הדמיית מיקרואורגניזמים קרקע באמצעות מצג שקופיות מגע ומיקרוסקופיה

1. הכנת מיקרוקוסמוס של שקופית הקרקע

1. אוספים אדמת גן מפני השטח (עומק 0-6 אינץ'), ומשקלים 150 גרם אדמה לשתי כוסות נפרדות.
   1. אם לקרקע יש צפיפות גבוהה של חומר אורגני, שקול 100 גרם.
2. תייג אחת טיפול והשני בקרה.
3. חשב את כמות המים הדרושה לשינוי תכולת הלחות.
   1. תכולת הלחות קרובה לעתים קרובות לקיבולת השדה.
      
4. למדוד כמות של מים מזוקקים עם גליל מדורג.
5. יוצקים כמות מים מזוקקים לשני בקבוקונים.
6. תייגו את ה"טיפול" ובאחר "בקרה".
7. לתקן את המים במתקנה "טיפול" עם מספיק גלוקוז עבור ריכוז גלוקוז הקרקע הסופי של 1%, על בסיס משקל יבש בקרקע "טיפול".
8. מוסיפים 200 מ"ג NH₄NO₃ לחקירה "טיפול" ומערבבים כדי להמיס את התיקונים. החנקות משמשות כמקור חנקן של חומרים מזינים עבור חיידקי הקרקע.
9. אל תתקן את ממתקנת ה"בקרה".
10. ב aliquots קטן של כ 50 מג, לערבב את התוכן של טיפול ביקאלי לתוך טיפול. מערבבים עם מרית לאחר כל תוספת עליקוט.
11. ב aliquots קטן, לערבב את התוכן של בקרה בקוקאלי לתוך שליטה. מערבבים עם מרית לאחר כל תוספת עליקוט.
12. תווית ארבע שקופיות מיקרוסקופ נקיות: שתי שקופיות "טיפול" ושתי שקופיות "בקרה".
13. הכנס את שתי שקופיות טיפול לתוך הקרקע טיפול, ולהכניס את שתי שקופיות בקרה לתוך הקרקע שליטה. השאר 2 ס"מ מכל שקופית המוקרנת מעל פני הקרקע, והקפידו להשאיר רווח בין שתי השקופיות.
14. מכסים את הכוסות בניילון נצמד ומאבטחים אותה בגומייה.
15. לנקב את העטיפה מספר פעמים כדי לאפשר אוויר, אבל עדיין למנוע אידוי מוגזם.
16. תקליט את המשקל של שתי הכוסות.
17. לדגור על הכוסות מלאות הקרקע בטמפרטורת החדר באזור / אינקובטור ייעודי במשך 7 ימים.

2. כתמי שקופיות ומיקרוסקופיה

1. תקליט את המשקל של שתי הכוסות.
2. חשב את לחות הקרקע בזמן הסרת שקופיות.
3. הסר את שתי השקופיות מכל על-ידי הקשה על כל שקופית למיקום נוטה ונסיגה כך שהפנים העליונות של השקופית לא יפריעו.
4. זהה וסמן את צד השקופית כך שיוכתם ויתבונן.
5. הקש בעדינות על השקופיות על הספסל העליון כדי להסיר חלקיקי קרקע גדולים.
6. בעזרת מגבת נייר לחה, נקו את הפנים התחתונות של המגלשות. יבש את השקופיות בטמפרטורת החדר.
7. מרכיב משקפי מגן ומחזיק כל מגלשה במלקחיים, טובל את השקופיות בחומצה אצטית של 40% (v/v) למשך 1-3 דקות מתחת למכסה המנוע.
8. לשטוף את החומצה עודפת תחת זרם עדין של מים.
9. באמצעות בקבוק טפטפת, לכסות את פני השטח של השקופיות עם רוז בנגל פנולי. תמוך בשקופית על מתלה כתמים מעל מיכל כדי לתפוס את הכתם העודף. היזהר, לא לשטוף בכוח שעלול להסיר מיקרואורגניזמים מפני השטח של השקופיות.
10. מכתימים את השקופיות למשך 5-10 דקות. אל תתנו למגלשה להתייבש. מוסיפים עוד כתם לפי הצורך.
11. יש לשטוף בעדינות את השקופיות כדי להסיר כתם עודף.
12. תן לשקופיות להתייבש בטמפרטורת החדר.
13. בעזרת המטרה טבילת שמן, התבונן בשקופית באמצעות מיקרוסקופ (איור 1).

איור 1. שקופית מתחת למיקרוסקופ.