Este protocolo ampliará la accesibilidad de la investigación sobre el ligamento uterosacro y las condiciones del piso pélvico, como el prolapso de órganos pélvicos o POP, y facilitará la disección del tejido del piso pélvico reflejado. Esta técnica permite el aislamiento de ambos ligamentos uterosacros de un ratón mientras se mantienen las uniones anatómicas y se recuperan los órganos circundantes del suelo pélvico. Nuestro método establece un modelo preclínico que permite este estudio de cómo el embarazo o la enfermedad influyen en el comportamiento mecánico de los tejidos.
Este método establece una nueva herramienta para la investigación relacionada con la salud de la mujer. La lucha principal es identificar y manejar el ligamento uterosacro. Mi consejo es tomarse el tiempo y el cuidado adecuados porque estos tejidos son pequeños y frágiles.
Comience colocando un ratón sacrificado en una almohadilla y sujetando las cuatro extremidades hacia abajo. Haga una incisión de uno a 1,5 centímetros de largo en el abdomen con tijeras. Separe suavemente la piel en los lados craneal, caudal y lateral de la incisión.
Gire el ratón hacia arriba y retire suavemente la piel hacia las extremidades posteriores. Fije las extremidades y haga una incisión de un centímetro de largo en el abdomen desde el tórax hasta la pelvis. Empuje suavemente los órganos hacia el tórax para una visión clara.
Después de la irrigación con PBS usando un par de fórceps, tire y limpie el tejido graso pélvico. Identifique los cuernos uterinos y luego córtelos de los ovarios. Ahora, sáquelos del campo de visión y corte la conexión cervical.
Cortar los uréteres de la conexión de la vejiga. Corte el colon lo más cerca posible del cuello uterino. Coloque el ratón con la almohadilla bajo un endoscopio de disección para visualizar los ligamentos uterosacros.
Use fórceps para eliminar suavemente cualquier grasa circundante de los ligamentos uterosacros. Ate una sutura 5-0 alrededor del extremo cervical de ambos ligamentos. Corte el extremo cervical del ligamento uterosacro, dejando un pedazo del cuello uterino unido.
Ahora, corta un pedazo de músculo de la parte inferior del ligamento. Coloque el tejido disecado en un baño que contenga PBS para mantener la hidratación del tejido. Corte el extremo cervical del tejido restante, dejando un pedazo de cuello uterino unido para pruebas mecánicas e imágenes.
Una vez que se haya eliminado la grasa, sostenga la vejiga con fórceps y levántela suavemente en un ángulo de aproximadamente 40 grados. Use tijeras para cortar la vejiga en el lado distal justo encima del cuello uterino. Coloque la vejiga en un baño con PBS para mantener la hidratación.
Ahora, use los fórceps para levantar el cuello uterino en un ángulo aproximado de 40 grados. Identifique la fascia rectovaginal que conecta el recto y el cuello uterino y corte la conexión con el bisturí. Use tijeras para cortar el hueso púbico en la síntesis púbica.
Ensanche suavemente el suelo pélvico para aumentar la visibilidad de las inserciones de tejido. Sostenga el cuello uterino con fórceps y córtelo lo más cerca posible de la vulva. Coloque el tejido en PBS para mantener la hidratación.
Use los fórceps para tirar suavemente del recto hacia el tórax. Identifique el recto y córtelo en el ano. Coloque el recto en PBS para mantener la hidratación.
Una vez cosechados todos los tejidos de interés dislocan los fémures de la pelvis. Cortar el hueso pélvico de los extremos distal y proximal. Coloque el tejido diseccionado en PBS.
El tratamiento enzimático pareció reducir el pico axial promedio y relajó los factores estresantes que experimenta el ligamento uterosacro en los desplazamientos globales prescritos, lo que indica que el colágeno y los glicosaminoglicanos contribuyeron a la rigidez axial de los ligamentos. Las cepas axiales promedio para cada muestra probada mecánicamente indican que la deformación axial global en las muestras tratadas con enzimas fue similar o mayor que la muestra controlada, lo que sugiere que la reducción en el estrés macroscópico se debió al tratamiento enzimático, en lugar de cepas más pequeñas. La espectroscopia Raman de la sección intermedia del ligamento uterosacro sugiere que los tratamientos enzimáticos alteraron la composición bioquímica de los ligamentos uterosacros murinos.
Los ligamentos uterosacros tratados con colagenasa habían disminuido el contenido de colágeno, así como la disminución del agua y el ácido hialurónico. Los ligamentos uterosacros tratados con condroitinasa tenían menos ácido hialurónico, así como un menor contenido de agua y colágeno. La atención al detalle es muy importante, especialmente cuando se aclara el hecho de que se necesitan depósitos alrededor de la USL y los órganos pélvicos aquí para evitar dañar la USL y sus tejidos circundantes.
Se pueden realizar más investigaciones en el USL y otros tejidos del piso pélvico utilizando ratones que tienen variaciones genéticas que hipotetizan que afectan el POP. Nuestro protocolo ya está permitiendo una serie de nuevos estudios, incluida la investigación sobre cómo el comportamiento mecánico de las USL cambia una función del embarazo, que es un factor de riesgo clave para el POP.
