Bu araştırma [kısmen] Intramural araştırma NIH, Ulusal Enstitüsü Çevre Sağlık Bilimleri Program tarafından desteklenmiştir. İstatistiksel analiz için özel Shyamal Peddada teşekkürler. Biz de Humphrey Yao, Gary kuş ve Yuki Arao incelenmesi bu el yazması ve Franco St onun sürekli destek ve tavsiyeler için teşekkür etmek istiyorum.

Tüm işlemleri fare çekirdek dışarı NIEHS Knock tesisin normal çalışma kapsamında yapıldı. Bütün fareler bir 12:12 tarihinde tutulan s açık: koyu döngüsü ve bir diyet NIH-31 ve su besleme ad libitum. Tüm deneylerin hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Ulusal Çevre Sağlık Bilimler Enstitüsü uygun olarak yapıldı.
1. hayvan hazırlık
<ol><li>Doğurmak donör fareler, B6 (Cg)-Tyr < c-2J > /J dişi fareler, 8-10 hafta-in yaş B6 için doğal olarak (Cg)-Tyr < c-2J > /J erkek fareler arasında 8 ve 26 hafta-in yaş. Fişler görsel olarak ertesi sabah (E0.5) kontrol edin.</li>
	<li>Alıcı fareler, İsviçreli kadın fareler 6 ve 9 hafta-in yaş arasında doğal olarak vasectomized İsviçre Webster erkek fareler için yetiştirilmiş Webster doğurmak. Fişler görsel olarak ertesi sabah (E0.5) kontrol edin.</li>
</ol>2. ES Hücre hazırlık
<ol><li>129-derieved AB2.2 ES hücreler için 15 ile desteklenmiş DMEM hücrelerde kültür % FBS, % 1 glutamin, %1 Penn/strep ve % 0.1 β-mercaptoethanol. ES Hücre tedarikçinin yönergeler, onların önerilen protokolleri kullanarak başına diğer tüm ES hücre kültür.</li>
</ol>3. embriyo koleksiyonu
<ol><li>
Hayvan diseksiyon
	<ol>
<li>Birkaç 60 mm yemekleri, yaklaşık 1 5 fare artı 10 mL patlama koleksiyonu medya (BCM) ile 3 ekstra hazırlamak (% 10 FBS inç DMEM), ve iyi bir 4 çanak ile 0.5 mL BCM de başına. 37 ° C, % 5 CO2equilibrate.</li>
		<li>B6 ötenazi (Cg)-Tyr < c-2J > /J dişi fareler, CO2 boğulma, % 10 debi ile kullanarak E3.5.</li>
		<li>Ötenazi sonra fareyi sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve karın % 70 etanol ile iyice ıslak.</li>
		<li>Sadece, deri yoluyla ilk kesi kadar geniş açılış yapma karın, orta noktasını yaptırın. Sonraki yeniden yapım belgili tanımlık kesme mümkün olduğu kadar geniş karın duvarından açın. Not: iki adımda bunu azaltmak veya kürk kirlenme ortadan kaldırmak yardımcı olur.</li>
		<li>Yumurtalık, ovidukt ve rahim, yağ dokusu minimumda tutmak için ekstra bakım alarak bir yumurtalık başlangıç ve yumurtalık yağ yastığı künt forseps ile tutarak dikkatle çıkarın. Rahim bir tek birim olarak veya aşağıdaki yöntemde bir değişiklik ile bireysel boynuzları olarak kaldırın.</li>
		<li>Kaldırıldıktan sonra rahim patlama toplama ortamı içeren bir 60 mm çanak yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Embriyo kaldırma
	<ol>
<li>BCM ile dolu bir 10 mL şırınga hazırlamak ve bir 25 G iğne ile uygun.</li>
		<li>Her seferinde bir rahim BCM holding çanak çıkarıp, onları aşırı kan kaldırmak ve düşük bir büyütme diseksiyon mikroskop altında 60 mm tabak içinde yerleştirmek için bir doku üzerinde leke.</li>
		<li>Dikkatlice ve yavaşça rahim distal sonuna (ovidukt) hemen altında tutarak forseps diseksiyon ile paralel bir uçak mümkün olduğunca olarak iğnede rahmine ortasına yerleştirin. Forseps ipuçları ötesinde iğne yerleştirin.</li>
		<li>İğne için rahim tutulacağı pensler biraz baskı uygulamak ve yaklaşık 1 mL BCM ile rahim boynuz sınırdışı. Not: şırınga üzerinde çok fazla baskı medya, kontrol edilemeyen bir akışı neden olur bu adımda kez çanak bırakarak özen göstermelidir.</li>
		<li>Rahim, 60 mm çanak, başına en fazla 5 bütün uteri kızarma sonra çanak koleksiyonu kadar da kuluçka makinesine koyun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Embriyo koleksiyonu
	<ol>
<li>Bir el çekilmiş Cam Pipet ve ağzını pipet cihazlar kullanarak, blastokistlerin 25 X ve 35 X arasında parçalanmış bir kapsam altında toplamak. (Şekil 1). Not: Ağız pipet aparatı 30-40 cm esnek boru oluşur, 5 mm altında kimlik eklemek bir 1 000 µL pipet ucu, ilk tek bir amaç için nokta ve içindeki Cam Pipet yapıştırmayın. Bir ekli 1 cc şırınga varil, bir ağız parçası hareket etmek hiçbir pistonu ile diğer ucunu bir şırınga filtre ekleyin.</li>
		<li>Bulaşık kuluçka makinesi--dan kaldırma ve bir ızgara deseni kullanılarak yemek embriyolar için her bölümünü inceleyin. Embriyo aldı tek tek yukarı ve yer üstünde BCM ikincil bir tabak içinde damla.</li>
		<li>Tüm yemekler toplama sonra embriyo bir kez daha taze BCM bir düşüş yıkama ve enjeksiyon beklemek üzere 4 iyi çanak içinde yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. embriyo enjeksiyon
<ol><li>ES hücreleri tek tek enjeksiyon iğneyi onayı ile seç.<ol>
<li>5-7 mL enjeksiyon medya ekleyerek bir enjeksiyon yemek hazırlamak (DMEM, %10 FBS ve 20 mM HEPES) bir cam alt enjeksiyon yemek için. İğne oda sıcaklığında yapılır.</li>
		<li>Bir hava veya yağ microinjector kullanarak, ES Hücre çizmek için enjeksiyon iğne vakum uygulanır. Hücreler arasında mümkün olduğunca az yer olarak tutmak için dikkat ediniz. Burada ya da enjeksiyon adım ES hücreleri saymak.</li>
		<li>Orta ve küçük boyutlu hücreler, pürüzsüz bir yüzey ile boşluklar gibi bariz hataları olmadan genel nüfusa göre ES hücreleri seçin. Not: ES Hücre popülasyonlarının büyük ölçüde morfolojik kalitesinde değişir ve kullanılan standartlar onlarla ayarlamanız gerekebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Embriyo yaklaşık 15 ES hücrelerle (Şekil 1) enjekte.<ol>
<li>Holding pipet eklemek ipucu için ikinci bir hava microinjector ve açılış sahibinin yakınındaki bir embriyo konumlandırın. Embriyo sahibi için güvenli için vakum uygulanır.</li>
		<li>Z ekseni için böylece embriyo sadece iyi zona üzerinde odaklanarak takip slayt, dokunuyor holding pipet yukarı veya aşağı taşıyarak ayarlayın. Ardından, ES hücrelerdir ucuna yakın odak enjeksiyon iğne Z ekseni ayarlayın.</li>
		<li>Embriyo şimdi hafifçe üst veya alt, ICM istediğiniz konuma koymak için dönen enjeksiyon iğne iterek ayarlayın.</li>
		<li>Zona ve ICM veya firma ama kontrollü push kullanarak trofoblast, enjeksiyon iğne yerleştirin. Microinjector enjeksiyon iğne blastocoel çöken düşük tutmak için hafif bir basınç uygulayın.</li>
		<li>Bir kez iğne blastocoel nüfuz, ES Hücre embriyo blastocoel için aktarmak için microinjector gelen basınç uygulayın. Basınç embriyo hücreleri tutarken, normale dönmek için izin vermek için embriyo çıkmak Duraklat kısaca iğne eğimi olarak başlar. Not: Başvuru grubu ES hücreleri normalde enjekte edildi, geleneksel bir ES takip enjeksiyon Protokolü9ICM dokunmamaya dikkat çekici, hücre. ES hücreleri de iğne doğrudan aracılığıyla ICM (TICM) (Şekil 2Tamamlayıcı film) iterek ICM yoluyla enjekte edildi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. eEmbryos devri
<ol><li>Transfer embriyoların İsviçre Webster farelere, E2.5, üretim prosedürleri başına bir cerrahi olmayan embriyo transferi aygıtı kullanarak. Cerrahi olmayan bu yordam herhangi bir anestezi veya özel ameliyat sonrası bakım gerektirir. Tek tek embriyo ve teslim ve sonraki sütten kesme yoluyla transferden sonra evi fareler.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Cong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Genome+Engineering+Using+CRISPR/Cas+Systems.">Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems.</a> Science. 339 (6), 819-823 (2013).</li><li>Mali, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-guided+human+genome+engineering+via+Cas9.">RNA-guided human genome engineering via Cas9.</a> Science. 339 (6), 823-826 (2013).</li><li>Friedel, R., Seisenberger, C., Kaloff, C., Wurst, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EUCOMM+the+European+Conditional+Mouse+Mutagenesis+Program.">EUCOMM the European Conditional Mouse Mutagenesis Program.</a> Brief Funct Genomic Proteomic. 6 (3), 180-185 (2007).</li><li>Austin, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36 (9), 921-924 (2004).</li><li>Coleman, J. L., Brennan, K., Ngo, T., Balaji, P., Graham, R. M., Smith, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Knockout+and+Reporter+Mouse+Line+Generation+and+Breeding+Colony+Establishment+Using+EUCOMM+Conditional-Ready+Embryonic+Stem+Cells:+A+Case+Study.">Rapid Knockout and Reporter Mouse Line Generation and Breeding Colony Establishment Using EUCOMM Conditional-Ready Embryonic Stem Cells: A Case Study.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 30, 105 (2015).</li><li>Nagy, A., Rossant, J., Nagy, R., Abramow-Newerly, W., Roder, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+completely+cell+culture-derived+mice+from+early-passage+embryonic+stem+cells.">Derivation of completely cell culture-derived mice from early-passage embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (18), 8424-8428 (1993).</li><li>Eggan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+and+female+mice+derived+from+the+same+embryonic+stem+cell+clone+by+tetraploid+embryo+complementation.">Male and female mice derived from the same embryonic stem cell clone by tetraploid embryo complementation.</a> Nat Biotechnol. 20 (5), 455-459 (2002).</li><li>Eggan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+vigor,+fetal+overgrowth,+and+viability+of+mice+derived+by+nuclear+cloning+and+tetraploid+embryo+complementation.">Hybrid vigor, fetal overgrowth, and viability of mice derived by nuclear cloning and tetraploid embryo complementation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (11), 6209-6214 (2001).</li><li>Eakin, G. S., Hadjantonakis, A. K., Papaioannou, V. E., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+potential+and+behavior+of+tetraploid+cells+in+the+mouse+embryo.">Developmental potential and behavior of tetraploid cells in the mouse embryo.</a> Dev Biol. 288 (1), 150-159 (2005).</li><li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+production+of+mice+from+embryonic+stem+cells+injected+into+four-+or+eight-cell+embryos+by+piezo+micromanipulation.">Efficient production of mice from embryonic stem cells injected into four- or eight-cell embryos by piezo micromanipulation.</a> Stem Cells. 26 (7), 1883-1890 (2008).</li><li>Poueymirou, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F0+generation+mice+fully+derived+from+gene-targeted+embryonic+stem+cells+allowing+immediate+phenotypic+analyses.">F0 generation mice fully derived from gene-targeted embryonic stem cells allowing immediate phenotypic analyses.</a> Nat Biotechnol. 25 (1), 91-99 (2007).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse embryo. , (2014).</li><li>Pease, S., Saunders, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advanced Protocols for Animal Transgenesis. , (2011).</li><li>Young, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+mechanical+stimulation+on+the+reprogramming+of+somatic+cells+into+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Effects of mechanical stimulation on the reprogramming of somatic cells into human-induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Res Ther. 8 (1), 139 (2017).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip.

