この作品は、リエージュ大学病院 (チュー リエージュ) によって支えられました。我々 はビデオ生産のための「瞬間プロダクション」を認めます。我々 はまた、セドリック フランソワ、映画に登場した患者を認めます。

このセクションで説明するすべてのメソッドは、リエージュ大学病院の倫理委員会によって承認されているし、すべての健常者が参加の書面によるインフォームド コンセントを与えた。
1. 喀痰誘発
<ol>
	<li>前と後の気管支拡張剤のスパイロメトリー
	<ol>
		<li>スパイロメトリーを実行 (1 秒 [fev 社1] の強制 expiratory ボリュームと肺活量 [FVC] 操縦) アメリカ胸部学会 (ATS) によると/欧州呼吸器学会 (ERS) 標準条件12。</li>
		<li>スペーサー デバイスを介してメーター用量吸入器 (MDI) から 400 μ g 吸入サルブタ モールを管理します。 注: 大人、吸入サルブタ モールの有害事象は振戦、頻脈の13を含みます。</li>
		<li>スパイロメトリー (fev 社1と FVC 操縦) 15 分後で繰り返す、ATS/ERS 基準12によると。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>超音波ネブライザーの準備 注意: ネブライザーする必要があります徹底的に洗浄・消毒製造元の指示に従い、各使用する前に。<ol>
		<li>推奨レベルまで蒸留水でネブライザー室を埋めます。</li>
		<li>ネブライザー室にクリーン カップを置きます。</li>
		<li>適切なふた付きカップをカバーします。</li>
		<li>後気管支拡張剤 fev 社1患者の高張生理食塩水 (5%) のいずれかの 50 mL のカップを埋める &#62; 65% 予測または 50 mL の等張生理食塩水 (0.9%) 後気管支拡張剤 fev 社1≤65% 予測患者の。</li>
		<li>カップにサルブタ モール硫酸塩溶液 (5 mg/mL) の 1.75 mL を追加します。</li>
		<li>チューブとバルブ製造元の指示に従って接続します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>ネブライザーと喀痰のコレクション 注: は、医療監督の下で技術を実行します。<ol>
		<li>患者への手順を説明します。</li>
		<li>鼻クリップを使用する患者をお願いします。</li>
		<li>噴霧器をオンし、エアロゾルとファンの設定の最下位のレベルを選択します。</li>
		<li>5 分の呼吸法とマウスピースを介してエアロゾルを吸入する患者をお願いします。 注: 患者の耐性に応じてエアロゾルとファンの設定を増加可能性があります。<ol>
			<li>耐え難い咳や吐き気、場合の手順を中止し、1.3.5 の手順に進みます。</li>
			<li>胸の圧迫感や呼吸苦、1.3.8 のステップに移動します。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>噴霧器をオフにします。</li>
		<li>鼻クリップを削除し、水で口をすすぎ、シンクにそれを破棄する前に 2 回うがい患者をお願いします。 注: 唾液細胞が痰のサンプルを汚染して使用できなくなるサンプルに 。</li>
		<li>プラスチックの容器に痰を咳をする患者をお願いします。</li>
		<li>Fev 社1を測定するスパイロメトリー (強制呼出) を実行します。</li>
		<li>Fev 社1秋を次のように評価: (fev 社1は 3.8 [mL] のステップで測定される) - (1.3 [mL] のステップで測定後気管支拡張剤 fev 社1 )/(1.3 [mL] のステップで測定後気管支拡張剤 fev 社1 ) * 100。<ol>
			<li>Fev 社1後気管支拡張剤値から 20% 以上該当する場合は、手順を中止します。Fev 社1再び 10 分後を測定します。Fev 社1には、20% 以上が該当する場合は、噴霧イプラトロピウム臭化物 (0.25 mg/2 mL) を管理し、医療観察下の患者に医師を求めます。1.3.10 手順に進みます。</li>
			<li>Fev 社1が後の気管支拡張剤の値から 20% 以上でない場合、手順 3.2 〜 3.9 1 ~ 3 回 10 〜 20 分の合計ネブライザー時間に到達します。 注: 合計ネブライザー時間は痰のサンプルの量と質 (プラグまたは粘性部品の存在) になります。サンプルの質や量が悪い場合ネブライザーの 10 分後、手順を拡張して、15 〜 20 分の合計ネブライザー時間に到達する必要があります。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>冷蔵処理まで痰のサンプルを保ちます。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 喀痰処理
注: 最適な細胞生存率のサンプリングの 3 時間以内、喀痰を処理します。
注意: は、白衣、防護手袋、ゴーグルを着用します。
<ol>
	<li>予備の準備
	<ol>
		<li>滅菌蒸留水 10 mL を製造元の指示に従って、6.5 ミリメートルのソリューションを取得する集中ジチオトレイトール ソリューション (粘液溶解剤) の 10 倍希釈を行います。 注: 集中ジチオトレイトール ソリューション周囲の空気との混合を防ぐために、ソリューションから撤退バイアル滅菌注射器と針で。開いたら、濃縮液バイアルを室温で保管し、5 日以内に使用する必要があります。希釈した溶液を毎日用意しています。 注意: 目や皮膚の炎症の危険性のため保護具 (衣類、手袋とゴーグル) を着用します。</li>
		<li>ダルベッコ Phosphate-Buffered 生理食塩水 (DPBS) 0.08% 解を得るためトリパン ブルー溶液 (0.4%) の割増希釈を行います。この希釈液を室温で維持し、2 週間以内に使用します。 注意: 発癌性の危険のため保護具 (衣類、手袋、ゴーグル) を着用します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>喀痰培養上清のコレクション
	<ol>
		<li>50 mL コニカル下部のプラスチック製のチューブで全体の喀痰を転送し、サンプルの重量を量る。</li>
		<li>DPBS ソリューションの 3 倍の重量を追加します。</li>
		<li>ゆっくりと渦 30 サンプル s。</li>
		<li>遠心 800 x g、4 ° C で 10 分間します。</li>
		<li>滅菌ガーゼの 2 層を通して試料をフィルター処理し、50 mL コニカル下部のプラスチック製のチューブに上清を収集します。</li>
		<li>分注 2 mL プラスチックの上澄みチューブ、-80 ° C で保存 注: 清サンプル、喀痰流体相コンポーネントを試金するために役立ちます。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>喀痰孟
	<ol>
		<li>必要に応じて、細胞懸濁液 5 mL の容量に到達する細胞ペレットに DPBS を追加します。</li>
		<li>6.5 mM ジチオトレイトールが 1 つのボリュームに細胞懸濁液を希釈します。ベンチ ロッカーを使用して、室温で 20 分間細胞懸濁液をロックします。<ol>
			<li>DPBS と少なくとも 3 回を繰り返します。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>550 x g と 10 分のための 4 ° C で希釈した細胞懸濁液を遠心します。</li></ol></li></ol>上清を捨てます。
		<li>DPBS 約 1 mL の細胞ペレットを再懸濁します。</li>
	
