이 작품은 파리 VI 대학과 피에르 파브르 혁신 기금에 의해 지원되었다.

모든 절차가 동물 실험에 대한 로컬 윤리위원회 (일드 프랑스 - 파리 -위원회 승인 4270)의 승인, 관리 및 실험 동물의 사용을위한 유럽 공동체 표준에 따라 수행 하였다. 1. 마취 <ol><li> 펜토 바르 비탈을 치사량을 주입 성인 마우스에 복강 내 (27 게이지 바늘 및 주사기를 1ml) (1 밀리그램 / 10g 체중까지) 수술 전. </li></ol> 2. 선박 관류 참고 : 혈관 재관류 동안 눈에 수의사 연고를 적용 할 필요가 없습니다. 이 절차는 (5-10 분) 신속하고 동물의 죽음에 끝납니다. 발가락 핀치와 응답의 부족을 확인합니다. <ol><li> 홍채 가위를 사용하여, 바로 흉곽 아래, 복벽과 복막에 약 4cm 길이 절개를합니다. </li><li> 연속 주 후 진동판에 작은 절개 (밀리미터 길이)를 확인하고전자 흉곽의 전체 길이를 따라 진동판의 절개은 흉강을 노출. </li><li> 멀리 흉골을 들어 올리고 지혈과 흉골의 끝 부분을 고정; 목에 지혈을 배치합니다. 조심스럽게 심장으로 흉골을 연결하는 지방 조직을 잘라. </li><li> 마음의 꼭대기에 좌심실을 통해 15 게이지 관류 바늘을 전달합니다. </li><li> 마지막으로, 출구를 만들기 위해 간 로브 중 하나를 잘라 가위를 사용합니다. 참고 : 또 다른 출구는 우심방에 절개를 만들 홍채 가위를 사용하여 만들 수 있습니다. </li><li> 2.5 ㎖ / 분의 속도로 작동하는 펌프를 인산 완충 용액 (PBS) 25 내지 50 ㎖로 동물을 관류. 간은 혈액으로 희게은 PBS로 교체해야합니다. </li><li> 간에서 유체가 완전히 명확하면 약 5 분 후, 재관류를 중지합니다. </li><li> 면역 염색 또는 일반 계획되는 경우, 파라 포름 알데히드의 50 mL로 동물 관류(PFA 4 PBS의 %) 15 분. 참고 :주의, PFA 연기는 독성. PFA와 동물의 재관류는 통풍이 흄 후드에서 수행되어야한다. </li></ol> 3. 뇌의 분리 및 윌리스의 원 <ol><li> 뇌의 분리 <ol><li> 수술 가위로 머리를 제거합니다. </li><li> 코에 목으로부터 피부를 따라, 홍채 가위와 정중선 절개를합니다. </li><li> 두개골을 노출하고 홍채 가위로 남아있는 근육과 지방 조직을 제거하는 피부를 낸다. </li><li> 한쪽 난원 매그넘에 홍채 가위의 날카로운 끝을 놓고 신중하게 (또한 외이도로 알려진) 외부 청각 (外耳道)에 두개골의 내부 표면을 따라 그들을 밀어 넣습니다. </li><li> 반대편 측면에 3.1.4에 설명 된 절개를 재현하고 시상 봉합의 시작에 간 정수리 뼈의 내부 표면을 따라 잘라 중간 선을합니다. </li><li> 조리개를 심고정면 뼈의 위, 오른쪽 눈 사이, 시상 봉합에서 다음 두 두개골을 분할을 엽니 다. </li><li> 후각 전구를 잡아와 복부 표면의 신경 연결을 차단하기 위해 홍채 가위를 사용하여 뇌를 들어 올립니다. </li><li> 뇌를 제거하고 소 분리를 위해 얼음처럼 차가운 PBS를 포함하는 60 mm 페트리 접시에 넣습니다. 