Method Article
Bu çalışma endoskopik adipoz doku kaynaklı stromal hücre (ADSC) başarılı bir yöntem bildiren bir domuz modelinde uzun bir endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) sonra özofagusdarlığı önlenmesi için -yaprak nakli.
Geçmiş yıllarda, hücre sayfalık yapısı özellikle rekonstrüktif cerrahi prosedürleri için, rejeneratif tıpta geniş bir ilgi teşvik etmiştir. Çeşitli biyomateryallerle adipoz doku kaynaklı stromal hücreler (ADSCs) birleştiren çeşitli teknolojilerin geliştirilmesi gibi kemik, kıkırdak ve kemirgen, domuz veya insan ADSCs adipoz dokuların doku mühendisliği ikame, çeşitli türleri yapımı yol açmıştır. Genişletilmiş özofagus endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) özofagusdarlığı oluşumu sorumludur. Darlık önleme hiçbir etkili tedaviler ile, zorlu kalır. Daha önce yapılan çalışmalar, bir köpek modelinde ve insanlarda mukozal hücre yapraklık nakli etkinliğini bildirilmiştir. ADSCs mezenşimal ve non-mezenkimal soy içine anti-inflamatuar özellikleri, lokal bağışıklık modülasyon efektleri, neovaskülarizasyon indüksiyon ve farklılaşma yeteneklerini ilişkilendirilir. Bu orijinal çalışma endoskopik tra açıklarBir ADSC doku mühendisliği yapının nsplantation bir domuz modelinde darlık önlemek için. ADSC yapısı bir kağıt desteği membran üzerinde birbirlerini katmanlı iki allojenik ADSC yaprak oluşmuştur. ADSCs prob bazlı konfokal lazer endomikroskopi (PCIe) izleme sağlamak için PKH67 florofor ile işaretlendi. transplantasyon gününde, 5-cm darlık indüklediği bilinen, yarı-dairesel ESD uygulandı. Hayvanlar hemen endoskopik 4 ADSC yapıları ile transplante edildi. ADSC yapılarının bir yapışma yumuşak uygulama, 10 dakika sonra elde edildi. Hayvanlar Tüm hayvanlar başarıyla transplante edildi 28. günde öldürüldü. Transplantasyon pozitif PCIe değerlendirme ile 3. günde teyit edilmiştir. nakledilen hayvanlara kıyasla, kontrol hayvanları ana fibrotik doku gelişimi, daha sık sindirim sorun ve indirgenmiş kilo alma ile, ağır striktür- geliştirdi. allogeni bizim modelinde, transplantasyonc çift hücre tabakalar halinde organize ADSCs, genişletilmiş ESD sonrası başarılı ve güçlü bir alt özofagus darlığı oranı ile ilişkili idi.
yüzeyel özofagus tümörlerinin yönetimi yeni endoskopik tekniklerin geliştirilmesi ile değişmiştir. Günümüzde, endoskopik rezeksiyon ilk basamak tedavi yöntemidir. Gerçekten de, eşit onkolojik sonuçlar 1, 2, 3 ile cerrahiye göre daha düşük morbidite ve mortalite oranları ile ilişkilidir. Endoskopik mukozal rezeksiyon (EMR) ve endoskopik submukozal rezeksiyon (ESD) en yaygın kullanılan yöntemlerdir. uzun bir yüzeysel tümör durumunda, ESD tercih edilir. EMR ile karşılaştırıldığında, ESD bağımsız lezyon büyüklüğü, bloğun rezeksiyon en izin verir ve 4, 5, 6, şekil. ESD ana gecikmiş komplikasyonu genellikle rezeksiyon sonrası bir ve iki hafta arasında gerçekleşir özofagusdarlığı oluşumdur. Son yayınlanan çalışmalar darlık oluşumu için korelasyon göstermiştirrezeksiyon boyutu. Japon Endoskopik Derneği ESD onlar olguların% 90'ından fazlasında içinde darlık gelişimi ile ilişkili ve şiddetli beslenme sorunları ve yaşam kalitesinde önemli bozulma sorumlu çünkü özofagus çevresinin ¾ daha büyük boyutları kaçınarak önerir.
