Una tecnica per la biopsia del tessuto adiposo sottocutaneo addominale tramite un metodo Non-diatermia

Abbiamo standardizzato una biopsia del tessuto adiposo addominale utilizzando un metodo non-diatermia eseguito in anestesia locale. Tre casi di eccessivo post-operazione sanguinamento fuori 115 operazioni (2,61%) si è verificato. Concludiamo che una biopsia chirurgica di tessuto adiposo addominale utilizzando un metodo non-diatermia può essere tranquillamente applicata agli uomini sani.

Le biopsie del tessuto adiposo di offrire campioni di tessuto che, al momento dell'analisi, possono fornire panoramiche penetranti dei meccanismi relativi al metabolismo e malattia. Per ottenere le biopsie di tessuto adiposo sottocutaneo nella zona addominale, i ricercatori e i medici utilizzano un chirurgica o una tecnica basata su ago. Tuttavia, le biopsie grasse sottocutanee chirurgiche in grado di offrire campioni di tessuto che possono fornire una panoramica più completa delle complessità di indici biologici nel tessuto adiposo bianco. Di solito, una biopsia chirurgica del tessuto adiposo comprende un trattamento di diatermia per cauterizzatori vasi sanguigni prevenire il sanguinamento eccessivo. Tuttavia, sono stati segnalati effetti collaterali, come il flash si attiva e le lesioni cutanee nel tessuto, dopo la diatermia. Di conseguenza, abbiamo mirato a standardizzare una biopsia del tessuto adiposo addominale chirurgica eseguita in anestesia locale utilizzando un metodo non-diatermia. Abbiamo condotto 115 biopsie di tessuto adiposo sottocutaneo in uomini in buona salute usando un metodo non-diatermia addominale biopsia chirurgica. I nostri risultati hanno mostrato tre casi di eccessivo post-operazione sanguinamento fuori 115 operazioni (2,61%). In conclusione, il nostro biopsia chirurgica standardizzata del tessuto adiposo sottocutaneo addominale utilizzando un metodo non-diatermia può applicarsi sicuro per uomini sani al capezzale, con effetti collaterali minimi.

Le biopsie del tessuto adiposo di offrire campioni di tessuto che, al momento dell'analisi, possono fornire una panoramica penetrante dei meccanismi relativi al metabolismo e malattia. Per esempio, essi sono utilizzati per seno cancro tumore identificazione¹, acido grasso composizione esame²e ricerca sulle malattie metaboliche ed ormonali importanti vie³. Per ottenere le biopsie di tessuto adiposo sottocutaneo nella zona addominale, i ricercatori e i medici utilizzano un chirurgica o una tecnica basata su ago. Tuttavia, le biopsie grasse sottocutanee chirurgiche in grado di offrire campioni di tessuto che possono fornire una panoramica più completa dei complessi meccanismi biologici [ad es., espressione dell'acido ribonucleico (mRNA) di messenger, l'analisi istologica, ecc.]⁴ . Essi sono stati utilizzati in precedenza in adulti sani⁴ e possono essere effettuate sicuro al comodino⁵.

La tecnica basata su ago biopsia richiede intensa liposuzione che può distruggere l'integrità del tessuto, e di solito recupera una piccola quantità di tessuto (100-500 mg)⁶. Questi campioni di tessuto possono non essere appropriati per studi di ricerca complessa. Inoltre, rispetto alla tecnica basata su ago, biopsie grasse sottocutanee chirurgiche possono offrire campioni di tessuto che possono disegnare un quadro più completo di parecchi indici infiammatori (per esempio, B - e T-cell signaling); regolazione del citoscheletro; vie cellulari; vie metaboliche di lipidi, carboidrati e aminoacidi; e vie di fosforilazione ossidativa⁴. Inoltre, la tecnica basata su ago include un elevato rischio per contaminazione delle cellule del sangue che chirurgico one⁴, fornendo poche informazioni sulle regioni fibrotiche del tessuto^4,7,8 .

Di solito, una biopsia chirurgica del tessuto adiposo comprende un trattamento di diatermia per cauterizzazione vasi sanguigni per evitare eccessivo sanguinamento⁹. Una diatermia è anche utilizzato per bruciare e distruggere i tessuti colpiti da neoplasie e verruche o tessuti che sono infettati da malattia⁹. Questa tecnica è particolarmente applicabile in neurochirurgia e occhio chirurgia⁹.