	
	<li>検定数によって痰のサンプル (細胞濃度、扁平上皮細胞の汚染、トリパン ブルー排除法による生存率) の質的特性の評価
	<ol>
		<li>評価し、細胞懸濁液の正確な量を記録します。</li>
		<li>0.08% トリパン ブルー溶液を 50 μ l 添加に細胞懸濁液 50 μ L を追加し、均質化します。</li>
		<li>検定 (トーマ部屋) の coverslip の下でサンプルを入れて光学顕微鏡 (400 倍) の下に置きます。</li>
		<li>扁平上皮細胞、非扁平上皮細胞 (未塗装細胞) と死んで非扁平上皮細胞を数える (青色塗装のセル)。 注: 場合低すぎるか高すぎる細胞密度、集中し、または細胞懸濁液を希釈、手順 2.4.1-2.4.3 を繰り返します。</li>
		<li>細胞濃度懸濁液、扁平上皮細胞の割合、非扁平上皮癌細胞の割合を評価します。 注: 計算結果喀痰の総非扁平上皮細胞数/g: 細胞懸濁液 (ステップ 5.4) の濃度 * 細胞懸濁液 (ステップ 4.8) のボリューム * % 非扁平上皮細胞の/重量の痰のサンプル (ステップ 2.2.1)。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>ステンド グラス cytospin の準備が必要な場合細胞懸濁液の残留細胞のストレージとスライドします。 注: 細胞懸濁液に扁平上皮癌の 80% 以上が含まれている場合サンプルのセルと見なされます貧しい品質と cytospin スライド14には不向き。その場合は、処理を中断し、失敗したこのサンプルを検討します。<ol>
		<li>細胞懸濁液 500,000 セル/mL の細胞懸濁液の少なくとも 350 μ L を取得する DPBS の因数を希釈します。</li>
		<li>製造元の指示に従って、セルのコンセントレーターを組み立てます。</li>
		<li>この細胞懸濁液を 100 μ l 添加でセル コンセントレーターの 3 コンパートメントの各を入力します。</li>
		<li>収集で 150 x g と常温で 2 分間スピンします。培養上清を捨てます。</li>
		<li>製造元の指示に従って、セルのコンセントレーターを逆アセンブルします。</li>
		<li>乾燥空気にスライドを許可します。 注: この段階で残留セル格納できます十分なバッファー内のさらなる実験に必要な場合。</li>
		<li>商業染色スライド キット (材料の表を参照)、製造元の指示に従って汚れ。</li>
		<li>メディアを適切なマウントとカバー スリップ、スライドをマウントします。</li>
		<li>オイルの液浸と光学顕微鏡 (600 X) の下でスライドを配置します。</li>
		<li>少なくとも 500 の非扁平上皮細胞をカウント: 好中球、好酸球、マクロファージ、リンパ球、上皮細胞。 注: 差動細胞数は通常 1 つだけが実行または 2 つは専用判定不一致を制限するオブザーバーを訓練を受けた。</li>
		<li>レコードの絶対値と各セルのパーセンテージを入力します。</li>
	</ol>
	</li>

