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该协议描述了如何使用微生物滴培养系统(MMC)进行自动微生物培养和适应性进化。MMC可以自动连续地培养和分培养微生物,并在线监测其生长,具有相对较高的通量和良好的并行化性,减少了劳动力和试剂消耗。
传统的微生物培养方法通常操作繁琐,通量低,效率低,消耗大量劳动力和试剂。此外,近年来开发的基于微孔板的高通量培养方法由于其溶解氧低,混合物不良以及严重的蒸发和热效应,微生物生长状况较差,实验平行化程度低。由于微液滴的诸多优点,如体积小、通量高、可控性强等,液滴基微流控技术可以克服这些问题,已应用于多种高通量微生物培养、筛选、进化的研究。然而,大多数先前的研究仍处于实验室建设和应用阶段。一些关键问题,如操作要求高,施工难度高,缺乏自动化集成技术,限制了液滴微流控技术在微生物研究中的广泛应用。在这里,基于液滴微流技术成功开发了一种自动化微生物微滴培养系统(MMC),实现了微生物液滴培养过程中所需的接种、培养、在线监测、亚培养、分选、取样等功能的集成。以野生型大肠杆菌MG1655和甲醇必需大肠杆菌菌株(MeSV2.2)为例,详细介绍了如何使用MMC进行自动化和相对高通量的微生物培养和适应性进化。该方法操作简便,消耗的人工和试剂少,实验通量高,数据并行度好,与常规培养方法相比具有很大的优势。它为科研人员开展相关微生物研究提供了一个低成本、操作友好、结果可靠的实验平台。
微生物培养是微生物科学研究和工业应用的重要基础,广泛应用于微生物的分离、鉴定、重建、筛选和进化1,2,3。传统的微生物培养方法主要采用试管、摇瓶、实心板作为培养容器,结合振荡培养箱、分光光度计、酶标仪等设备进行微生物培养、检测和筛选。但是,这些方法存在许多问题,例如操作繁琐,通量低,效率低,消耗大量劳动力和试剂。近年来开发的高通量培养方法主要基于微孔板。但微孔板溶解氧水平低,混合性能差,蒸发和热效应严重,往往导致微生物生长状态和实验平行化不良4,5,6,7;另一方面,它需要配备昂贵的设备,如液体处理工作站和酶标仪,以实现自动化培养和过程检测8,9。
作为微流控技术的一个重要分支,液滴微流体近年来在传统的连续流微流体系统的基础上发展起来。它是一种离散流动微流体技术,它使用两个不混溶的液相(通常是油 - 水)来产生分散的微液滴并在其上运行10。由于微液滴具有体积小、比表面积大、内部传质率高、区室化不造成交叉污染等特点,以及液滴可控性强、通量高的优点,因此应用液滴微流控技术应用于微生物高通量培养、筛选和进化等已有多种研究11.然而,仍有一系列关键问题需要使液滴微流控技术普及和广泛应用。首先,液滴微流体的操作繁琐复杂,对操作人员的技术要求很高。其次,液滴微流控技术结合了光学、机械和电气元件,需要与生物技术应用场景相关联。如果没有多学科协作,单个实验室或团队就很难建立高效的液滴微流体控制系统。第三,由于微液滴体积小(从皮升(pL)到微升(μL)),对于一些基本的微生物操作,如亚培养、分选、取样,实现液滴的精确自动化控制和实时在线检测需要很大的难度,并且难以构建一体化设备系统12。
为了解决上述问题,基于液滴微流控技术成功开发了一种全自动微生物微滴培养系统(MMC)。MMC由四个功能模块组成:液滴识别模块、液滴光谱检测模块、微流控芯片模块和采样模块。通过所有模块的系统集成和控制,准确建立包括液滴生成、培养、测量(光密度(OD)和荧光)、分裂、融合、分选在内的自动化操作系统,实现微生物液滴培养过程中所需的接种、培养、监测、分培养、分选、采样等功能的集成。MMC可容纳多达200个2-3μL体积的重复液滴培养单元,相当于200个摇瓶培养单元。微滴培养系统可以满足微生物生长过程中无污染、溶解氧、混合、质能交换的要求,通过生长曲线测量、自适应进化、单因子多级分析、代谢物研究与分析(基于荧光检测)等多种集成功能,满足微生物研究的各种需求13,14。
在这里,该协议详细介绍了如何使用MMC进行自动化和微生物培养以及适应性进化(图1)。以野生型大肠杆菌MG1655为例,以生长曲线测量和甲醇必需的大肠杆菌菌株MesV2.215为例,证明了MMC的适应性进化。开发了MMC的操作软件,使操作非常简单明了。在整个过程中,用户需要准备初始细菌溶液,设置MMC的条件,然后将细菌溶液和相关试剂注入MMC。随后,MMC将自动执行液滴生成,识别和编号,培养和自适应进化等操作。它还将以高时间分辨率对液滴进行在线检测(OD和荧光),并在软件中显示相关数据(可以导出)。操作员可以根据结果随时停止培养过程,并提取目标液滴以进行后续实验。MMC操作简便,消耗的劳动力和试剂少,实验通量相对较高,数据并行度好,与常规培养方法相比具有显著优势。它为研究人员进行相关的微生物研究提供了一个低成本,操作友好且强大的实验平台。
1. 仪器和软件安装
2. 准备工作
3. MMC中的生长曲线测量
4. MMC的适应性演进
5. MMC的清洁
