Obez Sıçan Modelinde Gelincik Somniferum Tohumlarının Anti-Obezite Potansiyelinin Araştırılması

Çalışma, obezitenin neden olduğu Albino sıçanlarında Papaver somniferum tohumlarının anti-obezite etkinliğini araştırıyor. Yıkanmış haşhaş tohumları, ağırlığı etkili bir şekilde azalttı, glikoz seviyelerini düşürdü ve toksisite olmadan lipit profillerini iyileştirdi. Buna karşılık, yıkanmamış tohumlar kan parametrelerini değiştirdi, bu da potansiyel toksisiteyi ve daha fazla araştırmaya ihtiyaç olduğunu düşündürdü.

Obezite, dünya çapında nüfusun yaklaşık %30'unu etkileyen önemli bir küresel sağlık sorunudur. Obezite prevalansına rağmen, şu anda Papaver somniferum'un anti-obezite ve metabolik etkileri hakkında veri mevcut değildir. Çalışmanın amacı, yüksek yağlı diyet (HFD) ile indüklenen obez sıçanlarda Papaver somniferum (haşhaş) tohumlarının anti-obezite ve metabolik etkilerini doğrulamak ve kilo verme, lipit profili ve organ toksisitesi üzerindeki etkilerini değerlendirmekti. Deney iki aşamada gerçekleştirildi: 4 haftalık haşhaş tohumu müdahalesi ve 6 haftalık obezite indüksiyon denemesi. Sıçanlar gruplara ayrıldı ve hem yıkanmış hem de yıkanmamış haşhaş tohumu, HFD ve kilo kaybı için reçeteli bir ilaç verildi. Bulgular, haşhaş tohumlarının yıkanmasının kilo alımını önemli ölçüde azalttığını ve lipid profillerini geliştirdiğini, özellikle trigliseritleri, düşük yoğunluklu lipoproteini (LDL) ve çok düşük yoğunluklu lipoproteini (VLDL) azalttığını gösterdi. Ek olarak, tedavi edilen gruplar glikoz seviyelerinde bir azalma gösterdi. Bununla birlikte, daha yüksek dozlarda yıkanmamış haşhaş tohumu, yüksek alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) seviyeleri ile gösterilen orta düzeyde karaciğer stresine neden oldu ve renal histopatoloji hafif inflamasyon gösterdi, ancak hematolojik parametreler sabitti. Bu sonuçlar, yıkanmış haşhaş tohumlarının obeziteyi azaltma ve olumsuz zarar vermeden metabolik sağlığı geliştirme potansiyeline sahip olabileceğini ve bu da terapötik potansiyellerini keşfetmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç olduğunu göstermektedir.

Obezite, vücut kitle indeksi (VKİ) 20'nin altında olmasına rağmen aşırı yüksek vücut yağ yüzdesi ile karakterize tıbbi bir durumdur ^1,2. Vücudun kontrollü sistemi, vücudun düzenleyici sistemindeki besinler ve enerji arasındaki uygun dengeyi sağlayamadığında, vücutta biriken fazla vücut yağının birikmesine neden olur³. BMI, normal kilo, aşırı kilo ve obezite durumunu belirlemek için kullanılan birincil tanı aracıdır. Aşırı kilolu veya obezitesi olan bireyleri tanımlamak için klinik araştırmalarda yaygın olarak kullanılır. Araştırmalar, obezitenin herhangi bir kronik hastalığın ana nedeninden ziyade kendi başına bir hastalık olduğunu göstermektedir⁴. Başlıca olarak aşırı kalori içeren gıdaların tüketimi ve hareketsiz bir yaşam tarzından kaynaklanır⁵. Genetik kilo alma mekanizmaları ve enerjisi yüksek gıdalara uzun süre ve aşırı maruz kalmak da obeziteye katkıda bulunabilir. Obezitenin küresel prevalansı son yıllarda hızla artmıştır ve dünya çapında tahmini 2,1 milyar insan veya dünya nüfusunun %30'u obeziteden muzdarip ve aşırı kiloludur. Mevcut trendlerin artmaya devam etmesi halinde bu oranın 2030 yılına kadar %40'a ulaşacağı tahmin ediliyor. Ekosistem ve sosyal sorunlar gibi çevresel faktörler de obezitenin gelişimini etkilemektedir ^6,7. Obezite, rahim, meme ve kolon kanseri dahil olmak üzere çeşitli kanser türlerinin yanı sıra dislipidemi, diyabet ve kas-iskelet sistemi bozuklukları (özellikle osteoartrit) gibi komorbiditelerle ilişkilendirilmiştir. Ayrıca obezite, hiperglisemi ve yüksek vücut kitle indeksi dahil olmak üzere kardiyak risk faktörleri ile de ilişkilidir. Obeziteye katkıda bulunan en iyi bilinen faktörler arasında hormonal problemler ve kompulsif yeme yer alır⁸. Obezite için geleneksel tedaviler kapsamlı bir şekilde çalışılmamış olsa da, genellikle minimum risk oluştururlar. Öte yandan, batı ilaçları genellikle önemli sağlık riskleri oluşturabilecek maliyetli yan etkilerle birlikte gelir. Bu nedenle, güvenli, etkili anti-obezite ilaçları oluşturmak için alternatif bir yaklaşım, obeziteye karşı doğal ürünleri araştırmak olabilir. Fitokimyasal çalışmaların ilerlemesi, obezite için alternatif bir tedavi olarak kullanılabilecek terapötik bitkilerin⁹ geleneksel kullanımını desteklemektedir. Çeşitli bilimsel araştırmalar, bitkisel ilaçların yüzyıllardır obezite tedavisinde etkinliğini göstermiştir. Daha önce yapılan çalışmalar, çeşitli farmakolojik bileşenler içeren şifalı bitkilerin gıda olarak tüketildiğini göstermiştir¹⁰. Doğal bitkilerin ilaç olarak kullanılmasına olan ilgi hakkında tartışmalar olmuştur. Bu bitkileri kullanmak çok az olumsuz sonuçla ilişkilendirilmiştir¹¹; Bu bitkiler sindirimi iyileştirebilir ve kilo vermeyi hızlandırabilir¹². Tıbbi bitkiler, obeziteyi ele almak için beş ana mekanizmayı kapsayan çok yönlü bir yaklaşım kullanır: iştah bastırma, termojenez ve lipid metabolizmasının uyarılması, pankreas lipaz aktivitesinin inhibisyonu, patogenezin önlenmesi ve lipolizin teşviki¹³. Ayrıca, doğal otlar genellikle sindirim enzimi inhibitörleri olarak işlev gören biyoaktif bileşikler içerir, böylece diyet karbonhidratlarının ve yağlarının hidrolizini ve emilimini engeller¹⁴.

Alt kıtada yaygın olarak afyon haşhaşı veya Khashkhash olarak bilinen papur somniferum, zengin bir kullanım geçmişine sahip, dünya çapında tanınan geleneksel bir bitkidir. Morfin, kodein, noskapin, papaverin ve tebain gibi alkaloidler dahil olmak üzere çeşitli fitokimyasallar afyon^15'ten izole edilmiştir. Haşhaş bitkisi öncelikle psikoaktif ve analjezik özellikleri ile ilişkilendirilirken, tohumları potansiyel sağlık yararları nedeniyle giderek daha fazla tanınmaktadır. Haşhaş tohumu, kilo yönetimi ile bağlantılı olan çoklu doymamış yağ asitleri, özellikle omega-3 yağ asitleri açısından zengin bir kaynaktır¹⁶. Özellikle, haşhaş tohumu, anti-obezite potansiyeli büyük ilgi gören bir omega-3 yağ asidi olan α-linolenik asit içerir. α-linolenik asidin 10 ve 12 izomeri, özellikle kilo kaybında rol oynamıştır. Çok sayıda insan çalışması, bu izomerlerin bir kombinasyonu ile takviyenin vücut yağ yüzdesini^{azaltabileceğini göstermiştir 17}. Bu araştırmanın temel amacı, P. somniferum'un bir hayvan modelinde kilo kaybı üzerindeki etkilerini değerlendirmekti. Ek olarak, çalışma lipid profili, hematolojik parametreler, böbrek ve karaciğer fonksiyonu ve yağ dokusu histolojisi üzerindeki etkisini değerlendirmeyi amaçladı.

Tüm işlemler 21-04-2021 tarihinde yapılan toplantıda Pakistan Lahor Üniversitesi etik kurulu tarafından onaylandıktan sonra Kayıt No: REG. # EPZOOL02193026

1. Hayvanların barınması

1. 35 erkek Wistar albino sıçanını (3 haftalık) ayrı ayrı standart laboratuvar kafeslerinde barındırın. Deney boyunca kemirgen yemine ve suya ad libitum erişimi sağlayın.
2. Vivaryum ortamını 22 ± 1 °C sabit sıcaklıkta ve %50 ± %10 bağıl nemde tutun. Yapay aydınlatma kullanarak 12 h:12 h aydınlık-karanlık döngüsü uygulayın.

2. Hayvanların gruplandırılması

1. Deneyin başlangıcında, hayvanları 2 gruba ayırın: obez ve obez olmayan. Obez gruba normal diyete ek olarak yüksek yağlı bir diyet sağlayın. Obez olmayan grubu normal bir diyetle besleyin ve deneyde kontrol grubu (kontrol negatif) olarak kullanın.

3. Yüksek yağlı diyetin (HFD) hazırlanması

1. Hem bitki hem de hayvan kaynaklarından elde edilen yağların oranını artırarak yüksek yağlı bir diyet (HFD) formüle edin. Peletleri hazırlamak için HFD'yi standart yemekle birleştirin.
2. HFD'deki yağ içeriğini 30 g besleme başına 4 g olarak ayarlayın. Peletleri 24 saat boyunca hayvan kafeslerine koyun. 24 saat sonra kalan peletleri tartın ve kaydedin, ardından çıkarın. Her gün taze peletler sağlayın. Obeziteyi indüklemek için bu HFD besleme rejimini 6 hafta boyunca sürdürün.
3. Hayvanların vücut ağırlığını izleyin ve artıp artmadığını kontrol etmek için her hafta kaydedin. Vücut ağırlığını ölçmek için kavanozu ağırlık makinesine koyun ve üzerini kapatın. Ağırlığı kontrol etmek için fareyi kavanozun içine ekleyin.
4. Potansiyel kilo verme etkilerini araştırmak için kalan 4 hafta boyunca aynı peletleri haşhaş tohumu ile destekleyin.

4. Obez hayvanların gruplandırılması

1. 6 hafta sonra, obez hayvanları dört gruba ayırın: Grup 1, HFD ile beslenmeye devam eden ancak herhangi bir tedavi sağlanmayan obez kontroldür (kontrol pozitif). Grup 2 (Standart), obezite kontrolü için ticari olarak temin edilebilen ilaçlarla (Malzeme Tablosuna bakınız) tedavi edilir. Grup 3 (yıkanmamış) ve Grup 4 (Yıkanmış) sırasıyla yıkanmış ve yıkanmamış haşhaş tohumu ile beslenir.

5. Haşhaş tohumlarının hazırlanması

1. Mağazalarda kolayca bulunabildiği için yerel bir ticari tedarikçiden haşhaş tohumu (P. somniferum) edinin. Tohumları birkaç saat güneşte kurutun. Tohumları iki gruba ayırın: yıkanmamış ve yıkanmış.
2. Yıkanmış grup haşhaş tohumlarını 7x damıtılmış suyla yıkayın, ardından güneşte kurutun. 1 L'lik bir behere 500 g haşhaş tohumu ekleyin, su ekleyin ve elinizle karıştırın. Ardından suyu atın ve tohumlardaki tüm yabancı maddeleri, tozu ve diğer parçacıkları çıkardığınızdan emin olmak için prosedürü 7 kez tekrarlayın. Yıkadıktan sonra tohumları kuruması için güneş ışığına koyun.

6. Dozajın hesaplanması ve yemin hazırlanması

1. Hayvanın yem alımına göre dozu, birey başına 30 g olarak standartlaştırılmış olarak belirleyin. Haşhaş tohumlarını 30 g yem başına 0,5 g konsantrasyonda uygulayın.
2. Haşhaş tohumlarını, bir pelet oluşturmak için damıtılmış suyla karıştırarak yemlere dahil edin. Peletleri 4 haftalık deney süresi boyunca günlük olarak taze olarak hazırlayın.

7. Sıçanların diseksiyonu ve kan alma

1. Fareleri 24 saat oruç tutun. Hayvanı kloroform kullanarak kurban edin ve aşağıda açıklandığı gibi daha sonraki prosedürler için kan ve organ örneklerini toplayın.
2. Sıçanları kloroform kullanarak uyuşturun. Kloroformu, eğitimli bir laboratuvar teknisyeni tarafından% 1 inhale kloroform (0.05 mL / L) oranında uygulayın ve sıçanın ayağını sıkıştırarak sıçanın uygun şekilde uyuşturulduğundan emin olun.
3. Standart diseksiyon kutusu aletlerini kullanarak diseksiyon yapın. Diseksiyona başlamadan önce keskin bir bıçağı, makası ve forsepsleri dezenfekte edin. Diseksiyon sırasında böbrek, karaciğer ve yağ dokusu örneklerini çıkarın. Eksize edilen numuneleri formalin dolgulu santrifüj tüplerinde saklayın.
4. Kan örneklerini EDTA kaplı şişelerde toplayın. Her hayvandan 12 mL kan çıkarın ve daha sonra böbrek fonksiyonunu, karaciğer fonksiyon testini ve lipid profilini test etmek için her biri 3 mL'yi bölün.
5. Toplanan kan örneklerini 5 dakika boyunca 1.957 x g'da santrifüjleyin. Kan serumunu diğerlerinden berrak veya sarımsı bir sıvı olarak ayırın. Serumu ayırın ve daha fazla biyokimyasal analiz için mikro santrifüj tüplerine ayırın.

8. Numune analizi

1. Standart enzimatik kolorimetrik yöntemleri kullanarak toplam kolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, trigliseritler ve VLDL dahil olmak üzere toplam lipid profilini belirleyin¹⁸. HDL kolesterol tayinini zaman alıcı bir çökeltme prosedürüne dayandırın¹⁸.
2. Bir kan şekeri monitörü GL-110¹⁹ kullanarak tüm deney boyunca sıçan glikoz seviyelerini düzenli olarak izleyin.

9. Toksisitenin değerlendirilmesi

1. Papaver somniferum'un karaciğer fonksiyon testlerini kullanarak ALT, AST, ALP, TP ve bilirubin parametreleri üzerindeki toksikolojik etkisini değerlendirin²⁰. ^21'de belirtilen metodolojiyi izleyerek serum kreatinin seviyelerini ölçün.
2. Bir Neubauer hemositometresi kullanarak kırmızı kan hücresi (RBC) ve beyaz kan hücresi (WBC) sayıları dahil olmak üzere hematolojik parametreleri belirleyin. Siyanmethemoglobin yöntemini kullanarak hemoglobin konsantrasyonunu değerlendirin.
3. Toplanan doku örneklerinin histopatolojik incelemesini yapın. Mikroskobik değerlendirme için hematoksilen ve eozin (H & E) ile kesitleri boyayın.

10. İstatistiksel analiz

1. İstatistiksel analiz için SPSS yazılımının 16 sürümünü kullanın. Obezite indüksiyon denemesi için ilk ayın verilerine bağımsız bir t-testi uygulayın.
2. İkinci aşama için tekrarlanan ölçümler ANOVA'yı LSD sonrası hoc testinden yararlanın. Toksisite değerlendirmesi için kan parametrelerini analiz etmek için LSD ile tek yönlü ANOVA kullanın
3. İstatistiksel anlamlılığı p ≤ 0.05 olarak tanımlayın, p ≤ 0.001 oldukça anlamlı kabul edilir.

Başlangıç vücut ağırlığı 40-45 g (sütten kesme aşaması) olan sıçanlar, iki aşamaya ayrılan 70 günlük deney için seçildi. 6 hafta süren ilk aşama, standart yiyeceklerini yüksek yağlı bir diyetle (HFD; Şekil 1). Sonraki 4 haftalık aşamada, obez sıçanlara Papaver somniferum uygulandı. Deneyin başında ve sonunda vücut ağırlığı ölçüldü. Tekrarlanan ölçümler ANOVA, kontrol ve deney grupları arasında vücut ağırlığında anlamlı bir fark olduğunu (p < 0.001) ve ayrıca zamanın (hafta) vücut ağırlığı üzerinde anlamlı bir etkisi olduğunu (p < 0.001) ortaya koydu. Şekil 2'de gösterildiği gibi, obez sıçanların nihai vücut ağırlığı, kontrol grubunun ilk vücut ağırlığına kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti (p < 0.001).

Haşhaş tohumu denemesi 4 hafta (28 gün) sürdü ve obez sıçanları dört deney grubuna ayırmayı içeriyordu: Kontrol Pozitif (sadece HFD), Kontrol Negatif (sadece standart yemek), Grup Standardı (HFD + ticari kilo verme ilacı (Malzeme Tablosuna bakınız)), Grup Yıkanmış (HFD + yıkanmış haşhaş tohumu), Grup Yıkanmamış (HFD + yıkanmamış haşhaş tohumu).

Kontrol pozitif gruba yemleriyle birlikte sadece yüksek yağlı diyet (HFD) verilirken, kontrol negatif gruba standart yemek verildi. Grup standart hayvanları, ticari olarak temin edilebilen bir kilo verme ilacı (0.5 g) ile tedavi edildi. Yıkanmış ve yıkanmamış gruplarda, haşhaş tohumu (0.5 g) HFD beslemesine dahil edildi.

1. hafta boyunca, hem yıkanmış hem de yıkanmamış gruplarda önemli bir kilo artışı gözlendi. Buna karşılık, grup standardı, kontrol pozitif gruba kıyasla önemli bir ağırlık değişikliği göstermedi (p < 0.01). 2. hafta, yıkanmamış grupta diğerlerine göre bir kilo artışı görüldü (p < 0.01). Bu eğilim 3. haftada da devam etti ve yıkanmamış grup önemli bir kilo artışı sergiledi. 4. haftada, hem yıkanmamış hem de standart gruplar diğer gruplara göre anlamlı bir kilo artışı gösterdi (p < 0.05). Bu sonuçlar görsel olarak Şekil 3'te gösterilmiştir. Tekrarlanan ölçümler ANOVA, hem zamanın (hafta) hem de grubun vücut ağırlığı üzerinde oldukça anlamlı bir etkisini doğruladı (her ikisi için p < 0.001).

Şekil 3, farklı deney gruplarındaki glikoz seviyelerini göstermektedir. A en yüksek değeri, D ise en düşük değeri temsil eder. P değeri (p < 0.001) ile oldukça anlamlı sonuçları gösteren grafik, alfa-amilazın haşhaş tohumu tarafından inhibisyonunu göstermektedir. Şekil 4A , deney sırasında deney gruplarında kontrole kıyasla daha düşük olan Lipoprotein yoğunluğunu göstermektedir; İstatistiksel olarak, fark önemli değildir. Haşhaş tohumu, Şekil 4B, C'de gösterildiği gibi kandaki düşük yoğunluklu ve çok düşük yoğunluklu lipoproteinleri (LDL ve VLDL) azaltmaya yardımcı olur. İstatistiksel olarak, fark oldukça önemlidir. Şekil 4D'de gösterilen trigliseritler üzerinde önemli bir etki yoktur.

CBC çalışmalarında kırmızı kan hücresi sayısı, beyaz kan hücresi sayısı, lenfositler, ESR, eozinofiller, trombosit sayısı ve ortalama korpüsküler hemoglobin incelenmiştir. Haşhaş tohumlarının kan CBC ve hematoloji üzerinde istatistiksel olarak anlamlı bir etkisi yoktur, bu da haşhaş tohumlarının kan parametreleri üzerinde herhangi bir yan etkisi olmadığını gösterir. Alanin Transaminaz (ALT), Aspartat Aminotransaminaz (AST), bilirubin ve alkalin fosfat, haşhaş tohumlarının karaciğer üzerinde herhangi bir olumsuz etki olup olmadığını kontrol etmek için karaciğer fonksiyon testinde incelenmiştir. Bilirubin ve alkali fosfatlar üzerinde gözlenen önemli bir etki yoktur. Şekil 5'te gösterildiği gibi standart ve yıkanmamış gruplarda ALT (p < 0.01) ve AST'de (p < 0.01) anlamlı bir artış gözlenmiştir. Bu da haşhaş tohumunun yıkanan grupta artış göstermediği için toksik olmayan etkisini gösterir. Serum kreatinin böbrek fonksiyonu için çalışılmış ve böbrek fonksiyonu üzerinde anlamlı bir etkisi yoktur (Şekil 6). Histopatolojik analiz, kontrol negatif grupta normal bir karaciğer mimarisi ortaya çıkardı. Buna karşılık, tedavi edilen tüm gruplar, hafif ila orta arasında değişen derecelerde karaciğer iltihabı sergiledi. Hepatositler, ağırlıklı olarak portal yollar ve merkezi venler etrafında lokalize olan hem mikroveziküler hem de makroveziküler steatoz kanıtı gösterdi. (Şekil 7). İlgili grupların böbrek dokusunun histopatolojik incelemesi (Şekil 8). Çeşitli gruplardan alınan yağ dokusunun histopatolojik incelemesinde kontrol grubunda normal yağ dokusu mimarisi görüldü. Buna karşılık, HFD ile beslenen gruplar, yağ dokusu içinde vasküler sızıntı ve hafif iltihaplanma kanıtı sergiledi (Şekil 9).

Şekil 1: Kilo alımı. Grafik, ilk haftaya kıyasla sıçanların ağırlığında önemli bir artış olduğunu göstermektedir. Karşılaştırma bağımsız bir t-testi uygulanarak yapılmıştır. Ortalama ± SE cinsinden sunulan veriler, p değeri * için en az anlamlı sonuçları gösterir; ** önemli sonuçlar gösterir ve *** son derece önemli sonuçlar gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Kilo alımındaki fark. Grafik, deney gruplarında kilo alımındaki farklılıkları gösteren Tekrarlanan Ölçüm ANOVA uygulanarak yapılan 4 haftalık bir deneyin çoklu karşılaştırmalarını temsil ederken, ticari olarak getirilen ilacın ve Papaver somniferum tohumlarının (yıkanmış ve yıkanmamış) hayvanları yağsız hale getirmek için hiçbir etkisi yoktur. (Mean ± SE) cinsinden sunulan veriler, P değeri için bir yıldız (*) en az anlamlı sonuçları göstermektedir. İki yıldız (**) önemli sonuçlar gösterir. Üç yıldız (***) son derece önemli sonuçlar göstermektedir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: Glikoz seviyeleri. Grafik, farklı deney gruplarındaki glikoz seviyelerini göstermektedir. P değeri, LSD ile gösterilen tek yönlü ANOVA ve karşılaştırmalı ANOVA ile ifade edilir. (Mean ± SE) cinsinden sunulan veriler, P değeri için bir yıldız (*) en az anlamlı sonuçları göstermektedir. İki yıldız (**) önemli sonuçlar gösterir. Üç yıldız (***) son derece önemli sonuçlar gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Lipid profili. (A) Grafik, deney gruplarında Yüksek Yoğunluklu Lipoprotein'de bir artış olduğunu göstermektedir. P değeri ONE WAY ANOVA ile ifade edilir ve ikili karşılaştırma LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE) cinsinden sunulmuştur. p=0.06 olarak adlandırılır. (B) Grafik, deney gruplarındaki Düşük Yoğunluklu Lipoprotein seviyesini temsil eder. ONE WAY ANOVA ve ikili karşılaştırma ile ifade edilen P değeri LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE), p=0.05*. (C) Grafik, deney gruplarında VLDL seviyesindeki yüksekliği temsil eder. ONE WAY ANOVA ve ikili karşılaştırma ile ifade edilen P değeri LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE), p=0.000***** cinsinden sunulmuştur. (D) Deney gruplarındaki trigliserit seviyesini temsil eden grafik. ONE WAY ANOVA ve ikili karşılaştırma ile ifade edilen P değeri LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE), p= 0.22 olarak sunulmuştur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 5: Karaciğer fonksiyon testi. (A) Grafik, farklı deney gruplarında ALT'yi temsil eder. P değeri tek yönlü ANOVA ile ifade edilir ve ikili karşılaştırma LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE) cinsinden sunulmuştur. (B) Grafik, farklı deney gruplarında AST'yi göstermektedir. P değeri tek yönlü ANOVA ile ifade edilir ve ikili karşılaştırma LSD ile gösterilir. Veriler (Ortalama ± SE) cinsinden sunulmuştur. (C) Grafik, farklı deney gruplarında Bilirubin seviyesini göstermektedir. P değeri, LSD ile gösterilen tek yönlü ANOVA ve ikili karşılaştırma ile ifade edilir. Veriler (Ortalama ± SE) cinsinden sunulmuştur. (D) Grafik, farklı deney gruplarındaki alkalin fosfataz seviyesini göstermektedir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 6: Serum kreatinin düzeyi. Grafik, farklı deney gruplarındaki kreatinin düzeylerini göstermektedir. P değeri, LSD ile gösterilen tek yönlü ANOVA ve karşılaştırmalı ANOVA ile ifade edilir. Veriler (Ortalama ± SE) cinsinden sunulmuştur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 7: Karaciğer dokusunun histopatolojik incelemesi. Histopatolojik incelemede kontrol negatifte normal görünümlü karaciğer görülür, ancak tedavi edilen diğer tüm gruplar hafif ila orta şiddette inflamasyon gösterir. Hepatositler portal boşluklar ve perivenüler alanlar etrafında mikro ve makro steatoz gösterirler. (A) Grup kontrolü negatif (B) Grup kontrolü pozitif (C) Grup standardı (D) Grup yıkanmamış (E) Grup yıkanmış 40X çözünürlük, diğer gruplarda yağlı ve hasarlıyken normal görünümlü kontrol negatif karaciğeri ortaya çıkarır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 8: Böbrek dokusunun histopatolojik incelemesi. (A) Grup kontrolü negatif (B) Grup kontrolü pozitif (C) Grup standardı (D) Grup yıkanmamış (E) Grup yıkanmış normal yağ dokularını ortaya çıkarır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 9: Yağ dokusunun histopatolojik incelemesi. İlgili grupların yağ dokusunun histopatolojik incelemesi, sızdıran kan damarları ve HFD'ye bağlı hafif inflamasyon ile normal yağ dokularını ortaya çıkarır. (A) Grup kontrolü negatif (B) Grup kontrolü pozitif (C) Grup standardı (D) Grup yıkanmamış (E) Grup yıkanmış normal yağ dokularını ortaya çıkarır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Protokol, dikkat edilmesi gereken aşağıdaki kritik adımlara sahiptir. İlk kritik adım, yüksek yağlı diyet kullanarak hayvanlarda obeziteyi indüklemekti. İkinci adım, yüksek yağlı diyet uygulayan hayvanların, HFD'ye bağlı diyabet veya başka bir hastalık geliştirmediklerini izlemekti.

Protokol ayrıca aşağıdaki sınırlamalara sahiptir. Akademik kısıtlamalar nedeniyle, haşhaş tohumlarının kesin etkisini incelemek için deney süresi sadece 10 haftaydı. Farklı dozajlara sahip haşhaş tohumları hakkında daha ayrıntılı bir çalışma yapılmalıdır. Gelişmiş ekipman, kaynak ve finansmanın bulunmaması nedeniyle yalnızca temel testleri yapabildik ve bu en büyük sınırlamadır.

Bu çalışmanın sonuçları, bu tohumlara bağlı olarak genel bir etki veya kilo kaybı olmadığını ortaya koymaktadır. Her nasılsa, Papaver somniferum tohumları , yıkanmış Haşhaş tohumlarını kullanarak lipitleri düşürmeye yardımcı olur, bu da deney yürütme için daha fazla doz ve süre doğruluğu ile yıkanmış Haşhaş tohumu kullanılarak ağırlığın azaltılabileceği ifadesini destekler. Yıkanmamış Haşhaş tohumu, içinde büyük miktarlarda bulunan morfin ve yatıştırıcılar nedeniyle lipit profili ve hematoloji üzerinde olumsuz etkilere sahiptir. Bu tohumlar üzerinde kilo kaybı ile ilgili herhangi bir araştırma yapılmadığından, lipitleri kontrol ederek kilo kontrol yönetimi üzerindeki etkilerini kontrol etmek için daha deneysel çalışmalar yapılması önerilmektedir. Düşük yüksek yoğunluklu lipoprotein kolesterol (HDL-K) seviyeleri ile birlikte yüksek serum total kolesterol, düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterol (LDL-K) ve trigliseritler ile karakterize bir dislipidemi profili, kardiyovasküler hastalık için iyi bilinen bir risk faktörüdür. Normal LDL-K ve trigliserit seviyelerinin varlığında bile, düşük HDL-C'nin, yüksek LDL-C ile karşılaştırılabilir şekilde koroner sağlık için önemli bir risk oluşturabileceği dikkat çekicidir. HDL-C, ters kolesterol taşınmasında çok önemli bir rol oynar ve böylece aterosklerotik yükü hafifletir. Ayrıca, HDL-C anti-inflamatuar, anti-oksidatif, anti-trombotik, anti-apoptotik ve vazodilatör özellikler sergiler²².

Bu çalışmada, Papaver somniferum tohumlarının seçilen dozajda uygulanması, trigliseritler hariç lipid profil parametrelerinde önemli bir değişikliğe neden olmamıştır. Özellikle, yıkanmamış grup, diğer gruplara kıyasla en düşük trigliserit seviyelerini sergiledi.

Çalışmanın hem yıkanmış hem de yıkanmamış haşhaş tohumu kullanımı, hazırlama yönteminin sonuçları önemli ölçüde etkilediğini ortaya koymaktadır. Yıkanmamış tohumlar, trigliserit seviyeleri üzerinde bazı olumlu etkiler gösterirken, özellikle kan parametreleri ve potansiyel karaciğer stresi üzerinde olumsuz etkilere de yol açmıştır. Yıkama işlemi muhtemelen tohumlarda bulunan belirli bileşiklerin konsantrasyonunu ortadan kaldırır veya azaltır, bu da sonuçlardaki farkı açıklayabilir. Yıkanmamış haşhaş tohumu alan gruplarda yüksek ALT ve AST seviyeleri ile gösterilen potansiyel karaciğer stresi kritik bir endişe kaynağıdır. Yıkama işlemi bu toksik maddeleri uzaklaştırabilir veya seyreltebilir, çünkü yıkanmış tohumları alan grup aynı seviyede karaciğer enzim yükselmesi²³ göstermemiştir. Çalışma, haşhaş bitkisinden elde edilen afyonun morfin, kodein ve tebain dahil olmak üzere çeşitli alkaloidler içerdiğinden bahsediyor. Bu alkaloidlerin, özellikle daha yüksek dozlarda veya uzun süre tüketildiğinde potansiyel hepatotoksik etkilere sahip olduğu bilinmektedir. Bu alkaloidlerin veya diğer toksik bileşiklerin kalıntı miktarları, yıkanmamış tohumlarda kalabilir ve bu da gözlenen karaciğer stresine katkıda bulunur. Çalışmanın bulguları, geleneksel olarak güvenli kabul edilenler de dahil olmak üzere doğal ürünlerin uygun şekilde hazırlanması ve işlenmesinin önemini vurgulamaktadır. Yıkanmamış haşhaş tohumlarında potansiyel olarak toksik bileşiklerin varlığı, bu maddeleri tanımlamak ve karakterize etmek ve güvenli tüketim yönergeleri oluşturmak için daha fazla araştırmaya duyulan ihtiyacın altını çizmektedir. Yıkama işlemi, haşhaş tohumlarının potansiyel toksisitesini azaltmak için etkili bir yöntem gibi görünmektedir, ancak en uygun yıkama prosedürlerini belirlemek ve yıkanmış haşhaş tohumlarını tüketmenin uzun vadeli güvenliğini değerlendirmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

Çalışmanın bulguları, yıkanmış ve yıkanmamış haşhaş tohumlarının etkileri arasında net bir ayrım olduğunu vurgulamaktadır. Yıkanmış tohumların, önemli olumsuz etkilere neden olmadan obeziteyi yönetmede ve metabolik sağlığı iyileştirmede potansiyel faydalar sağladığı görülmektedir²⁴. Buna karşılık, yıkanmamış tohumlar, trigliserit seviyeleri üzerinde bazı olumlu etkiler gösterirken, özellikle karaciğer sağlığı ile ilgili olarak potansiyel toksisite sergiler. Gözlenen karaciğer iltihabı, kısa vadede hafif ila orta derecede olsa bile, yıkanmamış haşhaş tohumu tüketmenin uzun vadeli etkileri hakkında endişeleri artırmaktadır. Kronik inflamasyon, ilerleyici karaciğer hasarına yol açabilir ve potansiyel olarak fibroz, siroz ve hatta karaciğer yetmezliği ile sonuçlanabilir²⁵. Bu nedenle, yıkanmamış haşhaş tohumlarını tüketirken dikkatli olmak ve daha güvenli bir profile sahip gibi görünen yıkanmış tohumların kullanımına öncelik vermek çok önemlidir. Çalışmanın bulguları, P. somniferum'un güvenlik profilini, özellikle de çeşitli form ve dozajlarda tüketiminin uzun vadeli etkileri ile ilgili olarak tam olarak aydınlatmak için daha fazla araştırmaya duyulan ihtiyacın altını çizmektedir.

Yıkanmamış tohum grubunda vücut ağırlığında gözlenen artış, potansiyel karaciğer toksisitesi ile birleştiğinde, tedavinin istenmeyen ve potansiyel olarak zararlı etkilere sahip olabileceğini düşündürmektedir. Bir anti-obezite ajanı olarak P. somniferum'un güvenliğini ve etkinliğini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için daha titiz ve uzun vadeli çalışmalar yapmak esastır. Bu çalışmalar, güvenli ve etkili tüketim kılavuzları oluşturmak için çeşitli hazırlama yöntemlerini, dozajları ve tedavi sürelerini araştırmalıdır. Ek olarak, potansiyel terapötik kullanım için standartlaştırılmış ve güvenli P . somniferum preparatlarını geliştirmek için hem yararlı hem de olumsuz gözlenen etkilerden sorumlu spesifik bileşikleri tanımlamak ve karakterize etmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

Pankreas amilaz aktivitesindeki bir azalmanın, sindirimi engelleyerek glikoz emiliminin azalmasına yol açabileceği ve sonuç olarak daha düşük kalori alımına neden olabileceği varsayılmaktadır²⁶. Çeşitli bilimsel araştırmalar, bitki kaynaklı α-amilaz inhibitörlerinin tokluk hiperglisemiyi hafifletme potansiyelini göstermiş, böylece anormal glikoz metabolizmasının yönetimine ve metabolik bozuklukların önlenmesine katkıda bulunmuştur. Örneğin, Bauhinia purpurea özütü ile oral takviyenin, hiperkolesterolemi diyetiyle beslenen sıçanlarda pankreas lipaz ve amilaz aktivitelerini azalttığı gösterilmiştir¹⁹. Karbonhidrat ve lipid metabolizmasında yer alan anahtar enzimler olan amilaz ve lipaz, obezite de dahil olmak üzere çeşitli metabolik hastalıkların tedavisi için terapötik hedefler olarak giderek daha fazla araştırılmaktadır. Amilaz ve pankreatik lipaz inhibitörleri olarak işlev gören diyet müdahaleleri ve doğal ürünler, bağırsak yağ emilimini engellemek için potansiyel stratejiler olarak ilgi görmektedir ve bu da kilo yönetimini kolaylaştırabilir²⁷.

Bu çalışmada, tedavi edilen gruplarda kontrol gruplarına kıyasla glikoz seviyelerinde bir azalma gözlenmiştir. Ayrıca, yıkanmamış grupta trigliserit seviyeleri azaldı. Papaver somniferum'un değişen dozaj ve konsantrasyonlarını kullanan daha ileri araştırmalar, özellikle lipaz inhibisyonu ile ilgili olarak, lipid metabolizmasını modüle etmedeki potansiyel rolüne ışık tutabilir.

Tedavi edilen gruplar ayrıca, potansiyel olarak doz farklılaşmasına atfedilebilen kontrol gruplarına kıyasla yüksek HDL seviyeleri sergiledi. Benzer şekilde, tedavi edilen gruplarda LDL seviyeleri negatif kontrol grubuna göre daha yüksekti ve pozitif kontrol grubu en yüksek LDL değerlerini gösterdi. Tersine, VLDL ve trigliserit seviyeleri tedavi edilen gruplarda kontrol grubuna göre daha düşüktü. Sonuçlardaki bu değişkenlik, yüksek yağlı diyet rejiminden etkilenebilir.

Tedavi edilen gruplarda, standart ve kontrol pozitif gruplarda sızıntılı kan damarları ve inflamasyon, HFD birikimi nedeniyle gösterilmiştir. Bir araştırmaya göre, hindistan cevizi özü adiposit sayısını^{azaltır 28}. Tamarindus indica L'yi kullanan bir çalışmada Adiposit sayısını azaltarak toplam vücut ağırlığını azaltmak için posa²⁹. Sonuçumuz, tedavi edilmeyen grubun, tedavi edilen gruba kıyasla anlamlı derecede daha yüksek epididimal olduğunu ve bunun da adiposit boyutunun azaldığını gösterdiğini ortaya koymaktadır (p = 0.05; Şekil 8). Bu araştırmanın sonuçları, Papaver somniferum tohumlarının (yıkanmış) vücuttaki lipit seviyelerini düşürmeye yardımcı olduğunu, yıkanmamış Papaver somniferum tohumlarının ise trigliseritleri düşürdüğünü göstermiştir. Aynı zamanda, Papaver somniferum tohumları yağ dokularının histopatolojisini olumsuz yönde etkilemez. Yıkanmamış tohumlar, kandaki seviyelerini yükselterek kan parametrelerini olumsuz etkiler. Bu nedenle, yıkanmış Papaver somniferum tohumlarının kullanılması, belki de deneyin yürütülmesi ve dozun hesaplanması için süre zarfında bir artışla obeziteyi kontrol edebilir. Farklı sonuçlar için doz ve süre artışı ile daha fazla çalışma yapılmalıdır.

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Yazarlar, Suudi Arabistan, Riyad, Kral Suud Üniversitesi, Kral Suud Üniversitesi, Proje Numarası (RSPD2025R986) Destekleyen Araştırmacılara içten teşekkürlerini sunarlar.