Uzun ICM herhangi bir rahatsızlık ölüm, aslında, Şu anki blastosist mikroenjeksiyon protokolleri hala bu12,13uyarmak yol açabileceğini zannedildiği. Biz burada göstermiştir ne olduğunu mikroenjeksiyon ICM ile embriyo için zararlı değildir ve chimeras verimini artırır.
Böyle bir sonuç kesin mekanizması tanımlanmamış. Ancak, ICM ve eşlik eden hypoblast, mekanik bozulma ES Hücre entegrasyon mikroenjeksiyon takip yeni kurulan ICM insidansı artırmalıdır. İPSCs alanında son iş mekanik stimülasyon insan IPSC14kişi yeniden programlama yardımcı olduğunu göstermiştir. Mekanik işleme fare embriyo ICM içinde benzer bir etki varsa, bir potansiyel 'Başlangıç' blastosist donör kaldırma, pluripotent durumuna geri, ayırt etmek için potansiyel olarak başlayan ICM hücrelerinin dönme etkisi olabilir embriyonik doku oluşturan türetilmiş hücreler. Son olarak, ICM sonuçları enjeksiyon hücrelerde genetik olarak microinjected için rekabet düzeyini düşürücü ICM, sayısı bilinmeyen ölümüyle ES hücreleri değiştiren mümkündür.
Bu yöntem değişikliği birincil faydaları yok yeni öğrenme, sorun giderme veya ekipman gerekir vardır. Tüm teknikler standart blastosist enjeksiyon taşımak. En kritik adımlar da değişmeden kalır; embriyo ve öncesinde, sırasında ve sonra enjeksiyon embriyolar için uygun kültür koşulları uygun ve zamanında koleksiyonu. Ameliyatsız embriyo transferi tekniği kullanırken, uygun alıcı fare seçmek için daha kritik hale gelir. Cerrahi transferler ile cerrah uygun üreme devlet, doğrulamak için fareyi inceleyin fırsatınız oldu nerede ameliyatsız transferler ile bu mümkün değildir. Fareler ana üreme Çağı (6-9 hafta) olmalı ve sadece fare görünür fişleri ile kullanılmalıdır. Bu teknik en önemli unsuru ve tüm ES Hücre enjeksiyonları, ES Hücre kalitesidir.
Yüksek kaliteli, sağlam hücre hatları, ilgili bu teknik yalnızca en az fark verim, ancak satırları ile suboptimal ES hücre veya zor hatları ile çalışır, herhangi, hatta küçük iyileştirmeler önemli ve proje başarı arasındaki fark ve başarısızlık. Bu çalışma boyunca, birden fazla piyasada bulunan ES hücre satır germline chimeras oluşturulan ve neredeyse tüm germline chimeras üretilen ticari ES satırları TICM enjeksiyonları olduğunu belirtmek gerekirse da sağlar. Burada basit bir değişiklik tekniğinde önemli bir iyileşme verimlilik artışı, yeni ekipman için herhangi bir ek maliyetler üstlenmeden, eğitim veya hayvan kullanımı artan neden göstermiştir.