<ol>
	<li>Jayaram, L., Parameswaran, K., Sears, M. R., Hargreave, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+sputum+cell+counts:+their+usefulness+in+clinical+practice.">Induced sputum cell counts: their usefulness in clinical practice.</a> European Respiratory Journal. 16 (1), 150-158 (2000).</li><li>Pavord, I. D., Pizzichini, M. M., Pizzichini, E., Hargreave, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+induced+sputum+to+investigate+airway+inflammation.">The use of induced sputum to investigate airway inflammation.</a> Thorax. 52 (6), 498-501 (1997).</li><li>Leigh, T. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asthma+exacerbations+and+sputum+eosinophil+counts:+a+randomised+controlled+trial.">Asthma exacerbations and sputum eosinophil counts: a randomised controlled trial.</a> Lancet. 360 (9347), 1715-1721 (2002).</li><li>Siva, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eosinophilic+airway+inflammation+and+exacerbations+of+COPD:+a+randomised+controlled+trial.">Eosinophilic airway inflammation and exacerbations of COPD: a randomised controlled trial.</a> European Respiratory Journal. 29 (5), 906-913 (2007).</li><li>Louis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+infiltration,+ICAM-1+expression,+and+eosinophil+chemotactic+activity+in+asthmatic+sputum.">Cell infiltration, ICAM-1 expression, and eosinophil chemotactic activity in asthmatic sputum.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 155 (2), 466-472 (1997).</li><li>Maes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asthma+inflammatory+phenotypes+show+differential+microRNA+expression+in+sputum.">Asthma inflammatory phenotypes show differential microRNA expression in sputum.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 137 (5), 1433-1446 (2016).</li><li>Moermans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+cellular+inflammation+and+cytokine+release+in+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Local and systemic cellular inflammation and cytokine release in chronic obstructive pulmonary disease.</a> Cytokine. 56 (2), 298-304 (2011).</li><li>Gibson, P. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+eosinophil+apoptosis+in+induced+sputum+correlates+with+asthma+severity.">Reduced eosinophil apoptosis in induced sputum correlates with asthma severity.</a> The European Respiratory Journal. 22 (3), 484-490 (2003).</li><li>Demarche, S. 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V., Liu, J., Wong, H., Boushey, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Biochemical+Analysis+of+Induced+Sputum+from+Asthmatic+and+from+Healthy+Subjects.">Cellular and Biochemical Analysis of Induced Sputum from Asthmatic and from Healthy Subjects.</a> American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1126-1131 (1993).</li><li>Pizzichini, E., Pizzichini, M. M., Efthimiadis, A., Hargreave, F. E., Dolovich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+inflammatory+indices+in+induced+sputum:+effects+of+selection+of+sputum+to+minimize+salivary+contamination.">Measurement of inflammatory indices in induced sputum: effects of selection of sputum to minimize salivary contamination.</a> The European Respiratory Journal. 9 (6), 1174-1180 (1996).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

