連絡先を介して可視化の土壌微生物スライド法と顕微鏡

ソース: ドクターペッパー イアン博士チャールズ Gerba - アリゾナ大学所
示す著者: ブラッドリー ・ シュミッツ

土壌には、生命に寄与する生物的・非生物的要因を含む地球の表面で薄い層が装備されています。非生物的部分には、無機粒子サイズと形状に至るまで土壌のテクスチャを決定するにはが含まれます。生物の部分には、植物残渣、ルーツ、有機物、微生物が組み込まれています。土壌の 1 グラム含まれている 10^{7 8}細菌、放線菌 10^{6 8} 、10^{5 6}菌、10³酵母、原生動物^{4 6} 10、10^{3 4}藻類と 5³線虫は土壌微生物の豊かさと多様性、します広大な。一緒に、生物的・非生物的要因は土壌微生物のための有利な条件を提供する、根圏として知られている植物根の周りのアーキテクチャを形成します。

生物的・非生物的要因は土壌中での生活を促進します。しかし、それらはまた微生物を制限ストレスのダイナミクスを貢献します。生物的ストレスに適応し、環境条件の中で生き残る生活の中で競争が含まれます。たとえば、微生物は、隣接の微生物に害を抑制または有毒物質を分泌できます。ペニシリウム-notatumは悪名高い菌抗菌薬、医薬品のペニシリンを作成する人間が収穫を生産することによって栄養素のための競争を減らします。非生物的ストレスは光、水分、温度、pH、栄養素、およびテクスチャなど、微生物の生存を制限する物理的なまたは化学的特性に起因します。

直接土壌環境の変化の動作、粒子、土の有機体間の相互関係を観察することは難しいが、ロッシらによって開発されたスライドの試金、埋葬スライド テクニックとして知られています。(1936) 土壌微生物学にスナップショットの視点を提供します。このメソッドは、土壌菌、放線菌、および顕微鏡で細菌を観察するために便利です。とはいえ、微生物の数量のためのものではありません、それだけを意味する大規模な異機種混在環境の 1 つの小さい部分。

このメソッドは、数日間土壌にスライド ガラスを埋めるし、酢酸でスライド上の微生物を固定によって簡単に実行されます。微生物はローズ ベンガルの染料で染色、100 X 目的にオイルの液浸を用いた顕微鏡を介して観察。細菌のような小さな丸い形、薄い文字列として放線菌フィラメントと菌糸は厚い糸としてとして、3 つの微生物グループを区別できます。土中では、ほぼすべての細菌が小さく、縮小より有利な表面の丸めを引き起こす栄養ストレスによる純粋培養に比べて丸く: 容積比。汚れていない不規則な黒い図形が土粒子です。異なる栄養改正は、土壌微生物の増殖および相互作用を促進する炭素とグルコースのソースを提供するために追加できます。この技術は、土壌微生物学の簡単な観察は、いくつか生物環境の存在を識別するのに役立ちます。

1. 土壌のスライドの小宇宙の準備

1. 表面から庭の土を収集 (0-6"深さ)、2 つのカップに土壌 150 g の重量を量る。
   1. 土壌に有機物の高密度がある場合 100 g の重量を量る。
2. ラベル一杯「治療」と、その他「制御」
3. 含水率を変更するために必要な水の量を計算します。
   1. 水分含有量が多いフィールドの容量の近くにあります。
      
4. メスシリンダーの蒸留水の量を測定。
5. 2 つのバイアルに蒸留水の量を注ぐ。
6. ラベル 1 バイアル「治療」と、その他「制御」
7. 「治療」土壌の乾燥重量ベースによると最終的な土壌のグルコース濃度 1% の十分なブドウ糖を「治療」瓶で水を改正します。
8. 「治療」のバイアルに 200 mg NH₄の₃を追加し、改正を溶解する攪拌します。硝酸態窒素は、土壌微生物の栄養素の窒素源として機能します。
9. 「コントロール」バイアルを改正すれば。
10. 約 50 mg の小さい因数は、「治療」のカップに「治療」バイアルの内容をミックスします。追加するたびに分注後ヘラでかき混ぜます。
11. 小さい因数で「コントロール」のカップに「コントロール」バイアルの内容をミックスします。追加するたびに分注後ヘラでかき混ぜます。
12. 4 つのきれいな顕微鏡スライド ラベル: 2 つの「治療」と「制御」の 2 つのスライド。
13. 「治療」土壌カップに 2 つの「治療」のスライドを挿入し、「コントロール」土壌カップに 2 つの「コントロール」のスライドを挿入します。土の表面の上に投影各スライドの 2 cm を残して、2 つのスライド間のギャップを残すようにしてください。
14. プラスチック製のラップとカップをカバーし、ゴムのバンドで固定します。
15. 空気がまだ余分な蒸発を防ぐためにラップの数回を穿刺します。
16. 両方のコップの重量を記録します。
17. 7 日土壌充填カップ指定エリア/インキュベーターに室温で孵化させなさい。