该协议使用 大肠杆菌 MG1655和MesV2.2菌株作为示例,以展示MMC中具有自动化和相对高通量策略的微生物培养和甲醇必需的适应性进化。生长曲线测量主要用于表征微生物培养。通过自动连续亚培养和在每个亚培养过程中加入高浓度甲醇作为选择压力进行适应性进化。通过每个次培养期间液滴最大OD值的变化趋势来估计是否实现了适应性进化。MMC的可调参数和精度参数如 表 2所示。
生长曲线测量结果
在培养过程中检测到的15个液滴的OD600 值在培养约20小时后从MMC输出(图5A)。可以观察到,检测大约每14分钟进行一次。该检测周期取决于产生的液滴数量,因为液滴在培养管中来回循环,检测模块仅在液滴通过光纤探头时检测OD值(OD值的检测和计算见 补充图 1)。因此,14分钟的检测周期非常短,提供了高时间分辨率的检测过程,以更准确地反映微生物的生长情况。
根据导出的数据,计算了每个时间点15个液滴的平均OD600 值和标准偏差(SD),并绘制了 大肠杆菌 MG1655的生长曲线(图5B)。结果表明,生长曲线呈现"S"形,包括滞后相、对数相和静止相,与经典的微生物生长模型非常一致。同时,15个液滴的标准偏差非常小,表明生长的一致性和平行性良好。因此,它充分证明了MMC良好的微生物培养和检测性能。此外,还证实在培养过程中液滴之间几乎没有串扰(补充图 2 和 补充表 1)。
适应性进化的结果
我们已经在MMC中对MesV2.2进行了长期的适应性演进。第18天 ,根据软件界面上显示的生长曲线显示的每个子培养期液滴最大OD600值的增加趋势,我们认为50个液滴实现了良好的适应性进化。导出OD600数据,提取生长性能较好的8个液滴(含液滴6),提取13个。 图6A 显示了整个自适应进化过程中50个液滴的生长曲线。在18天内,MMC自动进行了13次分耕作业。从 图6A 可以看出,MeSV2.2首先缓慢增长,之后增长迅速,这表明了MesV2.2中自适应进化的轨迹。为了提供选择压力,将甲醇添加到MesV2.2培养基中。最初,甲醇抑制细胞生长。适应性进化后,适应甲醇的富集细胞具有较高的生长速率。单独绘制了液滴6在整个适应性进化过程中的生长曲线(图6B)。第一代和最后一次亚培养期的最大OD600值分别为0.37和0.58,分别增加了56.8%。表明液滴6中的应变已经实现了明显的适应性演化。
随后,培养液滴6菌株和摇瓶中的初始菌株,并比较其生长曲线(图6C)。根据文献17,18中给出的方法,计算液滴6菌株和初始菌株的最大比增长率(μ最大值),分别为0.096 h-1 和0.072 h-1。 图6C 显示,与摇瓶中培养时相比,液滴6菌株表现出更高的最大比生长速率(增加54.8%),并且在固定期具有更高的细胞浓度(增加20.0%),这进一步表明MeSV2.2中的适应性进化已经实现。
图1:MMC中生长曲线测量和自适应进化的整体工作流程。 (A)MMC中的生长曲线测量。首先,在摇瓶中培养菌株以制备初始细菌溶液。然后,将初始细菌溶液注入试剂瓶中。接下来,在 MMC 中生成液滴。MMC使液滴在微流体芯片和管中来回循环以培养它们。当液滴通过检测点时,将检测并记录OD数据。最后,导出数据进行分析。(B)MMC中的适应性进化。从琼脂糖平板中挑选一个菌落,并将其培养在摇瓶中以制备初始细菌溶液。将初始细菌溶液注入试剂瓶后,在MMC中进行自适应进化。适应性进化涉及连续的亚培养,可以通过液滴分裂和融合自动操作。自适应演化后,导出数据进行分析。可以提取目标液滴,然后在板上扩散以获得单个菌落。 请点击此处查看此图的大图。
图2: MMC的结构和基本工具。(一)MMC的外部和操作室。(B)MMC的微流控芯片。该芯片有七个通道(C1-C6和CF)。(C) 试剂瓶。它有一个顶管和一个侧管。在将样品注入试剂瓶之前,需要先将注射器针头连接到快速接头A,然后将快速接头A连接到侧管。 (四)微流控芯片的安装。微流控芯片安装在基座上。然后将七个通道(C1-C6和CF)分别连接到MMC(O1-O6和OF)的相应端口。
1 - MMC的操作室。
2 - 含有MMC油的油瓶。
3 - 用于收集废液的废液瓶。
4 - 紫外灯(波长254纳米)用于灭菌。该灯可以提前打开,对芯片和管子进行消毒。
5 - 用于液滴识别的激光 (620 nm)。激光在芯片上照射的点是液滴识别位点。
6 - 温度探头,用于测量操作室内的温度。
7 - 用于操作室的加热器。它可用于维持微生物培养的温度。可设定的温度范围为25±0.5°C至40±0.5°C。
8 - 光纤探头,用于测量液滴的OD或荧光。
9 - 芯片底座安装微流控芯片。
10-金属浴固定试剂瓶并加热它们以快速将试剂的温度提高到微生物培养的温度。
11 - 微流控芯片(O1-O6 和 OF)的端口。微流控芯片通过这些端口连接到MMC。
12 - 用于液滴储存和培养的管子。
13 - 磁铁块,用于在安装过程中快速定位微流控芯片。
14 - 注射器针头将样品注射到试剂瓶中。其内径为0.41毫米,外径为0.71毫米。
15 - 快速接头 A. 使用快速接头 B 连接。
16 - 快速接头 B. 请点击这里查看此图的大图。