완전히 PBS의 뇌를 체험. 뇌가 4 % PFA로 고정 된 경우 (이후 절편 및 면역 염색 또는 일반 염색 용), 24 시간 동안 4 ° C에서 4 % PFA의 목욕에 보관합니다. </li></ol></li><li> 윌리스의 원의 분리 참고 : 해부 현미경이 암소 격리 필요합니다. 뇌는 전체 과정에 걸쳐 4 ° C에서 보관해야합니다. <ol><li> 소를 시각화하기 위해 거꾸로 (즉, 그것의 등쪽 표면에) 뇌를 넣습니다. </li><li> (후각 엽의 기지에서 전방 대뇌 동맥 (ACA)을 잡기 위해 작은 집게를 사용하여 <str옹&gt;을, 그림 1)과 발휘 압력 용기의 연속체에서 그들을 해리합니다. B의 중간 대뇌 동맥 (MCA) (그림 1) 잘라 동일한 절차를 사용합니다. </li><li> 피질에서 소를 형성하는 주요 동맥을 들어 올려 제거 포셉의 날카로운 끝을 사용합니다. </li><li> 포셉과 중간 대뇌 동맥 (MCA)을 파지하여, 뇌에서 분리하는 사후 통신 동맥 (PCA)의 시작을 올립니다. 전방 동맥 (ACA 및 MCA)를 선택하고 전방-등의 방향으로 광학 chiasm에 걸쳐 부드럽게 잡아 당깁니다. 암소의 중단을 방지하기 위해, 다른 혈관을 처리하는 절차를 중단. </li><li> 반복은 dorsal-에서 그들을 당기는 / (PCA) (C, 그림 1)과 기저 동맥 (BA) (D, 그림 1)에 대한 3.2.2와 우수한 후방 소뇌 동맥 (SCA) 3.2.3 단계 전방 방향. 기재된 절차 I의 끝에서 중지n은 3.2.4. </li><li> 포셉 부드럽게 당겨 전체 소를 제거합니다. 얼음처럼 차가운 PBS로 가득 찬 60 mm 페트리 접시에 소를 넣고 작은 핀 곳에서 소를 잡고, 두 집게로 남아있는 부착 된 뇌 조직을 제거합니다. </li><li> 또는 단백질 추출 - 다음 RNA 정화 처리 (약 500 ng의 RNA 추출 수율 RNA 많은 양의)에 대한 -80 ° C에서 수확 암소 보관하십시오. 참고 : 소는 격리 된 마우스 후각 동맥 위해 개발 된 장기 목욕 시스템을 적용하여, 24 시간 동안 생체 유지 될 수있다 (7). </li></ol></li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> 그림 1 : 마우스 뇌 젖소를 강조 암소가 두 개의 전방 대뇌 동맥 (ACA)에서 파생 된 두 개의 내부 경동맥 동맥 (MCA)로부터 형성된다의 복부보기의 회로도;. 뇌 바닥동맥 (BA) 후부 (PCA)과 우수 (SCA)에 분기 대뇌 동맥, 두 개의 척추 동맥 (VA).