Yaklaşık 25 yıl için genetik olarak hedeflenen fareler oluşturulması genellikle bir darboğaz tarafından blastokistlerin ES Hücre mikroenjeksiyon aşamada chimeras verici germline üretimi için engel yavaş bir süreç olmuştur. Son gelişmeler, ES hücre ve yüksek üretilen iş ES hedefleme CRISPR/Cas91,2 de dahil olmak üzere hücre üretimi konsorsiyumlar KOMP gibi genetik olarak değiştirilmiş ES hücre üretimi/durumu düzeldi. Ancak, genetik olarak değiştirilmiş fare bu ES hücreleri3,4den oluştururken bir darboğaz germline chimeras nesil kalır. Yüksek işlem hacmi ES hücre üretimi projeleri germline chimeras başarılı oluşturulması için önemlidir ES Hücre kalitesi yüksek değişkenlik tarafından rahatsız olması. Ayrıca, yaygın olarak kullanılan ES Hücre satırlarından bazıları yüksek anöploidi ve germline yetkili chimeras5zor üretim için bilinir.
Fare ya da daha yüksek bir chimera oluşturmak için birçok yöntem geliştirilmiştir veya tamamen ES Hücre fareler6,7,8,9,10türetilmiş. Bu sistemlerin her biri kendi yararları olsa da, onlar da kendi eksiklikleri var. Verimsiz ve outbred satırları 5,6sınırlı iken % 100 ES Hücre üretme fareler, türetilmiş tetraploid chimeras kuşağıdır. Morula enjekte ederek yeni yöntemleri yüksek oranda chimeras, % 100, yaklaşan verim ama genel olarak önemli ek donanımları (lazerler ya da piezos) ve eğitim10,11gerektirir. Nerede bu teknikler zaten yerde laboratuvarlarda, bu yeni yöntem gerek kalmayabilir.
Bu çalışmanın amacı chimera üretme, sonraki fare koloni kurmak için mutant gen aktarımını germline olasılığını artırma oranı artırmak için ortak teknikleri ve hazır ekipman kullanan bir yöntem bulmak oldu.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ES Cell injection needle</td>
			<td>Humagen</td>
			<td>MSC-20-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSET device</td>
			<td>Paratechs</td>
			<td>60010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco (life technologies)</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Gibco (life technologies)</td>
			<td>10439-024</td>
			<td>lots should be individually tested for ES Cell compatibility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H0887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro manipulator</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Micro manipulator</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro injector</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>Cell Tram Air 5176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM IRB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 well dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>176740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6(Cg)-Tyr&#60;c-2J&#62;/J</td>
			<td>Jackson Labs, Bar Harbor, Maine, USA</td>
			<td>000058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Webster mice</td>
			<td>Taconic, USA</td>
			<td>Tac:SW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection Dish</td>
			<td>MatTek Corp.</td>
			<td>P50G-0-30-F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

trans-inner cell mass injection of embryonic stem cells leads to higher chimerism rates

Bir çaba ES Hücre metodolojileri ile genetik fareler oluşturulmasında verimliliğini artırmak için biz bir uyum geçerli blastosist enjeksiyon protokolü için mevcut. Burada basit bir rotasyon embriyo ve sızdırma Trans-iç hücre kütlesi (TICM) yoluyla chimeric % %31 50'si, hiçbir ek donanımları ile fareler yüzdesi arttı ya da daha fazla eğitim uzman raporu. 26 farklı klonlar yakın akraba evliliğinden doğan ve 35 toplam klonlar bir 9 ay boyunca enjekte edildi. Geleneksel enjeksiyon teknikleri ve TICM arasında anlamlı bir fark gebelik oranı veya embriyo iyileşme oranı oldu. Bu nedenle, enjeksiyon süreci ve blastosist basit bir konumlandırma ve ICM enjekte herhangi bir önemli değişiklik, ES Hücre blastocoel boşluğa bırakmadan potansiyel chimeric üretim ve sonraki miktar artırabilir germline iletim.