图3:MMC的操作软件界面。(一)软件的主界面。(1)操作腔内的温度。(2)液滴识别的光电信号值。当液滴通过时,信号值很高(>2 V)。当油通过时,信号值较低(<1 V)。(3)功能选择。有四种功能可供选择:生长曲线测量(生长曲线),自适应实验室进化(ALE),单因子多级分析(单因子)和根据实验需求定制操作(定制)。(4)参数设置接口。选择一个函数后,在此处设置相应的实验参数。(5)命令运行区域。(6) 切换摄像机。摄像头直接安装在芯片上方,可用于在线观察芯片中的液滴。(7)过程显示区域。显示运行时间、监视数据和正在执行的操作。(二)自适应进化的参数设置界面。(C)液滴筛选界面。MMC 可以自动对液滴进行编号。在这里,可以从MMC中选择并提取目标液滴。(四)摄像头观察界面。请点击此处查看此图的大图。
图 4: 样品进样、液滴生成和液滴提取。(一)试剂瓶注射后加入菌液和MMC油。细菌溶液和MMC油都从侧管中注入。油相在上层,细菌溶液在下层。注射后,连接快速接头A和B,然后将其安装到MMC中。(B)微流控芯片中的液滴生成。为了提高液滴的可见性,使用红色颜料溶液来演示液滴的产生过程。(C)储存在管中,用显微镜观察。比例尺:400 μm.(D) 弹出窗口提示和相应的操作。当出现提示"请拉出CF快速接头并将其放入EP管中"时,拉出CF连接器并将其放入EP管中以收集目标液滴;当出现提示"请重新插入连接器"时,液滴收集完成,将CF连接器插回OF端口。 请点击此处查看此图的大图。
图 5: 数据导出和增长曲线的图形绘制。(A) 部分导出数据的屏幕截图。导出的数据包括每个检测时间点生成的15个液滴和相应的OD600值。(B)根据导出数据绘制 的大肠杆菌 MG1655生长曲线。计算每个时间点15个液滴的平均OD600值和标准偏差(SD),并绘制生长曲线。可以清楚地看到,这条增长曲线包括滞后阶段、对数阶段和平稳阶段。 请点击此处查看此图的大图。
图6:MMC中MesV 2.2自适应演化的结果。(A)整个适应性进化过程中50滴的生长曲线。从MMC输出50个液滴在18 d自适应演化过程中的OD 600检测数据并绘制。第18天,提取8个液滴,包括液滴6。(B)液滴6在整个适应性进化过程中的生长曲线。第一代和最后一次亚培养期的最大OD600值分别为0.37和0.58,分别增加了56.8%。(C)液滴6菌株和摇瓶中初始菌株的比较。将液滴6的菌株和初始菌株在摇瓶中培养,并测量生长曲线(包括SD,n = 3)。这个数字是从简×J.等人13中修改而来的。请点击此处查看此图的大图。
组件 | 浓度 |
Na2HPO4·12H2O | 6.78 克/升 |
KH2PO4 | 3 克/升 |
氯化钠 | 0.5 克/升 |
NH4氯 | 1 克/升 |
维生素B1(通过过滤灭菌) | 0.34 克/升 |
镁SO4·7H2O | 0.049克/升 |
氯化钙2·2H2O | 1.5毫克/升 |
微量元素: | |
三氯甲烷 3·6H2O | 0.5毫克/升 |
锌离子4·7H2O | 0.09毫克/升 |
铜硫4·5H2O | 0.088毫克/升 |
氯化锰2 | 0.045毫克/升 |
氯化钴2·6H2O | 0.09毫克/升 |
葡萄糖 酸 | 1.09 克/升 |
甲醇 | 500毫摩尔/升 |
异丙基-β-d-硫代高糖吡喃糖苷 | 0.1毫摩尔/升 |
硫酸链霉素 | 20 微克/毫升 |
硫酸卡那霉素 | 50微克/毫升 |
加入额外的15g / L琼脂糖以制备固体培养基。 |
表 1:MeSV2.2 专用介质的组件。
可调参数 | |
参数 | 范围 |
栽培温度 | 25–40 °C ± 0.5 °C |
液滴数 | 0–200 |
接种物浓度 | 13.3–86.7 % |
化学因子浓度 | 8种不同浓度,最高浓度储存化学因子 |
次级栽培时间 | 由用户决定 |
次级栽培数量 | 由用户决定 |
OD检测波长 | 350–800 纳米 |
荧光检测波长 | 激发波长: 470, 528 nm 发射波长: 350–800 nm |
精度参数 | |
参数 | C.V |
液滴体积 | 1.88% |
接种物浓度 | <5.0% |
表2:MMC的可调参数和精度参数。可调参数是指可以根据用户的具体要求进行调整的参数;精度参数是指反映不同流体操作的精度和再现性的参数。
补充图1:MMC中液滴的识别和检测。 (A) MMC 中液滴的波形。该波形来自MMC光谱仪的原始光谱数据。在后台处理原始光谱数据后,MMC将给出测量的OD值。(B) MMC中液滴的OD计算。在液滴的波形中,"a"代表液滴的最大长度,"c"代表油相和水相形成的弧形界面,"b"代表液滴的主要部分。根据兰伯特-比尔定律,液滴的外径值使用以下公式计算:外径值 = lg(E/D) × 10。"E"是指油相的平均光谱信号值;"D"是指液滴主体部分b的平均光谱信号值。应该注意的是,MMC测量的OD值与分光光度计测量的OD值不同。 请点击此处下载此文件。
补充图2:液滴之间串扰的测试。 为了验证长期培养过程中液滴之间是否存在串扰,将大肠杆菌MG1655溶液稀释至非常低的浓度(根据泊松分布,λ = 0.1),然后产生200个液滴并培养5天。在测量OD后,发现大肠杆菌MG1655在少量液滴中生长。而且这些液滴周围的液滴中几乎没有细菌生长。结果还初步表明,液滴之间几乎没有串扰。 请点击此处下载此文件。