誘発喀痰法は、気道のコンパートメントを勉強する役に立つツールです。この手法のいくつかの用途があります。最初に、それは免疫細胞と様々 な呼吸器疾患に関与するメカニズムについての知識が向上します。たとえば、この方法は、患者の大規模コホートで気道炎症の調査を許可している、喘息患者の約半分が、気道の異常好酸球性炎症15,によって特徴付けられることが示されています。16,17, COPD 患者は通常発生した喀痰中の好中球を展示中は、18 をカウントします。この手法は、特発性肺線維症患者における気道炎症のより良い評価してこの病19に貢献するかもしれない証拠調停にも貢献しています。第二に、誘発喀痰法は治療への反応を予測する役に立つかもしれません。たとえば、喀痰中好酸球の割合が異常の存在はステロイド反応性11,18の予測マーカーに示されています。喘息や COPD、11 現在臨床ガイドラインに従って治療を調整するよりも増悪の減少に効果的であることが示された喀痰中好酸球の割合を正規化するコルチコステロイドの投与量を調整 ,20,21。第三に、喀痰分析はターゲットを絞った治療法の開発に役立つことがあります。たとえば、COPD と気管支喘息患者の喀痰中好中球の異常な数の存在は、antineutrophilic 治療11の開発につながっています。第四に、技術は、診断で役割を果たす可能性があります。たとえば、喀痰中好酸球の存在は非喘息好酸球性気管支炎11の診断をする必要です。
差動細胞数を取得するには、ほか喀痰を誘導する手法は、喀痰培養上清または喀痰細胞を研究することによって多くの追加解析のパフォーマンスもことができます。喀痰培養上清中のメディエーター8,19,22の分析と好酸球22サンプルの遊走活性の評価があります。喀痰細胞から RNA を抽出してマイクロ Rna を使用できるまたは遺伝子発現解析19,23 。喀痰細胞は、とりわけ、診療とセルを並べ替えできる流れ cytometry9,23で分析できます。さらに、喀痰細胞培養10日をすることができ、その伝達物質産生体外測定24をすることができます。それはここでは注目に値する、調停内容がわかること喀痰の培養上清から異なります。確かに、居住者の気道からの分泌物、喀痰細胞培養モデル24に反して、プラズマ滲出喀痰培養上清中メディエーターを影響可能性があります。最後に、免疫細胞化学およびその場で交配も行える喀痰細胞7を使用します。
誘発喀痰法には、いくつかの制限があります。誘導は、医療監督の下で行う必要があります。また、患者に徹底した指示を与えるオペレーターのために不可欠です。他の制限には呼吸努力が必要な協力と患者の健康状態が含まれます。子供でこの技術の可能性について成功と256 歳以上のお子様に安全なだったいくつかの研究を報告しています。上の子のデータ &#60;25, 6 歳に欠けているが、それは喀痰誘発がそれらの子供14で行うことは困難である可能性。技術は、それが技術的に困難な時間のかかる、それは訓練を受けたスタッフ1を必要とするので、サービス、専門センターを研究に制限されています。別の制限は、喀痰誘発と分析の手法は、常に成功すると、読みやすい cytospin26常に得られないことを意味ないです。ただし、成功率は約 80% 患者4,26,27,28,29の異なるコホートでは通常。喀痰細胞数30,31に影響を与えるようだった時代のマッチングについての患者の別のコホートを比較するとき最後に、注意が必要です。同様に、ジェンダーとタバコの習慣などの他のパラメーターは、彼らはまた、喀痰細胞数29,32妨げる可能性があるに一致しなければなりません。患者照合が不可能な年齢、性別、喫煙の有無を考慮する別の方法これらの特性の統計的分析を調整することです。
誘発喀痰法気道生検、気管支肺胞洗浄などから細胞を集めることができる他の技術と比較して単純な安定、安全、再現性、費用効率、および非侵襲的であることの利点があります。これらの利点は大規模で、時間をかけて、繰り返し実行する誘発喀痰法の許可し、気道サンプリングに最適な代替は。Bronchosorption は、気道メディエーター33を査定するために粘膜内層流体のコレクションを許可する別の手法です。このテクニック (必要とする気管支鏡検査) は誘発喀痰検査法よりも、唾液で汚染を回避し、気管支肺胞洗浄33より仲介人の高い濃度を得ることの利点があります。
重要なステップには、プロトコルでは注意が必要。最初に、これらの 2 つのパラメーターが結果に影響を与える標準化された34,35になっているために、生理食塩水の濃度および、誘導時間をに関する注意を取られなければなりません。第二に、DTT の孟は処理の重要なステップです。PBS と比較してより喀痰細胞7スライド、cytopsin、品質が向上し、再現可能なセルの数2を持つことが不可欠ですを分散させる DTT を示した。ただし、粘液溶解剤は、生化学成分の測定を妨げる可能性があります。実験をスパイクは、新しい生化学的化合物36を測定するときに、実行する必要があります。最後に、プロシージャのもう一つの重要なステップは信頼性と解釈できる結果を確保するための訓練を受けた技術者が行う必要があるステップを数えるセルです。
全体の痰ではなく喀痰プラグ (粘性や密度の高いパーツ) を使用して別の方法は文献7に説明されています。両方の技術の長所と短所があります。全体喀痰手法によりより迅速な処理7が、頻繁にサンプルを希釈し、cytospins2,7の質を減らすことができます唾液で汚染されています。プラグ選択手法でサンプルが cytospin スライド7流体相のメディエーターの投与のためのより良い品質の多いことを意味する唾液の汚染は低減されます。処理はしかし長く7と選択したプラグは、サンプル全体の37の代表できない場合があります。またすべてのサンプルを含むプラグ、制限することができますは注目に値するです。両方のメソッドは、検証と再現と両方これらのメソッドから取得した差分のセル数が異なる14,38だという証拠がないです。
将来は、誘発喀痰検査法を臨床ツールとして使用して、調査、診断、および炎症性呼吸器疾患のすべての種類の管理のためのバイオ マーカーを提供する可能性があります。