2. スライドの染色と顕微鏡観察

1. 両方のコップの重量を記録します。
2. スライドの取り外しの時に土壌水分を計算します。
3. 傾斜位置に各スライドを押してスライドの上面を妨げないので撤退、それぞれのカップから 2 つのスライドを削除します。
4. 識別し、染色して観察したスライドの側面をマークします。
5. 優しく大きな土壌粒子を除去するベンチ上のスライドをタップします。
6. 少し湿らせたペーパー タオルで、スライドの下面を拭きます。室温でスライドを乾燥させます。
7. 保護ゴーグルを着用し、鉗子で各スライドを保持、ヒューム フードの下で 1 〜 3 分の 40% (v/v) 酢酸にスライドを浸します。
8. 水の穏やかな流れの下で過剰な酸を洗浄します。
9. ドロッパー ボトルを使用すると、フェノール ローズ ベンガルとスライドの表面を覆います。余分な汚れをキャッチするためのコンテナーで、染色ラックにスライドをサポートします。注意してください、スライドの表面から微生物を削除可能性があります力で洗浄しないでください。
10. 5 ~ 10 分スライドになるスライドさせないで汚れは乾燥します。必要に応じてより多くの汚れを追加します。
11. 余分な汚れを削除するスライドを優しく洗います。
12. スライドは、室温で乾燥させてください。
13. 油浸対物レンズを使用して、顕微鏡 (図 1) を使用してスライドを確認します。

図 1。顕微鏡下でのスライド。

菌類は、厚さ、糸状の菌糸 (図 2) を表示します。放線菌は、薄い、糸状の菌糸を表示します。細菌は小さい球菌またはロッド図形を表示します。彼らはしばしば土壌粒子、またはライニング菌糸の塊で発見しています。土壌粒子は、不規則な暗い形 (図 3) を表示します。

図 2。スライド イメージの 100 倍の対物レンズを使用してお問い合わせください。
写真礼儀 W.H. フラー。

図 3。スライド イメージの 100 倍の対物レンズを使用してお問い合わせください。
写真礼儀 W.H. フラー。

スライドの試金、埋葬スライドとも呼ばれますは、土壌生物相を質的観察を活用シンプルな手法です。この試金は質的、土粒子、細菌、放線菌フィラメント菌糸間の空間的相互作用を示しています。個人や業界は、ガーデニング、堆肥化、教育、そして勉強に関しては農業、特定の土壌の健康に関する知識を収集するこのアッセイを使用できます。しかし、この手法としてそれだけ大規模な異機種混在環境の小さな肖像土壌マイクロ生物相を定量化しない場合。

土壌生物関係は、100 倍油浸顕微鏡 (図 2および3) で結果を表示およびスライド アッセイを実行して観察できます。シンプルさとやすこの分析を実行するのになりますを偉大な開始技術微生物にさらされていることと、初めて顕微鏡で微生物を表示可能性があります人のため。

1. Pepper, I. L., & Gerba, C P. 'Contact Slide Assay.' Environmental Microbiology A Laboratory Manual. 2nd ed. Elsevier 19-25 (2004).
2. Pepper, I. L., Gerba, C. P., & Gentry, T. J. 'Earth Environments.' Environmental Microbiology. 3rd ed. Elsevier 59-88 (2014).
3. Rossi, G., Ricardo, S., Gesue, G., Stanganelli, M., and Want, T.K. Direct Microscopic and bacteriological investigations of the soil. Soil Science. 41, 52 – 66 (1936).