补充表1:MMC中液滴生成的稳定性。 如 补充图1所示,液滴具有固定波形。MMC的光谱仪每秒产生一定数量的数据点,因此液滴波形的数据点数量可以反映液滴的大小。利用红色染料溶液在MMC中生成397个液滴,并测定OD值。导出原始频谱数据,对每个液滴波形的数据点进行计数,并计算液滴数据点的变异系数(C.V)。 请按此下载此表格。
补充表2:MMC中的液滴蒸发。 在这里,红色染料溶液用于在MMC中产生液滴,液滴储存在培养管中。然后将管置于37°C恒温培养箱中30天,并定期测量液滴长度(在显微镜下拍照并用比例尺测量长度)。结果表明,30天后液滴的体积减少了约12.3%,这表明MMC中液滴的蒸发非常小。 请按此下载此表格。
该协议介绍了如何使用微生物滴培养系统(MMC)进行自动微生物培养和长期适应性进化。MMC是一种小型化,自动化和高通量微生物培养系统。与传统的微生物高通量培养方法和仪器相比,MMC具有劳动力和试剂消耗少、操作简单、在线检测(OD和荧光)、高时间分辨率数据采集、超并行化等诸多优点。MMC还具有一些与常规液滴微流体技术不同的特殊优势,后者通常使用pL和nL液滴。以前报道的大多数使用pL和nL液滴的系统具有较差的培养性能和很少的可检测参数(通常只有荧光)18,19,20,21。虽然已经有一些平台可以实现更好的栽培性能和多参数检测,但难度很大,需要付出很多努力。例如,一些研究人员报告了pL液滴的OD检测。它基于图像识别,不仅有误报,还需要进一步验证精度22。但是,MMC可以通过相对简单的方式完成这些操作。MMC使用很少报告的微升(μL)液滴。MMC优越的微生物培养性能已经过验证,还可以直接检测OD和荧光。由于μL液滴体积较大,因此液滴的产生不易受到干扰,因此具有更高的稳定性。同时,可以在微升液滴中执行更多样化的操作,有利于实现自动化操作。此外,由于液滴是封闭空间,因此可以抑制内容物的挥发性(补充表 2),有利于在介质14中存在挥发性物质时进行微生物的长期培养和适应性进化。这在摇瓶和微孔板中很难实现。
但是,协议中的某些关键点值得强调。首先,应该注意的是,MMC测量的OD值与分光光度计的OD值不同,因为它们的OD测量的光程长度不同(分别为1 mm和10 mm)。因此,当比较MMC的OD值与摇瓶的OD值时,有必要测量校准曲线13。幸运的是,自适应进化过程不需要校准曲线,因为我们关注的是增长曲线之间的相对趋势。接下来,某些微生物在MMC中未被培养。液滴依靠油水界面23的表面张力来保持稳定性。如果微生物产生某些物质,破坏油水界面的表面张力,如一些枯 草芽孢杆菌 菌株产生表面活性剂24,则液滴不能保持稳定性。此外,如果介质本身是液滴生成的障碍,则在MMC中使用是不可行的,例如,非常粘稠的介质或含有大颗粒的介质。目前,我们在MMC中成功培育的种类包括 大肠杆菌、 植物乳杆菌、 谷氨酸棒状杆菌、酵母菌、 引端甲基杆菌、米曲 霉、微藻等。建议在MMC中培养菌株进行初步实验。最后,芯片、试剂瓶和MMC之间的连接器和端口必须严格按照协议进行连接。否则,细菌溶液可能会流入MMC并污染内部。此外,必须指出的是,由于亚培养操作所需的时间,MMC目前的吞吐量有限(0-200)。未来,我们将优化控制软件和芯片尺寸,以缩短时间并提高吞吐量。由于MMC是一个模块化系统,因此只需要更换相关部件或软件,而无需更换新设备。
目前,MMC不仅可以进行生长曲线测量、自适应实验室演化、单因素多级分析,还可以定制不同的液滴操作程序,以满足实验需求。未来,需要进一步丰富MMC系统的应用功能,以应对微生物研究的不同需求,如进行多因子多级正交实验,多样品自动采样技术,同时测量多种细菌物种的生长曲线,并准确检测和控制更多的参数(例如溶解氧(DO)和pH值)。同时,还需要在微生物学领域开发更多的功能,将MMC应用到更实际的场景中,如优化培养基组成、测定最小抑制浓度(MIC)、微生物共培养25等。
作者没有什么可透露的。
本研究得到了国家重点研发计划(2018YFA0901500)、国家自然科学基金国家重点仪器设备专项(21627812)和清华大学自主研发计划(20161080108)的支持。我们还感谢Julia A. Vorholt教授(苏黎世联邦理工学院生物学系微生物研究所,苏黎世联邦理工学院,苏黎世8093,瑞士)提供甲醇必需 的大肠杆菌 菌株2.2版(MeSV2.2)。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 μm PVDF filter membrane | Merck Millipore Ltd. | SLGPR33RB | Sterilize the MMC oil |
4 °C refrigerator | Haier | BCD-289BSW | For reagent storage |
Agar | Becton, Dickinson and Company | 214010 | For solid plate preparation |
