העברת חוט השדרה בקסנופוס לאביס ראשנים

פרוטוקול זה מאפשר לחקור התחדשות חוט השדרה בצפרדעים. הידע שנרכש יכול לספק תובנות חדשניות כדי להבין כיצד בני אדם מגיבים לפגיעה בחוט השדרה. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא הקלות בביצוע הפציעה, וגם כי בהשוואה לפרדיגמה של כריתת זנב, טכניקה זו מחקה טוב יותר את מה שקורה בבני אדם.

טכניקה זו מאפשרת לאתגר את תהליך הרגנרטיבי כדי להבין טוב יותר את ההשתתפות של גנים שונים, חלבונים, מולקולות, ומסלולי איתות שונים, ובכך לזהות מטרות טיפוליות חדשות, מציאת המקום הנכון ליצירת הפציעה, כמו גם הרחבתה, קשה. היכולת לראות את הצעדים האלה היא קריטית להפיכת הליך זה לפשוט וניתן לשחזור. שלושה עד ארבעה שבועות לאחר ההפריה, מניחים את הראשנים בצלחת פטרי ובודקים את המורפולוגיה ואת המראה של הגפיים הקדמיות והגפיים האחוריות.

חפשו את המאפיינים האנטומיים הבאים של בעלי חיים בשלב 50, גפיים קדמיות שרק מופיעות והן כדוריות, וגפיים אחוריות בולטות וכדוריות. לפני הניתוח, להרדים את הראשנים על ידי הצבתם ב 0.02% tricaine mesylate ב 0.1 פעמים פתרון בארת,ולבדוק כי בעלי החיים אינם מגיבים על ידי הפיכתם. כדי לבצע את ניתוח העברת חוט השדרה, השתמש בכף ומלקחיים כדי למקם צד גב ראשן שלב-50 מורדם למעלה על חתיכת גזה רטובה בחצי העליון של צלחת פטרי זכוכית.

לאחר מכן, באמצעות מספריים קפיץ microdissection, לעשות חתך של העור ושרירי הגב ברמה midthoracic. עבור בעלי חיים מזויפים שליטה, ודא כי גודל החתך הוא רק 0.2 מילימטרים ואינו פוגע בחוט השדרה. בבעלי החיים שעברו טרנסגנציה, לבצע חתך שני של 0.2 מילימטרים כדי לחצות באופן מלא את חוט השדרה.

לאחר הניתוח, להעביר את הראשנים למיכל המכיל 500 מיליליטר של 0.1 פעמים פתרון בארת עם פעם אחת פניצילין סטרפטומיצין בצפיפות של 10 עד 12 ראשנים לכל טנק. לשמור על ראשנים transected ולשלוט מזויף במיכלים נפרדים. לשמור על הראשנים עם אוויר בטמפרטורה של 20 עד 21 מעלות צלזיוס.

לשנות את הפתרון בארת עם אנטיביוטיקה כל יומיים עד סוף הניסוי. התחל להאכיל את הראשנים יום אחד לאחר הניתוח ולחסל את החיות המתות. לבדיקת השחייה, יש להשיג קופסה עם תאורת LED מבפנים, מכוסה יריעת פוליסטירן שקופה המאפשרת לאור לעבור, ולהתקין מצלמה מעל תיבת ה- LED.

לאחר מכן, מניחים צלחת פטרי בקוטר 15 ס"מ על גבי הקופסה מלאה 100 מיליליטר של 0.1 פעמים פתרון בארת. יום אחד לאחר המעבר, מניחים ראשן בצלחת פטרי ומשאירים אותו לתקופת הסתגלות של חמש דקות. לאחר ההסתגלות, התחל לעקוב אחר התנהגות השחייה החופשית באמצעות תוכנת ההתייחסות במשך חמש דקות.

לאחר השלמת הסרטון, העבר את הראשן בחזרה למיכל שלו. תרשים נקודה מייצג זה מראה את ההתאוששות של פונקציה מוטורית לאורך זמן. חמישה ימים לאחר המעבר, הראשנים שחו בממוצע 0.7 מטר בחמש דקות, והפגינו יכולת שחייה מופחתת.

קיבולת זו גדלה עם ימים חולפים, מראה ממוצע של 2.1 מטר בחמש דקות לאחר 10 ימים, ו 3.1 מטר בחמש דקות לאחר 15 ימים לאחר טרנספורמציה. התאוששות מלאה של יכולות השחייה נצפתה ב 20 ימים לאחר המעבר, עם ממוצע של 5.7 מטר בחמש דקות. ממוצע השחייה יכול להשתנות בהתאם לכל קבוצה של בעלי חיים.

לכן, תמיד יש להשוות את קבוצת הניסוי לבקרות המתאימות ולא נתונים שהושגו בעבר. לאחר הניתוח, בעלי חיים יכולים לשמש לניתוח גלובלי, כולל תמלול, פרוטאומיקה, מטבולומיקה, וכדי לסנן עבור תרכובות המעכבות או מקדמות התחדשות חוט השדרה, במטרה לפתח גישות טיפוליות חדשות.