Method Article
Sıçan şahdamar balonu yaralanması, aterosklerotik damarlarda kan akışını geri kazanmak için yapılan klinik anjiyoplasti prosedürünü taklit eder. Bu model, arteriyel duvarı dağıtarak ve endotel hücrelerinin intimal tabakasını indirgeyerek arteriyel yaralanma yanıtını indükler, sonuçta yeniden şekillendirmeye ve intimal hiperplastik yanıta neden olur.
Kardiyovasküler hastalık, kısmen ateroskleroz nedeniyle dünya çapında önde gelen ölüm ve sakatlık nedeni olmaya devam etmektedir. Aterosklerotik plak arterlerdeki ışıklı yüzey alanını daraltır, böylece organlara ve distal dokulara yeterli kan akışını azaltır. Klinik olarak stentli veya stentsiz balon anjiyoplasti gibi revaskülarizasyon işlemleri kan akışını geri getirmeyi amaçlamaktadır. Bu işlemler plak yükünü azaltarak kan akışını yeniden kursa da damar duvarına zarar verir ve bu da arteriyel iyileşme yanıtını başlatır. Uzun süreli iyileşme yanıtı arteriyel restenoza veya yeniden daralmaya neden olur ve sonuçta bu revaskülarizasyon prosedürlerinin uzun vadeli başarısını sınırlar. Bu nedenle, preklinik hayvan modelleri, restenoza yol eden patofizyolojik mekanizmaları analiz etmek için ayrılmaz bir bütün olandır ve yeni terapötik stratejileri test etme fırsatı sağlar. Murine modelleri büyük hayvan modellerine göre daha ucuz ve kullanımı daha kolaydır. Balon veya tel yaralanması, murine modellerinde yaygın olarak kabul edilen iki yaralanma yöntemidir. Özellikle balon yaralanma modelleri klinik anjiyoplasti prosedürünü taklit eder ve arterde restenoz gelişimi için yeterli hasara neden olur. Burada modifiye edilmiş, basınç kontrollü sıçan şahdamar balonu yaralanma modelinin gerçekleştirilmesi ve histolojik olarak analiz edilmesi için cerrahi detayları açıklıyoruz. Ek olarak, bu protokol, neointimal hiperplaziyi inhibe etmek için terapötiklerin lokal periadventitial uygulamasının nasıl kullanılabileceğini vurgulamaktadır. Son olarak, arteriyel hasarın üç boyutlu olarak görüntülenmesi ve görselleştirilmesi için yeni bir yaklaşım olarak ışık tabakası floresan mikroskopisini sunuyoruz.
Kardiyovasküler hastalık (CVD) dünya çapında önde gelen ölüm nedeni olmaya devam etmektedir1. Ateroskleroz, CVD'ye bağlı morbidite ve mortalitenin çoğunun altında gelen nedendir. Ateroskleroz, arterlerin içindeki plağın birikmesidir, bu da daralmış bir lümenle sonuçlanır, organlara ve distal dokulara uygun kan perfüzyonunu engeller2. Şiddetli ateroskleroz tedavisi için klinik müdahaleler arasında stentli veya stentsiz balon anjiyoplasti saydır. Bu müdahale, bir balon kateterinin plak bölgesine ilerletmeyi ve plak arteriyel duvara sıkıştırmak için balonu şişirmeyi, ışık alanını genişletmeyi içerir. Bu prosedür artere zarar verir, ancak arteriyel yaralanma yanıtını başlatır3. Bu yaralanma yanıtının uzun süreli aktivasyonu, neointimal hiperplazi ve damar remodelingine sekonder arteriyel restenoza veya yeniden daralmaya yol açar. Anjiyoplasti sırasında intimal tabaka, hemen trombosit alımına ve lokal inflamasyona yol açan endotel hücrelerinden indirilir. Lokal sinyalizasyon, vasküler düz kas hücrelerinde (VSMC) ve maceracı fibroblastlarda fenotipik değişikliklere neden olur. Bu, VSMC ve fibroblastların lümene doğru göç etmesine ve çoğalmasına yol açar ve neointimal hiperplazi4,5 .5'eyol açar. Dolaşımdaki progenitör hücreler ve bağışıklık hücreleri de restenozun genel hacmine katkıda bulunur6. Uygulanabilir olduğunda, ilaçlı stentler (DES) restenozun inhibe etmek için mevcut standarttır7. DES arteriyel yeniden endotelyalizasyonu inhibe eder, ancak böylece geç stent trombozu ile sonuçlanabilecek pro-trombotik bir ortam yaratır8. Bu nedenle, hayvan modelleri hem restenozun patofizyolojisini anlamak hem de revaskülarizasyon prosedürlerinin etkinliğini uzatmak için daha iyi terapötik stratejiler geliştirmek için ayrılmaz bir bütündür.