気道炎症を調べるにいくつかの方法を使用: 直接測定 (気管支生検、気管支肺胞洗浄など) と間接法 (症状評価のような血液サンプルの分析および肺機能検査)1。直接テクニック確実に気道炎症を評価するという利点がありますが、侵襲と不可能で大規模な患者の不快感のため、リスク発生1。間接法としては不十分な気道炎症1の直接の評価と相関する彼ら。
喀痰コレクション気道からサンプル細胞に別の方法、気道炎症の直接の評価を可能です。それにもかかわらず、自発的に痰の生産質の悪いサンプルにつながる可能性があります、すべて患者2は不可能します。この問題は、喀痰生産2を誘発する超音波噴霧高張生理食塩水を使用してによって克服されています。このメソッドは、ニューモシスチス ・ カリニ肺炎3の診断用ひと免疫不全ウイルス (HIV) に感染した患者に使われた当初、健常者と喘息患者 1992年4に適応されました。喀痰誘発は等張生理食塩水5を使用してもより深刻な患者で可能であります。一般的に忍容されている生理食塩水の吸入は hyperresponsive 航空5患者の気管支けいれんを引き起こす可能性があります。したがって、手順1の前に短時間作用の β 作動薬を管理することをお勧めします。さらに、我々 は以前超音波ネブライザーで食塩にサルブタ モールを追加することでこのリスク6さらに減少したことを示しています。喀痰誘発の利点は、それは非侵襲的な2 、5のとき適切な安全予防措置です。
喀痰サンプルの処理の 2 つの方法は文献で現在使用されて: 全体痰法とプラグの選択7。当研究室全体痰法が行われます。喀痰処理の主な目的は、炎症気道内腔に存在の種類を研究する差分セル数を取得することです。ただし、多くの追加解析は喀痰培養上清中8で仲介人を研究することによって、または喀痰細胞の詳細な調査を実行することによってさらに炎症性プロセスおよび免疫のメカニズムを調査することも (など、流れ cytometry9セル文化10、ゲノム10、プロテオミクス10、免疫細胞化学7の in situハイブリダイゼーション7、等)
喀痰誘発と分析の手法は、現在は技術的に困難な時間のかかる、1訓練を受けたスタッフが必要ですのでサービス、臨床専門センターを研究に限定されます。気道の炎症は、喘息、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、慢性の咳、または特発性肺線維症11のような様々 な呼吸器疾患のためこの方法で調査されるかもしれない。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1223">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Spirometer - Spirobank</td>
			<td style="width:265px;">MIR France</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:305px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salbutamol MDI - Ventolin</td>
			<td>GLAXOSMITHKLINE</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 0135-913</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Nebulizer UltraNeb</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td>UltraNeb U3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Devilbiss UltraNeb Disposable Cups &#38; Lids</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td>100HD-647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeVilbiss Bacterial Filter For UltraNeb Nebulisers</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td style="width:140px;">1001005879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">One-way Valves</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">One-way Valves</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Aerosol T-connector&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Ventilation circuit monobranch corrugated</td>
			<td style="width:265px;">Int&#39;Air Medical France</td>
			<td style="width:140px;">TA30A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl 5 %&#160;</td>
			<td style="width:265px;">/</td>
			<td style="width:140px;">/</td>
			<td style="width:305px;">Produced by our hospital pharmacy</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">Mini-Plasco NaCl 0.9%</td>
			<td style="width:265px;">B.Braun Medical&#160; Diegem Belgium</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salbutamol sulfate 5 mg/mL - Ventolin</td>
			<td>GLAXOSMITHKLINE</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 0094-987</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ipratropium bromide 0.25 mg/2 mL - Atrovent</td>
			<td style="width:265px;">Boehringer Ingelheim Germany</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 1543-305</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td style="width:265px;">LONZA Belgium</td>
			<td style="width:140px;">BE17512F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Sputolysin reagent</td>
			<td style="width:265px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:140px;">56000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Trypan blue 0.4% solution 100 mL</td>
			<td style="width:265px;">LONZA Bio Whittaker Belgium</td>
			<td style="width:140px;">17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer - Thoma chamber</td>
			<td style="width:265px;">Labor Optik Lancing UK</td>
			<td style="width:140px;">1500000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Hemacolor Stainig set</td>
			<td style="width:265px;">Merck Belgium</td>
			<td style="width:140px;">1116610001</td>
			<td style="width:305px;">Alternative product&#160; : Diff Quik Staining Set 
			&#160;Medion Diagnostic&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mounting medium - Entellan</td>
			<td style="width:265px;">Merck Belgium</td>
			<td style="width:140px;">107960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Statspin Cytofuge 12&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Beckman Coulter Belgium</td>
			<td>X00-003066-001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methodology for sputum induction and laboratory processing

喀痰誘発と処理の手法はコレクション、喘息、慢性閉塞性肺疾患 (COPD) のような様々 な呼吸器疾患における興味深いである気道からの細胞の分析を許可する認められた非侵襲的な方法慢性の咳、または特発性肺線維症。この手法はよく容認、安全かつ非侵襲的、技術的に困難、時間のかかるは、訓練を受けたスタッフが必要ですので、臨床研究サービスおよび専門センターに現在限定は。喀痰誘発の解析成功率は約 80% です。
ここでは、喀痰の誘導および実験室の処理について述べる.サルブタ モールと高張または等張生理食塩水の吸入による喀痰。処理全体痰テクニックを使用します。ジチオトレイトール (DTT) は、喀痰の孟を許可する使用されます。喀痰処理の主な目的は、気道の内腔内にあるセル型を研究する差分セル数を取得することです。追加の分析は、喀痰培養上清中の炎症性プロセスや免疫機構に調査を進めることがありますの喀痰細胞も実行可能性があります。喀痰培養上清中メディエーターを勉強し、フローサイトメトリー、ゲノミクス、プロテオミクスなどの喀痰細胞の解析の大きいスペクトルを実行するがあります。
最後に、健常者、喘息、COPD 患者の喀痰分析の代表の結果が掲載されています。

