小鼠子宫骶韧带和盆底器官的分离和表征

该协议将扩大子宫骶韧带和盆底疾病（如盆腔器官脱垂或POP）研究的可及性，并促进镜像盆底组织的解剖。该技术允许从小鼠中分离两个子宫骶韧带，同时保持解剖附着并检索周围的盆底器官。我们的方法建立了一个临床前模型，允许研究怀孕或疾病如何影响组织机械行为。

这种方法为妇女健康相关研究建立了新的工具。主要的斗争是识别和处理子宫骶韧带。我的建议是花足够的时间和护理，因为这些组织又小又脆弱。

首先将安乐死的鼠标放在垫子上并将四肢固定下来。用剪刀在腹部做一个1到1.5厘米长的切口。轻轻分离切口颅侧、尾侧和侧侧的皮肤。

将鼠标翻转为面向背侧朝上，然后轻轻地将皮肤剥离到后肢。将四肢固定，从胸部到骨盆在腹部做一个一厘米长的切口。轻轻地将器官推向胸部以获得清晰的视野。

使用一对镊子用PBS冲洗后，拉动并清除盆腔脂肪组织。识别子宫角，然后从卵巢上切开它们。现在，将它们拉出视野并切断颈椎连接。

切断输尿管与膀胱连接。将结肠切得尽可能靠近子宫颈。将带有垫子的鼠标放在解剖镜下，以可视化子宫骶韧带。

使用镊子轻轻清除子宫骶韧带上的任何周围脂肪。在两条韧带的颈端周围绑一条 5-0 的缝合线。切开子宫骶韧带的颈端，留下一块子宫颈附着。

现在，从韧带底部切一块肌肉。将解剖的组织放入含有PBS的浴中以保持组织水合作用。切开剩余组织的颈端，留下一块子宫颈进行机械测试和成像。

脂肪清除后，用镊子握住膀胱，并以大约 40 度的角度轻轻提起它。用剪刀在子宫颈正上方的远端切开膀胱。将膀胱放入装有PBS的浴缸中以保持水分。

现在，使用镊子以大约 40 度的角度提起子宫颈。识别连接直肠和子宫颈的直肠阴道筋膜，并切断与手术刀的连接。用剪刀在耻骨合成处剪断耻骨。

轻轻加宽骨盆底以增加组织插入的可见性。用镊子握住子宫颈，并尽可能靠近外阴切开子宫颈。将组织放入PBS中以保持水分。

用镊子轻轻地将直肠拉向胸部。识别直肠并在肛门处切开。将直肠置于PBS中以保持水分。

一旦收获了所有感兴趣的组织，股骨就会从骨盆脱位。从远端和近端切开盆骨。将解剖的组织放入PBS中。

酶处理似乎降低了子宫骶韧带在规定的整体位移时经历的平均轴向峰值并放松了压力源，表明胶原蛋白和糖胺聚糖有助于韧带的轴向僵硬。每个力学测试样品的平均轴向应变表明，酶处理样品中的全局轴向应变与对照样品相似或更大，表明宏观应力的减少是由于酶处理，而不是较小的菌株。子宫骶韧带中间部分的拉曼光谱表明，酶治疗改变了小鼠子宫骶韧带的生化组成。

胶原酶处理的子宫骶韧带的胶原蛋白含量降低，水和透明质酸减少。软骨素酶处理的子宫骶韧带透明质酸较少，水分和胶原蛋白含量较低。注意细节非常重要，尤其是在清除USL和盆腔器官周围需要沉积物以避免损坏USL及其周围组织的事实时。

可以使用具有假设影响POP的遗传变异的小鼠对USL和其他盆底组织进行进一步研究。我们的协议已经实现了一系列新的研究，包括调查USL的机械行为如何改变怀孕的功能，这是POP的关键危险因素。