the output channel of the perfusion system.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software system, LabVIEW PCI-MIO-16E-4 DAQ card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW 2011</td>
			<td>To control the pico pump for tastant delivery and to record the signals from the color sensor .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compulab 3 Manostat peristaltic pump</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1366</td>
			<td>For pumping water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tubing, ID 1/16&#34; OD 1/8&#34;</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WU-95802-02</td>
			<td>To connect the water source to the peristaltic pump tubing, and the outlet tube of the pump to the rigid tube of the delivery system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color sensor-digital fiber optic sensor</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>&#160;FS-V31M</td>
			<td>For monitoring tastant delivery.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color sensor-reflective fiber unit</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>FU35-FZ</td>
			<td>To connect the color sensor device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental periphery Wax</td>
			<td>Henry-Schein Dental</td>
			<td>6652151</td>
			<td>To secure the proboscis into the rigid tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two 3.7 L containers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To provide water to the system, and to recollect the water waste.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast green FCF&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing forceps 25.5 cm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500364</td>
			<td>To introduce moths proboscis into the proboscis hole from the rigid tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Electrophysiology Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D.C. amplifier</td>
			<td>Brown-Lee</td>
			<td>440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lamp</td>
			<td>Schott</td>
			<td>Schott Fostec Light Source DCR 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual micromanipulator</td>
			<td>Leica</td>
			<td>micromanipulator</td>
			<td>To precicely insert the tetrodes into the animals brain. The manipulator has to allow fine and coarse movements in x, y and z axis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibration-isolation table (MICRO-g lab table)</td>
			<td>TMC</td>
			<td>63-541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix&#160;</td>
			<td>TDS2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16-channle pre-amplifier and amplifier</td>
			<td>16 Channel MA-800 Amplifier System&#160;</td>
			<td>B.E.S 2013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>optiplex 780</td>
			<td>The following are the minimum recommended requirements. RAM: 3.32GHz, 3GB. Processor: Intel Core&#160;2 Duo. Graphic card: integrated Intel GMA X4500.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software system, LabVIEW PCI-MIO-16E-4 DAQ card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW 2011</td>
			<td>To control the pico pump for tastant delivery and to record the signals from the color sensor and electrode .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Tastants</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAc</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L9650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>73575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

new methods to study gustatory coding

Tat duygusu, hayvanlara hayatta kalabilmek için kritik davranışlar yaratan çevredeki kimyasalları tespit etmelerini sağlar. Gustatory Reseptör Nöronlar (GRN), tastant molekülleri tespit ettiğinde, tastantın kimliğini ve konsantrasyonunu, beyindeki takip eden nörona ileten elektriksel aktivite kalıpları olarak kodlarlar. Bu desenler, hayvanın eylemleri seçip anıları oluşturmalarına izin veren, tadıcının içsel temsillerini oluşturur. Nispeten basit hayvan modelleri kullanımı, duyusal kodlamanın temel ilkelerini incelemek için güçlü bir araçtır. Burada Manduca cinsiyet kelası kullanılarak tatlılık kodlamasını incelemek için üç yeni yöntem önermekteyiz. İlk olarak maksiller sinirleri ve subesophageal bölgeyi (SEZ) açığa çıkartmak için diseksiyon prosedürü sunarak, aksonlarından GRN aktivitesinin kayıt altına alınmasını sağlarız. İkincisi, çoklu GRN&#39;lerin aktivitesini te kaydettirerek hücre dışı elektrotların kullanımını açıklıyoruz.Direkt olarak maksiller sinir içine trode telleri. Üçüncüsü, yüksek zamansal hassasiyetle, farklı tatların atışlarını sunmak ve izlemek için yeni bir sistem sunuyoruz. Bu yöntemler, nevresel yanıtların in vitro olarak , tatlandırıcılar verilmeden önce, sırasında ve sonrasında doğrudan GRN&#39;lerden karakterize edilmesine izin verir. Birden fazla GRN&#39;den kaydedilen gerilim izlerinin örneklerini veriyoruz ve bireysel nöronların tepkilerini tanımlamak için verilere bir başak sıralama tekniğinin nasıl uygulanabileceğinin bir örneğini sunuyoruz. Son olarak, kayıt yaklaşımımızı doğrulamak için, tetrodesli GRN&#39;lerden elde edilen hücre dışı kayıtları keskin cam elektrotlarla elde edilen hücre içi kayıtlarla karşılaştırdık.

