Name: heterotopic cervical heart transplantation in mice
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice at JoVE.com

M.-A. Deutsch is supported by Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014) Deutsche Stiftung f&#252;r Herzforschung and Deutsche Gesellschaft f&#252;r Thorax- Herz- und Gef&#228;&#223;chirurgie. M. Krane is supported by Deutsche Stiftung f&#252;r Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum f&#252;r Herz Kreislauf Forschung (DZHK B 13-050A; DZHK B 14-013SE) and Deutsche Forschungsgemeinschaft (KR3770/7-1; KR3770/9-1)

Bütün deneyler Alman Kalp Merkezi Münih ve Bavyera, Almanya (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13) Hükümeti tarafından kabul edildi. Hayvanlar belli bir patojen serbest tesis içinde yer ve Tıbbi Araştırmalar Ulusal Derneği ve Ulusal Bilimler Akademisi tarafından verilen &quot;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu&quot; ile formüle &quot;Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri&quot; ile uyumlu insan bakım alınmıştır Fen ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH Yayın no. 86-23, 1985 revize) tarafından yayınlandı. NOT: İki kavisli bir forseps ve damar dilatatörler dahil steril mikrocerrahi aletlerin tam bir set, prosedür (Şekil 2a) için gereklidir. Perioperatif antibiyotik profilaksisi rutin gerekli değildir, ancak, bağışıklığı bozulmuş hayvanlarda endike olabilir. Hayvanlar, terminal izofluran inhalasyonu ile sakrifiye edildi. Donör Hazırlama ve Aşı Hasat &lt;ol&gt; <li> Intraperitonal (ip) ile hayvan midazolam enjeksiyonu (5.0 mg / kg), medetomidin (0.5 mg / kg) ve fentanil (0.05 mg / kg vücut ağırlığı) anestezisi. Operatif sahada yatar pozisyonda fare yerleştirin ve pedal çekme refleksi cerrahi toleransı onaylayın. </li><li> Klorheksidin ile cilde üç kez dezenfekte ve orta hat karın kesisi gerçekleştirin. Inferior vena kava maruz sola ıslak bir gazlı bez ile bağırsakları geri çekin. </li><li> Antikoagülasyon inferior vena kava ile 0.4 ml serum fizyolojik içinde sulandırılmış heparin 50 IU enjekte edilir. Heparin sonrası damar 1 dakika İnsizyon. </li><li> Diyaframı açın ve kalp maruz ikili torakotomi gerçekleştirin. Ön göğüs duvarı superiora yansıyan ve bir kelepçe ile yerinde tutulur. </li><li> Timus çıkarın ve açıkça aort ve pulmoner gövdede arasındaki bağ dokusunu incelemek. Sağ superior vena kava İnsizyon. </li><li> Düzeyinde harekete çıkan aort delinme30 G iğne ile brakiyosefalik gövde 5 ml şırınga üzerine monte ve yavaş yavaş 4 ° C soğuk kardiyoplejik çözeltisi 3 ml aşırı baskı olmadan retrogradually kalbi serpmek. Koroner dolaşım içine hava girmesini önleyin. Ayrıca kardiyak arrest geliştirmek için greft üzerine buz tuz çözeltisi bırakın. </li><li> Brakiosefalik gövde kökeni proksimale aort transect. </li><li> 8-0 ipek ile kalbe yakın alt ve üst venae hem kava inferior bağlanır ve bitişik harfler distal onları transect. </li><li> Kadar distale mümkün olduğunca pulmoner gövde ücretsiz teşrih. 8-0 ipek ile çatallanma yakın pulmoner arterleri bağlanır ve distalde onları transect. </li><li> Tek bir 8-0 ipek ligatür ile hep birlikte pulmoner venlerin bağlanır ve onları transect. </li><li> Donörden kalbini çıkarıp implantasyon kadar buz gibi soğuk kardiyoplejik solüsyon içinde saklayın. </li></ol> 2. Alıcı Hazırlık <ol><li> HazırlamakBir No. 11 neşter veya mikroskop altında bir makas ile polimid boru keserek anastomozlar için manşet. Manşet, bir silindirik gövde ve damar kelepçesi yerleştirilmesi için bir uzantı (çevresinin 1/3), 1 mm (Şekil 2b) bir uzunluğu, her oluşur. </li><li> Hayvan anestezisi ve yukarıda tarif edildiği gibi, cerrahi tolerans teyit etmektedir. Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu subkutan (sc) enjekte edilir. </li><li> Elektrikli tıraş makinesi kullanarak sağ servikal bölgenin saç çıkarın ve sıcak bir pad üzerinde bir yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. Solunum tehlikeye sokabilir, bu kadar ön uzuvları gerilmeden kaçınarak bant ipliklerini bacakları sabitleyin. Kuruluğunu önlemek için oftalmik merhem kullanarak gözleri örtün. Cerrahi siteyi klorheksidin ile üç kez dezenfekte edin. </li><li> Juguler çentik sağ mandibular açıdan enine deri kesi olun. </li><li> Açık açık ext seferberernal juguler ven. Iki kutuplu bir forseps ile yan dalları cauterize ve bunları transect. </li><li> Submandibuler bezden ven ile izdiham düzeyinde ligatures arasındaki dış juguler ven bölün. </li><li> Manşet harici juguler ven çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir damar kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak. </li><li> Manşet üzerinde damar duvarını Evert ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin. </li><li> Sternocleidomastoid kasının yüzeysel kısmını çıkarın. </li><li> Sağ karotis arter harekete geçirmek ve karotis bifurkasyonu altındaki ligatures arasındaki gemi transect. </li><li> Manşet ile karotis arter çekin ve manşet uzantısı üzerinde bir Yaşargil kelepçe koyarak proksimale gemi tıkamak. Bitişik harfleri çıkarın ve 01:10 heparinli serum fizyolojik ile damar lümeni sulamak. </li><li> Yavaşça dilate bir gemi dilatatörle arter lümen, manşet üzerinde damar duvarını tersine çevrilmesi ve önceden belirlenmiş bir çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabitleyin. </li><li> Greft implantasyonu için yeterli yer kazanmak için, submandibular bezin sağ lobunu çıkarın. </li><li> Implantasyon kadar nemli ameliyat alanını tutun. </li></ol> 3. Greft İmplantasyonu <ol><li> Başaşağı medial odaklı aorta ve pulmoner arter yanal ile alıcı servikal bölgede greft yerleştirin. </li><li> Karotis arter ile manşet üzerine greft aorta çekin ve çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin. </li><li> Onun ön yönü üzerinde akciğer gövde insizyon ve dış juguler ven ile manşet üzerine çekin. Yine çevresel 8-0 ipek ligatür ile anastomoz sabitleyin. </li><li> Karotid arter çözülmesini aşağıdaki dış juguler ven kelepçeyi çıkarın. Kalpler kanla hemen doldurur. R artırmak içineperfusion greft üzerine 37 ° C sıcak tuzlu su çözeltisi bırakın. Normalde kalp bir dakika içinde sinüs ritmi geliştirir. Venöz yerinde manşet uzantısını kaldırın. </li><li> Doğru greft pozisyonunu sağlamak, anastomozlar torsiyon olmadan gerilimsiz ve damarları olmalıdır. Bu beri cilt koterize gemiler yara iyileşmesini bozabilir etmeyin. Kanama genellikle kendiliğinden durur. Tek bir 8-0 sürekli dikiş ile cilt kapatın. </li></ol> 4. Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> Sıvı replasmanı için 0.25 ml ılık tuzlu su solüsyonu sc enjekte edilir. </li><li> Narkotik nalokson (1,2 mg / kg), flumazenil (0.5 mg / kg) ve sternal yatma muhafaza edilmesi için yeterli bilinci yerine kadar sıcak bir pedi üzerinde hayvan sol sc atipamezol (2,5 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte antagonize etmek. Herhangi bir anormal davranış kaydetmek için en az bir saat daha hayvan gözlemleyin. Tamamen geri kazanılması kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyinKırmızı. </li><li> Buprenorfin ile önleyici analjezi sağlamak (0.05 mg / kg sc günde üç kez) ya da işlemden sonra 72 saat içinde minimum bir süre için yerel kurumsal protokole göre alternatif bir analjezi. </li><li> Cerrah ve bir veteriner hayvanları düzenli olarak görmelisiniz. Kilo kaybı&gt;% 15, halsizlik, şişme veya cerrahi yan enfeksiyon hayvanlar durumunda terminal izofluran inhalasyonu ile ötenazi. </li></ol>