L'uso eccessivo della diatermia può portare alla formazione di tessuto necrotico, che causano infezioni e ritardando il processo curativo¹⁰. Infatti, sono stati segnalati effetti collaterali quali flash scatta e lesioni cutanee nel tessuto seguito diatermia⁹. Inoltre, sono state sollevate preoccupazioni circa la tossicità dei fumi chirurgici rilasciata dalla diatermia l'ambiente della chirurgia, che può essere inalata dal partecipante/paziente e il personale operativo⁹. Infatti, l'uso della diatermia può causare la tossicità di aria in sala operatoria pari a quella prodotta dai fumatori sigarette sei¹¹ e, anche se sale operatorie in genere hanno buona ventilazione sistemi, la contaminazione può durare per almeno 20 min¹² . Tuttavia, in pazienti di intraprendere un intervento chirurgico di tonsillectomia, il metodo di diatermia ha mostrato meno, ma non significativo dolore post-operatorio¹³ e spurgo¹⁴ rispetto al metodo di emostasi di legatura classico. Nel complesso, la prova per quanto riguarda le differenze nel dolore post-operatorio e sanguinamento tariffe dopo le biopsie di tessuto adiposo in individui in buona salute a malapena esiste. Data la mancanza di prove e gli effetti collaterali di diatermia, è opportuna una standardizzazione di un metodo non-diatermia per biopsia del tessuto adiposo. Di conseguenza, lo scopo di questo studio era di standardizzare una tecnica chirurgica per la biopsia del tessuto adiposo sottocutaneo addominale, eseguita in anestesia locale utilizzando un metodo non-diatermia in uomini in buona salute. Inoltre, abbiamo delineare le procedure per la raccolta di tessuto per determinare l'espressione di mRNA e concentrazione nella proteina e per eseguire analisi istologiche.

lo studio conformi agli standard stabiliti dalla dichiarazione di Helsinki ed è stato approvato dall'Università della Tessaglia, dipartimento di scienze motorie, Βiοethics Comitato.

1. preparazione della chirurgia attrezzature e consumabili

1. posizionare un campo chirurgico disinfettato su un basamento di Mayo chirurgico 4 ruote.
2. Posizionare i seguenti materiali di consumo e apparecchiature chirurgiche su un basamento di Mayo chirurgico 4 ruote:
   Un paio di Forbici rette operative (15cm)
   un bisturi (n. 11)
   manico per uno bisturi
   un paio di forbici curve (14 cm)
   forcipe una zanzara
   un paio di pinzette Kocher
   una pinzetta chirurgica
   Povidone-iodio (su una sterile garza)
   una sutura (4.0)
   un paio di Forbici rette (11 cm)
   un ago titolare (15cm)
   cinque garze sterili
   una garza sterile adesivo
   una siringa 10 mL con un ago disinfettato
   10 mL di lidocaina 2% (senza adrenalina)
   uno paio di guanti chirurgici disinfettati
3. i seguenti materiali di posizione su un banco separato:
   due provette per microcentrifuga
   una provetta contenente 5 mL di formalina al 10%
   un piccolo contenitore contenente 50-100 mL di azoto liquido a-190 ° C.

2. La preparazione dei partecipanti

1. chiedere ai partecipanti di seguire un veloce 8 h ¹⁵ prima della procedura di biopsia.
2. Avere partecipanti astenersi da esercizio fisico, stress eccessivo, alcool e attivo e fumo passivo 72 h prima la biopsia ^{16 , 17}.

3. Eseguire la biopsia del tessuto adiposo sottocutaneo

1. posizionare il partecipante sul letto chirurgico in posizione supina.
2. Disinfettare la regione dell'incisione con povidone-iodio.
3. Iniettare 10 mL di lidocaina 2% (senza adrenalina) lentamente e costantemente ¹⁸ nella regione selezionata per servire come anestesia locale.
4. Posizionare un campo chirurgico sterile sull'area per coprire il corpo del partecipante, escluse la regione dell'incisione.
5. Almeno 3-5 min in seguito, applicare pressione con un paio di pinzette per l'area di anestesia locale e chiedere il partecipante se si sente alcun dolore ¹⁹ per garantire che l'anestesia locale è stato raggiunto.
6. Allegare il bisturi n. 11 al manico bisturi.
7. Creare un'incisione di 2-2.5 cm di lunghezza, 3-5 cm a sinistra o destra dell'ombelico.
8. Rimuovere il tessuto sottocutaneo con un paio di cm 15 dritti forbici di funzionamento.
9. Una volta che il tessuto adiposo viene rivelato, catturarlo con un paio di pinzette e un paio di forbici curve 14 cm.
10. Tagliare e rimuovere circa 1 g di tessuto adiposo.
11. a seguito di rimozione del tessuto, posizionare garze sterili sopra l'incisione per ottenere l'emostasi.
12. Quando l'emostasi è confermato, catturare la sutura 4.0 con un ago di 14 cm e la pelle con un paio di pinzette chirurgiche fino a rendere visibile il tessuto sottocutaneo.
13. Inserire l'ago di sutura nella pelle, in movimento verso il tessuto sottocutaneo mentre la pelle e sottocutaneo sono strettamente allineati.
14. Con l'ago di sutura, seguire una tecnica continua a zig-zag nel tessuto sottocutaneo fino a guidato esternamente fuori la pelle. Continuare fino a quando l'incisione cutanea è chiuso.
15. Esternamente legare la sutura.
16. Pulire la zona dell'incisione con soluzione salina e coprirlo con una garza sterile adesiva.

4. Deposizione del tessuto

1. separare il tessuto adiposo raccolto in tre pezzi: 150, 350 e 500 mg.
2. Situare i 150 e 350 mg di tessuto campione di microcentrifuga.
3. Microcentrifuga immergere i due nel piccolo contenitore con l'azoto liquido a-190 ° C fino a deposizione finale in un congelatore a -80 ° C.
   Nota: In anticipo, usi un ago sterile per perforare un piccolo foro nei tubi del microcentrifuge per evitare il fallimento di Coppa durante l'immersione delle provette microcentrifuga nell'azoto liquido a -190 ° C.
4. Immergere il pezzo di 500 mg di campione tessuto-da utilizzare per l'analisi istologica-in una provetta contenente 5 mL di formalina al 10%.
   Nota: Utilizzare il forcipe di zanzara solo in caso di eccessivo sanguinamento durante l'intervento chirurgico. In tali casi, catturare la nave con il forcipe di zanzara per legare e chiudere fino a quando emostasi.

Le caratteristiche dei partecipanti sono fornite nella tabella 1. I punti di sutura nella zona dell'incisione è caduto entro i prossimi 8-12 giorni. Abbiamo completato un totale di 115 biopsie di tessuto adiposo sottocutaneo, utilizzando il metodo di non-diatermia biopsia chirurgica addominale in uomini adulti sani (età: 35,2 ± 6,9 anni; indice di massa corporea: 27,3 ± 4.4; e percentuale di grasso corporeo: 27,0 ± 9,0%). Eccessivo sanguinamento post-biopsia è stato osservato in tre casi (prevalenza: 2.61%) due giorni dopo l'intervento chirurgico. I tre individui che hanno avvertito un eccessivo sanguinamento erano più vecchi rispetto ai loro omologhi che non sperimentato effetti collaterali [t₍₁₁₃₎=-2.115, p = 0,037], e non altre differenze (cioè, massa indice e corpo percentuale di grasso corporeo) sono state osservate (p > 0.05) tra i due gruppi. Infine, tre mesi dopo ogni operazione, nessuno dei nostri partecipanti segnalati effetti collaterali (tra cui le ferite della pelle).

Tabella 1: Caratteristiche dei partecipanti.

Lo scopo di questo studio era di standardizzare una tecnica chirurgica per la biopsia del tessuto adiposo sottocutaneo addominale, eseguita in anestesia locale con un metodo non-diatermia in uomini in buona salute. Diatermia è comunemente usato in sala operatoria; Tuttavia, possono verificarsi ritardi nella guarigione¹⁰ e possibili effetti collaterali (cioè, flash scatta e tossicità ambientale)⁹ . Questi effetti indesiderati di diatermia possono generare rischi per la salute sia per il personale operativo e i pazienti/partecipanti. Pertanto, un metodo non-diatermia chirurgico per la biopsia del tessuto adiposo sottocutaneo è giustificato.

Abbiamo osservato eccessivi sanguinamento in tre dei nostri partecipanti due giorni dopo l'intervento chirurgico. Questi tre individui segnalati dolore nella zona dell'incisione. Per il trattamento di questi casi, è stato riaperto l'area dell'incisione della pelle, del sangue in eccesso è stato rimosso e l'area era pulita con saline e chiuso usando la stessa tecnica sopra descritta. Nessuna complicazione sono stata segnalata dopo di che, e normale processo di guarigione è stata osservata nei giorni successivi. I nostri risultati hanno mostrato effetti collaterali minimi dopo il metodo di non-diatermia: tre casi di eccessivo post-operazione sanguinamento fuori 115 operazioni (2,61%). Prova precedente dalle biopsie dell'ago-basata del tessuto adiposo ha mostrato minore sanguinamento in una delle 10 partecipanti 12 h dopo la chirurgia¹⁵, mentre nessun sanguinamento significativo si è verificato in individui obesi dopo una biopsia del tessuto adiposo di lato-taglio ago tecnica⁶. Basato sui nostri risultati, possiamo anticipare che un metodo di biopsia non-diatermia chirurgica del tessuto adiposo può eliminare il rischio di lesione cutanea, attivazione del flash e la tossicità rilasciato nell'ambiente operativo, che sono causati dalla diatermia chirurgica del tessuto adiposo biopsia.