GRN&#39;lerin aktivitesi, tat vericinin verilmesinden önce, sırasında ve sonrasında bir hücre dışı tetrode elektrot kullanılarak kaydedilebilir ( Şekil 6A ve 6C ). Şekil 6A (orta ve alt paneller), hareket potansiyellerini (oklar) yansıtan farklı amplitüdlerin sinyallerinin görülebildiği maksiller sinire yerleştirilen dört telin her biri tarafından kaydedilen süzülmüş (300-6,000 Hz) voltaj izlerini göstermektedir. Deneyin başlangıcından 2 saniye sonra bir 1 nabız tadı (1 M sukroz) verildi; Uyarıcının başlangıcı ve kayması renk sensörü ( Şekil 6A , üst panel) tarafından izlendi. Dört kanalın her birinde görülen tastant uyarısı ( Şekil 6A , orta panel). GRN&#39;ler mekanik sensörlerden (burada gösterilmemektedir) tespit edilebilmekte ve ayırt edilebilmektedir. Tetrode kayıtlarından tek nöron yanıtlarını tanımlamak ve izole etmek için, Pouzat&#39;ın 31 ve Kleinfeld&#39;in 32,33 yöntemlerine dayanan bir dizi özel işlev kullanarak off-line spike sıralama gerçekleştirdik (bu yöntemler bu atıflarda açıklanmıştır: 10 , 29 ). Şekil 6B , Şekil 6A&#39;da gösterilen verilere uygulanan ve iyi izole edilmiş üç ünitenin bulunduğu bir sivri uçlu sıralama örneğini göstermektedir. Şekil 6C&#39;den alınan çizgiler, Şekil 6B&#39;deki üç izole edilmiş ünitenin sırayla verilen dört farklı deneme maddesi (1 M sükroz, maltoz ve NaCl; 100 mM kafein ve 10 mM berberin ve lobeline) üzerindeki tepkilerini göstermektedir (4 denemeS / tastant gösterilmektedir). Şekil 6C&#39;de gösterildiği gibi, kaydedilen GRN&#39;ler, sessiz (GRN&#39;ler 1) ila düşük veya orta dereceli (GRN 2 ve 3) arasında değişen farklı baz seviye aktivitelerine sahiptir. Tastant başlangıcından sonra, GRN&#39;ler çeşitli aktivite modelleri gösterir ve tat arttırıcılara farklı seçicilik gösterir. Örneğin, GRN 1 sadece sükroza tepki verirken, GRN 2, sivri patlama ile maltoz ve NaCl&#39;ye ve sadece stimulusun başlamasında spike ile lobeline yanıt verdi. Buna ek olarak, bazı tepkiler uyaranın zamanlamasına ( örn., Sakroza GRN 1 yanıtı) kilitlenirken, diğer yanıtlar uyarı süresinden daha uzun sürer ( örn., Berberine GRN 3 yanıtı) ya da hem eksitatör hem de inhibitör bileşenleri içerir ( örn. Şekil 7 GRN 2, NaCl ve sükroza yanıtlar). GRN&#39;lerin farklı hassasiyetleri ve etkinlik kalıpları hakkında daha fazla bilgi için bkz. Referans 10 . <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page= &quot;1&quot;&gt; Maksiller sinirden GRN&#39;leri kaydetmek için tetrode ve sivri sıralama tekniklerini doğrulamak için, klasik keskin cam elektrotlar (80-120 MΩ&#39;luk direnç) kullanarak GRN aksonlarından diğer hayvanlarda hücre içi kayıtlar yaptık. Hücre içi kayıtları kullanarak elde edilen aktivite kalıplarının tetrode tekniği kullanılarak elde edilen tepkilere benzediğini bulduk ( Şekil 7 ). Panel A&#39;daki yeşil kutudaki voltaj izleri, sükroz sunumunun ardışık 5 denemesi sırasında GRN 1&#39;den hücre içi olarak kaydedildi ve aynı yanıtlar, panel B&#39;de raster çizimler olarak gösterildi. (Bu tip