Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin tarafından (Grant No 31400936, 31460260) destek verdi ve doğal Bilim Vakfı, Jiangxi eyaletinin Çin (20171BAB215020). Biz de Nanchang üniversite ve Queen Mary University of London arasındaki ortak program bu eser destek için teşekkür ederiz.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve kullanım Komitesi Nanchang Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. montaj malzemeleri ve Microtome bağlanmak
<ol><li>Parametre (ek Şekil 1) gereksinimleri başına tasarım.</li>
	<li>Akrilik panoları üretimi için yerel bir fabrika için parametre gönderin.</li>
	<li>Tüm parçaları sırayla birleştirin: kloroform 7 ticari akrilik panoları bir tanka bir bölüm kanal ve su ile banyo (Şekil 1) birleştirmek için kullanın. Dikkat: ışık ve oksijen karşılaştığında kloroform toksik maddeler üretir. Cihaz bir duman başlıklı bir araya getirin.</li>
	<li>Borulu elektrikli ısıtma elemanı delikten akrilik Kurulu #1 (Şekil 2A, ok ucu) yükleyin.</li>
	<li>Sıcaklık denetleyicisi yüklemek için küçük bir delik bir elektrikli matkap kullanarak #2 akrilik tahtada oluşturmak ve sıcaklık dedektörü (Şekil 2A, ok) yükleyin. Bir dijital termostat tank (Şekil 2A) yükleyin. Not: Sıcaklık dedektörü su yüzeyinin altında 1 cm olmalıdır.</li>
	<li>Güç erişim sağlamak için gerilim altında 24 V ekipman açmadan önce ayarlayın.</li>
	<li>Microtome bölümü atık tepsisini çıkarın.</li>
	<li>Bölümleri kanal tarafsız silikon dolgu macunu (Şekil 2B) ile microtome bıçak sahibi ile bağlantı. Not: eski bıçak kolayca değiştirilir, böylece herhangi bir nötr silikon dolgu macunu bıçağın üstündeki yukarıda smear değil.</li>
	<li>Kloroform ve tarafsız silikon dolgu macunu zaman kuvvetlendirmek için izin vermek için bir gecede kuru.</li>
	<li>Bıçak bıçak sahibine yükleyin. Su su banyosu (Şekil 2C) dökün. Su yüzeyinin sadece bıçak (Şekil 2B, ok başı) üstündeki dokunmatik gerekir.</li>
</ol>2. parafin kesit
Not: Enkaz kez üst veya alt kenarlarını mum blok ve su yüzeyi üzerinde birikir. Bu enkaz düzenli olarak temizlenmiş olmalıdır.
<ol><li>
Geleneksel parafin10kesit gerçekleştirin.
	<ol>
<li>Parafin gömülü numune üzerinde döner microtome kelepçe ve bıçak bıçak tutucu içinde yerleştirin.</li>
		<li>Çark açmak ve örnek bölüm.</li>
		<li>Parafin kesitli şerit 38,5 ° C sıcak su banyosu için transfer.</li>
		<li>Bölümler mikroskop üzerine su yüzeyinden unfolding sonra slayt alın.</li>
		<li>Slayt 42 ° c fırında gecede kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Geliştirilmiş parafin (Şekil 3) kesit
	<ol>
<li>Ekipman açın.</li>
		<li>Kalorifer sıcaklık algılama anahtarı ile açın ve hedef sıcaklık 40.0 ° c önceden sıcak su 1 h için 38,0 ° C arasında ayarlayın.</li>
		<li>Parafin katıştırma tarafından alınan parafin blok değiştirmek; sonra parafin blok microtome'nın kaset kelepçe üzerinde yerleştirin ve kilitle. Not: Parafin blok üst ve AST sınırları bir ark şekillendirme ve dar bölümleri kanalı ile akış yapamaz hale bölüm şerit önlemek için yatay olarak değiştirilmesi gerekir.</li>
		<li>Hızlı bir şekilde örnek kesme kalın bölümler tarafından yaklaşım.</li>
		<li>Uygun bölümü kalınlığı (10 µm yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler ve embriyo fare beyni, zebra balığı gözler için 4 µm) için ayarlayın. Çark açmak ve bölümleri kanal ve banyo bölümleri otomatik olarak girer.</li>
		<li>Numune yavaş ve düzgün kesme Darbedeki (Şekil 3A) bölüm. Not: çark birkaç dakika durdu sonra değiştirilmiş ilk bölümünün Thethickness. Bölümleri üst üste çizik olduğunda tek kullanımlık bıçaklar değiştirilmelidir.</li>
		<li>Bölümleri bir satırda (Şekil 3B, 3 C) yüzmek için banyo odası deliklere. Not: baş kısmındaki odası duvara yapışır, yüzen tutmak için bir fırça kılavuzu kullanın.</li>
		<li>Bölümler mikroskop slayta uygun. Bölümlerden sonra tamamen su banyosunda ayrı birkaç bölüm cımbız ile açılmak. O zaman Seç onları--dan mikroskop slayta (şekil 3D) su banyosu. Not: Bu bölüm kanal ve su banyosu ön henüz tam olarak gelişeceğini olmayacak gibi bölümler su banyosu, arka çekilmesi gereken.</li>
		<li>Slaytları gecede 42 ° C fırında yerleştirerek kuru. Slaytları sonra oda sıcaklığında süresiz olarak depolanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hematoksilen-eozin (HE) geliştirilmiş Yöntem8değerlendirilmesi uğruna boyama kullanın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography.">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li><li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+Computer-aided+jet-based+3D+tissue+engineering.">Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryosectioning+tissues.">Cryosectioning tissues.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).</li><li>Viebahn, C., Luttenberg, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+anti-roll+plate+as+a+remedy+for+the+ill-effects+of+electrical+charge+during+cryosectioning.">A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).</li><li>Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+completely+automated+tissue-sectioning+machine+for+paraffin+blocks.">Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).</li><li>Sabaliauskas, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+zebrafish+histology.">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li><li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid-Cut:+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples.">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).</li><li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles.">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis.">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies.">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li><li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification.">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).</li><li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus.">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).</li><li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD163:+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples.">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li><li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets.">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).</li></ol>