Özofagus darlığı önlenmesi zor kalır. darlık oluşumunda rol oynayan mekanizmalar ancak kısmen bilinmektedir. (1) pro-enflamatuar hücre işe alma ve (2) aşırı fibrozis gelişimi 7: oluşumları darlık iki farklı mekanizma dernek kaynaklandığı görülmektedir. Çeşitli önleyici tedaviler önerilmiştir. Ancak sonuçlar çok az fayda ve ciddi yan etkilere 8, 9, tatmin edici idi. Son zamanlarda, bir Japon ekip, Ohki ve ark. , Esoph otolog oral mukozal hücrelerin, tek katmanlı hücre tabakasını nakli için önerilenageal yara. Transplantasyon ESD 10, 11 hemen sonra gerçekleştirildi. Önce bir köpek modelinde ve sonra hastalarda, bu yenilikçi yaklaşımın etkinliğini göstermiştir.
Yağ dokusu kaynaklı stromal hücreler (ADSCs) rejeneratif tıpta umut vericidir. çeşitli alanlarda uygulama özellikle yara iyileştirici süreç içinde, ilginç sonuçlar göstermiştir. Hücreleri kolayca izole edilir ve mezenşimal olmayan mezenkimal soy, 12, 13, 14, anti-enflamatuar özellikleri, lokal immüno-modüle edici etkileri, yeni damar oluşumu indüksiyonu ve farklılaşma yetenekleri ile ilişkilidir, çünkü ADSC tedavi, pek çok avantajlar sunmaktadır.
Daha önceki bir çalışmada, ekibimiz özofagusdarlığı prev için çift ADSC sayfalık endoskopik nakli etkinliğini göstermiştirBir domuz modelinde 15 genişletilmiş ESD sonrası ention. Bu makalede, ADSC sayfalık inşaat ve endoskopik nakli tekniği raporları sunulmuştur.
Bütün hayvanlar Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi (Fransa Tarım Bakanlığı ve kurallar) göre tedavi edildi. protokol Paris Descartes Üniversitesi Hayvan Deneyleri yetkili yerel etik kurul onayı almış (kayıtlı numara Mesr 2.035,02; Tıp Fakültesi Paris Descartes, Paris, France).
1. ADSC Kültür ve Etiketleme
2. Çift ADSC sayfalık Construct
3. Özofagus Endoskopik Submukozal Diseksiyon (ESD)
4. Endoskopik Nakli
5. Ameliyat sonrası Değerlendirme ve Takip
ADSCs ve ADSC tabaka elde etmek üzere işlemin kültürü, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Şekil 2 onların kağıt desteği membran üzerinde birbirlerini katmanlı iki ADSC yaprak oluşan greft yapımını gösterir. ADSCs önce PCIe in vivo aşı izleme sağlamak için PKH67 florofor ile işaretlendi. Şekil 3, 5 cm'lik bir ve hemi-çevresel özofagus yara sonuçlanan uzun özofagus endoskopik submukozal diseksiyon farklı adımlarını göstermektedir. Şekil 4 endoskopik nakli prosedürü göstermektedir. transplantasyon nazik uygulama 10 dakika sonra tüm hayvanlar için başarılı oldu. Şekil 5 transplantasyon prosedürünün başarısını teyit 3. günde pozitif PCIe değerlendirme gösterir.
multimodal darlık analizi kullanılmıştır izin izlem süresi olduğunu. Farklı değerlendirmeler aşağıdaki şekiller ve tabloda gösterilmektedir. nakledilen grup kontrol grubundaki tüm hayvanlara kıyasla ciddi bir darlık gelişmiş hayvanların kontrol ile karşılaştırıldığında, nakledilen hayvan grubu daha az sık gıda ile ilgili sorun ve 28. günde bir hayvanda yüksek ağırlık kazancı göstermiştir. nakledilen hayvanlara kıyasla, kontrol hayvanları önemli bir fibrotik doku geliştirdi. Tablo 1 izlem süresi boyunca klinik ve endoskopik bulguları gösterir. Şekil 6 nakledilen ve olmayan nakledilen hayvanların izlem süresinin sonunda endoskopik ve radyolojik bulguları gösterir. Şekil 7 nakledilen ve kontrol hayvanlar arasındaki farklı histolojik bulguları göstermektedir. Bu veriler özofagusdarlığı önlenmesi için ADSC sayfalık naklinin etkinliğini doğrulamaktadır.