検定 典型的なイメージは、検定を用いた顕微鏡で可視化した図 1に示すように。扁平上皮細胞は識別簡単に彼らが非扁平上皮細胞よりもはるかに大きい。これらの扁平上皮細胞、上皮細胞、口の中から来る。両方の種類の細胞はトリパン青死んだとき汚れます。酵母、細菌、およびスクラップをカウントを避けるために注意する必要があります。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig1.jpg"> 
図 1: 死んで非扁平上皮細胞と、(C)、扁平上皮細胞 (A) 生活非扁平上皮細胞、(B) を示す検定画像。スケールバー = 50 μ m.<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
Cytospin スライド: 喀痰処理後に得られる cytospin スライドの代表イメージを図 2に示します。形態と色によって、異なる種類の細胞 (好中球、好酸球、マクロファージ、リンパ球、上皮細胞) を区別できます。いくつかのケースで扁平上皮細胞による汚染は重要な可能性があり、扁平上皮細胞の割合が 80% を超える場合、サンプルは失敗した (図 3)。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig2.jpg"> 
図 2:好中球、マクロファージ、好酸球、(C) (D)、リンパ球 (B) (A) を示す Cytospin スライド画像と上皮細胞 (E)。スケール バー = 20 μ m.<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig3.jpg"> 
図 3:質の悪い cytospin スライドの例 &#62; 扁平上皮細胞の 80%。スケール バー = 20 μ m.<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
成功率 当科で (成功した誘導と読める cytospin を組み合わせた) プロシージャの成功率 1,129 患者 (健常者、喘息または COPD 患者) のサンプルに基づく、82% (924/1,129) です。患者のタイプによるとサブ解析で成功率は 75% (57/76) 健常者で、82% (827/1,004) 喘息、COPD 患者の 82% (40/49)。
健常者の結果 当科の中央 (四分位範囲) から 289 健常者のシリーズのレトロスペクティブ分析で 3.72 g (四分位幅 2.46 g-5.54 g) であり、喀痰の中央値の合計非扁平上皮細胞数/g が x 106 (0.59 喀痰重量0.37 x 10 の四分位範囲6 - 1.29 × 106)。
、それらの健常者に扁平上皮細胞の比率は 19% (10%-34%) と低水準と生存率は 66% (54 78%) に高い。異なった細胞のタイプの割合に関する結果は、図 4 aにまとめたものです。マクロファージ (49% [31-68%]) の比率中リンパ球 (2% [1-3]) の割合 (34% [14%-60%])、好中球の割合よりも高くなって、好酸球 (0% [0% 0%]) と上皮細胞 (4% [2 11%]) が低いことがわかります。これらの結果は、データを絶対値 (図 4 b) で表現した場合に似ています。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig4.jpg"> 
図 4:健常者にみられる差動細胞数の代表の結果は絶対値をパーセンテージ (A) または (B) で表されます。結果は、中央 (四分位幅) として表示されます。<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
また、患者の年齢を考慮することが重要です。確かに、強い相関が痰のサンプル (図 5) 患者さんの年齢と好中球の割合の間に存在。同様に、10 年間の年齢別グループ (図 6) によると患者を分類するとき増加する年齢と好中球の割合が大幅に増加を見ました。したがって、別のコホート研究の結果を比較するときにこの変数を考慮する必要があり、主題の一致に注意する必要があります。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig5.jpg"> 
図 5:年齢および喀痰中の好中球の割合の相関。相関関係を求めたスピアマン テスト。<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig6.jpg"> 
図 6:年齢カテゴリによると好中球比率の進化します。分散分析の p 値は &#60; 0.0001 好中球の割合年齢クラス間の比較のため。複数の比較は、ダンの多重比較検定で作られました。P 値は次のように表されます: * p &#60; 0.05 * * p &#60; 0.01 と * * * p &#60; 0.001。結果は、中央 (四分位幅) として表示されます。<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
呼吸器疾患を患っている患者の結果 誘発喀痰検査法のテクニックは、気管支喘息患者における炎症細胞プロファイルを評価するために使用されます。この手法は、別の炎症性呼吸器疾患、COPD を患っている患者にも適用可能性があります。健常者、喘息、COPD 患者 (年齢、性別、およびタバコの習慣の一致する 3 つのグループ) を比較すると、炎症性細胞プロファイルは全然違うこれらのコホート (図 7) を観測しました。確かに、気管支喘息患者通常によって特徴付けられる上げられた喀痰中好酸球、喀痰中好中球の割合は、健常者に比べて COPD 患者で通常より高い疾患重症度に結びついています。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig7.jpg"> 
図 7:健常者の喀痰炎症細胞プロファイル (n = 45)、気管支喘息患者 (n = 108)、および COPD 患者 (n = 54).3 つのグループは、性別、年齢、タバコの習慣に一致しました。ANOVA の p 値が &#60; 0.05、&#60;、0.0001 と &#60; 0.0001 好中球、好酸球、マクロファージ、グループ間の比較のためそれぞれ。複数の比較は、ダンの多重比較検定で作られました。P 値は次のように表されます: * p &#60; 0.05 と * * * p &#60; 0.001。結果は、中央 (四分位幅) として表示されます。<a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56612/56612fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

喀痰誘発および実験室の処理のための方法論

ここで喀痰誘発の手法について述べる。このプロトコルは、喀痰処理差分セル数を数えるために、喀痰培養上清を収集するために、さらなる分析のための細胞にも説明します。

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

methodology-for-sputum-induction-and-laboratory-processing

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

27.3K ビュー.  University of Liege. ここで喀痰誘発の手法について述べる。このプロトコルは、喀痰処理差分セル数を数えるために、喀痰培養上清を収集するために、さらなる分析のための細胞にも説明します。

ビデオ: Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis. Since the clinical presentation of this disease is so variable and non-specific, the associated risks of these biopsies are too great for the diagnostic yield. Other sites that have a lower biopsy risk, such as skin or gingival, are also relatively invasive and expensive. In addition, these biopsies may not always have sufficient amyloid deposits to establish a diagnosis. Fat pad aspiration has demonstrated good clinical correlation with low cost and minimal morbidity. However, there are no standardized protocols for performing this procedure or processing the aspirated specimen, which leads to variable and nonreproducible results. The most frequently utilized modality for detecting amyloid in tissue is an apple-green birefringence on Congo red stained sections using a polarizing microscope. This technique requires cell block preparation of aspirated material. Unfortunately, patients presenting in early stage of amyloidosis have minimal amounts of amyloid which greatly reduces the sensitivity of Congo red stained cell block sections of fat pad aspirates. Therefore, ultrastructural evaluation of fat pad aspirates by electron microscopy should be utilized, given its increased sensitivity for amyloid detection. This article demonstrates a simple and reproducible procedure for performing anterior fat pad aspiration for the detection of amyloid utilizing both Congo red staining of cell block sections and electron microscopy for ultrastructural identification.