I rapporti precedenti hanno indicato che l'invecchiamento è associato positivamente con le anomalie in emostasi²⁰. Interessante, i tre individui che hanno avvertito un eccessivo sanguinamento nello studio corrente erano significativamente più anziani (da otto anni, in media) rispetto a chi non ha esperienza di effetti collaterali. Pertanto, si può osservare che gli individui più anziani hanno un rischio maggiore di effetti collaterali quando viene applicato il metodo di biopsia non-diatermia chirurgica del tessuto adiposo. Tuttavia, riteniamo che la prevalenza di tali effetti collaterali è troppo bassa (cioè, 2,61%) a causare problemi significativi. Dovrebbe essere notato che i nostri partecipanti in anticipo riempito un questionario di anamnesi per determinare il loro stato di salute. Nessun precedente condizioni di malattia cronica sono stati segnalati dai partecipanti, tra cui i tre partecipanti che hanno mostrato un eccessivo sanguinamento post-operatorio. Allo stesso modo, nessun precedente trattamento cronico di farmaci è stato segnalato da sia i partecipanti che hanno mostrato che coloro che non hanno mostrato alcun sanguinamento eccessivo. Pertanto, post-l'operazione sanguinamento eccessivo che abbiamo osservato nello studio corrente non può essere attribuito a condizioni precedenti di malattia cronica e/o precedente trattamento cronico di farmaci. In questa luce, la prevalenza di questo effetto collaterale può essere diversa se la tecnica è applicata alle popolazioni cliniche.

Un passaggio fondamentale durante la biopsia del tessuto adiposo chirurgica proposta è garantire l'anestesia locale prima l'incisione, che impedisce ogni dolore e disagio nel partecipante. Inoltre, un pre-screening di storia allergica per l'anestetico deve essere fatto per impedire le complicazioni allergiche durante l'iniezione anestetica. Inoltre, è fondamentale assicurare l'emostasi prima l'incisione viene chiusa per prevenire il sanguinamento post-operatorio, mentre è importante mantenere i contatti con i partecipanti per diversi giorni dopo la procedura viene eseguita finché non viene raggiunta la guarigione completa per scoprire eventuali anomalie potenziali e per prevenire l'infezione e/o casi di sanguinamento post-operatorio.

Le limitazioni della tecnica proposta biopsia comprendono il disagio che zona dell'incisione può causare ai partecipanti, in particolare relativi alla loro capacità di comodamente sedersi e prendere un bagno/doccia, fino a quando è raggiunta la completa guarigione. I partecipanti devono essere informati di evitare di lavare la zona dell'incisione per prevenire l'infezione, anche quanto a sostituire la garza sterile adesiva sopra l'area di incisione ogni giorno fino a quando è raggiunta la completa guarigione. Questa procedura quotidiana può causare disagio. Infine, è importante notare che il nostro scopo era di introdurre e standardizzare una nuova tecnica. In questa luce, non abbiamo usato un controllo gruppo impresa basata su ago sottocutaneo grasso biopsie al fine di quantificare le differenze tra questa tecnica e il metodo non-diatermia di nuova introduzione.

Come precedentemente suggerito^4,7,8, la tecnica di biopsia chirurgica proposta può offrire campioni di tessuto con maggiore integrità rispetto alla tecnica di base dell'ago. Infatti, utilizzando questa tecnica, siamo stati in grado di eseguire mRNA e analisi di proteine sul tessuto ottenuto e, inoltre, ai cubi di paraffina di modulo per utilizzano in analisi istologiche. Inoltre, suggeriamo evitando diatermia nelle biopsie chirurgiche del tessuto adiposo sottocutaneo, dato che l'emostasi e normale processo di guarigione può essere raggiunto con la nostra tecnica.

In conclusione, il nostro biopsia chirurgica standardizzata del tessuto adiposo sottocutaneo addominale utilizzando un metodo non-diatermia possa essere effettuata sicuro in uomini sani al capezzale, con effetti collaterali minimi.

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.

Questo lavoro ha ricevuto finanziamenti da Orizzonte 2020 (concessione contratto n. 645710) 7th Framework e dell'Unione europea (grant accordi n. 612547 e 319010) programmi. Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Fotini Sourli-Chasioti per l'assistenza con la procedura di biopsia. Gli autori ringraziano anche Mr. Yiorgos Paterakis per il suo prezioso aiuto nella preparazione del video.