Diagnostische Nekropsie und Gewebeentnahme

Quelle: Kay Stewart, RVT, RLATG, Anus; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. University of Notre Dame, IN

Viele Tierversuche Vertrauen auf letzte Zeit Datenannahmestellen, die von der Ernte und Erprobung von Organen und Geweben gesammelt werden. Die Qualität der Proben und die Analyse der Daten, die für die Prüfung der Gewebe entnommen werden, kann die Verwendung von geeigneten Methoden für die Sammlung von Organen und Geweben auswirken. Die Methode der Euthanasie des Tieres kann auch Auswirkungen auf die Qualität der Proben. Dieses Manuskript wird richtige Autopsie Techniken für Ratten darlegen.

Die am häufigsten verwendeten Euthanasie-Methode für Mäuse und Ratten ist eine Überdosierung von Kohlendioxid (CO₂). Im Einklang mit der American Veterinary medizinische Association (AVMA) ist die Verwendung von CO₂ akzeptabel mit Bedingungen, die Abneigung und Stress zu minimieren. ¹ die Tiere sind in ihrer Heimat Käfig hinterlassen, die in eine Kammer gelegt wird. CO₂ ist allmählich in die Kammer mit einer Verschiebung Rate von 10 % auf 30 % von der Kammer Volumen/min, eingeführt, das die Tiere zur Ohnmacht vor der Schmerzwahrnehmung zugeordnete Nociceptor Aktivierung durch Kohlensäure verursacht. Die Strömung ist dann in der Kammer aufrechterhalten, sobald Atemstillstand eingetreten ist, um sicherzustellen, dass das Tier tot ist. Eine Überdosierung von einer Inhalat Anästhesie ist auch akzeptabel, vor allem für Projekte, die erfordern den Einsatz von Lungengewebe, wie CO₂ das Lungengewebe schädigt. Entbluten der Tiere möglicherweise erforderlich für einige Versuche, das Blut in den Geweben zu reduzieren.

Genauen Erfassung aller Befunde unbedingt während einer Autopsie. Eine Form sollte begonnen werden, die eine komplette Geschichte des Tieres, einschließlich der Kennzeichnung von Tieren, Geschlecht, Haltungsbedingungen, Geburtsdatum, Datum des Todes, Studie Anzahl/Protokoll-Nummer und den Namen des Principle Investigator aufzeichnet. Eine grobe interne Untersuchung wird durchgeführt, da die Körperhöhlen ausgesetzt sind, um die inneren Organe sichtbar zu machen. Alle offensichtlichen Abweichungen hinzuweisen. ²

Sektions- und Gewebe Ernte muss unmittelbar nach der Euthanasie des Tieres, gestartet werden, da bakterielle Leckage aus dem Darmtrakt einige Tests verwirren kann. Die inneren Organe sollten beachtet werden, beginnend in der Bauchhöhle und Umzug in die Brusthöhle. Vor dem entfernen alle Gewebeproben, ist es wichtig, die Organe an Ort und Stelle zu beobachten. ² Organ- und Ernte für histologische Untersuchung erfordern, dass das Gewebe gut vorbereitet sind. Gewebeproben für Histologie sollte 0,5-1 cm dicke, die Fixativ Lösung ausreichend eindringen. Fixierung bewahrt biologisches Gewebe Verfall, Autolyse und Fäulnis zu verhindern. Außerdem hält jeder ablaufenden biochemischen Reaktionen und erhöht die mechanische Festigkeit und Stabilität des behandelten Gewebes. Die breite Gewebe Fixierung soll Zellen und Gewebe-Komponenten für die Herstellung von dünnen, ermöglichen zu bewahren gebeizt Abschnitte. Sofern nicht anders angegeben, ist die am häufigsten verwendeten Fixativ 10 % Neutral gepufferte Formalin. Ready-to-Use 10 % Neutral gepufferte Formalin ist von großen Anbietern im Handel erhältlich. ³

Abbildung 1. Thorakalen und abdominalen Organe eine weibliche Ratte.