CaCl2·2H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 20011160 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Clean bench | Beijing Donglian Har Instrument Manufacture Co., Ltd. | DL-CJ-INDII | For aseptic operation and UV sterilization |
CoCl2·6H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 10007216 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Computer | Lenovo | E450 | Software installation and MMC control |
Constant temperature incubator | Shanghai qixin scientific instrument co., LTD | LRH 250 | For the microbial cultivation using solid medium |
CuSO4·5H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 10008218 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Electronic balance | OHAUS | AR 3130 | For reagent weighing |
EP tube | Thermo Fisher | 1.5 mL | For droplet collection |
FeCl3·6H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 10011928 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Freezing Tube | Thermo Fisher | 2.0 mL | For strain preservation |
Gluconate | Sigma-Aldrich | S2054 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Glycerol | GENERAL-REAGENT | G66258A | For strain preservation |
High-Pressure Steam Sterilization Pot | SANYO Electric | MLS3020 | For autoclaved sterilization |
isopropyl-β-d-thiogalactopyranoside (IPTG) | Biotopped | 420322 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Kanamycin sulfate | Solarbio | K8020 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
KH2PO4 | MACKLIN | P815661 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Methanol | MACKLIN | M813895 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
MgSO4·7H2O | BIOBYING | 1305715 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Microbial Microdroplet Culture System (MMC) | Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd. | MMC-I | Performing growth curve determination and adaptive evolution. Please refer to http://www.tmaxtree.com/en/index.php?v=news&id=110 |
Microfluidic chip | Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd. | MMC-ALE-OD | For various droplet operations. Please refer to http://www.tmaxtree.com/en/ |
MMC oil | Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd. | MMC-M/S-OD | The oil phase for droplet microfluidics. Please refer to http://www.tmaxtree.com/en/ |
MnCl2 | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 20026118 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
NaCl | GENERAL-REAGENT | G81793J | Component of the LB medium |
Na2HPO4·12H2O | GENERAL-REAGENT | G10267B | Component of the special medium for MeSV2.2. |
NH4Cl | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 10001518 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Petri dish | Corning Incorporated | 90 mm | For the preparation of solid medium |
Pipette | eppendorf | 2.5 μL, 10 μL, 100μL, 1000μL | For liquid handling |
Quick connector A | Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd. | — | For the connection of each joint. Please refer to http://www.tmaxtree.com/en/ |
Reagent bottle | Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd. | MMC-PCB | Sampling and storage of bacteria solution and reagents. Please refer to http://www.tmaxtree.com/en/ |
Shake flask | Union-Biotech | 50 mL | For microbial cultivation |
Shaking incubator | Shanghai Sukun Industrial Co., Ltd. | SKY-210 2B | For the microbial cultivation in shake flask |
Streptomycin sulfate | Solarbio | S8290 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Syringe | JIANGSU ZHIYU MEDICAL INSTRUCTMENT CO., LTD | 10 mL | Draw liquid and inject it into the reagent bottle |
Syringe needle | OUBEL Hardware Store | 22G | Inner diameter is 0.41 mm and outer diameter is 0.71 mm. |
Tryptone | Oxoid Ltd. | LP0042 | Component of the LB medium |
Ultra low temperature refrigerator | SANYO Ultra-low | MDF-U4086S | For strain preservation (-80 °C) |
UV–Vis spectrophotometer | General Electric Company | Ultrospec 3100 pro | For the measurement of OD values |
Vitamin B1 | Solarbio | SV8080 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
Yeast extract | Oxoid Ltd. | LP0021 | Component of the LB medium |
ZnSO4·7H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co., Ltd. | 10024018 | Component of the special medium for MeSV2.2. |
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ISSN 2578-2614
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