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	<li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer's+disease.">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li><li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology.">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li><li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis.">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li><li>Tulamo, R., Fr&#246;sen, J., Hernesniemi, J., Niemel&#228;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall:+a+review.">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li><li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+amyloid+angiopathy:+emerging+concepts.">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li><li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+atherosclerotic+stroke:+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li><li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery.">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li><li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+murine+intracranial+aneurysm+model:+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension.">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li><li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy:+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain.">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li><li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice.">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li><li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite.">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li><li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stanimirovic,+Hamel,+&amp;+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries.">Stanimirovic, Hamel, &amp; Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li><li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release.">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li><li>H&#252;bscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors.">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

우리는 윌리스의 원의 분리 여기를 재현 프로토콜을 설명합니다. 소를 포함하는 가장 일반적인 뇌 혈관 질환은 동맥 혈관의 벽에 영향을 모두 CAA 관련 vasculopathies, 두개 내 동맥 경화 및 두개 내 동맥류이다. 위험 인자로 잘 알려져 있지만, 이들 뇌 질환의 분자 기전은 잘 알려져 있지 남아 그 발생을 예측하기위한 특정한 생물학적 마커는 부족하다. 분자 변화를 거시적 인 관찰을 연결하는 형질 전환 마우스에서 소를 분리하는 방법에 상당한 관심이있다. 예를 들어, (호사카 등. (8)에 의해 설명 됨)는 특정 유전자가 녹아웃 된 마우스 모델에서 일관된 동맥류 유도 및 젖소를 분석함으로써, 치료 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 대상 여부를 판단 할 수 있어야한다있을 두개 내 동맥류 및 / 또는 지주막 하 출혈을 방지한다. Obviou교활한,이 방법은 AD의 다양한 형질 전환 마우스 모델에서 CAA 관련 vasculopathies의 진행에서 특정 약물의 효과를 분석하기 위해 사용될 수있다. 이는 전체 마우스 미세 혈관 정화보다 마우스 동맥을 분리하기 쉽지만, 이러한 샘플링은 그럼에도 쥐에 비해 쥐에서 더 어렵다. 실제로, 래트 암소 가능 한번에 전체 구조를 분리하기 훨씬 엄격한 수막에 포함된다. 마우스에서 혈관의 작은 크기의 문제에 더하여,이 절차에 의한 뇌의 제거 전에 PBS와의 관류에 따라 용기의 투명성도 까다 롭다. 따라서 우리는 쉽게 혈관을 구별하기 위해 마취 후 3 단계부터 주입없이 연습 추천한다. 마우스 뇌 혈관이 매우 잘되어 쉽게 파괴 마지막으로, 절개는 전체 구조 있도록, 돌진하지 않고, 매우 신중하게 수행되어야한다먼저 ACA를 잡아, 한 조각에 격리됩니다. 소 제제의 순도는 신경 및 혈관의 유전자의 발현 수준을 비교함으로써 평가 될 수있다. 10 유전자 발현 - 연습으로, 하나의 소 (5)의 연구에 대해서만 충분한 RNA를 제공합니다. 대규모 스크리닝의 경우, 여러 마우스 소가 풀링되어야한다. 고티에 등. (9)는 배양시에 유지 될 수 평활근 또는 내피 세포를 산출한다 (트랩 그들 유리 비드 뇌 및 단편 소화 콜라게나 제 / 디스 파제의 사용을 기반으로) 미세 혈관의 작은 조각을 분리하기위한 방법을 설명 적절한 매체에 위치. 우리의 방법의 장점은 용기의 구조를 변경하지 않고, 대형 선박을 분리한다는 것이다. 암소의 특정 지점의 절개는 뇌 diseas에 유전자 발현의 특정 지점의 프로파일 및 가능한 감수성 간의 상관 관계를 결정하기 위해, 관심이있을같은 두개 내 동맥류와 같은 말이지. 이러한 접근 방식은 일부 ACA 해부학 적 및 유전 적 변형 ACA 동맥류의 높은 유병률과 상관되는 이유에 대한 설명을 제공 할 수있다. 이 절개 암소 분리 절차의 개시에서, 다른 지점에서 해리를, 각 특정 지점의 기지 포셉 발휘되는 압력을 필요로한다. 따라서, 가능한 소 (10)로부터 세포를 추출하거나, 유전자 발현 (11) 및 단백질 생산 12 번역 후 단백질 변형에 대해 스크리닝하기에 더하여,이 방법은 간단하게하기 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여 생체 연구에 사용될 수있는 배양액을 함유하는 항생제의 전체 소 배양 후 절연 마우스 후각 동맥.도 7은 이러한 특정 구조에 의해 방출 된 secretome 얻어 분석 할 수있다. CAA의 마우스 모델에서이 secretome의 분석은 포 만들 것ssible, 예를 들어, 이들 뇌동맥의 CAA 관련 염증 상태를 결정한다. 생성 된 컨디셔닝 된 배지는 각 혈관벽 세포 유형 표현형에 secretome의 효과를 결정하기 위해 사용될 수있다. 병적 소 제제는 또한 클릭 구아노 신 모노 포스페이트 (cGMP), 사이 클릭 아데노신 모노 포스페이트 (cAMP)로서 생화학 적 신호의 수의 차이를 식별하는 데 사용하거나, 형광 공명 에너지 전달 (FRET)을 검출 칼슘 농도 기반 바이오 센서를 할 수있다. 바이러스 전달 바이오 센서는 피라미드 대뇌 피질의 뉴런과 선조체 중간 가시 뉴런 사이의 D1 응답의 깊은 차이의 검출을 선도, 보존 형태로 실험적으로 접근 성숙한 살아있는 뉴런을 포함하는 뇌 조각 준비에 사용되어왔다. (13) FRET 기반 초 톡 센서 14 단백질을 발현 트랜스 제닉 마우스의 뇌 혈관 질환의 모델링격리 된 암소의 생화학 적 신호의 영상에 대해 더이 질환의 생화학, 병태 생리, 그리고 약물에 더 통찰력을 제공한다.

또한 윌리스 (소), Willisor 윌리스 다각형의 루프의 원형으로 알려진 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양은)) 먼저 그것은 시신경 chiasma 수 있습니다 시상 하부의 주위에있는 순환 문합 인 1664 년 토마스 윌리스에 의해 설명되었다 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 중앙 허브로 간주 될 수있다. 혈액 경동맥 및 척추 동맥을 통해 이러한 구성에 진입하며 내부 중간 및 후방 뇌동맥 통해 원 밖으로 흐른다. 이러한 동맥의 각각은 원호의 양측에 지점을 좌우되었다. 완전한 원을 동맥을 통신하는 기저, 포스트 소통하고, 전방 (그림 1과 그림 2). 유출 동맥 중 어느 하나에 장애가 혈류 위험함으로써 충분한 혈액이 (B)에 공급되도록 보장 경동맥 및 뇌동맥으로부터 원 입력 피 병합하여 최소화비. 이 구조는 내부 경동맥 폐색 심각한 질병에 부수적 혈류의 주요 경로로서 기능한다. 뇌 혈관 질환의 여러 유형의 소에서 자신의 기원을 가지고있다. 가장 일반적으로는 1, 2, 3이 질환으로 인한 혈관 확장에 관류 저하로 이어질 수있다. 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 내 동맥류하고, 뇌내 및 / 또는 지주막 하 출혈 궁극적 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중 또는로 변환 기껏해야 일시적 허혈성 발작. 아마도 조영술 결합 뇌 영상을 포함한 진단 절차에서의 최근 발전은 뇌 생검 없이도 가능 임상 이러한 주요 뇌 혈관 질환을 진단 만들었다. 그럼에도 불구하고, 효과적이고 특이 치료 (약물 또는 혈관)이 현재 부족과 새로운 정의 필요하다분자 표적. 인간에서 이들 질환의 예방을위한 신규 약물 표적의 식별은 동물 모델 및 소를 포함하는 뇌 - 혈관을 분리하는 방법이 필요하다. 이러한 모델은 두개 내 동맥 동맥류, CAA 또는 두개 내 동맥 경화증의 동물 모델에서 큰 혈관의 벽에 발생하는 염증을 포함하는 특정 변경에의 증거와 단서를 제공해야한다. 4, 5, 6 우리는 CAA와 같은 알츠하이머 질환에서 혈관 염증의 연구 (AD) 및 관련 질병을 촉진하기 위해 마우스 암소 분리하는 방법을 설립했다. 마우스 암소를 분리하는이 방법은 질병 진행 동안 뇌 염증 유전자 발현의 평가를 위해 개발되었다. 함께 leptomeningeal 및 pial 동맥의 벽 내에서 아밀로이드 베타 침착의 검출과,이 방법은 쉽게 저지 할 만들 수내 염증성 뇌 - 혈관 벽에 유전자 발현 및 Aβ 펩타이드의 축적 사이의 가능한 관계. 지주막 하 공간에 leptomeningeal 및 pial을 포함하는 뇌의 혈관 네트워크는 윌리스의 원을 형성하는 큰 동맥의 확장입니다. 여기서 설명한 방법은 임의의 마우스 계통의 암소를 분리하는 데 사용될 수 있고, 마우스 뇌 - 혈관의 대형 선박의 스크리닝 (예를 들어, 유전자 발현, 단백질 생산 및 번역 후 단백질 변형)의 모든 유형에 이용 될 수있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="692">
	<tbody>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:173px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:173px;">D8537</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dumont #55 Forceps</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">11295-51</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Hardened Fine Iris Scissors&#160;</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">14090-11</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Scissors - Straight / Sharp / Sharp&#160;&#160; 16.5 cm</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">14002-16</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dumont #7b Forceps&#160;</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">11270-20</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Stereoscopic Zoom Microscope</td>
			<td style="width:173px;">Nikon</td>
			<td style="width:173px;">SMZ745T</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">CellBIND Surface 60mm Culture Dish</td>
			<td style="width:173px;">Corning</td>
			<td style="width:173px;">#3295</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Peristaltic Pump - MINIPULS 3</td>
			<td style="width:173px;">Gilson</td>
			<td style="width:173px;">M312</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Pentobarbital Sodique</td>
			<td style="width:173px;">Ceva Sant&#233; Animale</td>
			<td style="width:173px;">FR/V/2770465 3/1992</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for isolating the mouse circle of willis

윌리스 (COW)의 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양) 또는 원은 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 광학 chiasma 및 시상 하부를 둘러싸는 순환 문합이다. 이는 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 뇌 동맥류 등 여러 질병에 관여하고있다. 자신의 예방을위한 새로운 약물 표적의 식별을 위해 이러한 질병의 기초가되는 분자 메커니즘의 연구는 동물 모델을 필요로한다. 다른 사람들이 여기에 설명 된 CoW.The 방법 임의의 마우스 계통의 소 분리에 적합하며 (유전자, 단백질 생산의 발현을 선별하기위한 상당한 잠재력을 가지고 포함하는 뇌 - 혈관의 분리를 포함하는 반면 이러한 모델 중 일부는, 형질 전환 될 수있다 번역 후 단백질 수정 등 secretome 분석) 마우스 cerebro-의 대형 선박에 대한 연구혈관. 또한 절연 마우스 후각 동맥 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여, 생체 외 연구에 사용될 수있다.

<html> PBS를 관류 마우스를 살해하고 프로토콜의 3.2 절에 설명 된대로 소는 격리됩니다. 해부가 제대로 수행 될 때, 소는 한 조각에서 와야 인해 혈관에 잔류 혈액의 부재로 약간 투명해야한다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> 그림 2 : 분리 후 마우스 소. 10 cm 페트리 접시에서 암소의 (A) 개요. (B) 암소의 여러 가지의 세부 사항. MCA는 중간 대뇌 동맥를 들어, ACA 기저 동맥에 대한 전방 대뇌 동맥, BA를 들어, PCA 후부 대뇌 동맥과 우수한 뇌 동맥에 대한 SCA에 대해. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54352/54352fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 텐트. &quot;FO : 유지-together.within 페이지 =&quot;1 &quot;&gt; 암소 준비의 순도가 신경 유전자의 발현이 발견 할 수없는 반면 특정 혈관 유전자가 강하게 발현되는 것을 보장에 의해 확인 될 수보다 구체적으로는, 청소 암소해야 구체적으로 평활근 액틴 (SMA), 평활근 - 마이 오신 중쇄 (SM-MHC)와 smoothelin 같은 혈관 평활근 세포 마커를 표현한다. 이러한 마커는 거의 뇌의 다른 부분에서 표현된다. 식의 반대 패턴이 있어야한다 암소 만 거의 검출 신경 세포 마커 (모그, Map2에)과, 신경 세포의 유전자에 대해 획득. mRNA의 수준은 기준 유전자 전 사체에 대해 정규화 (여기서, GAPDH의)와 RT-qPCR에 의해 평가 될 수있다. 전형적인 결과는 그림 3A와 B에 표시됩니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig3.jpg" /&gt; 그림 3 :. 신경과 수축성 윌리스의 마우스 원에서 유전자와 뇌의 발현은 RT-qPCR의 결과는 참조 유전자 (GAPDH)에 대한 이들에 대해 정규화 하였다. 그들은 6 ~ 12 독립적 인 실험의 평균 ± 표준 편차로 표현된다 뇌와 암소의 비교 : NS, 중요하지, *, P &lt;0.05, **, P &lt;0.005, 및 ***, P &lt;0.001 수축 유전자 (A) 식 :. SMA (평활근 액틴) smoothelin, SM-MHC (부드러운 근육 마이 오신 중쇄 11) 및 E-셀렉틴 신경 유전자 (B) 식 :. 모그 (수초의 희소 돌기 아교 세포 당 단백질) 및 Map2에 (미세 소관 연관 단백질 2). 소가없는 뇌의 내피 마커 E 셀렉틴의 발현 패턴은 아마도 뇌 모세 혈관 네트워크의 존재를 반영, 소 샘플 얻은 것과 매우 유사하다. <strong&gt; 표 1은 각 증명서에 대한 평균 CP 번호가 나와 있습니다. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 에이. </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"> 평균 CP </td><td colspan="3"> GAPDH </td><td colspan="3"> SMA </td><td colspan="3"> Smoothelin </td><td colspan="3"> SM-MHC </td><td colspan="3"> E-SEL </td></tr><tr><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </강한&gt; </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td></tr><tr><td> 소 </td><td> 20.86 </td><td> 0.93 </td><td> (12) </td><td> 22.02 </td><td> 0.67 </td><td> (12) </td><td> 25.29 </td><td> 1.89 </td><td> (12) </td><td> 23.37 </td><td> 0.80 </td><td> (12) </td><td> 30.56 </td><td> 1.66 </td><td> (12) </td></tr><tr><td> 뇌 </td><td> 18.71 </td><td> 0.72 </td><td> 6 </td><td> 33.91 </td><td> 2.06 </td><td> 6 </td><td> 31.08 </td><td> 3.17 </td><td> 6 </td><td> 26.05 </td><td> 0.73 </td><td> 6 </td><td> 28.45 </td><td> 0.63 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> 비. </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td> &lt;TD&gt; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"> 평균 CP </td><td colspan="3"> GAPDH </td><td colspan="3"> 소 </td><td colspan="3"> MAP2 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td> 평균 </td><td> SD </td><td> 엔 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 소 </td><td> 21.04 </td><td> 0.41 </td><td> 6 </td><td> 32.13 </td><td> 1.63 </td><td> 6 </td><td> 30.21 </td><td> 0.85 </td><td> 6 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 뇌 </td><td> 19.09 </td><td> 0.49 </td><td> 6 </td><td> 26.43 </td><td> 0.88 </td><td> 6 </td><td> 23.30 </td><td> 0.99 </td><td> 6 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 1 :. 윌리스의 마우스 원에서 신경과 수축성 유전자의 발현에 대한 평균 크로싱 포인트 및 뇌 계산은 형광의 일정한 수준에서 교차 포인트 (CP)에 의해 결정 정확한 사이클의 비교를 기반으로합니다. 교차점은 증폭 곡선의 최대 초 미분에 대응하는 사이클 수이다. 높은 CP 값은 표현의 낮은 수준과 연관된다. 제어 포인트가 기준 유전자 (35) (A) (CP)를 초과하는 경우 소정의 유전자, 발현을 탐지되는 것으로 간주된다 : GAPDH 단계; 및 수축 유전자의 : SMA, smoothelin, SM-MHC 및 E 셀렉틴 (B) 참조 유전자의 CP :. GAPDH; 및 신경 유전자 : 모그와 Map2에.

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Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

윌리스의 마우스 원을 분리하는 프로토콜

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.0K 조회수.  Sorbonne Universités. We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

비디오: Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The NeuroStar TMS Device: Conducting the FDA Approved Protocol for Treatment of Depression

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic fields. These rapidly alternating fields induce electrical currents within localized, targeted regions of the cortex which are associated with various physiological and functional brain changes.1,2,3
In 2007, O'Reardon et al., utilizing the NeuroStar device, published the results of an industry-sponsored, multisite, randomized, sham-stimulation controlled clinical trial in which 301 patients with major depression, who had previously failed to respond to at least one adequate antidepressant treatment trial, underwent either active or sham TMS over the left dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC). The patients, who were medication-free at the time of the study, received TMS five times per week over 4-6 weeks.4
The results demonstrated that a sub-population of patients (those who were relatively less resistant to medication, having failed not more than two good pharmacologic trials) showed a statistically significant improvement on the Montgomery-Asberg Depression Scale (MADRS), the Hamilton Depression Rating Scale (HAMD), and various other outcome measures. In October 2008, supported by these and other similar results5,6,7, Neuronetics obtained the first and only Food and Drug Administration (FDA) approval for the clinical treatment of a specific form of medication-refractory depression using a TMS Therapy device (FDA approval K061053).
In this paper, we will explore the specified FDA approved NeuroStar depression treatment protocol (to be administered only under prescription and by a licensed medical profession in either an in- or outpatient setting).

In this article, we examine the methodology and considerations relevant to the FDA approved depression treatment protocol using the Neuronetics NeuroStar TMS device.

NeuroStar TMS 장치 : FDA를 실시는 우울증 치료 프로토콜을 승인

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic ...

연구

신경과학

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

여러 마우스 Neuroanatomical 자기 공명 영상

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external environment and easily accessible in every living individual. As a result, this tissue is unique for anyone aiming to identify molecular anomalies in the pathological brain or isolate adult stem cells for cell therapy. 
Molecular abnormalities in brain diseases are often studied using nervous tissue samples collected post-mortem. However, this material has numerous limitations. In contrast, the olfactory mucosa is readily accessible and can be biopsied safely without any loss of sense of smell1. Accordingly, the olfactory mucosa provides an "open window" in the adult human through which one can study developmental (e.g. autism, schizophrenia)2-4 or neurodegenerative (e.g. Parkinson, Alzheimer) diseases4,5. Olfactory mucosa can be used for either comparative molecular studies4,6 or in vitro experiments on neurogenesis3,7.
The olfactory epithelium is also a nervous tissue that produces new neurons every day to replace those that are damaged by pollution, bacterial of viral infections. This permanent neurogenesis is sustained by progenitors but also stem cells residing within both compartments of the mucosa, namely the neuroepithelium and the underlying lamina propria8-10. We recently developed a method to purify the adult stem cells located in the lamina propria and, after having demonstrated that they are closely related to bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC), we named them olfactory ecto-mesenchymal stem cells (OE-MSC)11.
Interestingly, when compared to BM-MSCs, OE-MSCs display a high proliferation rate, an elevated clonogenicity and an inclination to differentiate into neural cells. We took advantage of these characteristics to perform studies dedicated to unveil new candidate genes in schizophrenia and Parkinson's disease4. We and others have also shown that OE-MSCs are promising candidates for cell therapy, after a spinal cord trauma12,13, a cochlear damage14 or in an animal models of Parkinson's disease15 or amnesia16.
In this study, we present methods to biopsy olfactory mucosa in rats and humans. After collection, the lamina propria is enzymatically separated from the epithelium and stem cells are purified using an enzymatic or a non-enzymatic method. Purified olfactory stem cells can then be either grown in large numbers and banked in liquid nitrogen or induced to form spheres or differentiated into neural cells. These stem cells can also be used for comparative omics (genomic, transcriptomic, epigenomic, proteomic) studies.

We describe here a method for biopsying olfactory mucosa from rat and human nasal cavities. These biopsies can be used for either identifying molecular anomalies in brain diseases or isolating multipotent adult stem cells that can be utilized for cell transplantation in animal models of brain trauma/disease.

설치류 또는 인간의 네이절 강한 줄기 세포를 분리

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues presents a unique challenge because of the paucity of cells of interest and few transgenic reporter mouse models. Here, we describe a protocol using fluorescence-conjugated probes to selectively label LacZ-positive cells from the neonatal cochleae.
The most common underlying pathology of sensorineural hearing loss is the irreversible damage and loss of cochlear sensory hair cells, which are required to transduce sound waves to neural impulses. Recent evidence suggests that the murine auditory and vestibular organs harbor stem/progenitor cells that may have regenerative potential1,2. These findings warrant further investigation, including identifying specific cell types with stem/progenitor cell characteristics. The Wnt signaling pathway has been demonstrated to play a critical role in maintaining stem/progenitor cell populations in several organ systems3-7. We have recently identified Wnt-responsive Axin2-expressing cells in the neonatal cochlea, but their function is largely unknown8.
To better understand the behavior of these Wnt-responsive cells in vitro, we have developed a method of isolating Axin2-expressing cells from cochleae of Axin2-LacZ reporter mice9. Using flow cytometry to isolate Axin2-LacZ positive cells from the neonatal cochleae, we could in turn execute a variety of experiments on live cells to interrogate their behavior as stem/progenitor cells. Here, we describe in detail the steps for the microdissection of neonatal cochlea, dissociation of these tissues, labeling of the LacZ-positive cells using a fluorogenic substrate, and cell sorting. Techniques for dissociating cochleae into single cells and isolating cochlear cells via flow cytometry have been described2,10-12. We have made modifications to these techniques to establish a novel protocol to isolate LacZ-expressing cells from the neonatal cochlea.