tepki tetrodes ve Şekil 6C&#39;de gösterilmiştir.) Keskin hücre içi elektrotlarla kaydedilen GRN 2, daha geniş bir tepki modeli gösterir. <img alt="Şekil 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55868/55868fig6v2.jpg"/&gt; Şekil 6: Ekstraselüler Tetrode ile Maksiller Sinir Kayıtlarından Temsilci Sonuçlar. ( A ) Maksiller sinirdeki dört telin her biri tarafından kaydedilen filtrelenmiş (300-6,000 Hz) voltaj izleri gösterilmiştir (orta panel). Orta paneldeki kırmızı gölgelendirme ile belirtilen süre boyunca 1 sn&#39;lik bir nasır tat verildi. Uyarıcının başlangıcı ve ofset değeri, üst paneldeki kırmızı voltaj izi ile gösterildiği gibi renk sensörü tarafından izlendi ve kırmızı paneli ile orta panelden belirtildi. Noktalı yatay çizgiler, +50 (üst), 0 (orta) ve -50 (alt) μV&#39;yi ifade eder. Dikey noktalı çizgilerdeki alana karşılık gelen ham gerilim izlerinin genişlemesi gösterilmektedir (alt panel). Sivri uçlara örnekler oklarla gösterilir. ( B ) Panel A&#39;da gösterilen verilere uygulanan sivri uçlu sıralama örneği. Dört hücre dışı telin (1-4) her birinde kaydedilen dalga formlarıKaydedilen sinyallere katkıda bulunan üç farklı GRN (birimler 1-3) ile tanımlandı. Bireysel olaylar (renkli ince çizgiler) ve ortalama (kalın siyah çizgi) üç ünite için gösterilir. Başak birleştirme yöntemini kullanarak bağımsız birimleri güvenilir bir şekilde tanımlamak için birkaç istatistiksel kriter dikkate alınmalıdır (bkz. Referanslar 10 , 29 ). ( C ) Üç izole edilmiş ünitenin altı farklı tat sahibinden oluşan bir sıraya karşılık gelen raster çizimleri (4 deneme / tat verici gösterilmiştir). Tastant verilme süresi (1 s) kırmızı-gölgeli alanla gösterilir. Tatların konsantrasyonları 1 M (sükroz, maltoz, NaCl), 100 mM (kafein) ve 10 mM idi (berberin ve lobeline). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55868/55868fig6v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7" c<html> Lass = &quot;xfigimg&quot; src = &quot;/ dosyalar / ftp_upload / 55868 / 55868fig7.jpg&quot; /&gt; Şekil 7 : GRN Aksonlardan Hücre içi Kayıtlar. ( A , yeşil kutu paneli) Maksiller sinire yerleştirilen keskin cam hücre içi elektrotlarla (80-120 MΩ dirençli) bir GRN&#39;den kaydedilen voltaj izleri, 1 M sükrozla (Suc) ardışık olarak 5 uyarı ile ortaya çıkmıştır. ( B ) Panel A&#39;da (yeşil kutu paneli) gösterilen yanıtlar da dahil olmak üzere, iki GRN yanıtının, keskin cam intraselüler elektrotlarla kaydedilen sırayla (100 mM gri font rengi; 1 M siyah font rengi) verilen iki farklı tat grubuna rastgele örnekleri Maksiller sinire yerleştirilir (7 deneme / tastant ve 3 deneme / su gösterilmiştir). Tatlandırıcı doğum zamanı, her iki panelde de kırmızı gölgeli alanlarla gösterilir. Uyarıcının başlangıcı ve ofset değeri, her panelin altındaki kırmızı voltaj izleriyle gösterildiği gibi renk sensörü tarafından izlendi.Es / ftp_upload / 55868 / 55868fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bu rakamın daha büyük sürümünü görmek için lütfen tıklayınız.

Watch this Scientific Journal Video about New Methods to Study Gustatory Coding at JoVE.com

Tat Kodlamasını Çalışmanın Yeni Yöntemleri | Sinirbilim | Video

New Methods to Study Gustatory Coding

Tatlandırıcı kodlamayı incelemek için üç yeni yöntem sunuyoruz . Basit bir hayvan olan Manduca güvesi Mandka&#39;yı kullanarak, diseksiyon protokolünü, çoklu tatlılık reseptör nöronlarının aktivitesini kaydetmek için hücre dışı tetrodeslerin kullanımını ve tat vericilerin kesin zamanlı nabızlarını iletmek ve izlemek için bir sistemi tarif ediyoruz.

Tatlandırıcı Kodlamanın Yeni Yöntemleri

The sense of taste allows animals to detect chemicals in the environment, giving rise to behaviors critical for survival. When Gustatory Receptor Neurons ...

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Neuroscience

Human Biology

Sensory Systems

SCIENTISTS IN ACTION

9.3K Görüntüleme.  National Institutes of Health (NIH).  Tatlandırıcı kodlamayı incelemek için üç yeni yöntem sunuyoruz . Basit bir hayvan olan Manduca güvesi Mandka'yı kullanarak, diseksiyon protokolünü, çoklu tatlılık reseptör nöronlarının aktivitesini kaydetmek için hücre dışı tetrodeslerin kullanımını ve tat vericilerin kesin zamanlı nabızlarını iletmek ve izlemek için bir sistemi tarif ediyoruz. 

Video: New Methods to Study Gustatory Coding

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the molecular mechanisms underlying class-specific dendrite morphogenesis1,2. To facilitate molecular analyses of class-specific da neuron development, it is vital to obtain these cells in a pure population. Although a range of different cell, and tissue-specific RNA isolation techniques exist for Drosophila cells, including magnetic bead based cell purification3,4, Fluorescent Activated Cell Sorting (FACS)5-8, and RNA binding protein based strategies9, none of these methods can be readily utilized for isolating single or multiple class-specific Drosophila da neurons with a high degree of spatial precision. Laser Capture Microdissection (LCM) has emerged as an extremely powerful tool that can be used to isolate specific cell types from tissue sections with a high degree of spatial resolution and accuracy. RNA obtained from isolated cells can then be used for analyses including qRT-PCR and microarray expression profiling within a given cell type10-16. To date, LCM has not been widely applied in the analysis of Drosophila tissues and cells17,18, including da neurons at the third instar larval stage of development. 
Here we present our optimized protocol for isolation of Drosophila da neurons using the infrared (IR) class of LCM. This method allows for the capture of single, class-specific or multiple da neurons with high specificity and spatial resolution. Age-matched third instar larvae expressing a UAS-mCD8::GFP19 transgene under the control of either the class IV da neuron specific ppk-GAL420 driver or the pan-da neuron specific 21-7-GAL421 driver were used for these experiments. RNA obtained from the isolated da neurons is of very high quality and can be directly used for downstream applications, including qRT-PCR or microarray analyses. Furthermore, this LCM protocol can be readily adapted to capture other Drosophila cell types a various stages of development dependent upon the cell type specific, GAL4-driven expression pattern of GFP.

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

In this video-article we present a method for isolating single or multiple Drosophila da neurons from third instar larvae using the infrared capture (IR) class of Laser Capture Microdissection (LCM). RNA obtained from the isolated neurons can be readily used for downstream applications including qRT-PCR or microarray analyses.

Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon Drosophila Periferik Nöronlar

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Nörobilim

How to Create and Use Binocular Rivalry

Each of our eyes normally sees a slightly different image of the world around us. The brain can combine these two images into a single coherent representation. However, when the eyes are presented with images that are sufficiently different from each other, an interesting thing happens: Rather than fusing the two images into a combined conscious percept, what transpires is a pattern of perceptual alternations where one image dominates awareness while the other is suppressed; dominance alternates between the two images, typically every few seconds. This perceptual phenomenon is known as binocular rivalry. Binocular rivalry is considered useful for studying perceptual selection and awareness in both human and animal models, because unchanging visual input to each eye leads to alternations in visual awareness and perception. To create a binocular rivalry stimulus, all that is necessary is to present each eye with a different image at the same perceived location. There are several ways of doing this, but newcomers to the field are often unsure which method would best suit their specific needs. The purpose of this article is to describe a number of inexpensive and straightforward ways to create and use binocular rivalry. We detail methods that do not require expensive specialized equipment and describe each method's advantages and disadvantages. The methods described include the use of red-blue goggles, mirror stereoscopes and prism goggles.

Binocular rivalry occurs when the eyes are presented with different images at the same location: one image dominates while the other is suppressed, and dominance alternates periodically. Rivalry is useful for investigating perceptual selection and visual awareness. Here we describe several easy methods for creating and using binocular rivalry stimuli.

Binoküler Rekabeti nasıl oluşturun ve kullanın

Each of our eyes normally sees a slightly different image of the world around us. The brain can combine these two images into a single coherent ...

Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method

In the central nervous system of all mammals, severed axons after injury are unable to regenerate to their original targets and functional recovery is very poor 1. The failure of axon regeneration is a combined result of several factors including the hostile glial cell environment, inhibitory myelin related molecules and decreased intrinsic neuron regenerative capacity 2. Astrocytes are the most predominant glial cell type in central nervous system and play important role in axon functions under physiology and pathology conditions 3. Contrast to the homologous oligodendrocytes, astrocytes are a heterogeneous cell population composed by different astrocyte subpopulations with diverse morphologies and gene expression 4. The functional significance of this heterogeneity, such as their influences on axon growth, is largely unknown.
To study the glial cell, especially the function of astrocyte heterogeneity in neuron behavior, we established a new method by co-culturing high purified dorsal root ganglia neurons with glial cells obtained from the rat cortex. By this technique, we were able to directly compare neuron adhesion and axon growth on different astrocytes subpopulations under the same condition.
In this report, we give the detailed protocol of this method for astrocytes isolation and culture, dorsal root ganglia neurons isolation and purification, and the co-culture of DRG neurons with astrocytes. This method could also be extended to other brain regions to study cellular or regional specific interaction between neurons and glial cells.

In this protocol, we described a new method to study the influence of glial cell heterogeneity on axon growth with an in vitro co-culture system. Rat cortical glial cells were cultured to confluence and cocultured with highly purified rat dorsal root ganglia neurons. Different glial cell influence on neurons adhesion and axon growth was compared directly in the same culture. This method provides a new way to directly study the glial cell heterogeneity influence on neuron adhesion and axon growth.

Axon Büyüme, Yeni Bir Coculture Yöntemle Çalışması Glial Hücre heterojenite Etkisi

In the central nervous system of all mammals, severed axons after injury are unable to regenerate to their original targets and functional recovery is ...

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the first born neurons remain closer to the ventricle while the last born neurons migrate past the first born neurons towards the surface of the brain1. In addition to neuronal migration2, a key process for normal cortical function is the regulation of neuronal morphogenesis3. While neuronal morphogenesis can be studied in vitro in primary cultures, there is much to be learned from how these processes are regulated in tissue environments.
We describe techniques to analyze neuronal migration and/or morphogenesis in organotypic slices of the cerebral cortex4,6. A pSilencer modified vector is used which contains both a U6 promoter that drives the double stranded hairpin RNA and a separate expression cassette that encodes GFP protein driven by a CMV promoter7-9. Our approach allows for the rapid assessment of defects in neurite outgrowth upon specific knockdown of candidate genes and has been successfully used in a screen for regulators of neurite outgrowth8. Because only a subset of cells will express the RNAi constructs, the organotypic slices allow for a mosaic analysis of the potential phenotypes. Moreover, because this analysis is done in a near approximation of the in vivo environment, it provides a low cost and rapid alternative to the generation of transgenic or knockout animals for genes of unknown cortical function. Finally, in comparison with in vivo electroporation technology, the success of ex vivo electroporation experiments is not dependant upon proficient surgery skill development and can be performed with a shorter training time and skill.

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

To conduct a rapid assessment of the function of genes in the development of cerebral cortex, we describe methods involving the ex vivo electroporation of plasmids co-expressing inhibitory RNA (RNAi) and GFP in murine embryonic cortex. This protocol is amenable to the study of various aspects of neurodevelopment such as neurogenesis, neuronal migration and neuronal morphogenesis including dendrite and axon outgrowth.

Nöronal Morphogenesis Çalışması Yöntemleri:<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Mürin Serebral Korteks olarak&gt; RNAi Elektroporasyon

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the ...

Measuring the Subjective Value of Risky and Ambiguous Options using Experimental Economics and Functional MRI Methods

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition termed "risky". In other cases when probabilities cannot be estimated, this is a condition described as "ambiguous". While most people are averse to both risk and ambiguity1,2, the degree of those aversions vary substantially across individuals, such that the subjective value of the same risky or ambiguous option can be very different for different individuals. We combine functional MRI (fMRI) with an experimental economics-based method3 to assess the neural representation of the subjective values of risky and ambiguous options4. This technique can be now used to study these neural representations in different populations, such as different age groups and different patient populations.
In our experiment, subjects make consequential choices between two alternatives while their neural activation is tracked using fMRI. On each trial subjects choose between lotteries that vary in their monetary amount and in either the probability of winning that amount or the ambiguity level associated with winning. Our parametric design allows us to use each individual's choice behavior to estimate their attitudes towards risk and ambiguity, and thus to estimate the subjective values that each option held for them. Another important feature of the design is that the outcome of the chosen lottery is not revealed during the experiment, so that no learning can take place, and thus the ambiguous options remain ambiguous and risk attitudes are stable. Instead, at the end of the scanning session one or few trials are randomly selected and played for real money. Since subjects do not know beforehand which trials will be selected, they must treat each and every trial as if it and it alone was the one trial on which they will be paid. This design ensures that we can estimate the true subjective value of each option to each subject. We then look for areas in the brain whose activation is correlated with the subjective value of risky options and for areas whose activation is correlated with the subjective value of ambiguous options.