Abbildung 2. Thorakalen und abdominalen Organe einer männlichen Ratte.

1. externe Prüfung

Eine grobe externe Prüfung des Körpers, die visuelle Inspektion des Körpers für Läsionen und Massen umfasst, sollte als erster Schritt in eine Autopsie durchgeführt werden. Das Fell sollte für Bereiche von Haarausfall untersucht werden. Die Zähne und die Nägel werden auf übermäßiges Wachstum oder Verschleiß ausgewertet. Verfärbung des Fells am Mund, Nasenlöcher, Augen, anal, und genitale Öffnungen sollte beachtet werden. Tests mit Klebeband, Kratzen der Haut und Fell Prüfungen durchgeführt werden, um externe Parasiten zu erkennen (siehe die folgenden Verfahren).

1. Band-test
   1. Notwendige Ausstattung für ein Band-Test umfasst Handschuhe, einen klaren Tesafilm-Streifen, ein Glas-Objektträger und Schere.
   2. Handschuhe sind immer getragen, bei der Handhabung der Band, wie der Klebstoff wird heben, Ölen und Hautzellen von den Fingern verdeckt Erkenntnisse oder Verwirrung bei der Bewertung der Folie.
   3. Schnitt ein Stück der Band, das ist etwas schmaler als die Breite, und kürzer als die Länge der Objektträger.
   4. Drücken Sie vorsichtig die Klebeseite des Bandes um den Anus und Umgebung, und entfernen Sie schnell zu.
   5. Mit dem entgegengesetzten Ende des Bandes, drücken Sie es zwischen den Schulterblättern und entfernen Sie schnell zu.
   6. Bringen Sie das Klebeband auf dem Objektträger.
   7. Der Tape Test ist bereit für die mikroskopische Untersuchung. Parasiteneier sind bei 4 X Vergrößerung sichtbar aber sollte dann geprüft werden, bei 10 X Vergrößerung, die Arten richtig zu identifizieren.
   8. Es ist wichtig zu vermeiden, berühren die klebende Seite des Bandes. Das Band hebt mit Schutt aus den behandschuhten Händen und Lesen der Folie schwierig machen.
2. Kratzen der Haut
   1. Der Haut Schaben Test erfolgt auf alle Bereiche der Alopezie, Hautveränderungen oder Abschürfung.
   2. Die notwendige Ausstattung für Haut Schaben ist ein sauberes Glas-Objektträger, Mineralöl und ein Metall Spachtel oder Skalpell-Klinge.
   3. Legen Sie ein paar Tropfen von Mineralöl auf dem Objektträger.
   4. Drücken Sie die Haut in eine Falte am Rand der Läsion oder Interessengebiet.
   5. Legen Sie eine kleine Menge von Mineralöl auf der Haut.
   6. Setzen Sie den Rand der Spatel oder Skalpell Klinge auf der Haut, und kratzen Sie gegen die Richtung des Haarwuchses.
   7. Fahren Sie fort, Schaben, bis eine kleine Menge der Rötung auf der Haut sichtbar ist.
   8. Legen Sie die Haare und Gewebe von der Hautoberfläche in das Öl auf den Objektträger abgekratzt. Ggf. sollte das Material so verteilt, dass es in das Öl gleichmäßig verteilt wird.
   9. Die Folie kann jetzt unter dem Mikroskop untersucht werden. Falls gewünscht, kann ein Deckglas auf der Öltropfen auf der Folie angewendet werden. Untersuchen Sie die Folie am 4 X und 10 X Vergrößerung.
3. Fell-Prüfung
   1. Die Fell-Prüfung ist der letzte externe Prüfung durchgeführt; jedoch ist es tatsächlich getan, nachdem die interne Prüfung abgeschlossen ist.
   2. Das Tier wird in einem Glas oder Kunststoff Petrischale gelegt, nachdem alle inneren Organproben gesammelt wurden.
   3. Das Gericht befindet sich im Kühlschrank für 15 Minuten.
   4. Nach 15 Minuten die Schale befindet sich unter dem sezierenden Mikroskop und das Fell wird auf externe Parasiten untersucht. Die meisten Fell Milben bewegt sich bis an die Enden der Haare und sind gut zu beobachten.

2. interne grobe Untersuchung des Bauchraums

1. Besteuert der Haut
   1. Ein kleiner Schnitt wird nur anterior das Becken bei Frauen und über die Vorhaut bei Männern gemacht.
   2. Der Haut-Schnitt erstreckt sich bis zum Kinn.
   3. Stumpfe Dissektion wird verwendet, um die Haut von den Faszien und Muskeln zu lockern.
   4. Quere Schnitten werden die vorderen Gliedmaßen anterior der hinteren Gliedmaßen und Posterior vorgenommen. Darauf sollte geachtet werden, nicht, die Blutgefäße in der axillären Bereich zu trennen.
   5. Verwenden Sie stumpfe Dissektion der zervikalen Bereich und Brust aussetzen. Besondere Vorsicht sollte ausgeübt werden, um Bruch der Vena und Arteria Schiffe in den Hals zu vermeiden.
2. Milchdrüsen
   1. Untersuchen Sie bei Frauen die Milch-Gewebe zu Massen, Verfärbung oder Auffälligkeiten suchen.
   2. Schwangere oder stillende Frauen Milch-Gewebe Volumen erhöht haben, und Milch vorhanden sein.
   3. Milch-Gewebe wird von der Spitze des Brustbeins an das Manubrium festgestellt, dass die Geschlechtsöffnung auf der ventralen Oberfläche und erstreckt sich seitlich auf beiden Seiten fast berühren auf der dorsalen Oberfläche an den Hüften und Schultern.
   4. Exzision der Milchdrüsen erfordert greifen den Rand der Drüse mit Daumen-Zange und mit stumpfe Dissektion, um Anhänge auf der Haut zu lösen. Sobald die Drüse von der Haut getrennt wurde, kann Iris-Schere, alle übrigen Anlagen schneiden vor dem Einlegen der Drüsenkörpers in einem Fixativ Lösung verwendet werden.
3. Subkutane Drüsen
   1. Präputial Drüsen sind gekoppelt und liegen nur anterior der Vorhaut bei der männlichen Ratte. Sie erscheinen groß und eine graue, gelbliche Farbe mit einem schaumigen aussehen.
   2. Mandibulären Speicheldrüsen Paaren, befindet sich in den Unterkiefer und erstrecken sich entlang der Hals, das Manubrium Sternum. Sie haben eine harte Bespannung und die Muskeln fest eingehalten werden.
   3. Entfernung dieser Drüsen erfordert stumpfe Dissektion und zusätzliche Pflege bei der Arbeit in der zervikalen Region, Ruptur von Blutgefäßen zu verhindern. Stumpfe Dissektion ist eine Technik in der anatomischen Präparation in welche Gewebe getrennt sind und die zugrunde liegenden Strukturen spanlos ausgesetzt.
   4. Für stumpfe Dissektion dienen die Schere Gewebe auseinander zu verbreiten, anstatt, sie auseinander zu schneiden. Die geschlossenen Spitzen sind in Gewebe geschoben und dann geöffnet, um Gewebe entlang natürlicher Ebenen aufgeteilt. Dieser Prozess erfordert Geduld und Fingerspitzengefühl, da die Dehnung des Gewebes zu Schäden an angrenzenden Organe und Blutgefäße führen kann.
   5. Die Drüsen, einmal von der darunter liegenden Muskeln befreit werden gehoben und alle restlichen Anlagen werden durchtrennt.
   6. Die Drüsen benötigen mindestens ein Schnitt auf das Fixiermittel eindringen.
   7. Subkutanes Fett wird für Menge und Ablagerung ausgewertet. Eine übergewichtige Tier möglicherweise eine große Menge an Fett mit der Haut verdickt. Tiere, die dehydriert sind werden die Elastizität der Haut reduziert haben, und es wird dünner fühlen.
4. Muskel
   1. Beobachten Sie die Bauch-, Intercostalneuralgie und exponierten Muskeln von Hals und Gliedmaßen.