018fig1.jpg "/>
1. ADSC sayfalık Construct rakam. Farklı büyütme standart kültür tabaklarında A ve B Erken geçiş ADSCs. ADSC yaprak ticari sıcaklığa duyarlı kültür kaplarına PKH-etiketli ADSCs kültürlenmesiyle elde edilmiştir. C kuluçka ısısı 20 ° C (oda sıcaklığı) indirildiğinde, enzimatik işlem için gerek kalmadan kendi kendine sağlam ADSC sayfaları gibi bulaşık yüzeylerinin kopuk tüm hücreler. D. Bir ADSC levha bir transfer membran kullanılarak greft inşaatı önce hasat. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
2. Çift ADSC sayfalık Construct rakam. Transpla önce A, B, ve C gününtation, PKH-etiketli ADSCs erken geçiş numarasında toplandı - 12 oyuklu sıcaklığa duyarlı hücre kültürü üzerinde tohumlandı (P4, P5), ve% 10 cenin dahil 37 ° C'de ve% 5 a, minimum gerekli ortam maddesi ile CO2 de kültüre Dana serumu ve% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin). Her bir sıra (her bir alt kısmında), bir poli-N-izopropil membran ile kaplanmış ve 1.5 x 10 6 hücre ile tohumlanmıştır. inkübasyon sıcaklığı 20 ° C (oda sıcaklığı) indirgenerek, tüm hücrelerin spontan enzimatik işlem için gerek kalmadan sağlam ADSC tabakalar olarak müstakil. İki ADSC yaprak oluşan çift hücre sayfalık yapının D. Teorik şema birbirlerini katmanlı ve bir kağıt desteği zarına başvurdu. Tamamlanmış çift hücre sayfalık yapının E. makroskopik görünümü. Referans 15. modifiye t tıklayınız o bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntüleyin.
3. Endoskopik Submukozal Diseksiyon Prosedürü Şekil. A. Endoskopik işaretleri dental ark 40 45 cm arasında değişen ve çevresinin yarısını kapsayan, rezeksiyon alanı tanımlamak için yaratılmıştır. B. indigo karmin boya içeren bir gliserol çözeltisi submukozal enjeksiyon. Bu enjeksiyon amacı, submukozal tabakası ortaya koymak için kas tabakası mukozal tabaka ayrılır amaçlanmıştır. C. Periferik kesiler enjekte submukozal katmanı açığa endoskopik işaretleri dışarıdan yapılmıştır. D. 5 cm uzunluğunda ve hemi-çevresel özofagus yara gösteren submukozal diseksiyon sonunda endoskopik görünümü.et = "_ blank"> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
4. Çift ADSC sayfalık Endoskopik Nakli Prosedürü Şekil. A. Dört ADSC nakledilen hazır oluşturur. ADSC B. Koruma transplantasyon öncesi büyük bir endoskopik kapağın altında inşa. Endoskopik kapağın altında korunmakta ADSC yapısını gösteren hayvan yutak geçilmesi, C. endoskopik görünümü. D. uygulamasının 10 dakika tabaka yapışmasını elde etmek için yeterli olmuştur. Uygulama endoskopik kapağı veya endoskopik forseps kullanılarak gerçekleştirildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5. PCIe Bulguları. 3. günde PCIe başarılı hücre tabaka nakli ile uyumlu in vitro elde edilen ile benzer kendiliğinden ve yoğun sinyalleri gösterir. Sinyal yok günlerde 14 ve süspansiyon ADSCs in vitro PCIe sinyali 28. A. bulunmuştur. B. hücre tabakasının düzenlenen ADSCs in vitro PCIe sinyali. Özofagus skar C. in vivo PCIe sonda uygulaması. D. ADSCs in vivo PCIe sinyal naklinden sonra 3. günde görüntülendi. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
6. Sonuçlar ŞekilMorfolojik Analiz, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında Gün 28. endoskopik ve 28. günde radyolojik bulgular yukarı dilatasyon ve tamamen yeniden epiteli mukozanın olmadan kısa ve hafif darlık saptandı. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 7. darlık Alanları histolojik değerlendirilmesi. histolojik analiz HES-etiketleme ve slayt dijitalleşme sonra yapıldı. Nakledilen hayvanların (A), iyileşme süreci ile karşılaştırıldığında, artan reepitelizasyon ile geliştirilmiş ve fibrozis gelişimini azalmıştı olmayan nakledilen hayvanlar (B). Yoğun fibrotik doku gelişimi oldumuskularis mukoza imha, fibrotik iç muskularis tabaka işgali ve büyük mukoza kusurları nedeniyle gözlemledik. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Takip döneminde Tablo 1. Klinik değerlendirmeler. Klinik değerlendirmeler Mellow Pinkas puanına ve ağırlık varyasyon göre olan bir günlük klinik değerlendirme kullanılarak yapıldı. (*) Mellow Pinkas 16 puan. Referans 15 modifiye.
Bu domuz modelinde, ADSC sayfalık nakli teknik olarak başarılı oldu ve in vivo PCIe değerlendirme hücre nakli izlenmesi için izin verdi. Klinik endoskopik, radyolojik ve histolojik değerlendirmeler genişletilmiş ESD sonrası özofagusdarlığı önleme endoskopik ADSC levha etkinliğini göstermiştir.
Bir indigo karmin boya tabakasını içeren bir ADSC gliserol çözeltisi endoskopik nakli rejeneratif tıpta yenilikçi bir yaklaşımdır. Ohki ve ark. ilk endoskopik nakli prosedürü tarif. Çalışmalarında, hücre-tabaka yapıları bir destek zar 10, 11, 19 olarak kullanılan poliviniliden difluorür ince bir tabaka üzerine yerleştirilmiş oral mukozal epitel hücre tabakaları, oluşmaktadır. destek membran endoskopik forseps ile kavradı ve dikkatlice ülser yatağına yerleştirildi. celL-tabaka yapışması yumuşak uygulama, 10 dakika sonra elde edildi. Bu prosedür henüz yeniden değil. Bu çalışmada, çift ADSC sayfalık yapıları birden nedenlerle transplante edildi. ADSC seçimi özellikle cilt iyileştirme sürecinde, anti-enflamatuar özellikler birçok çalışmada dayanıyordu. ADSCs keratinosit ve fibroblast etkileşimleri 7 modüle bilinmektedir. fibroz geliştirme mekanizması karmaşık ve sadece tam olarak anlaşılamamıştır. Parakrin etki, TGFβ ve pro-anjiyojenik faktörler 20 gibi anti-iltihabik faktör üretimi de dahil olmak üzere ADSC harekete önemli bir rol oynar gibi görünmektedir.
Endoskopik ADSC sayfalık nakli çeşitli sınırlamalar vardır. İlk olarak, hücre tabakaları sabit bir yapışma elde etmek için yemek borusu yara 10 dakika boyunca tatbik edilmiştir. Prosedürün bu bölümü, zorlu teknik olarak zor olduğunu ve deneyimli endoskopist tarafından gerçekleştirilen gerekiyordu. Bununla birlikte, tüm hayvanlar başarıyla endoskopik prosedür fizibilite teyit nakledildi. Son zamanlarda, hücre sayfalık naklinin başarısını artırmak için bir 3D baskılı cihazın kullanımı 21 rapor edildi. İkinci olarak, bu teknik, bilinmeyen bir hayatta kalma oranı ile ilişkilidir. Bir özofagus skar hücreleri için saldırgan bir ortamdır. hücre tabakasının üretimi, hücre dışı matris ve hücre bağlantıların oluşumu için inşa edilmesi için bir ısı duyarlı bulaşık sağlar. Böylece, hayatta kalma oranını ve ADSC etkileşimleri, bir çift ADSC sayfalık yapı, 23 22 seçildi geliştirmek. Bu çalışma, hücre hayatta kalma oranı veya her ikisi önemli sorular özofagusdarlığı önlenmesi transplantasyon doz etkisi, ya değerlendirmek için tasarlanmış değildi. Ohki ve diğerleri gibi, üçüncü. Bir destek zar kullanılması ADSC yaprak yapısı gerçekleştirmek için gerekli olmuştur. kıçtaer nakli, kağıt desteği membran yapı yıkım olmadan kaldırılamadı. Bu içi özofagus yabancı madde artmış inflamasyon sorumlu oldu. Optimize edilmiş teknik kağıt desteği zarının çıkarılması için izin verecek.
PCIe ile Transplantasyon izleme da zor oldu. Bu yeni endoskopik görüntüleme tekniği glandüler desen görselleştirme, mikro-vaskülarizasyon ve hücresel değişiklik de dahil olmak üzere, in vivo histolojik analiz sağlar. PCIe enflamatuar bağırsak hastalığı, Barrett yemek borusu ve müsinöz pankreas kistleri 24, 25 gibi pek çok sindirim hastalıkları, değerlendirilmiştir. PCIe uyumlu PKH67 fluorofor hücre etiketlenmesi için kullanılmıştır. ADSC tabakanın varlığı ile uyumlu bir flüoresan sinyal Bu pozitif sonuç ADSC yapraklık naklinin başarısını yansıyan 3. günde 4 hayvanlarda gözlenmiştir. Bununla birlikte, Becakullanım PKH67 zamanla bir azalma sinyali vardır ve hücre bölünmesi sonrası, PCIe değerlendirme sadece birkaç gün transplantasyon 26 sonra mümkün oldu. Ohki ve ark. ve Kanai ve ark. immün yoluyla hücre tabaka nakli izlenir, ve transplantasyon sonrası 8. günden kadar hücrelerinin varlığını doğruladı. Olgun hücreler spesifik immün avantajı var bu çalışmada, kullanılmıştır.
Özofagusdarlığı böylece teknik gelişimini sınırlayan ESD aşağıdaki en ciddi advers olayların biridir. Optimal teknikler striktür hala eksik önlemek için. Klinik pratikte, genişletilmiş özofagus ESD olan hastalar bu tür 27 stent kortikosteroidler, endoskopik balon dilatasyon ya da yemek borusu gibi farklı önleyici tedaviler, reçete edilir. Biyomalzeme lokal uygulama, 29 farklı sonuçlar 28, yapılmıştır Sup. rejeneratif tıp amacı, doku değiştirme veya yerel immunomodulasyona gibi çeşitli yaklaşımlar kullanılarak bir doku veya organa yeniden inşa etmek olduğunu. Doku değiştirilmesi için, ya da epitelyal hücreleri olmayan biyolojik iskeleler kullanımı literatür 30, 31 değerlendirilmiştir. Bir erken ve artan yeniden epitelizasyon özofagus yara gözlendi. Yerel İmmünomodülasyon için, küçük veri ADSC enjeksiyon veya amniyon membran uygulaması 32, 33 hakkında literatürde mevcuttur. Bir gecikmeli darlık oluşumu ve azalmış darlık oranı gözlendi.
Bu domuz modelinde, endoskopik hücre sayfalık nakli işlemi başarıyla gerçekleştirildi. çift hücre tabakalar halinde organize nakledilen ADSCs uzun ESD sonrası özofagusdarlığı oluşumunu önlemek için yeteneklerini gösterdi. ADSC iyileşmesinde yer alan mekanizmalarsüreç tam olarak anlaşılamamıştır ve gelecekteki çalışmalarda daha fazla araştırılması gerekmektedir. Böylece, bu umut verici sonuçlar ışığında, bir klinik çalışma sonrasında hastalarda ESD genişletilmiş ADSC sayfalık yapının etkinliğini değerlendirmek için yapılmalıdır.
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
This study was supported and funded by the Avenir Foundation (Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, Paris, France). This study would never have been conducted without the precious help of the veterinary team of the Laboratory of Biosurgical Research from the Alain Carpentier Foundation.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Transparent endoscopic cap Q180 compatible | Olympus Optical Co | ||
GIF-Q180 gastroscope | Olympus Optical Co | ||
Videoscope System Exera II | Olympus Optical Co | ||
Injection needle 18 G | Olympus Optical Co | ||
Electrosurgery unit ERBE ICC 350 | ERBE Technology | ||
Indigo carmin 1% | Life | ||
Endoscopic hybrid knife | Life | ||
Minisonde Z pCLE green probe | Mauna Kea Technology | You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult. | |
Fetal bovine serum | Sigma Aldrich | 12105C | |
Trypsin | Sigma Aldrich | T146 | |
Alpha minimum essential medium | Thermo Fisher | 22561-021 | |
Phosphate-Buffered Salines | Thermo Fisher | 10010-023 | |
PKH67 dye kit | Sigma Aldrich | Mini67-KT | |
12-well temperature responsive cell culture dish | Upcell Thermo Scientific | 174900 | Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells |
Esomeprazole 40 mg | Biogaran | ||
Moprhine sulfate 50 mg/mL | Lavoisier | ||
Amoxicilline 1 g | Biogaran | ||
Ketamine 250 mg/5 mL | Panpharma | ||
Propofol 10 mg/mL | Fresenius | ||
Hydrophobic paper | Carrefour |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır