يسمح هذا البروتوكول بدراسة تجديد الحبل الشوكي في الضفادع. يمكن أن توفر المعرفة المكتسبة رؤى جديدة لفهم كيفية استجابة البشر لإصابة الحبل الشوكي. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هي السهولة في أداء الإصابة ، وكذلك أنه بالمقارنة مع نموذج بتر الذيل ، فإن هذه التقنية تحاكي بشكل أفضل ما يحدث في البشر.
تسمح هذه التقنية بتحدي عملية التجدد لفهم مشاركة الجينات والبروتينات والجزيئات ومسارات الإشارات المختلفة بشكل أفضل ، وبالتالي تحديد أهداف علاجية جديدة ، ومن الصعب العثور على المكان المناسب لتوليد الإصابة ، وكذلك امتدادها. إن القدرة على رؤية هذه الخطوات أمر بالغ الأهمية لجعل هذا الإجراء مباشرا وقابلا للتكرار. بعد ثلاثة إلى أربعة أسابيع من الإخصاب ، ضع الضفادع الصغيرة في طبق بتري وتحقق من مورفولوجيا ومظهر الأطراف الأمامية والخلفية للأطراف.
ابحث عن الخصائص التشريحية التالية لحيوانات المرحلة 50 ، والأطراف الأمامية التي تظهر للتو وهي كروية ، والأطراف الخلفية البارزة والكروية. قبل الجراحة ، قم بتخدير الضفادع الصغيرة عن طريق وضعها في 0.02٪ من تريكاين ميسيلات في 0.1 مرة من محلول بارث ، وتحقق من أن الحيوانات لا تستجيب عن طريق قلبها رأسا على عقب. لإجراء جراحة نقل الحبل الشوكي ، استخدم ملعقة كبيرة وملقط لوضع الجانب الظهري المخدر من المرحلة 50 من الشرغوف على قطعة مبللة من الشاش في النصف العلوي من طبق بتري الزجاجي.
ثم ، باستخدام مقص الربيع التشريح المجهري ، قم بعمل شق في الجلد والعضلات الظهرية على مستوى منتصف الصدر. بالنسبة للحيوانات الوهمية الضابطة ، تأكد من أن حجم الشق هو 0.2 ملم فقط ولا يتلف الحبل الشوكي. في الحيوانات المنقولة ، قم بعمل شق ثان يبلغ 0.2 ملم لعبور الحبل الشوكي بالكامل.
بعد الجراحة ، انقل الضفادع الصغيرة إلى خزان يحتوي على 500 ملليلتر من محلول بارث 0.1 مرة مع البنسلين والستربتومايسين مرة واحدة بكثافة 10 إلى 12 ضفادع صغيرة لكل خزان. الحفاظ على الضفادع الصغيرة العابرة والسيطرة عليها في خزانات منفصلة. الحفاظ على الضفادع الصغيرة مع تهوية عند درجة حرارة 20 إلى 21 درجة مئوية.
تغيير محلول بارث بالمضادات الحيوية كل يومين حتى نهاية التجربة. ابدأ في إطعام الضفادع الصغيرة بعد يوم واحد من الجراحة والقضاء على الحيوانات الميتة. لفحص السباحة ، احصل على صندوق به إضاءة LED من الداخل ، مغطى بورقة بوليسترين شفافة تسمح للضوء بالمرور ، وقم بتثبيت كاميرا فوق صندوق LED.
ثم ، ضع طبق بتري قطره 15 سم فوق الصندوق المملوء ب 100 ملليلتر من محلول بارث 0.1 مرة. في يوم من الأيام بعد التحويل ، ضع شرغوف في طبق بتري واتركه لفترة تكيف مدتها خمس دقائق. بعد التكيف ، ابدأ الفيديو في تتبع سلوك السباحة الحرة باستخدام البرنامج المرجعي لمدة خمس دقائق.
بعد اكتمال الفيديو ، انقل الشرغوف مرة أخرى إلى خزانه. يوضح مخطط النقطة التمثيلية هذا استعادة الوظيفة الحركية بمرور الوقت. بعد خمسة أيام من التشريح ، سبحت الضفادع الصغيرة بمعدل 0.7 متر في خمس دقائق ، مما يدل على انخفاض قدرة السباحة.
وزادت هذه السعة مع مرور الأيام، حيث أظهرت في المتوسط 2.1 متر في خمس دقائق بعد 10 أيام، و3.1 متر في خمس دقائق بعد 15 يوما بعد الانتقال. ولوحظ الاسترداد الكامل لقدرات السباحة في 20 يوما بعد الانتقال، بمتوسط 5.7 متر في خمس دقائق. يمكن أن يختلف متوسط السباحة اعتمادا على كل دفعة من الحيوانات.
وبالتالي ، ينبغي دائما مقارنة المجموعة التجريبية بالضوابط المعنية ولم يتم الحصول على البيانات من قبل. بعد الجراحة ، يمكن استخدام الحيوانات للتحليل العالمي ، بما في ذلك النسخ ، والبروتينات ، والأيض ، وفحص المركبات التي تمنع أو تعزز تجديد الحبل الشوكي ، بهدف تطوير أساليب علاجية جديدة.