Hücre kültürünü rasgele etkisi olarak tedavi, karışık etkileri Doğrusal model (örneğin SAS (sürüm 9.2)) yazılımında verileri çözümlemek için kullanıldı. Her analiz embriyo transfer ve hücre sayısı için kontrollü. İkinci analiz de hayatta yavru sayısı için kontrol.
Bu çalışma için her ES hücre kültürünü ve klon her ikisi ile geleneksel enjekte ettiler ve TICM teknikleri, her embriyo sonra iki yöntem arasında geçiş yapma. Enjeksiyon sonra embriyo çanak üzerinde ayrılmış ve genellikle arasında alıcı erkek başına 12 ve 15 embriyo transferi göre gruplandırılmış. Açıkça görünür bir blastocoel yoktu embriyolar Zona pelusida yoksun veya nerede microinjected ES hücreleri blastocoel girmek başarısız oldu bu deneyden elendi.
İncelendiğinde ilk veri gebelik oranı oldu. Şekil 3' te gösterildiği gibi gebelik oranları kontrol grubundan TICM grubunda değiştirilmemiş. Ayrıca, bir eşit oranda ve yavrularını hayatta sütten kesmek için (P = 0,50, Şekil 4). En önemlisi, değişmeden kalır numarası ve yavrularını sütten kesme, fareler sayısı ise kat renk chimerism görüntüleme %31 TICM grubu için % 50 artış (p = 0,005, Şekil 5). Ceket renk chimerism derecesini çok subjektif Bu çalışmada değerlendirilecek ve gerçekten germline chimerism ilgili olarak kabul edildi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56955/56955fig1.jpg"> Şekil 1: uzman ekipman. (Sol) Enjeksiyon mikroskop Kur, (A) mikro manipülatörler ve (B) hücre tramvay hava gibi. (Sağ) Ağzını pipet aparatı, (C) çizilmiş cam pipet, (D) 1000µL pipet ucu, (E) boru, (F) filtre ve (G) şırınga ile namlu. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56955/56955fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56955/56955fig2.jpg"> Şekil 2: Blastokist embriyo enjeksiyon örneği. (A, B) Geleneksel enjeksiyon yöntemi, nerede ICM ile herhangi bir etkileşim kaçınarak ICM, karşısında enjeksiyon iğne girer. (C, D) TICM yöntemi, nerede enjeksiyon iğne ICM aracılığıyla doğrudan blastocoel için girer. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56955/56955fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56955/56955fig3.jpg"> Şekil 3: gebelik oranı. Gebelik oranı geleneksel (39/50) ve TICM (64/76) arasında anlamlı bir fark gösterdi. Ortalamalar artı standart hata ortalamaya (SEM). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56955/56955fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56955/56955fig4.jpg"> Şekil 4: Survival oranı. Sağkalım oranı sütten kesmek için hayatta pups sayısıdır olduğu yere vazgeçirmek için bir çöp. Yavrular sütten kesmek için hayatta değildi ve nerede hiçbir yavrular sütten kesmek için hayatta çöp bu verilerde dahil değildi. Ortalamalar artı standart hata ortalamaya (SEM). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56955/56955fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56955/56955fig5.jpg"> Şekil 5: Chimerism oranı. Chimeras üretilen ve chimerism kalitesini gidermez bu veriler sadece numarasını temsil eder. Geleneksel grubunda, % 31'i (34/110) belgili tanımlık çoluk çocuk chimerism, nerede TICM grup ortalama % 50 oranında (79/158) vardı gösterdi. Ortalama artı standart hata ortalamaya (SEM). <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56955/56955fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates at JoVE.com

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Burada yeni ekipman kullanmanıza gerek kalmadan chimera üretimi artırmak için bir iletişim kuralı mevcut. Enjeksiyon için embriyo basit yönlendirme değişikliği üretilen embriyo sayısını artırmak ve potansiyel olarak zaman çizelgesi germline iletim için azaltmak.

Trans-iç hücre embriyonik kök hücrelerin kitle enjeksiyon daha yüksek Chimerism oranları için yol açar.

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

trans-inner-cell-mass-injection-embryonic-stem-cells-leads-to-higher

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

10.1K Görüntüleme.  NIEHS/NIH. Burada yeni ekipman kullanmanıza gerek kalmadan chimera üretimi artırmak için bir iletişim kuralı mevcut. Enjeksiyon için embriyo basit yönlendirme değişikliği üretilen embriyo sayısını artırmak ve potansiyel olarak zaman çizelgesi germline iletim için azaltmak.

Video: Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Yeah, so I'm Lauren Deon. I'm in charge of the Human Amgen stem cell co facility at MGH. Yeah, so I'm Lauren, I'm in charge of the Human AM stem cell co facility at MGH.So I've been working with human Amgen stem cells for years now since I was a postdoc in George De Lab before, from four, four years. And so right now we have two cell lines, H one and H nine, which are both from Y cell. And so the way we are expanding or maintaining these cells in culture is by, at least the way we are splitting these cells is by using collagenous.So what I usually do is for the first few passage after throwing the cells, I use a technical, the picking colonies. So in this case, I can check under the microscope which colonies are good and differentiate and nice shape, and I will collect only these colonies and I will cut them in few pieces and put them back in, in a fresh flat. And the, the colonies that look kind of differentiate it are just left them alone.The other way to pass the cells is by using trypsin. So I don't use this technique here. I think collagenase is a little bit safer because human being stem cells don't like to be individualized or they don't like to be alone.So if you do trypsin, if you use trypsin for a little bit too long, if you use it for like three to four minutes, which is the way we use strips in for other type of cells, human stem cells will be individualized and most of them will die or just differentiate or will not attach to the myth. So the idea is you have to keep the cells as clumps. You don't want them to be alone in the in, in the flask.So using collagenase, the advantage is to keep cells as plants. Using chipsy, you just select for cells that will survive this very, very harsh process of g opsonization. So these cells are usually very highly proliferative.So you get, you can adapt your cells to this tripsin process. The problem is that you have cells that they behave differently, they go much faster. And one risk is that you can get some commercial abnormality to, to this, to this very high division process.So you say that ization can cause selection of cells in culture for most proliferative cells.Right. More ative and probably also higher survival rates than other cells. So after proliferation, basically culture after proliferation in tripsin, after several passages become a different culture, these different properties.So it's, it's hard to figure out if they are exactly identical. If you do the test, the usual test, let's say you check markers, regular markers of end differentiated cells like OC four, nano one 60 SC four C, C3, all this molecule might still be expressed. If you do TER formation, this cells might still differentiate and be formed like al like normal cells.If you look at the karyotype, you might have some abnormality, but you might still have a normal karyotype. The, the, the selective advantage might be due to just a mutation that you cannot see by doing a karyotype. So the fact that they grow much faster is by itself I think a little bit worser.And if we want to use these cells for transplantation at some point, I would definitely not use this type of cells.Okay. So would you like to tell me what are the main technical problems with using this technique for, for passages of cells? So using S, yes.It's just a little bit longer and also it's, since the cells are not going as fast, it's just much longer to get a high number of cells to do some experiment. So it's just less convenient I would say. Would you like to tell me about few words about the goals of your experiment?How do you use CS cells? Okay, so my main project here is to get endothelial cells from human AB stem cells. And the idea is to be able to make blood.And we are working a lot with tissue bioengineering labs and one of their goal is to make tissue in vitro. But one of the limitation to this is the lack of blood vessels going through this tissues. So if we can bring endothelial cells or put endothelial cells in this tissue, we would have better growth of this tissue.So the idea few sources of cells are known for endothelial cells like cold blood or pressure blood, but it would be interesting to have another source of cells like human years. And the advantage is since human years can be expanded and most infinitely, you could modify these cells, make some inducible system and be able to use it. Then in your final product, your material cells, in this case.

İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması

Biyoloji

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are derived from the blastocyst of the early embryo and are pluripotent in differentiative ability.  Their vast differentiative potential has made them the focus of much research centered on deducing how to coax them to generate clinically useful cell types.  The successful derivation of hematopoietic stem cells (HSC) from mouse ESC has recently been accomplished and can be visualized in this video protocol.  HSC, arguably the most clinically exploited cell population, are used to treat a myriad of hematopoietic malignancies and disorders.  However, many patients that might benefit from HSC therapy lack access to suitable donors.  ESC could provide an alternative source of HSC for these patients.  The following protocol establishes a baseline from which ESC-HSC can be studied and inform efforts to isolate HSC from human ESC.  In this protocol, ESC are differentiated as embryoid bodies (EBs) for 6 days in commercially available serum pre-screened for optimal hematopoietic differentiation.  EBs are then dissociated and infected with retroviral HoxB4.  Infected EB-derived cells are plated on OP9 stroma, a bone marrow stromal cell line derived from the calvaria of  M-CSF-/- mice, and co-cultured in the presence of hematopoiesis promoting cytokines for ten days.  During this co-culture, the infected cells expand greatly, resulting in the generation a heterogeneous pool of 100s of millions of cells.  These cells can then be used to rescue and reconstitute lethally irradiated mice.

This protocol details the derivation of transplantable hematopoietic stem cells from mouse embryonic stem cells (ESC) and their subsequent injection into lethally irradiated recipient mice. Briefly, ESC are differentiated as embryoid bodies, which are then infected with retroviral HoxB4 and co-cultured with OP9 stromal cells and hematopoietic cytokines.

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both medical applications and as a research 
tool for addressing fundamental questions in development and disease. Here, we provide a 
concise, step-by-step protocol for the derivation of human embryonic stem cells from embryos 
by immunosurgical isolation of the inner cell mass. 


The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both medical applications and as a research 
tool for addressing fundamental questions in development and disease. Here, we provide a 
concise, step-by-step protocol for the derivation of human embryonic stem cells from embryos 
by immunosurgical isolation of the inner cell mass.

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are characterized by two fundamental properties: self-renewal and multipotency that allows a stem cell to differentiate into virtually any cell type 1. The progression stem cell to differentiated cell is characterized by loss of multipotency, structural and morphological changes and the hierarchic activity of transcription factors and signaling molecules, whose activities establish and maintain cell-type specific gene expression patterns. At the molecular level, cell differentiation involves dynamic changes of the structure and composition of chromatin and the detection of those dynamic changes can provide valuable insights into the functional features of stem cells and the cell differentiation process 2,3. Chromatin is a highly compacted DNA-protein complex that forms when cells package chromosomal DNA with proteins, mainly histones 4. Stemcellness and cell differentiation has been correlated with the presence of specific arrays of regulatory proteins such as epigenetic factors, histone variants, and transcription factors 2,3,5.
 Chromatin immunoprecipitation (ChIP) provides a valuable method to monitor the presence of RNA, proteins, and protein modifications in chromatin 6,7. The comparison of chromatin from different cell types can elucidate dynamic changes in protein-chromatin associations that occur during cell differentiation.
Chromatin immunoprecipitation involves the purification of in vivo cross-linked chromatin. The isolated chromatin is reduced to smaller fragments by enzymatic digestion or mechanical force. Chromatin fragments are precipitated using specific antibodies to target proteins or protein and DNA modifications. The precipitated DNA or RNA is purified and used as a template for PCR or DNA microarray based assays. Prerequisites for a successful ChIP are high quality antibodies to the desired antigen and the availability of chromatin from control cells that do not express the target molecule. ChIP can correlate the presence of proteins, protein and RNA modifications, and RNA with specific target DNA, and depending on the choice of outread tool, detects the association of target molecules at specific target genes or in the context of an entire genome. The comparison of the distribution of proteins in the chromatin of differentiating cells can elucidate the dynamic changes of chromatin composition that coincide with the progression of cells along a cell lineage.

The differentiation of ESC coincides with cell-type specific changes in the structure and composition of chromatin. The detection of those changes provides valuable insights into the mechanisms that define stemcellness and cell differentiation. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) represents a valuable method to dissect the molecular mechanisms underlying stem cell differentiation.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum (dpc) mouse embryos.  Developing gonadal ridges from mouse embryos (C57BL6J) were dissociated by mechanical disruption with collagenase, then plated in a mouse embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) that was previously mitotically inactivated with mitomycin C in the presence of knockout media and supplemented with Leukemia Inhibitor Factor (LIF), basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), and Stem Cell Factor (SCF).  Using these optimized methods for PCG identification, isolation, and establishment of culture conditions permits long term cultures of EG cells for more than 40 days.  The embryonic germinal cell lines showed embryonic phenotype and expression of common used markers of the pluripotent state.  Isolation and derivation of germinal cells in culture provide a tool to understand their development in vitro and offer the opportunity to monitor cumulative damage at genetic and epigenetic levels after exposure to oxidative stress.

The ability of embryonic germinal cells to differentiate into primordial germinal cells during early development stages is a perfect model to address our hypothesis about cancer and infertility. This protocol shows how to isolate primordial germinal cells from developing gonads in 10.5-11.5 days post coitum mouse embryos.

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant interest in deriving a pure population of lineage-committed oligodendrocyte precursor cells (OPCs) for transplantation. OPCs are characterized by the activity of the transcription factor Olig2 and surface expression of a proteoglycan NG2. Using the GFP-Olig2 (G-Olig2) mouse embryonic stem cell (mESC) reporter line, we optimized conditions for the differentiation of mESCs into GFP+Olig2+NG2+ OPCs. In our protocol, we first describe the generation of embryoid bodies (EBs) from mESCs. Second, we describe treatment of mESC-derived EBs with small molecules: (1) retinoic acid (RA) and (2) a sonic hedgehog (Shh) agonist purmorphamine (Pur) under defined culture conditions to direct EB differentiation into the oligodendroglial lineage. By this approach, OPCs can be obtained with high efficiency (&gt;80%) in a time period of 30 days. Cells derived from mESCs in this protocol are phenotypically similar to OPCs derived from primary tissue culture. The mESC-derived OPCs do not show the spiking property described for a subpopulation of brain OPCs in situ. To study this electrophysiological property, we describe the generation of spiking mESC-derived OPCs by ectopically expressing NaV1.2 subunit. The spiking and nonspiking cells obtained from this protocol will help advance functional studies on the two subpopulations of OPCs.

We describe a small molecule-based protocol for differentiation of mouse embryonic stem cells into oligodendrocyte precursor cells (OPCs). This protocol generates Olig2+NG2+ OPCs with high efficiency by 30 days of differentiation. We also describe a method to generate "spiking" OPCs that can fire action potentials.

Embriyonik Kök Hücreler farklılaşma oligodendrosit Öncüleri

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation 

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three embryonic germ layers (1). Directed differentiation of hESCs into specific cell types has generated much interest in the field of regenerative medicine (e.g., (2-5)), and methods for determining the in vivo fate of selected or manipulated hESCs are essential to this endeavor. We have adapted a highly efficient teratoma formation assay for this purpose. A small number of specifically selected hESCs is mixed with undifferentiated wild type hESCs and Phaseolus vulgaris lectin to form a cell pellet. This is grafted beneath the kidney capsule in an immunodeficient mouse. As few as 2.5 x 105 hESCs are needed to form a 16 cm3 teratoma within 8-12 weeks. The fate of the originally selected hESCs can then be determined by immunohistochemistry. This method provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Directed differentiation of hESCs into specific cells has generated much interest in regenerative medicine. We provide a concise, step-by-step protocol for determining the in vivo fate of selected hESCs that provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Use of LysoTracker to Detect Programmed Cell Death in Embryos and Differentiating Embryonic Stem Cells

Programmed cell death (PCD) occurs in adults to maintain normal tissue homeostasis and during embryological development to shape tissues and organs1,2,6,7. During development, toxic chemicals or genetic alterations can cause an increase in PCD or change PCD patterns resulting in developmental abnormalities and birth defects3-5. To understand the etiology of these defects, the study of embryos can be complemented with in vitro assays that use differentiating embryonic stem (ES) cells.
Apoptosis is a well-studied form of PCD that involves both intrinsic and extrinsic signaling to activate the caspase enzyme cascade. Characteristic cell changes include membrane blebbing, nuclear shrinking, and DNA fragmentation. Other forms of PCD do not involve caspase activation and may be the end-result of prolonged autophagy. Regardless of the PCD pathway, dying cells need to be removed. In adults, the immune cells perform this function, while in embryos, where the immune system has not yet developed, removal occurs by an alternative mechanism. This mechanism involves neighboring cells (called "non-professional phagocytes") taking on a phagocytic role-they recognize the 'eat me' signal on the surface of the dying cell and engulf it8-10. After engulfment, the debris is brought to the lysosome for degradation. Thus regardless of PCD mechanism, an increase in lysosomal activity can be correlated with increased cell death.
To study PCD, a simple assay to visualize lysosomes in thick tissues and multilayer differentiating cultures can be useful. LysoTracker dye is a highly soluble small molecule that is retained in acidic subcellular compartments such as the lysosome11-13. The dye is taken up by diffusion and through the circulation. Since penetration is not a hindrance, visualization of PCD in thick tissues and multi-layer cultures is possible12,13. In contrast, TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) analysis14, is limited to small samples, histological sections, and monolayer cultures because the procedure requires the entry/permeability of a terminal transferase.
In contrast to Aniline blue, which diffuses and is dissolved by solvents, LysoTracker Red DND-99 is fixable, bright, and stable. Staining can be visualized with standard fluorescent or confocal microscopy in whole-mount or section using aqueous or solvent-based mounting media12,13. Here we describe protocols using this dye to look at PCD in normal and sonic hedgehog null mouse embryos. In addition, we demonstrate analysis of PCD in differentiating ES cell cultures and present a simple quantification method. In summary, LysoTracker staining can be a great complement to other methods of detecting PCD.

We present a simple protocol to visualize regions of programmed cell death (PCD) in mouse embryos and differentiating embryonic stem (ES) cell cultures using a highly soluble dye called LysoTracker.

Embriyolar yılında Programlı Hücre Ölümü Algılama LysoTracker kullanımı ve Embriyonik Kök Hücreler Farklılaşan

Programmed cell death (PCD) occurs in adults to maintain normal tissue homeostasis and during embryological development to shape tissues and ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during development. Misregulation of this process has been implicated as a key event in fibrosis and the progression of carcinomas to a metastatic state. Understanding the processes that underlie EMT is imperative for the early diagnosis and clinical control of these disease states. Reliable induction of EMT in vitro is a useful tool for drug discovery as well as to identify common gene expression signatures for diagnostic purposes. Here we demonstrate a straightforward method for the induction of EMT in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells pre- and post-EMT induction by immunocytochemistry are also included. Additionally, we demonstrate the effectiveness of this method through antibody-based array analysis and migration/invasion assays.

A straightforward method is described for the induction of epithelial to mesenchymal transition (EMT) in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells in EMT states by immunocytochemistry are included.

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...