(3) der Bauchorgane

1. Leber
   1. Normalerweise sollte die Leber Farbe dunkelrot. Am Rande sollte glatt sein und haben eine scharfe Kante. Eine abnormale Leber kann haben einen verdickten Rand und Kerben oder gewellten Rändern.
   2. Vorsicht beim Umgang mit der Leber, als es eine lockere Gewebe ist. Jede Störung der Integrität des Organs führt Blut Austritt in die Körperhöhle und verdunkelt die Organe.
   3. Vorsichtig reflektieren Sie die Leber weg von der Membran zu und machen Sie einen Schnitt durch die Blutgefäße anterior der Leber.
   4. Spiegeln der Leber zurück in Richtung des Zwerchfells und den faserigen Knoten, der die Lappen der Leber zentral verbindet zu erfassen. Heben Sie die Leber während Durchtrennung aller Anhänge auf den Darm und Magen.
   5. Entfernen Sie die Leber in einem Stück zu, und tupfen Sie überschüssiges Blut von der Oberfläche des Organs. Es kann in einer saline Bad gelegt oder gespült in steriler Kochsalzlösung vor dem Schneiden in dünneren Bereiche Eindringen von Fixativ Lösungen zu ermöglichen.
2. Gallenblase
   1. Die Gallenblase ist eine kleine transparente Sac, die oft aufgrund der Ansammlung von Galle gelb erscheint. Es ist bei Mäusen, aber nicht in Ratten.
   2. Die Gallenblase befindet sich zwischen der oberen die meisten Lappen der Leber entlang der Mittellinie. Es ist in der Regel an der Membran durch eine dünne Lippenbändchen verbunden, die versehentlich zerrissen werden kann, wodurch die Gallenblase zu Bruch.
   3. Die Gallenblase kann mit der Leber entfernt und später für Prüfung getrennt.
3. Milz
   1. Die Milz ist dunkelrot und befindet sich entlang der unteren Krümmung des Magens. Es sollte regelmäßiger Form, mit einer leicht matten Oberfläche.
   2. Es ist bei Männern in der Regel größer als die Weibchen. Tiere mit internen parasitäre Infektionen, bakterielle Infektionen oder Erkrankungen des Blutes können Milz vergrößert haben.
   3. Da die Milz Filter roten Blutkörperchen aus dem Kreislauf beschädigt, ist es mit Blut gefüllt. Wenn die Milz entfernen, vermeiden Sie Punktierung der Orgel.
   4. Um es zu entfernen, wird die Milz angehoben und die Anlagen Schneiden zwischen dem Magen und Milz.
4. Darm-Trakt
   1. Postmortale Veränderungen rasch auftreten und umfassen Bündelung von Blut im Gewebe, wodurch das Auftreten von Blutergüssen und Ballonfahren des Darms mit Gas-oft durch bakterielle Überwucherung produziert. Der Darm wird gründlich untersucht, nachdem es aus dem Körper entfernt worden ist.
5. Magen
   1. Der Magen befindet sich am distalen Ende der Speiseröhre. Es scheint zweifarbig, muskulösen und Drüsengewebe Portionen zu unterscheiden sein.
   2. Der Magen sollte für das Vorhandensein von Nahrung nach Gefühl bewertet werden. Nagetiere im allgemeinen Essen ständig durch eine hohe metabolische Rate. Nüchternen Magen sollte hingewiesen, da es Krankheit hindeuten kann.
   3. Schneiden Sie Magen, nicht, da der Inhalt der Organe in der Bauchhöhle verunreinigen werden.
   4. Um den Magen aus dem Darmtrakt zu entfernen, ist die Speiseröhre nur anterior Magen durchtrennt. Wenn der Magen ist in einem gemeinsamen Container Fixativ platziert werden, kann ein Stück Naht um die Speiseröhre zu verschütten des Mageninhalts vor dem Schneiden zu verhindern gebunden.
6. Dünndarm
   1. Der Dünndarm besteht aus drei Abschnitten: der Zwölffingerdarm, das Jejunum und Ileum. Es wird keine fäkalen Pellets enthalten.
   2. Der Zwölffingerdarm ist eine kürzere Abschnitt aus der hinteren Bauch Schließmuskel zu Jahresbeginn das Jejunum. Der Gallengang tritt in den Dünndarm in den Zwölffingerdarm, und Bauchspeicheldrüse-Gewebe ist stärker an diesen Teil des Dünndarms.
   3. Das Jejunum ist der zentrale Teil des Dünndarms.
   4. Peyer ist Patches komponiert von Lymphgewebe, in kleinen ovalen Flecken sind vorhanden auf der Nonmesenteric Oberfläche des Jejunum und Ileum in der Ratte. ³ Diese sind Teil des Immunsystems und können hilfreich bei der Diagnose von Immun-Krankheiten sein.
   5. Das Ileum ist der distale Abschnitt des Dünndarms und ist der längste Teil, bei der Blinddarm.
7. Blinddarm
   1. Der Blinddarm ist eine grünliche Farbe und sehr weich.
   2. Es befindet sich an der Kreuzung des dünn- und Dickdarm.
   3. Gärung tritt in den Blinddarm, so dass die Punktion des Organs einen fauligen Geruch und Verschmutzung der Organe mit Bakterien führen wird.
8. Dickdarm
   1. Der Dickdarm beginnt um der Blinddarm und dauert bis zum Anus. Es ist leicht erkennbar, wie fäkale Pellets in das Lumen des Darms visualisiert werden können.
   2. Es sollte keine Bereiche der Blutung oder Verfärbung sofort nach Euthanasie.
9. Mesenterium
   1. Die kleinen und großen Darm verankert sind für den Körper durch das Mesenterium, einer Membran, enthält Blutgefäße, Fett, und Lymphknoten.
   2. Es sollte für vergrößerte Lymphknoten und Massen vor dem Entfernen des Darmtraktes geprüft werden.
10. Bauchspeicheldrüse
    1. Die Bauchspeicheldrüse ist eine diffuse Organ befindet sich unter den Bauch und zwischen die ersten Falten an den Zwölffingerdarm. Es ist hellbraun bis grau und setzt sich aus mehreren kleinen Lappen mit unregelmäßigen Kanten.
    2. Es möglicherweise nicht möglich, die Bauchspeicheldrüse in einem Stück zu entfernen.
    3. Wenn das Pankreasgewebe geerntet werden soll, muss es vor dem Entfernen des Verdauungstraktes erfolgen.
    4. Als pankreatischen Gewebe muss sorgfältig entfernt die mesenterialen Gewebe umgebenden gehänselt.
11. Entfernen den Darm-Trakt
    1. Die Darm-Trakt wird als Einteiler, angefangen mit den Magen bis hin zu den Anus entfernt.
    2. Eine Kürzung erfolgt durch den Dickdarm nur anterior des Afters.

4. die Brusthöhle

1. Lunge
   1. Die Lungen sind in der Regel eine leuchtend rosa Farbe und Textur mit einer glatten Oberfläche schwammig. Jedoch kann Sterbehilfe mit CO₂ pulmonale Blutungen, wodurch dunkle rote Flecken, die die gesamte Lungenoberfläche abdecken kann.
2. Herz
   1. Das Herz ist dunkelrot mit vier Kammern. Die Ventrikel sind muskulös und fühle mich fest im Griff. Die Vorhöfe sind dunkler in der Farbe rot und sitzen an der Spitze der Ventrikel. Sie sind viel weniger muskulös und schlaff erscheinen.
   2. Der Herzbeutel Sac ist eine dünne, lichtdurchlässige Membran umgibt das Herz.
3. Thymus
   1. Die Thymusdrüse liegt anterior zum Herzen und sitzt über der Luftröhre. Es sollte weich in der Textur.
   2. Bei Jungtieren erscheint es als tan mit einer fetthaltigen Textur.
   3. Ältere Tiere müssen Infiltration von Fettgewebe in den Thymus, vergrößert und der Thymus eine weiße Farbe zu geben.
4. Luftröhre
   1. Die Luftröhre erstreckt sich von der Kehldeckel, der Bifurkation der Bronchien. Es ist eine geriffelte, knorpelige Röhre, die flexibel ist.
   2. Es sollte klar sein und keine flüssige oder schaumige Flüssigkeit in das Lumen. Sterbehilfe mit CO₂ kann dazu führen, dass Flüssigkeit (Serosanguinous und/oder schaumig) Ansammlung in der Lunge und Luftröhre aufgrund von Blutungen.
5. Speiseröhre
   1. Die Speiseröhre erstreckt sich von der Mundhöhle in den Magen. Es ist ein sehr dünnes Rohr, das liegt direkt hinter der Luftröhre und hinter dem Herzen, und geht durch das Diaphragma hindurch in den Magen.
   2. Die Speiseröhre ist schwer zu entfernen, da es leicht hin und her gerissen ist, obwohl das Gewebe dehnbar ist. Entfernung der Speiseröhre erfolgt am einfachsten durch sezieren es weg von der Luftröhre nach Entfernung des Herzens und der Lunge.
6. Entnahme von thorakalen Organen
   1. Herz und Lunge werden am leichtesten zusammen entfernt.
   2. Legen Sie die Zange senkrecht zur Trachea und fassen Sie die Luftröhre fest, nur über die Thymusdrüse.
   3. Mit der Schere, machen Sie einen Schnitt senkrecht zur Trachea nur anterior der Zange.

(5) Kopf

1. Augen
   1. Die Augen sollten gleich groß sein und frei von Exsudat. Die Bindehaut sollte glatt sein.
   2. Um die Augen zu entfernen, Druck auf die Haut rund um das Auge nach hinten und nach unten, um das Auge aus der Umlaufbahn zu ragen. Mit einer gebogenen Spitze Pinzette, isolieren Sie den Globus und schneiden Sie die Anlagen in die Steckdose zu halten.
2. Ohren
   1. Beobachten Sie die Ohren für die Identifizierung. Einige Ermittler-Anforderung, die Ohr-Tags werden mit Organproben zur Bestätigung der tierischen Identität aufgenommen.
   2. Die Gehörgänge sind für Läsionen, Massen oder Exsudat untersucht.
3. Nase
   1. Die Nase ist Flüssigkeit oder Exsudat eingehalten.
   2. Die Nasenlöcher sollten symmetrisch und klar sein.

Der letzte Schritt in vielen Forschungsprojekten ist die Autopsie der Versuchstiere. Eine detaillierte Beobachtung der externen und internen Strukturen, gefolgt von der Sammlung von Geweben zur weiteren Analyse bietet eine große Menge von Forschungsdaten. Korrekte Techniken zur Gewebeentnahme und Erhaltung mit geeigneten Fixativ Lösungen sind wesentlich für die korrekte Interpretation der Ergebnisse.

1. Leary, S., Underwood, W., Anthony, R., Cartner, S., Corey, D., Grandin, T., et al. 2013. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2013 edition.
2. Parkinson, C.M., O'Brien, A., Albers, T.M., Simon, M.A., Clifford, C.B. and Pritchett-Corning, K.R. 2011. Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice. 54. e2966. 1-7.
3. Fiette, L. and Slaoui, M. 2011. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, 39-67.
4. Youngson, R.M. 2005. Collins dictionary of Medicine fourth edition.