Using functional MRI and behavioral methods to determine the neural representation of the subjective value of risky and ambiguous options in the human brain.

Deneysel İktisat ve Fonksiyonel MRI yöntemleri kullanarak Riskli ve belirsiz Seçenekleri Sübjektif Değer Ölçme

Most of the choices we make have uncertain consequences. In some cases the probabilities for different possible outcomes are precisely known, a condition ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of Alzheimer's disease (AD) and is found in Lewy body dementia, inclusion body myositis and cerebral amyloid angiopathy 1-4. Amylopathies progressively develop with time. For this reason simple organisms with short lifespans may help to elucidate molecular aspects of these conditions. Here, we describe experimental protocols to study A&beta;-mediated neurodegeneration using the worm Caenorhabditis elegans. Thus, we construct transgenic worms by injecting DNA encoding human A&beta;42 into the syncytial gonads of adult hermaphrodites. Transformant lines are stabilized by a mutagenesis-induced integration. Nematodes are age synchronized by collecting and seeding their eggs. The function of neurons expressing A&beta;42 is tested in opportune behavioral assays (chemotaxis assays). Primary neuronal cultures obtained from embryos are used to complement behavioral data and to test the neuroprotective effects of anti-apoptotic compounds.

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

We describe methods to study aspects of amylopathies in the worm C. elegans. We show how to construct worms expressing human A&beta;42 in neurons and how to test their function in behavioral assays. We further show how to obtain primary neuronal cultures that can be used for pharmacological testing.

Bir<em&gt; Caenorhabditis elegans</emAmylopathy Çalışmaları&gt; Model Sistemi

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

Bal Arısı RNAi-aracılı Çift Gen demonte ve tat Algı Ölçüm (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with increasing connective tissue and decreased neuronal viability that occur with age. Here, we describe a methodology for the dissociation of healthy hypothalamic neurons from adult-aged mice. The ability to study neurons from adult-aged mice allows the use of disease models that manifest at a later age and might be more developmentally accurate for certain studies. Fluorescence imaging of dissociated neurons can be used to study the activity of a population of neurons, as opposed to using electrophysiology to study a single neuron. This is particularly useful when studying a heterogeneous neuronal population in which the desired neuronal type is rare such as for hypothalamic glucose sensing neurons. We utilized membrane potential dye imaging of adult ventromedial hypothalamic neurons to study their responses to changes in extracellular glucose. Glucose sensing neurons are believed to play a role in central regulation of energy balance. The ability to study glucose sensing in adult rodents is particularly useful since the predominance of diseases related to dysfunctional energy balance (e.g.&#160;obesity) increase with age.

The activity of single neurons from adult-aged mice can be studied by dissociating neurons from specific brain regions and using fluorescent membrane potential dye imaging. By testing responses to changes in glucose, this technique can be used to study the glucose sensitivity of adult ventromedial hypothalamic neurons.

Membran Yetişkin farelerin ventromedial Hipotalamus Nöronlar Potansiyel Boya Görüntüleme Glikoz Algılama Çalışması için

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain in adulthood and during development. Although most in vivo approaches use a craniotomy to study brain regions located on the dorsal side, brainstem regions such as the pons, located on the ventral side remain relatively understudied. The main goal of this protocol is to facilitate access to ventral brainstem structures so that they can be studied in vivo using electrophysiological and imaging methods. This approach allows study of structural changes in long-range axons, patterns of electrical activity in single and ensembles of cells, and changes in blood brain barrier permeability in neonate animals. Although this protocol has been used mostly to study the auditory brainstem in neonate rats, it can easily be adapted for studies in other rodent species such as neonate mice, adult rodents and other brainstem regions.

A surgical method is described to expose the ventral skull in neonate rats. Using this approach it is possible to open a craniotomy to perform acute electrophysiology and two-photon microscopy experiments in the brainstem of anesthetized pups.

Yenidoğan Kemirgenlerin Ventral Kafatası kranyotomi olun Bir Yöntem

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...