Bu patolojiyi incelemek için birkaç büyük ve küçük hayvan modeli9 kullanılmaktadır. Bunlar arasında bir atardamarın ışıklı tarafının balon yaralanması3,10 veya tel yaralanması11' in yanı sıra arter çevresinde kısmi ligasyon12 veya manşet yerleşimi13 bulunur. Balon ve tel yaralanması, arterin endotel tabakasını denude eder ve anjiyoplastiden sonra klinik olarak meydana gelenleri taklit eder. Özellikle balon yaralanması modelleri klinik ortamdakine (yani balon kateter) benzer aletler kullanır. Balon yaralanması en iyi sıçan modellerinde gerçekleştirilir, çünkü sıçan arterleri piyasada bulunan balon kateterleri için uygun bir boyuttur. Burada, sıçan şahdamar balonu yaralanmasının iyi kurulmuş, değiştirilmiş bir versiyonu olan basınç kontrollü segmental arteriyel yaralanmayı tarif ediyoruz. Bu basınç kontrollü yaklaşım klinik anjiyoplasti prosedürünü yakından taklit eder ve yaralanmadan iki hafta sonra tekrarlanabilir neointimal hiperplazi oluşumuna izin verir14,15. Ek olarak, bu basınç kontrollü arteriyel yaralanma, ameliyattan 2 hafta sonra tam endotel tabakası restorasyonu ile sonuçlanır16. Bu, endotel katmanının hiçbir zaman tam kapsama alanına dönmediği Clowes tarafından tanımlanan orijinal balon yaralanması modeline doğrudan zıttır3.
Ameliyattan sonra terapötikler çeşitli yaklaşımlarla yaralı artere uygulanabilir veya bu artere yönlendirilebilir. Burada açıklanan yöntem, Pluronik jel çözeltiye gömülü küçük bir molekülün periadventitial uygulamasını kullanır. Özellikle, neointimal hiperplazi oluşumunu inhibe etmek için yaralanmadan hemen sonra artere% 25 Pluronic-F127 jelinde 100 μM cinnamik aldehit çözeltisi uyguluyoruz15. Pluronic-F127, ilaçları kontrollü bir şekilde yerel olarak teslim edebilen toksik olmayan, termo-geri dönüşümlü bir jeldir17. Bu arada, arteriyel yaralanma lokaldir, bu nedenle yerel yönetim hedef dışı etkileri en aza indirirken aktif bir prensibi test etmeyi sağlar. Bununla birlikte, bu yöntemi kullanarak bir terapötikin etkili bir şekilde verilmesi, kullanılan küçük molekülün veya biyolojiklerin kimyasına bağlı olacaktır.