Yazarlar bu aygıt üzerinde bir patente sahip ve hiçbir rakip ilgi bildirin.

Parafin bölüm morfoloji artırmak ve geleneksel parafin kesit sırasında harcanan zaman sorunu çözmek için biz bir geliştirilmiş parafin kesme ve unfolding birleştirir yöntemi kesit oluşturdu. Bu geliştirilmiş Yöntem bir bölüm kanal, bir su banyosu ve sıcaklık algılama anahtarı ile bir ısıtıcı oluşmaktadır basit ekipman kullanır. Bölüm şerit bölüm kanal üzerinden su banyosu girer ve otomatik olarak kesme sırasında yaşanıyor. Bu nedenle, bu yöntem kalite ve verimlilik, Yetişkin fare ...

Morfolojik biyolojik araştırmada önemli bir çalışmadır. Yeni teknoloji hedeflerine doğrudan doğruya--dan tüm doku veya organizmalar1,2,3ince bölüme, numune kesme, boyama tarafından takip gözlemlemek araştırmacılar sağladı rağmen birincil kalır yöntemi fornot tek doku morfoloji aynı zamanda protein dokuda doğrudan hedefleme. Işık mikroskobu üç bölüm türlerini kullanır: Parafin, dondurulmuş ve semithin. Cryosectioning doku antigenicity korumak için ortak ve numune hazırlama basittir, tutulan doku morfoloji yoksul ve ince parça4,5için uygun olsa da. Parafin kesit iyi korunmuş morfoloji sergilenmesi için en sık kullanılan yöntemdir. Numuneler tamamen susuz ve balmumu içinde gömülü olarak, parafin blok süresiz olarak saklanır. Buna ek olarak, parafin kesit biyolojik sonda erişimi daha fazla deneylerde geliştirmek ve hücre katmanı bindirme Z yönünde azaltmak ince kesitler üretir.
Ancak, geleneksel parafin kesit sıkıcı ve Operatör beceri gerektirir. Parafin kesitler fiksasyon, dehidratasyon, gömme, kesme ve yüzen tabi. Önemlisi, Bölüm şeritler bıçaklıklı su banyosu aktarma gerekli ama zor junior operatörleri için. Özellikle kuru hava, Bölüm şeritler statik elektrik nedeniyle kandıracak ve sıcak su yüzeyine açılmak zordur. Bölüm geliştirmek için kalite maruz doku yüzeyi arasında microtome bıçak geçer, onları buzlu suda çeker veya nem microtome yakınındaki bir nemlendirici ile yükselterek mum blok soğutma nemlendirme,6,7 tavsiye edilir . Parafin kesit geliştirmek için yeni yöntemler hibrid parafin katıştırma, cryosectioning8ve ticari bölüm transfer sistemi Yardım9içerir. Her ne kadar bu yöntemler kısmen parafin geliştirmek hız ve kalite, kesit kesit çok daha ağır yapmak ve ticari bölüm aktarma sistemleri pahalıdır.
Bu protokol için bir döner microtome blade sahibine bağlı basit, ucuz ve esnek ekipman adım adım oluşturmak nasıl gösterir. Bu cihaz bir bölüm kanal, bir su banyosu ve bir ısıtıcı bir sıcaklık algılama anahtarı ile oluşur. Kesme sonra bölümleri düzinelerce bölüm kanal akışı ve böylece otomatik olarak elinde tutmasına doğrudan, su banyosu girin. Bu parafin kesit verimliliğini artırır ve bu teknoloji daha uygun hale getirir. Bu yöntem, daha yetişkin fare hipokampal bölümleri, Yetişkin fare böbrek bölümler, embriyonik 15.5 bayat (E15.5) fare beyin bölümleri ve bölümler daha kısa sürede hasat ve morfolojik daha sağlam kaldı yetişkin zebra balığı göz kullanarak. Bu yöntem, Bölüm ayrım kaybı kaçınırken hızlandırılmış parafin kesit gerektiren diğer doku örnekleri için de kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Incubator</td><td>Boekel Scientific</td><td>133000-2</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Xylene&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>Heated Paraffin Embedding Module</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Commercial acrylic board</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trichloromethane</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>Tubular electric heating element(12 V 200 W)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Temperature controller(12 V 120 W)</td><td>Mingsuo</td><td>XH-W3002</td><td></td></tr><tr><td>Rotary microtome&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neutral silicone sealant</td><td></td><td></td><td>Link the water channel with the microtome knife holder</td></tr><tr><td>Voltage transformer</td><td>Dearll</td><td>S-250-12</td><td></td></tr><tr><td>Disposable blade</td><td>Accu-Edge</td><td>4689</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Eosin&amp;nbsp;</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Microslide</td><td>Sail Brand</td><td>7105</td><td></td></tr><tr><td>Neutral balsam</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip&amp;nbsp;</td><td>Citoglas</td><td>10212424C</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>Xilong Chemical</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>Water bath for paraffin sections</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HistoCore Arcadia C&amp;nbsp;- Cold Plate</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>paraffin repellent spray&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990420</td><td></td></tr></tbody></table>

the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning

Parafin gömülü dokusunun kesit Histoloji ve patoloji yaygın olarak kullanılır. Ancak, yorucu olabilir. Bu yöntem geliştirmek için çeşitli ticari şirketler karmaşık bölümüne transfer sistemleri sıvı su kullanarak tasarladılar. Bu teknoloji basitleştirmek için kesme ve basit bir termostatik odası içinde yüzen bir araya getiren ev yapımı donanımları kullanarak basit bir yöntem oluşturdu; Bu nedenle, bölümleri otomatik olarak su yüzeyine su banyosu girin. Hippocampus yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve yetişkin zebra balığı gözleri kesin karşılaştırma için geleneksel parafin kesit ve sunulan yöntem kullanarak. İstatistiksel analiz bizim geliştirilmiş Yöntem kurtarmak zaman ve yüksek kalite bölümleri üretilen gösterir. Buna ek olarak, kısa bir süre içinde bütün bir örnek parafin kesit junior operatörleri için kolaydır.

Geliştirilmiş Yöntem sağlam parafin bölümleri sayısı arttı. Yetişkin fare hipokampal doku, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve zebra balığı gözleri bu yeni yöntem test ettik. Su tankı için eklendi ve su sıcaklığı 38,0 ° C ile 40.0 ° c arasında devam edildi Bir seri olarak doku örnekleri hazırladıktan sonra onlar kesitli ve geleneksel kesit için karşılaştırıldığında. Yeni Yöntem bölümü kaybı kaçınılması ve yetişkin fare hipokamp...

Watch this Scientific Journal Video about The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning at JoVE.com

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

the-cutting-floating-method-for-paraffin-embedded-tissue-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.3K Görüntüleme.  Nanchang University. Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Video: The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been preserved, freshly removed, or excised but kept viable, as in slice preparations of brain tissue.  Subsequent microscopic studies of this material can be challenging, as the tissue samples may be difficult to handle.  Demonstrated here is a method for obtaining thin cryostat sections of tissue with a thickness that may range from 0.2-5.0 mm.  We routinely cut 400 micron thick Vibratome brain slices serially into 5-10 micron coronal cryostat sections.  The slices are typically first used for electrophysiology experiments and then require microscopic analysis of the cytoarchitecture of the region from which the recordings were observed.  We have constructed a simple device that allows controlled and reproducible preparation and positioning of the tissue slice.  This device consists of a cylinder 5 cm in length with a diameter of 1.2 cm, which serves as a freezing stage for the slice.  A ring snugly slides over the cylinder providing walls around the slice allowing the tissue to be immersed in freezing compound (e.g., OCT).  This is then quickly frozen with crushed dry ice and the resulting  wafer  can be position easily for cryostat sectioning.  Thin sections can be thaw-mounted onto coated slides to allow further studies to be performed, such as various staining methods, in situ hybridization, or immunohistochemistry, as demonstrated here.

The present method allows reproducible cryostat sectioning of small, difficult-to-manage, tissue pieces, such as biopsies and brain slices. We utilize a simple aluminum freezing stage to facilitate handling of tissue and a standard cryostat to routinely produce 5-10 micron serial sections from 400 micron thick brain slices.

Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been ...

Biyoloji

Protocol for HER2 FISH Using a Non-cross-linking, Formalin-free Tissue Fixative to Combine Advantages of Cryo-preservation and Formalin Fixation

Morphologic assessment of formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples has been the gold standard for cancer diagnostics for decades due to its excellent preservation of morphology. Personalized medicine increasingly provides individually adapted and targeted therapies for characterized individual diseases enabled by combined morphological and molecular analytical technologies and diagnostics. Performance of morphologic and molecular assays from the same FFPE specimen is challenging because of the negative impact of formalin due to chemical modification and cross-linking of nucleic acids and proteins. A non-cross-linking, formalin-free tissue fixative has been recently developed to fulfil both requirements, i.e., to preserve morphology like FFPE and biomolecules like cryo-preservation. Since FISH is often required in combination with histopathology and molecular diagnostics, we tested the applicability of FISH protocols on tissues treated with this new fixative. We found that formalin post-fixation of histological sections of non-cross-linking, formalin-free and paraffin-embedded (NCFPE) breast cancer tissue generated equivalent results to those with FFPE tissue in human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) FISH analysis. This protocol describes how a FISH assay originally developed and validated for FFPE tissue can be used for NCFPE tissues by a simple post-fixation step of histological sections.

Fluorescence in-situ hybridization (FISH) is often required in combination with histopathology and molecular diagnostics for selection of therapy in personalized medicine. A novel non-cross-linking, formalin-free tissue fixative that allows high quality morphologic, molecular and FISH analyses from the same specimen by addition of a post-fixation step before FISH is presented.

HER2 için iletişim kuralı balık bir çapraz bağlama, Formalin ücretsiz doku sabitleştirici Cryo-koruma ve Formalin fiksasyon avantajları birleştirmek için kullanma

Morphologic assessment of formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples has been the gold standard for cancer diagnostics for decades due to its ...

Kanser Araştırmaları

Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and sectioning of intact microbial colony biofilms using perfused paraffin wax. To adapt this method for use on colony biofilms, we developed techniques for maintaining each sample on its growth substrate and laminating it with an agar overlayer, and added lysine to the fixative solution. These optimizations improve sample retention and preservation of micromorphological features. Samples prepared in this manner are amenable to thin sectioning and imaging by light, fluorescence, and transmission electron microscopy. We have applied this technique to colony biofilms of Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas synxantha, Bacillus subtilis, and Vibrio cholerae. The high level of detail visible in samples generated by this method, combined with reporter strain engineering or the use of specific dyes, can provide exciting insights into the physiology and development of microbial communities.

We describe fixation, paraffin embedding, and thin sectioning techniques for microbial colony biofilms. In prepared samples, biofilm substructure and reporter expression patterns can be visualized by microscopy.

Parafin gömme ve ince mikrobiyal koloni biyofilmler mikroskobik analizlerin yapıldığı için kesit

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Fare Yumurtalık Yağ Pad içine Transplantasyon

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Tıp

Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the multicellular interactions of native tissue. Tissue&#160;slices immediately cut from freshly resected tumors preserve spatial aspects of intratumor heterogeneity (ITH), thus making them useful surrogates of in vivo biology. Careful optimization of tissue slice preparation and cultivation conditions is fundamental for the predictive diagnostic potential of tumor slice explants. In this regard, murine models are valuable, as these provide a consistent flow of tumor material to perform replicate and reproducible experiments. This protocol describes the culturing of murine lung tumor-derived tissue slices using a rotating incubation unit, a system that enables intermittent exposure of tissues to oxygen and nutrients. Our previous work showed that the use of rotating incubation units improves the viability of tissue compared to other culture methods, particularly floating slices and stagnant filter supports. Here, we further show that slice thickness influences the viability of cultured slices, suggesting that optimization of slice thickness should be done for different tissue types. Pronounced ITH in relevant oncogenic functions, such as signaling activities, stromal cell infiltration or expression of differentiation markers, necessitates evaluation of adjacent tissue slices for the expression of markers altered by drug treatment or cultivation itself. In summary, this protocol describes the generation of murine lung tumor slices and their culture on a rotating incubation unit and demonstrates how slices should be systematically analyzed for the expression of heterogeneous tissue markers, as a prerequisite prior to drug response studies.

We provide a method for the generation, cultivation and systematic analysis of organotypic slices derived from murine lung tumors. We also describe how to optimize for slice thickness, and how to select drug concentrations to treat tumor slices.

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a mixed cell population in a structured architecture that impacts function, and human islets are widely variable in cell type composition. Current frequently used methods to study cultured islets include molecular studies performed on whole islets, lumping disparate islet cell types together, or microscopy or molecular studies on dispersed islet cells, disrupting islet architecture. For in vivo islet studies, paraffin-embedded pancreas sectioning is a powerful technique to assess cell-specific outcomes in the native pancreatic environment. Studying post-culture islets by paraffin sectioning would offer several advantages: detection of multiple outcomes on the same islets (potentially even the exact-same islets, using serial sections), cell-type-specific measurements, and maintaining native islet cell-cell and cell-substratum interactions both during experimental exposure and for analysis. However, existing techniques for embedding isolated islets post-culture are inefficient, time consuming, prone to loss of material, and generally produce sections with inadequate islet numbers to be useful for quantifying outcomes. Clinical pathology laboratory cell block preparation facilities are inaccessible and impractical for basic research laboratories. We have developed an improved, simplified bench-top method that generates sections with robust yield and distribution of islets. Fixed islets are resuspended in warm histological agarose gel and pipetted into a flat disc on a standard glass slide, such that the islets are distributed in a plane. After standard dehydration and embedding, multiple (10+) 4 - 5 &#181;m sections can be cut from the same islet block. Using this method, histological&#160;and immunofluorescent analyses can be performed on mouse, rat, and human islets. This is an effective, inexpensive, time-saving approach to assess cell-type-specific, intact-architecture outcomes from cultured islets.

Ex vivo pancreatic islet studies are important for diabetes research. Existing techniques to study cultured islets in their native 3-dimensional architecture are time consuming, inefficient, and infrequently used. This work describes a new, simple, and efficient method for generating high-quality paraffin sections of whole cultured islets.

Pankreas adacık parafin kesitler için katıştırma

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

<meta charset="utf8"></head><body>Düşük Mortalite ve Minimal Adezyon ile Optimize Edilmiş İnce Endometrium Fare Modeli

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory treatment options are still urgently needed. Several animal models of TE have been developed, but the mouse model involving abdominal surgery and injection of 95% ethanol presents a formidable challenge due to the high mortality rate and risk of intrauterine adhesions if not performed correctly. Here, we describe a detailed protocol that produces reliable and reproducible TE with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus with varying infusion times. The results showed that all of the mice successfully developed TE with infusion times ranging from 1-3 min, characterized by a typical reduction in endometrial thickness and the number of glands, as well as excessive endometrial fibrosis. These findings suggest that this mouse model is suitable for studying thin endometrium and can serve as a platform for developing future TE treatments.

<meta charset="utf8"></head><body>İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

This article describes a detailed protocol for producing a reliable and reproducible thin endometrium with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus within 1-3 min.

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit

HER2 için iletişim kuralı balık bir çapraz bağlama, Formalin ücretsiz doku sabitleştirici Cryo-koruma ve Formalin fiksasyon avantajları birleştirmek için kullanma

Parafin gömme ve ince mikrobiyal koloni biyofilmler mikroskobik analizlerin yapıldığı için kesit

Fare Yumurtalık Yağ Pad içine Transplantasyon

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Pankreas adacık parafin kesitler için katıştırma

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması