脊髓切除 术在非洲爪 蟾蝌蚪

该协议允许研究青蛙的脊髓再生。获得的知识可以提供新的见解，以了解人类对脊髓损伤的反应。该协议的主要优点是易于执行伤害，并且与尾巴截肢的范式相比，这种技术更好地模仿了人类发生的事情。

该技术允许挑战再生过程，以更好地了解不同基因，蛋白质，分子和信号通路的参与，从而确定新的治疗靶点，找到产生损伤的正确位置及其延伸是困难的。能够看到这些步骤对于使此过程简单明了且可重复至关重要。受精后三到四周，将蝌蚪放入培养皿中，检查前肢和后肢的形态和外观。

寻找50期动物的以下解剖学特征，刚刚出现并且是球形的前肢，以及突出并且是球形的后肢。手术前，通过将蝌蚪置于0.1倍巴特溶液中的0.02%甲磺酸三卡因中麻醉蝌蚪，并通过将它们颠倒来检查动物是否无反应。要进行脊髓横断手术，使用汤匙和镊子将麻醉的50级蝌蚪背侧朝上放在玻璃培养皿上半部分的湿纱布上。

然后，使用显微切割弹簧剪刀，在胸中水平处对皮肤和背侧肌肉进行切口。对于对照假动物，请确保切口尺寸仅为0.2毫米，不会损伤脊髓。在截面动物中，做第二个0.2毫米的切口以完全切除脊髓。

手术后，将蝌蚪转移到含有500毫升0.1倍Barth溶液的罐中，其中一次青霉素和链霉素的密度为每罐10至12个蝌蚪。在单独的水箱中维护截面并控制假蝌蚪。将蝌蚪保持在20至21摄氏度的温度下枸气。

每隔一天用抗生素更换Barth溶液，直到实验结束。手术后一天开始喂蝌蚪，并消灭死去的动物。对于游泳测定，从内部获得一个带有LED照明的盒子，上面覆盖着透明的聚苯乙烯片，允许光线通过，并在LED盒子上安装摄像头。

然后，将一个直径为15厘米的培养皿放在装满100毫升0.1倍巴特溶液的盒子顶部。在转染后一天，将蝌蚪放入培养皿中，并放置五分钟的适应期。适应后，使用参考软件开始视频跟踪自由游泳行为五分钟。

视频完成后，将蝌蚪移回其水箱。这个具有代表性的点图显示了运动功能随时间推移的恢复情况。体检后五天，蝌蚪在五分钟内平均游出0.7米，游泳能力下降。

该容量随着天数的增加而增加，显示10天后5分钟内平均2.1米，转染后15天后5分钟内平均3.1米。在转染后20天观察到游泳能力完全恢复，平均5分钟内5.7米。游泳平均值可能因每批动物而异。

因此，实验组应始终与各自的对照组进行比较，而不是先前获得的数据。手术后，动物可用于全球分析，包括转录组学，蛋白质组学和代谢组学，以及筛选抑制或促进脊髓再生的化合物，旨在开发新的治疗方法。