<ol>
	<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5, 733-735 (1973).</li><li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation.">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28, 565-570 (2008).</li><li>Schramm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+subepicardial+microcirculation+in+heterotopically+transplanted+mouse+hearts:+an+intravital+multifluorescence+microscopy+study.">The subepicardial microcirculation in heterotopically transplanted mouse hearts: an intravital multifluorescence microscopy study.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 134, 210-217 (2007).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp : JoVE. 238, (2007).</li><li>Gong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+modified+cervical+cardiac+transplant+model+in+mice.">Introduction of modified cervical cardiac transplant model in mice.</a> Exp Clin Transplant. 10, 158-162 (2012).</li><li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51, 896-898 (1991).</li><li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice:+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis.">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PloS one. 8, e77278 (2013).</li><li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis.">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141, 682-689 (2007).</li><li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats.">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2010).</li><li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage.">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47-50 (1979).</li><li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li><li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li><li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation.">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis.">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> Am J Pathol. 153, 1301-1310 (1998).</li><li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant.">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20, 1123-1128 (2001).</li><li>Arras, M., Autenried, P., Rettich, A., Spaeni, D., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intraperitoneal+injection+anesthesia+in+mice:+drugs,+dosages,+adverse+effects,+and+anesthesia+depth.">Optimization of intraperitoneal injection anesthesia in mice: drugs, dosages, adverse effects, and anesthesia depth.</a> Comp Med. 51, 443-456 (2001).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Biz çeşitli deneysel ortamlarda% 90 üzerinde bir başarı oranı ile 200 kalp nakli tamamladık. Burada anlatılan teknik ile, tam bir prosedür, deneyimli bir cerrahın 60 dakika içinde yapılabilir. Organ ihale öncesi servikal damarları hazırlayarak toplam greft iskemi süresi 20 dakika ile sınırlı olabilir. Implantasyon (sıcak iskemi süresi) için zaman sütür tekniği 16 oranla manşet tekniği kullanılarak önemli ölçüde daha kısadır. Bunun yerine sadece daha önce 5,17 açıklandığı gibi kalbi eksize nedeniyle, bir klinik olarak kullanılan kardiyoplejik çözeltisi ile ve hipotermi greft perfüzyon ile kardiyak arrest neden olur. Kristaloid Custodiol HTK solüsyonu 10 mmol / L potasyum ve sodyum, kalsiyum ve magnezyum düşük konsantrasyonlarda içerir ve etkili bir şekilde kalp tutukladı. Katkı maddeleri histidin, triptofan ve a-ketoglutarat, asidoz azaltır ATP sağlar ve hücre membranları du korumahalka iskemi. Bu açık kalp ameliyatı sırasında kontrollü bir kardiyak arrest klinik durumunu andırıyor ve miyokard I / R-yaralanma soruşturma bu model idealdir. Ayrıca, soğuk iskemi başında Kardiyoplejik çözüm içinde farmakolojik ajanların uygulama sağlar. 0-4 ° C &#39;de depolama greft 4 saatlik bir maksimum süre aralığı için mümkündür. Uzamış iskemi süresi sağ kalp boşluklarında ve kanama fazla uzaması ile komplike miyokard hypocontractility yol açabilir. Bizim tecrübelerimize göre, birkaç kritik anahtar noktaları başarılı revaskülarizasyon kolaylaştıracaktır. Tam karotid arter mobilizasyonu ve anastomoz için düşük profilli Yaşargil kelepçe maksimum Vassel uzunluğu kullanılarak korunabilir. Vazospazm arter üzerine 1:10 seyreltilmiş papaverin bırakarak önlenebilir. Nörolojik bozukluklara önlemek için karotid arter t kollateral dolaşımı korumak için çatallanma altında bağlanır<html> O internal karotis arter. Damar lümen dikkatlice duvarın yırtılmasını kaçınarak ince (0.2 mm) ucu ile bir gemi dilatatörle dilate. Bizim tecrübelerimize göre tutma sütür yerleştirme önceden 7 zorunlu değildir nitelendirdi. Manşet boyutu seçimi başarılı revaskülarizasyon için çok önemlidir. Arteriyel anastomoz için iç kaf çapı greft büyük çıkan aort ile uyumsuzluğu hesaba karotis arter (250-300 mikron) dış çapından biraz daha büyük olmalıdır. Dış şahdamarından için (0.724 den 0.912 mm manşet iç çapı) 19 ile 21 G karotis arter için (0.510 den 0.643 mm manşet iç çapı) 22 ila 24 G 20-25 gr ağırlığında kullanım manşetleri farelerde ve manşetleri için . Biz bu düğümlenmesi kolaylaştırır olarak polyfilament sütür materyali (ipek) tercih ederler. Mikrovasküler kelepçe manşet uzantısı üzerine yerleştirilir. Bu gemiyi hareketsiz ve duvarın dışa dönmeden kolaylaştırır. o kurtarma uzatır ve perioperatif mortalitenin başlıca nedenidir çünkü &quot;ove_content&gt; Hipotermi dikkatle kaçınılmalıdır. Antagonizable Nöroleptanaljezi midazolam, medetomodine kullanarak ve fentanil ketamin / xylazine 18 oranla iyileşme iyi bir cerrahi tolerans sağlar ve hızlandırır. Servikal kalp nakli modeli olmayan bir fizyolojik olmayan yüklü kalp modeli nedeniyle intrakardiyak kan akışının eşsiz yönlülük olmakla birlikte, deneysel kalp nakli vazgeçilmez bir araçtır. Bu videoyu yazıda gösterilen teknik ayrıntılar araştırmalar kendi laboratuarlarında nispeten kolay bu modeli kurmak için izin vermelidir.