Flow cytometry is a powerful tool allowing for the isolation and study of specific cell populations. This protocol describes steps for isolating LacZ-expressing cells from cochlear tissues from neonatal transgenic mice. Dissociated cochlear cells were labeled using fluorescent-conjugated substrates of &#946;-galactosidase prior to separation via flow cytometry.

분리 LacZ를 표현 유동세포계측법를 사용하여 마우스 내이 (内耳) 조직의 세포를

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex three-dimensional retinal blood vessels and capillaries by creating a two-dimensional flat-mount of the interconnected vascular channels after digestion of the non-vascular components of the retina. This allows one to study various pathologic vascular changes, such as microaneurysms, capillary degeneration, and abnormal endothelial to pericyte ratios. However, the method is technically challenging, especially in mice, which have become the most widely available animal model to study the retina because of the ease of genetic manipulations 6,7. In the mouse eye, it is particularly difficult to completely remove the non-vascular components while maintaining the overall architecture of the retinal blood vessels. To date, there is a dearth of literature that describes the trypsin digest technique in detail in the mouse. This manuscript provides a detailed step-by-step methodology of the trypsin digest in mouse retina, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

Trypsin digest is one of the most commonly used methods to analyze retinal vasculature. This manuscript describes the method in detail, including key alterations to optimize the technique and remove the non-vascular tissue while preserving the overall architecture of the vessels.

트립신 다이제스트 프로토콜 마우스 모델의 망막 혈관을 분석하는

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, hippocampus, and the associated parahippocampal regions (perirhinal, entorhinal,&#160;and parahippocampal proper). Unlike most other tracing protocols available, typically focusing on certain MTL areas (e.g., amygdala and/or hippocampus), the integrative perspective adopted by the present tracing guidelines allows for clear localization of all MTL subregions. By integrating information from a variety of sources, including extant tracing protocols separately targeting various MTL structures, histological reports, and brain atlases, and with the complement of illustrative visual materials, the present protocol provides an accurate, intuitive, and convenient guide for understanding the MTL anatomy. The need for such tracing guidelines is also emphasized by illustrating possible differences between automatic and manual segmentation protocols. This knowledge can be applied toward research involving not only structural MRI investigations but also structural-functional colocalization and fMRI signal extraction from anatomically defined ROIs, in healthy and clinical groups alike.

The present work provides a comprehensive set of guidelines for manually tracing the medial temporal lobe (MTL) structures. This protocol can be applied to research involving structural and/or combined structural-functional magnetic resonance imaging (MRI) investigations of the MTL, in both healthy and clinical groups.

내측 측두엽 구조의 수동 분할을위한 포괄적 인 프로토콜

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and lifespan. In addition, telomerase protects the mitochondria from oxidative stress and confers resistance to apoptosis, suggesting its possible importance for the surviving of non-mitotic, highly active cells such as neurons. We previously demonstrated the ability of novel telomerase activators to increase telomerase activity and expression in the various mouse brain regions and to protect motor neurons cells from oxidative stress. These results strengthen the notion that telomerase is involved in the protection of neurons from various lesions. To underline the role of telomerase in the brain, we here compare the activity of telomerase in male and female mouse brain and its dependence on age. TRAP assay is a standard method for detecting telomerase activity in various tissues or cell lines. Here we demonstrate the analysis of telomerase activity in three regions of the mouse brain by non-denaturing protein extraction using CHAPS lysis buffer followed by modification of the standard TRAP assay.
In this 2-step assay, endogenous telomerase elongates a specific telomerase substrate (TS primer) by adding TTAGGG 6 bp repeats (telomerase reaction). The telomerase reaction products are amplified by PCR reaction creating a DNA ladder of 6 bp increments. The analysis of the DNA ladder is made by 4.5% high resolution agarose gel electrophoresis followed by staining with highly sensitive nucleic acid stain.
Compared to the traditional TRAP assay that utilize 32P labeled radioactive dCTP&#39;s for DNA detection and polyacrylamide gel electrophoresis for resolving the DNA ladder, this protocol offers a non-toxic time saving TRAP assay for evaluating telomerase activity in the mouse brain, demonstrating the ability to detect differences in telomerase activity in the various female and male mouse brain region.

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

Telomerase is expressed in the neonatal brain and also in distinct regions of the adult brain. We present a non-toxic time saving TRAP assay for the analysis of telomerase activity in various regions of the mouse brain and detection of differences in telomerase activity between male and female mouse brains.

마우스 뇌의 다양한 지역에서 텔로 머라 제 활동 : 비 방사성 텔로 머라 제는 증폭 프로토콜을 반복 (TRAP) 분석

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Receptor Autoradiography Protocol for the Localized Visualization of Angiotensin II Receptors

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to perform receptor autoradiographic mapping.
Tissue specimens are harvested and stored at -80 &#176;C. A cryostat is used to coronally section the tissue (brain) and thaw-mount the sections onto charged slides. The slide-mounted tissue sections are incubated in 125I-SI-Ang II to radiolabel Ang II receptors. Adjacent slides are separated into two sets: &#39;non-specific binding&#39; (NSP) in the presence of a receptor saturating concentration of non-radiolabeled Ang II, or an AT1 Ang II receptor subtype (AT1R) selective Ang II receptor antagonist, and &#39;total binding&#39; with no AT1R antagonist. A saturating concentration of AT2 Ang II receptor subtype (AT2R) antagonist (PD123319, 10 &#181;M) is also present in the incubation buffer to limit 125I-SI-Ang II binding to the AT1R subtype. During a 30 min pre-incubation at ~22 &#176;C, NSP slides are exposed to 10 &#181;M PD123319 and losartan, while &#39;total binding&#39; slides are exposed to 10 &#181;M PD123319. Slides are then incubated with 125I-SI-Ang II in the presence of PD123319 for &#39;total binding&#39;, and PD123319 and losartan for NSP in assay buffer, followed by several &#39;washes&#39; in buffer, and water to remove salt and non-specifically bound radioligand. The slides are dried using blow-dryers, then exposed to autoradiography film using a specialized film and cassette. The film is developed and the images are scanned into a computer for visual and quantitative densitometry using a proprietary imaging system and a spreadsheet. An additional set of slides are thionin-stained for histological comparisons.
The advantage of using receptor autoradiography is the ability to visualize Ang II receptors in situ, within a section of a tissue specimen, and anatomically identify the region of the tissue by comparing it to an adjacent histological reference section.

Here we present a protocol to describe the localization of angiotensin II Type 1 receptors in the rat brain by quantitative, densitometric, in vitro receptor autoradiography using an iodine-125 labeled analog of angiotensin II.

안지오텐신 II 수용체의 현지화 시각화에 대한 수용체자가 방사선 프로토콜

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the molecular and cellular basis of higher brain functions. A whole-mount preparation of adult brains with well-preserved morphology is critical for such whole brain-based studies, but can be technically challenging and time-consuming. This protocol describes an easy-to-learn, one-step dissection approach of an adult fly head in less than 10 s, while keeping the intact brain attached to the rest of the body to facilitate subsequent processing steps. The procedure helps remove most of the eye and tracheal tissues normally associated with the brain that can interfere with the later imaging step, and also places less demand on the quality of the dissecting forceps. Additionally, we describe a simple method that allows convenient flipping of the mounted brain samples on a coverslip, which is important for imaging both sides of the brains with similar signal intensity and quality. As an example of the protocol, we present an analysis of dopaminergic (DA) neurons in adult brains of WT (w1118) flies. The high efficacy of the dissection method makes it particularly useful for large-scale adult brain-based studies in Drosophila.

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

The adult Drosophila brain is a valuable system for studying neuronal circuitry, higher brain functions, and complex disorders. An efficient method to dissect whole brain tissue from the small fly head will facilitate brain-based studies. Here we describe a simple, one-step dissection protocol of adult brains with well-preserved morphology.

간단한 한 단계 성인의 전체 마운트 준비에 대한 해부 프로토콜<em&gt; 초파리</em&gt; 두뇌

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control neuroplastic processes and correct abnormal function, or even shift functions from damaged tissue to physiologically healthy brain regions, hold the potential to dramatically improve overall health. Of the current neuroplastic interventions in development, neurofeedback training (NFT) from functional Magnetic Resonance Imaging (fMRI) has the advantages of being completely non-invasive, non-pharmacologic, and spatially localized to target brain regions, as well as having no known side effects. Furthermore, NFT techniques, initially developed using fMRI, can often be translated to exercises that can be performed outside of the scanner without the aid of medical professionals or sophisticated medical equipment. In fMRI NFT, the fMRI signal is measured from specific regions of the brain, processed, and presented to the participant in real-time. Through training, self-directed mental processing techniques, that regulate this signal and its underlying neurophysiologic correlates, are developed. FMRI NFT has been used to train volitional control over a wide range of brain regions with implications for several different cognitive, behavioral, and motor systems. Additionally, fMRI NFT has shown promise in a broad range of applications such as the treatment of neurologic disorders and the augmentation of baseline human performance. In this article, we present an fMRI NFT protocol developed at our institution for modulation of both healthy and abnormal brain function, as well as examples of using the method to target both cognitive and auditory regions of the brain.

The ability to induce and/or control neural plasticity may be critical in future treatments for neurologic disorders and the recovery from brain injury. In this paper, we present a protocol on the use of neurofeedback training with functional magnetic resonance imaging to modulate human brain function.

관리의 실시간 fMRI Neurofeedback 훈련에 대 한 프로토콜

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...