Fat pad aspiration is a preferred, minimally invasive, and low cost approach as compared to other methods to detect amyloid for diagnosis of systemic amyloidosis. This video article demonstrates a procedural outline for performing fat pad aspiration with appropriate processing of the specimen for the optimal diagnostic outcome.

アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

医学

How to Measure Cortical Folding from MR Images: a Step-by-Step Tutorial to Compute Local Gyrification Index

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will be identifiable at any age. As recently reviewed by Mangin and colleagues2, several methods exist to quantify different characteristics of gyrification. For instance, sulcal morphometry can be used to measure shape descriptors such as the depth, length or indices of inter-hemispheric asymmetry3. These geometrical properties have the advantage of being easy to interpret. However, sulcal morphometry tightly relies on the accurate identification of a given set of sulci and hence provides a fragmented description of gyrification. A more fine-grained quantification of gyrification can be achieved with curvature-based measurements, where smoothed absolute mean curvature is typically computed at thousands of points over the cortical surface4. The curvature is however not straightforward to comprehend, as it remains unclear if there is any direct relationship between the curvedness and a biologically meaningful correlate such as cortical volume or surface. To address the diverse issues raised by the measurement of cortical folding, we previously developed an algorithm to quantify local gyrification with an exquisite spatial resolution and of simple interpretation. Our method is inspired of the Gyrification Index5, a method originally used in comparative neuroanatomy to evaluate the cortical folding differences across species. In our implementation, which we name local Gyrification Index (lGI1), we measure the amount of cortex buried within the sulcal folds as compared with the amount of visible cortex in circular regions of interest. Given that the cortex grows primarily through radial expansion6, our method was specifically designed to identify early defects of cortical development.
In this article, we detail the computation of local Gyrification Index, which is now freely distributed as a part of the FreeSurfer Software (<a href="http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/">http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/</a>, Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital). FreeSurfer provides a set of automated reconstruction tools of the brain's cortical surface from structural MRI data. The cortical surface extracted in the native space of the images with sub-millimeter accuracy is then further used for the creation of an outer surface, which will serve as a basis for the lGI calculation. A circular region of interest is then delineated on the outer surface, and its corresponding region of interest on the cortical surface is identified using a matching algorithm as described in our validation study1. This process is repeatedly iterated with largely overlapping regions of interest, resulting in cortical maps of gyrification for subsequent statistical comparisons (Fig. 1). Of note, another measurement of local gyrification with a similar inspiration was proposed by Toro and colleagues7, where the folding index at each point is computed as the ratio of the cortical area contained in a sphere divided by the area of a disc with the same radius. The two implementations differ in that the one by Toro et al. is based on Euclidian distances and thus considers discontinuous patches of cortical area, whereas ours uses a strict geodesic algorithm and include only the continuous patch of cortical area opening at the brain surface in a circular region of interest.

Measuring gyrification (cortical folding) at any age represents a window into early brain development. Hence, we previously developed an algorithm to measure local gyrification at thousands of points over the hemisphere1. In this paper, we detail the computation of this local gyrification index.

ローカルGyrificationのインデックスを計算するステップバイステップのチュートリアル：MR画像からの皮質折りたたみを測定する方法

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction of cells in the tumor with stem cell properties, termed brain tumor initiating cells (BTICs), possess an ability to differentiate along multiple lineages, self-renew, and initiate tumors in vivo. We applied culture conditions originally used for normal neural stem cells (NSCs) to a variety of human brain tumors and found that this culture method specifically selects for stem-like populations. Serum-free medium (NSC) allows for the maintenance of an undifferentiated stem cell state, and the addition of bFGF and EGF allows for the proliferation of multi-potent, self-renewing, and expandable tumorspheres.
To further characterize each tumor's BTIC population, we evaluate cell surface markers by flow cytometry. We may also sort populations of interest for more specific characterization. Self-renewal assays are performed on single BTICs sorted into 96 well plates; the formation of tumorspheres following incubation at 37 &deg;C indicates the presence of a stem or progenitor cell. Multiple cell numbers of a particular population can also be sorted in different wells for limiting dilution analysis, to analyze self-renewal capacity. We can also study differential gene expression within a particular cell population by using single cell RT-PCR.
The following protocols describe our procedures for the dissociation and culturing of primary human samples to enrich for BTIC populations, as well as the dissociation of tumorspheres. Also included are protocols for staining for flow cytometry analysis or sorting, self-renewal assays, and single cell RT-PCR.

The identification of brain tumor initiating cells (BTICs), the rare cells within a heterogeneous tumor possessing stem cell properties, provides new insights into human brain tumor pathogenesis. We have refined specific culture conditions to enrich for BTICs, and we routinely use flow cytometry to further enrich these populations. Self-renewal assays and transcript analysis by single cell RT-PCR can subsequently be performed on these isolated cells.

ソート幹細胞アッセイおよびフローの原発性脳腫瘍組織の処理

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

細胞培養のための人間の削減乳房形成や乳房切除組織の処理

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy and/or cytotoxic chemotherapy. To induce bladder cancer, C57BL/6 mice (MUC1.Tg and wild type) were treated orally with the carcinogen N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine (OH-BBN) at 3.0 mg/day, 5 days/week for 12 weeks. To assess the effects of OH-BBN on serum cytokine profile during tumor development, whole blood was collected via submandibular bleeds prior to treatment and every four weeks. In addition, a MUC1-targeted peptide vaccine and placebo were administered to groups of mice weekly for eight weeks. Multiplex fluorometric microbead immunoanalyses of serum cytokines during tumor development and following vaccination were performed. At termination, interferon gamma (IFN-&#947;)/interleukin-4 (IL-4) ELISpot analysis for MUC1 specific T-cell immune response and histopathological evaluations of tumor type and grade were performed. The results showed that: (1) the incidence of bladder cancer in both MUC1.Tg and wild type mice was 67%; (2) transitional cell carcinomas (TCC) developed at a 2:1 ratio compared to squamous cell carcinomas (SCC); (3) inflammatory cytokines increased with time during tumor development; and (4) administration of the peptide vaccine induces a Th1-polarized serum cytokine profile and a MUC1 specific T-cell response. All tumors in MUC1.Tg mice were positive for MUC1 expression, and half of all tumors in MUC1.Tg and wild type mice were invasive. In conclusion, using a team approach through the coordination of the efforts of pharmacologists, immunologists, pathologists and molecular biologists, we have developed an immune intact transgenic mouse model of bladder cancer that expresses hMUC1.

An N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced bladder cancer model was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic mice for the purpose of testing MUC1-directed immunotherapy. After administering a MUC1-targeted peptide vaccine, a cytotoxic T lymphocyte response to MUC1 was confirmed by measuring serum cytokine levels and T-cell specific activity.

免疫無傷のヒトMUC1トランスジェニックマウスにおける侵襲移行細胞膀胱癌の誘導：免疫療法の開発のためのモデル

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

マウスにおける胆管結紮：閉塞性胆汁うっ滞による炎症性肝障害と線維症の誘発

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

マウスにおける加速アテローム性動脈硬化症の誘導:ワイヤー傷害モデル

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the human respiratory tract. NA is a non-invasive technique which absorbs fluid from the inferior turbinate, and causes minimal discomfort. NA has yielded reproducible results with the ability to frequently repeat sampling of the upper airway. 
By comparison, alternative methods of sampling the respiratory mucosa, such as nasopharyngeal aspiration (NPA) and conventional swabbing, are more invasive and may result in greater data variability. Other methods have limitations, for instance, biopsies and bronchial procedures are invasive, sputum contains many dead and dying cells and requires liquefaction, exhaled breath condensate (EBC) contains water and saliva, and lavage samples are dilute and variable.
BA can be performed through the working channel of a bronchoscope in clinic. Sampling is well tolerated and can be conducted at multiple sites in the airway. BA results in MLF samples being less dilute than bronchoalveolar lavage (BAL) samples.
This article demonstrates the techniques of NA and BA, as well as the laboratory processing of the resulting samples, which can be tailored to the desired downstream biomarker being measured. These absorption techniques are useful alternatives to the conventional sampling techniques used in clinical respiratory research.

This manuscript describes the use of nasal and bronchial absorption techniques, specifically using synthetic absorptive matrices (SAM) to sample the mucosal lining fluid (MLF) of the upper and lower airway. These methods provide better standardization and tolerability than existing respiratory sampling techniques.

鼻粘膜および気管支の流体の吸収: 人間の呼吸器粘膜とサンプル室加工高精度サンプリング

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

サンプリング戦略とブタの生物医学的モデルからバイオバンク組織サンプルの処理

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Retinal Organoid Induction System for Derivation of 3D Retinal Tissues from Human Pluripotent Stem Cells

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to differentiate into all types of retinal cells, even mini-retinal tissues, hold huge promises for patients with these diseases and many opportunities in disease modeling and drug screening. However, the induction process from hPSCs to retinal cells is complicated and time-consuming. Here, we describe an optimized retinal induction protocol to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency, suitable for various human pluripotent stem cells. This protocol is performed without the addition of retinoic acid, which benefits the enrichment of cone photoreceptors. The advantage of this protocol is the quantification of EB size and plating density to significantly enhance the efficiency and repeatability of retinal induction. With this method, all major retinal cells sequentially appear and recapitulate the main steps of retinal development. It will facilitate downstream applications, such as disease modeling and cell therapy.

Here we describe an optimized retinal organoid induction system, which is suitable for various human pluripotent stem cell lines to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency.

ヒト多能性幹細胞からの3Dレチナル組織の導出のためのレチナルオガノイド誘導システム

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to ...