Kalp nakli modeli sıkça I / R-yaralanma, allogreft reddini, nakil sonrası vaskülopatisinin ve imünmodüller ajanların etkinliğini araştırmak için kullanılır. Fare modelleri bilinen immünolojik ve genetik geçmişleri, birçok kendilenmiş ve transgenik suşları ve nispeten düşük maliyetlerle deneysel durumu gibi birçok avantaj birleştirir. 1973 yılında, farelerde abdominal Kalp nakli bir teknik ilk Corry ark 1 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde greftler alıcının abdominal aorta ve vena kava inferior ana pulmoner arter çıkan aort uç-yan anastomoz ile revaskülarize edilmektedir. 1991 yılında, farelerde rahim kalp transplantasyonu için olan bir dikiş tekniği Chen ve ark 2 tarafından tarif edilmiştir. Bu modelde bir retrograd koroner arter perfüzyon gr çıkan aorta alıcının karotis arter anastomoz tarafından kurulanKıç. Venöz kan sağ atriuma, sağ ventrikül içine koroner sinüs yoluyla drene ve alıcı dış şahdamarından (Şekil 1) içine pulmoner arter yoluyla atılır. Karın greft implantasyonu ile karşılaştırıldığında servikal modeli daha az invaziv ve greft yüzeysel konumu ek izlem muayeneleri (örn palpasyon, ekokardiyografi, intravital floresan mikroskopi) 3,4 için çok kolay erişilebilirlik sağlar. Teknik gelişmelere 5,6 olmasına rağmen, bu modelin daha yaygın kullanımı anastomoz kaçağı ve tromboz insidansının yüksek olan küçük damarların dikilir anastomoz gerçekleştirmek için teknik zorluklar nedeniyle sınırlı kalmıştır. 1991 yılında, Matsuura ve ark. damar duvarı büyük ölçüde servikal Kalp nakli 7 modelini kolaylaştıran bir sentetik silindir, üzerinde dışa dönük olduğu kaf tekniğini tanıttı. Tekniği fu oldurther renal 8, pankreas 9, bacak 10, hepatik 11,12, 13,14 akciğer ve damar nakli 15 de dahil olmak üzere çeşitli deneysel modeller için transplant kabul etmiştir. Dikiş tekniği ile karşılaştırıldığında gereken anastomozlar için zaman ve böylece sıcak iskemi süresi kısadır ve içinde manşet tekniği kullanılarak 16 daha az vasküler komplikasyonları vardır. Ayrıca, yüksek başarı oranı ile işlemi gerçekleştirmek için mikrocerrahi az eğitim ile cerrahlar sağlar. Manşet tekniğinin bir dezavantajı serebral perfüzyon değiştirebilir karotis arter, bir önkoşul ligasyonu olduğunu. Bu videoyu yazıda farelerde servikal Kalp nakli için geliştirilmiş ve basitleştirilmiş manşet tekniği sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Forceps JFC-7.2</td><td>S&amp;amp;T</td><td>P-00036</td><td>Curved tip 0.20 mm</td></tr><tr><td>Vessel dilatator D-5a</td><td>S&amp;amp;T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>Adventita scissor</td><td>S&amp;amp;T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>Vascular clamp B-1V</td><td>S&amp;amp;T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil Clip</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>3.5 mm lenght</td></tr><tr><td>Bipolar forceps</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>tip 0.25 mm</td></tr><tr><td>Polyimide tubes</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 gauge</td></tr><tr><td>8.0 silk ligatures</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK solution</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

heterotopic cervical heart transplantation in mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

Ekibimiz başarıyla yaklaşık 20 eğitim ameliyatlarından sonra açıklanan teknik gerçekleştirebilir. En zorlu kısmı kolayca geri çevirir ve çoklu girişimler duvarın yırtılmaya yol açabilir, çünkü manşet üzerinde karotis arter damar duvarını tersine çevrilmesi için olduğunu. Eğitim döneminden sonra, ortalama toplam ameliyat süresi 60 ± 8 dk idi. Yaklaşık 20 dakika donör hasat, servikal damarlar ve anastomoz ve cilt kapatılması için 15 dakika hazırlanması için 25 dakika gereklidir. Miyokard I / R-Yaralanma soruşturma için biz% 92 cerrahi başarı oranı ile çeşitli deneysel ortamlarda singenik C57BL / 6 farelerinde 200 operasyonlar gerçekleştirildi. Erken ölüm anastomoz gerçekleştirmede güçlükler (n = 3), anastomoz kaçağı (n = 2) neden ve kardiyopulmoner yetmezlik (n = 10) oldu. Bir hayvan nedeniyle nörolojik bozulma İyileştikten sonra ötenazi edildi. Perioperatif ölüm arasında, greft sağkalım de&gt;% 95 idi7 gün (Şekil 4). Singenik greft alıcı bir dizi 3 ay boyunca canlı tutuldu. Antibiyotik proşaksisi değil rağmen, herhangi bir enfeksiyöz komplikasyonları dikkat etmedi. İlk seride, 12 singenik C57BL / 6 fareleri histopatolojik tetkikler (Şekil 3) için transplante edildi. Greftler, implantasyondan önce, 4 ° C &#39;de buz üzerinde muhafaza soğuk iskemi 4 saat için maruz bırakılmıştır. Nakli reperfüzyon 7 gün sonra hasat edilmiş ve hematoksilin ve eozin (H &amp; E) ile Sirius kırmızısı ile boyanmış. Nontransplanted hayvanları (n = 6), kontrol olarak kullanıldı. Doku ödemi, hiperemi, sızan lökosit, mikrovasküler oklüzyon ve interstisyel fibrozis güçlü bir inflamatuar reaksiyona I / R kurşun. Bu erken seriye tek hayvan ketamin / ksilazin bir tekrarlanan enjeksiyon sonrası öldü. Bu komplikasyon daha midazolam, medetomodine ve fentanil içeren tam antagonizable anestezi kullanılarak önlenebilir. &lt;<html> / p&gt; <img alt="Figür 1" src="/files/ftp_upload/52907/52907fig1.jpg" /> Şekil 1: Heterotopik Servikal Kalp Nakli Kan Akımının (a) şematik İllüstrasyon. Alıcının karotid arter akışlarının kan kardiyak greft serpmek için çıkan aort içine ve koroner arterler içine retrograd. Koroner sinüs yoluyla sağ atriyuma venöz kan drene, sağ ventrikül doldurur ve alıcının dış juguler ven içine pulmoner arter yoluyla atılır. Sol ventrikül tamamen atlanır. (B) anastomoz intraoperatif Görünümü. Aorta (2) karotid arter (1) ve pulmoner gövde ile manşet üzerine çekilir (3) dış juguler ven ile manşet üzerinde (4). Resimde venöz anastomoz henüz tamamlanmış değil.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52907/52907fig2.jpg" /> Şekil 2: (a) iki kavisli bir forseps ve iki gemi dilatatörler dahil steril mikrocerrahi aletleri tam bir set gereklidir. Bir uzantısı ve mikrovasküler kelepçeler ile 19-24 G anastomoz kolluklar için (b) kullanılmıştır. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52907/52907fig3.jpg" /> Şekil 3: Miyokard g / singenik C57BL / 6 Farelerinde R yaralanma gösterilmesi Histolojik numuneler, H ve 4 saat soğuk iskemiden sonra kontrol hayvanlarında (a) ve hayvanlardan kalplerin E boyama (20X büyütme) ve reperfüzyonun 7 gün (b).. Uzun süreli I / R doku ed ile güçlü bir enflamatuar reaksiyon sonuçlandıema, hiperemi, sızan lökositler ve mikrovasküler oklüzyon. Aynı deney ayar için Sirius kırmızısı ile boyama (40X büyütmede) olarak İnterstisyel kolajen birikimini işaretlenmiş gösterdi sonra / kontrol grubunun (C) ile karşılaştırıldığında R (d). <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52907/52907fig4.jpg" /> Şekil 4:. Singeneik C57BL / 6 farelerinde greft sağ kalımı görüntüleyen Kardiyak Allogreft Survival Kaplan-Meier arsa. Hayvanlar histopatolojik inceleme için ameliyat sonrası 7. günde ötenazi ware.

Watch this Scientific Journal Video about Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice at JoVE.com

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

heterotopic-cervical-heart-transplantation-in-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K Görüntüleme.  German Heart Center Munich, Technische Universität München. The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Video: Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable for studying rejection and immune response now that newer transgenic and gene knockout mice are available, and a large number of immunologic reagents have been developed. The heart transplant model is less stringent than the skin transplant models, although technically more challenging. We have developed a modified technique and have completed over 1000 successful cases of heterotopic heart transplantation in mice. When making anastomosis of the ascending aorta and abdominal aorta, two stay sutures are placed at the proximal and distal apexes of recipient abdominal aorta with the donor s ascending aorta, then using 11-0 suture for anastomosis on both side of aorta with continuing sutures. The stay sutures make the anastomosis easier and 11-0 is an ideal suture size to avoid bleeding and thrombosis.
When making anastomosis of pulmonary artery and inferior vena cava, two stay sutures are made at the proximal apex and distal apex of the recipient s inferior vena cava with the donor s pulmonary artery. The left wall of the inferior vena cava and donor s pulmonary artery is closed with continuing sutures in the inside of the inferior vena cava after, one knot with the proximal apex stay suture the right wall of the inferior vena cava and the donor s pulmonary artery are closed with continuing sutures outside the inferior vena cave with 10-0 sutures. This method is easier to perform because anastomosis is made just on the one side of the inferior vena cava and 10-0 sutures is the right size to avoid bleeding and thrombosis. In this article, we provide details of the technique to supplement the video.

The mouse heterotopic heart transplantation model has been proven by many investigators to be an important method for studying mechanisms of rejection and immune response. However, the techniques involved are still challenging. By modifying standard techniques we have had success with more than 1000 transplants.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Biyoloji

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Tıp

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique was developed and reported in 2001 by Niimi. Described here are the techniques that have evolved over more than a decade in the hands of three surgeons (Plenter, Grazia, Pietra) in our center. These techniques are now being passed on to a younger generation of surgeons and researchers.
Based largely on the Niimi experience, the procedures used have evolved in the fine details - details which we will endeavor to relate here in such a way that others may be able to use this very useful model. Like Niimi, we have found that a video aid to learning is a priceless resource for the beginner.

The manuscript describes the steps required to perform the heterotopic heart transplant in the mouse.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications have been reported since the first description in 1964. After 30 years of performing heterotopic heart transplantation in rats, we have developed a simplified surgical approach, which can be easily taught and performed without further surgical training or background.
After dissection of the ascending aorta and the pulmonary artery and ligation of superior and inferior caval and pulmonary veins, the donor heart is harvested and subsequently perfused with ice-cold saline solution supplemented with heparin. After clamping and incising the recipient abdominal vessels, the donor ascending aorta and pulmonary artery are anastomosed to the recipient abdominal aorta and inferior vena cava, respectively, using continuous running sutures.
Depending on different donor-recipient combinations, this model allows analyses of either acute or chronic rejection of allografts. The immunological significance of this model is further enhanced by a novel approach of in-ear injection of vital cardiac muscle cells and subsequent analysis of draining cervical lymphatic tissue.

We describe a model of heterotopic abdominal heart transplantation in rats, implying modifications of current strategies, which lead to a simplified surgical approach. Additionally, we describe a novel rejection model by in-ear injection of vital cardiac muscle cells, allowing further transplant immunological analyses in rats.

Sıçanlarda Heterotopik Kalp ve Kardiyak Kas Hücre Nakli için İmmünolojik Model

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to improve surgical efficiency. In our lab, we have optimized the cuff technique with two major steps. First, we used the inner tube technique to insert a temporary inner tube into the external jugular vein and carotid artery blood vessel to facilitate eversion of the vessel over the cuff. Second, we performed complete heterotopic cardiac transplantation through the collaboration of two experienced surgeons. These modifications effectively reduced the operation time to 25 minutes, with a success rate of 95%. In this report, we describe these procedures in detail and provide a supplemental video. We believe that this report on the improved cuff technique will offer practical guidance for murine heterotopic heart transplantation and will enhance the utility of this mouse model for basic research.

We introduce an inner tube approach to the cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation to help evert the vessel over the cuff. We found that cooperation between two experienced surgeons markedly shortens the operation time.

Murin Kalp Nakli için Manşet Tekniğinin Optimizasyonu

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Mouse Heterotopic Cervical Cardiac Transplantation Utilizing Vascular Cuffs

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after transplantation, and the impact of immunomodulatory therapies on graft rejection. Heterotopic cervical heart transplantation in mice was first described in 1991 using sutured anastomoses and subsequently modified to include cuff techniques. This modification allowed for improved success rates, and since then, there have been multiple reports that have proposed further technical improvements. However, translation into more widespread utilization remains limited due to the technical difficulty associated with graft anastomoses, which requires precision to achieve adequate length and caliber of the cuffs to avoid vascular anastomotic twisting or excessive tension, which can result in damage to the graft. The present protocol describes a modified technique for performing heterotopic cervical cardiac transplantation in mice which involves cuff placement on the recipient's common carotid artery and the donor's pulmonary artery in alignment with the direction of the blood flow.

Mouse cardiac transplantation models represent valuable research tools for studying transplantation immunology. The present protocol details mouse heterotopic cervical cardiac transplantation that involves the placement of cuffs on the recipient's common carotid artery and the donor's pulmonary artery trunk to allow for laminar blood flow.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Murine models of cardiac transplantation are frequently utilized to study ischemia-reperfusion injury, innate and adaptive immune responses after ...

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the established technique for a modified blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal heart transplantation model is presented. This method uses the intrathoracic inferior vena cava (IIVC) instead of the pulmonary artery of the donor heart for the anastomosis to the inferior vena cava of the recipient. It is facilitating and improving success rates for abdominal heart transplantation in mice.

A novel technique for blood circuit reconstruction in a heterotopic abdominal mouse heart transplantation model is demonstrated.

Abdominal Fare Kalp Nakli Modelinde Kan Devresi Rekonstrüksiyonu

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...