Burada açıklanan tüm yöntemler Chapel Hill'deki Kuzey Carolina Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Ameliyat öncesi prosedürler
2. Operatif prosedürler
3. Ameliyat sonrası prosedürler
4. Doku hasadı ve görüntüleme
Şekil 1'de bu ameliyatı yapmak için kullanılan tüm malzemeler ve cerrahi aletler gösterdir. İki haftalık yaralı arteriyel kesitlerin hematoksilin ve eozin (H&E) lekelenmesi neointimal hiperplazinin net bir şekilde görselleştirilmesini sağlar. Şekil 2 sağlıklı, yaralı ve tedavi edilmiş bir arterin H&E lekeli arteriyel kesitlerinin temsili görüntülerini göstermektedir. Şekil 2 ayrıca, yaygın olarak kullanılan bir görüntü işleme yazılımı olan ImageJ kullanılarak yaralı bir arterde neointimal hiperplazi seviyesinin nasıl ölçülebilir olduğunu özetlemektedir. Bu yaklaşım kullanılarak, neointima'nın çevresinin yanı sıra iç ve dış elastik lamina ilgili alanları ölçmek için izlenir. Tarif ettiğimiz basınç kontrollü segmental yaralanma yöntemi, standart sapması 0,29 (2 farklı cerrah ve n=11 sıçan) ile 0,80'lik bir intima-medya oranı ile sonuçlanır. Pluronic CA periadventitial uygulama ile tedavi, daha önce gösterdiğimiz gibi neointimal hiperplazi inhibisyonu ile sonuçlanır (yüzde oklüzyonda% 61 azalma)15.
Şekil 3, ECA ve STA'nın çatallanması sırasında optimal bir arteriotomi oluşturmak için bir illüstrasyon sağlar. Son olarak, Şekil 4, ışık tabakası floresan mikroskopisinin arter uzunluğu boyunca yaralanma bölgesinin tamamını görselleştirmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir. Cd31 boyama endotel hücrelerini görselleştirmek için intimal tabaka sabit arterler üzerinde yapılabilir. Arterler daha sonra% 1 agarose içine gömülebilir ve numunenin kırılma indeksini homojenize etmek için iDISCO+ yöntemi kullanılarak temizlenebilir20. Daha sonra arterler bir ışık tabakası floresan mikroskobunda görüntülenebilir ve görüntüler I:M oranını ölçmek için yazılım kullanılarak işlenebilir. Bu yaklaşımı kullanarak, H&E sonuçlarına uygun olan 0,86'lik bir I:M oranı elde ettik.
Bölüm Numarası | Başvuru |
10 bölüm | 27 |
8 bölüm | 28 |
6-10 bölüm | 29 |
6 bölüm | 30 |
5 bölüm | 31 |
3 bölüm | 32 |
Tablo 1. Hiperplazi analizi için yaygın olarak kullanılan arteriyel kesit sayısı.
Şekil 1. Cerrahi aletler ve aletler. Görüntünün sol üst köşesinden başlayarak saat yönünde sırayla: (A) Pamuklu çubuklar; (B) Betadin çözeltisi; (C) Gazlı Bez; (D) % 70 etil alkol çözeltisi; (E) İğneli 1cc şırıngalar; (F) Atropin; (G) Retraktörler; burada kullanılan bükülmüş ataşlar; (H) Rimadyl; (I) Mikro serrefin kelepçesi uygulanan kümesler; (J) İğne tutucu; (K) 4-0 naylon dikiş; (L) 4-0 vicryl dikiş; (M) Steril perdeler; (N) Mayonez makası; (O) Standart kümesler; (P) İnce kavisli önkseçimler; (Q) Mikrodispeksiyon makası; (R) Mikro serrefin kelepçeleri; (S) İnce makas; (T) T-pinleri; (U) Kavisli hemostatlar; (V) Yaklaşık 1 inç'e kesilmiş üç 7-0 Prolene dikiş; (W) 100 μL% 25 pluronic-127 jel; (X) Yağlama göz merhem; (Y) Steril salin çözeltisinde 2 Fransız balon embolektomi kateteri; (Z) Düğme. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2. Hematoksilin ve Eosin (H&E) lekeleme ve sıçan şahdamar kesitlerinin analizi. (A) Sağlıklı, yaralanmamış sağ şahdamarının kesiti. IEL = İç Elastik Lamina, EEL = Dış Elastik Lamina. (B) Pluronic-F127 aracı ile tedavi edilen iki haftalık yaralı sol şah damarının kesit. (C) 100 μM cinnamik aldehit ile tedavi edilen iki haftalık yaralı sol şah damarının kesiti. Ölçek çubuğu = 100 μm. (D) Yaralanmayı ölçmek için donmuş arterlerin kesit şeması. Slayt 1 bifurkasyondan başlar ve slayt başına 5 μm genişliğinde altı arteriyel bölüm alınır. Yaralanma genellikle bu slayt öncesinde meydana geldiğinden, bölümleme genellikle 70'i kaydırmaya devam eder. (E) Pluronic araç (B) ile tedavi edilen yaralı sol şahdamarının kesitleri. En içteki siyah çizgi neointima'yı izler ve aydınlık alanı tanımlamaz. Orta sarı çizgi, iç elastik lamina veya tunica intima alanını tanımlamaz. Dış mavi çizgi, dış elastik lamina veya tunica adventitia alanını tanımlamaz. Ölçek çubuğu = 100 μm. (F)(E)'den elde edilen ölçümlere dayanarak yüzde damar tıkanıklığını ve intima:media (I:M) oranını ölçmek için kullanılan hesaplamalar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3. Arteriotomi yaratımı. Uygun bir arteriotomi oluşturmak ve yanlış bir sistemden kaçınmak için adımların illüstrasyonu. CCA = Common Karotid Arter, ECA = Dış Karotis Arter, ICA = İç Karotis Arter, OA = Oksipital Arter, STA = Superior Tiroid Arteri. ECA ve STA dalları arasındaki çatallanmayı izole edin. Bu çatallanmayı, bölge arteriyel duvarın incelmesini gösteren daha parlak bir renge dönüşene kadar parçalara ayırın ve ardından mikrodiseksiyon makası kullanarak bir arteriotomi oluşturun. Balon yerleştirilmesine yardımcı olmak için ince tokmaklar kullanarak arteriyotomiyi kaldırın. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4. Arteriyel yaralanmayı görselleştirmek için ışık tabakası floresan mikroskopisi. Aşağıda temsili bir enine kesit ile 14 haftalık bir Sprague Dawley sıçanının ortak şahdamarının uzunluğu boyunca boyuna kesitler. Arterler CD31 ile boyanır ve AF647 ile karşıttır. (A) Sağlıklı, yaralanmamış sağ şahdamarının kesitleri. Beyaz = CD31, Yeşil = Elastik Lamina, L = Lümen, Ölçek çubuğu = 200-500 μm. (B) Pluronic-F127 aracı ile tedavi edilen yaralı, sol şahdamarının kesitleri. Ok uçları neointimal hiperplazi bölgelerini gösterir. (C) Yaralanmamış ve yaralı şahdamarının medyaya (I:M) intima oranı, her grup için tam değere dikkat çekerek (n=1). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Sıçan şahdamar balon yaralanması en yaygın kullanılan ve çalışılan restenoz hayvan modellerinden biridir. Hem orijinal balon yaralanma modeli3 hem de modifiye basınç kontrollü segmental yaralanma varyasyonu10, insanlarda da meydana gelen arteriyel yaralanma yanıtının birçok yönünü bilgilendirmiş olup, birkaç sınırlama fibrin bakımından zengin trombüsin nadiren gelişmesi ve lokal iltihabın hiperkolletemik tavşan veya porsin modelleri9,22gibi diğer yaralanma modellerine kıyasla minimum olmasıdır. Sıçanlar ayrıca arteriyel yaralanma yanıtının farklı yönlerini ölçmek ve analiz etmek için farklı zaman noktalarında feda edilebilir. Örneğin, daha önceki zaman noktaları, hücre çoğalması, vasküler düz kas hücrelerinin fenotipik anahtarı ve erken immün yanıt gibi yaralanmaya erken yanıtın yönlerini incelemek için kullanılabilir. Daha önce lökosit infiltrasyon ve hücre çoğalmasının 3 gün ile 1 hafta arasında maksimal olduğunu gösterdik16. Ara zaman noktaları, yeniden endotelizasyon oranını değerlendirmek için kullanılabilir. İki haftalık zaman noktası, neointimal hiperplaziyi ölçmek için önerilen en erken zaman noktasıdır, çünkü arter bu noktada çoğunlukla yeniden endotelize edilir16. Bu modelin çevrilmesi için önemli bir sınırlama, yaralanmanın sağlıklı bir arterde yapılmasıdır, oysa bu prosedür aterosklerotik hastalığı olan hastalarda ortaya çıkar. Bu sınırlama kısmen mevcut sıçan ateroskleroz modellerinin önceki eksikliği nedeniylevardır 23,24. Bununla birlikte, gen düzenleme teknolojilerindeki gelişmeler güvenilir aterosklerotik sıçan modellerinin geliştirilmesine izin verdi24Restenoz patofizyolojisini çalışmada yeni içgörüler sağlayabilir.
Karşılaştırmalı olarak, erkek sıçanlar dişi sıçanlardan daha sağlam bir yaralanma verir, bu da tipik olarak östrojenin koruyucu etkisi nedeniyle daha az neointimal hiperplazi geliştirir25. Bununla birlikte, tanımlanan model kadınlarda arteriyel iyileşmeyi incelemek için hala uygundur. 12-16 hafta yaşlanan erkek sıçanlar, 300-400 g arasında en sağlam ve tekrarlanabilir neointimal oluşumu verir. 12 haftadan küçük sıçanlar kullanılabilir; bununla birlikte, bu genç sıçanların atardamarları, 2F balonunun sıçan suşuna bağlı olarak artere kolayca giremeyeceği kadar küçük olabilir. Balon arteriotomiye kolayca sığmadığı ve zorlanırsa atardamarı gerçekten yırtabileceğinden, 200 gramın altındaki sıçanlar bu modelle çalıştırılmamalıdır. Ek olarak, 16 haftadan büyük sıçanların kullanılması neointimal oluşumda değişken bir yanıt verebilir. Bu yaralanma modelini gerçekleştirmek için çeşitli sıçan suşları kullanılabilir, Sprague Dawley sıçanları literatür boyunca en sık kullanılan26. Ameliyata başlamak için öncelikle çene kemiklerine etki ederek ve orta çizgiyi bulmak için fare burnunu kullanarak boyundaki kesi bölgesinin uygun hizalamasını ve yönünü alın. İlk kesiden sonra, birbirine paralel çalışan iki boyuna kas (sternohyoid ve sternomastoid) görselleşene kadar dokuyu parçalara ayırın. Boyun kasını (masseter) operasyon penceresinin alt sınırı olarak başa doğru kullanın. Vücuda doğru koşan paralel kasları, bu ikisine dik çalışan bir kas görselleşene kadar birbirinden ayırın. Dik kasın kesilmesi, iki paralel kasın kolayca geri çekilmesini ve şahdamarını açığa çıkarmasını sağlayacaktır. Anatomi her hayvandan biraz değişebileceğinden, konumlarıyla birlikte, ICA'nın üzerine dayanan küçük bir arteriyel dal olabilir. Bu küçük dal ICA ile birlikte sıkıştırılabilir; ancak, bu küçük dal sıkıştırılmadığında, prosedürün gerçekleştirilmesiyle ilgili herhangi bir sorun olmamalıdır. Ayrıca, herhangi bir sıkma ve dikiş gerçekleşmeden önce vagus sinirini hem ICA hem de CCA'dan ayırdığınızdan emin olun. Nazik olmak ve bu noktada sinir hasarından kaçınmak önemlidir. Hayvan, metal kelepçe ile temas eden vagus sinirinin bir yanıtı olabilecek bir kelepçe koyduktan sonra seğirirse; kıskacı yeniden düzenlenmeyi düşünün.
Muhtemelen tüm prosedürün en zor adımı arteriotomi yapmaktır. Bunun nedeni, 'yanlış' bir arteriotomi yapmanın mümkün olmasıdır ve bu 'yanlış' arteriotomy'den bir balon yerleştirmek, balonun atardamarın içinde değil, atardamarın üzerinde çalışmasına neden olacaktır. Bu gerçekleşirse, CCA'daki çatallanmaya daha yakın yeni bir arteriotomi yapmak olası bir çözümdür, ancak balon artere zorlandıysa, ameliyat kurtarılamayabilir. 'Yanlış' arteriotomiyi önlemek için (Şekil 3), ECA ve STA çatallamadaki macerasal tabakayı, görünüm yakındaki bölgelere göre önemli ölçüde daha kırmızı olana kadar ince önktüsler kullanarak parçalara ayırın ve atardamarın bu kısmı çıkıntılı gibi görünür. Daha sonra, mikro makası kullanarak arteriyotomiyi oluşturun, makasın bir çatallanmadaki temizlenmiş alana hızlı bir şekilde sokup sonra keserek. Arteriyotomiyi yaptıktan sonra, atardamarın açıklığını kaldırmak ve balonu lümene itmek için ince tokmakları kullanın. Balon arteriotomy'den CCA'ya kolayca kaymalıdır. Sıçan konumlandırmasına bağlı olarak, balon kateterini CCA'ya yönlendirirken CCA'nın dışına doğru hafifçe yukarı çekmek için ince tokalar kullanarak balonu CCA'ya yönlendirmek yararlı olabilir. Balon CCA'ya yerleştirildikten sonra kateteri aşağı bantla, böylece balon şişirilirken arterden çıkmaz.
Terapötik periadventitial uygulama sadece yaralanma yerinde lokal ve yönlendirilmiş ilaç teslimatına izin verir. Bu yaklaşım, oral, intraperitoneal veya intravenöz yönetimler tarafından sistemsel olarak sunulan bir şeye kıyasla potansiyel hedef dışı etkileri ve dosing sınırlamalarını sınırlar. Pluronic-F127 termo-ters çevrilebilir, yani soğuk sıcaklıkta sıvı ve oda sıcaklığında jeller. Bu, terapötik pluronik jellerden önce sıvı bir çözeltide kolayca hazırlanmasını sağlarken, jel yaralanmadan hemen sonra artere eşit olarak uygulanabilir. CCA'nın üst kısmına tüm yaralanma bölgesini etkili bir şekilde kapsayacak şekilde kolayca erişilebilirken, CCA'nın alt kısmını kaplamak için CCA hafifçe kaldırılmalıdır. Bununla birlikte, araştırmacıların tedavi edilen hayvanlar arasındaki potansiyel değişkenliği hesaba katmak için çalışmaya uygun şekilde güç vermelerini sağlamaları gerekir. Çalışmaya uygun şekilde güç sağlamak için beklenen etki boyutunun ve sonucun standart sapmasının bir tahminine sahip olmak önemlidir. Periadventitial doğum yönteminin sınırlandırılması, perkütan bir işlem olarak gerçekleştirilen anjiyoplasti sırasında hastanın atardamarı maruz kalmadığı için klinik olarak ilgili bir yaklaşım olmamasıdır. Bununla birlikte, periadventitial uygulama, yaralanma bölgesine lokal olarak teslim edilen moleküllerin ve biyolojiklerin ön testine izin verir15,27,28,29,30.
Neointimal hiperplaziyi ölçmenin mevcut standart yöntemi, H&E lekeli slaytların morfometrik analizine dayanmaktadır. Yaralı şahdamarı fiziksel olarak 5 μm dilimler halinde slaytlara bölünür. Bu slaytlar daha sonra H&E kullanılarak lekelenir ve görüntüler hafif bir mikroskop kullanılarak alınır. ImageJ yazılımı daha sonra intima, iç lamina ve dış lamina ile sınırlandırılmış alanları ve çevreleri ölçmek için kullanılır. Hiperplazi19'unölçülmesi için 10 slayt kullanarak artan hassasiyet bildirmiş olsak da, literatürde kaç slaytın ölçülmesi konusunda bir fikir birliği yoktur, bildirilen metodoloji 3 ila 10 eşit aralıklı bölümler (Tablo 1)31,32,33,34, 35,36. Bu metodoloji (Aralık: 0.54-1.51) kullanılarak standart sapması 0.29 (n=11) olan 0.8 I:M oranı beklenebilir. Biz ve diğerleri daha önce ışık tabakası floresan mikroskopisi (LSFM) arteriyel yaralanmayı görselleştirmek için yeni bir yaklaşım sağladığını bildirdik19,37. LSFM, x, y ve z düzleminde tüm şahdamarının görüntülenmesini sağlar. LSFM, optik dilimlemenin analiz için arteriyel kesitler oluşturmasına izin verir ve geleneksel histolojik yaklaşımlardan daha kesin hiperplazi tahminleri (varyasyon katsayısı: LSFM tarafından% 28 ve histoloji tarafından%41) verir 19,37. Şekil 4'tegörüldüğü gibi LSFM tarafından elde edilen I:M oranı (0,86, n=1) klasik histolojik analiz ile elde ettiğimiz sonuçlarla karşılaştırılabilir (0,8 ± 0,29).
Sonuç olarak, basınç kontrollü segmental yaralanma, klinik revaskülarizasyon işlemlerinden sonra ortaya çıkan arteriyel yaralanma yanıtını yeniden düzenler ve restenozun patofizyolojisini incelemek için ideal bir model haline getirir. Periadventitial ilaç uygulaması, lokal ilaç teslimatının terapötik etkinliğini test etmek için yararlı bir kavram kanıtı doğum yöntemidir ve hedeflenen sistemik ilaç dağıtım yaklaşımlarının geliştirilmesini bilgilendirebilir.
Yazarlar bu makalenin yayımlanması ile ilgili herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan eder.
N.E.B., Ulusal Çevre Sağlığı Bilimleri Enstitüsü 'nden (5T32ES007126-35, 2018) bir eğitim hibesi ve Amerikan Kalp Derneği doktora öncesi bursu (20PRE35120321) ile desteklendi. E.S.M.B., UNC Klinik ve Çeviri Bilimi Ödülü-K12 Bursiyerleri Programı (KL2TR002490, 2018) ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (K01HL145354) tarafından kısmen desteklenen bir KL2 bursiyeriydi. Yazarlar, UNC Mikroskopi Hizmetleri Laboratuvarı'ndan Dr. Pablo Ariel'e LSFM'ye yardımcı olduğu için teşekkür ediyor. Mikroskopi Hizmetleri Laboratuvarı'nda Işık Sac Floresan Mikroskopisi yapıldı. Patoloji ve Laboratuvar Tıbbı Anabilim Dalı Olan Mikroskopi Hizmetleri Laboratuvarı, kısmen UNC Lineberger Kapsamlı Kanser Merkezi'ne P30 CA016086 Kanser Merkezi Çekirdek Destek Hibesi ile desteklenmektedir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 mL Syringe | Fisher | 14955450 | |
1 mL Syringe with needle | BD | 309626 | |
2 French Fogarty Balloon Embolectomy Catheter | Edwards LifeSciences | 120602F | |
4-0 Ethilon (Nylon) Suture | Ethicon Inc | 662H | |
4-0 Vicryl Suture | Ethicon Inc | J214H | |
7-0 Prolene Suture | Ethicon Inc | 8800H | |
70% ethyl alcohol | |||
Anti-Rabbit Alexa Fluor 647 | Thermo Fisher Scientific | A21245 | |
Atropine Sulfate | Vedco Inc | for veterinary use | |
Cotton Swabs | Puritan | 806-WC | |
Curved Hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
Fine Curved Forceps | Fine Science Tools | 11203-25 | |
Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
Gauze | Covidien | 2252 | |
IHC-Tek Diluent (pH 7.4) | IHC World | IW-1000 | |
Insufflator | Merit Medical | IN4130 | |
Iodine solution | |||
Lubricating Eye Ointment | Dechra | for veterinary use | |
Mayo Scissors | Fine Science Tools | 14010-15 | |
Micro Serrefines | Fine Science Tools | 18055-05 | |
Microdissection Scissors | Fine Science Tools | 15004-08 | |
Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | Fine Science Tools | 18057-14 | |
Needle Holder | Fine Science Tools | 12003-15 | |
Pluronic-127 (diluted in sterile water) | Sigma-Aldrich | P2443 | 25% prepared |
Rabbit Anti-CD31 | Abcam | ab28364 | |
Retractor | Bent paper clips work well | ||
Rimadyl (Carprofen) | Zoetis Inc | for veterinary use | |
Saline solution | |||
Standard Forceps | Fine Science Tools | 11006-12 | |
Sterile Drape | Dynarex | 4410 | |
T-Pins |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır